一种异山梨醇中硫酸二异丙酯的检验方法与流程

1.本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种异山梨醇中硫酸二异丙酯的检验方法。


背景技术：

2.异山梨醇是一种生物基功能性二元醇，是重要的生物基平台分子，可应用于医药、食品和化妆品等领域，异山梨醇作为山梨醇的脱水衍生物，是一口服渗透性脱水利尿药，作用机制类似于静注甘露醇和山梨醇，通过提高血浆渗透压，导致组织内（包括眼、脑、脑脊液等）水分进入血管内，从而减轻水肿，降低眼内压、颅内压和脑脊液容量及其压力，用于治疗脑水肿及青光眼。
3.异山梨醇合成工艺中用到了硫酸和异丙醇，可能产生硫酸二异丙酯，可能残留在异山梨醇中，硫酸二异丙酯的结构式为：，硫酸二异丙酯包含基因毒性警示结构，根据ich m7中基因杂质的限度ttc按1.5ug/天计算，而单硝酸异山梨酯最大日剂量为120mg，根据公式限度= ttc /最大日剂量，计算得到硫酸二异丙酯在成品单硝酸异山梨酯中的限度为12.5ppm，为保证用药安全，需要对异山梨醇中的基因毒性杂质硫酸二异丙酯进行控制。
4.硫酸二异丙酯无紫外吸收，且限度极低，测定比较困难，有文献报道用液质联用法测定样品中硫酸二异丙酯残留量，或gc-ms法测定样品中硫酸二异丙酯残留量，lc-ms和gc-ms灵敏度高，价格昂贵。
5.本发明使用气相色谱法测定异山梨醇中硫酸二异丙酯，采用衍生溶液进行柱前衍生化，采用ecd检测器进行异山梨醇中硫酸二异丙酯的分离测定，在ecd检测器上灵敏度更好，该方法较未经柱前衍化的方法检测限更低，本发明首次公开了采用衍生溶液进行柱前衍生化，采用ecd检测器检测异山梨醇中硫酸二异丙酯的含量，为解决异山梨醇中硫酸二异丙酯的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确、检测限低的检测方法，该方法能检测异山梨醇中硫酸二异丙酯的含量，从而有效保障用药安全，便于异山梨醇的质量控制。


技术实现要素：

6.本发明提供一种异山梨醇中硫酸二异丙酯的检验方法，为解决异山梨醇中硫酸二异丙酯的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测异山梨醇中硫酸二异丙酯的检验方法，从而有效保障用药安全，便于异山梨醇的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于异山梨醇的质量控制。
7.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种异山梨醇中硫酸二异丙酯的检验方法，使用气相色谱法测定异山梨醇中硫酸二异丙酯，采用衍生溶液进行柱前衍生化，采用ecd检测器进行异山梨醇中硫酸二异丙酯的分离测定，该检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、系统适用性溶液、衍生溶液和测试溶液。
8.（2）测定方法：采用气相色谱法测定异山梨醇中硫酸二异丙酯，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、参比溶液和测试溶液，记录色谱图；色谱条件如下:气相色谱仪带ecd检测器，色谱柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱，柱温：70℃保持0min，以5℃/min升温至150℃保持0min，进样口温度：220℃，检测器温度：250℃，分流比：10：1，载气：n2，流速：1.5ml/min，进样体积：1ml，顶空平衡温度：80℃，平衡时间：40min。
9.进一步的，色谱柱为db-624 30m
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0.53mm，3.0μm，衍生溶液：取适量碘化钠、抗坏血酸，置于量瓶中，加适量水溶解并稀释至刻度，摇匀；空白溶液：取适量稀释液和衍生溶液，置于顶空瓶中，加盖密封，涡旋后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；稀释液：乙腈；参比溶液：取适量稀释液和硫酸二异丙酯储备液置于量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；移取适量上述溶液、衍生溶液，置顶空瓶中，加盖密封，涡旋后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；硫酸二异丙酯储备液：取适量稀释液置于量瓶中，取硫酸二异丙酯适量，加稀释液稀释至刻度，摇匀；灵敏度溶液：取适量稀释液置于量瓶中，取适量硫酸二异丙酯储备液置于该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；移取适量上述溶液、衍生溶液，置顶空瓶中，加盖密封，涡旋后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；测试溶液：取适量异山梨醇样品，置于量瓶中，加适量稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；移取适量上述溶液、衍生溶液，置顶空瓶中，加盖密封，涡旋后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。
10.为了确保此方法的准确性，对此方法进行方法学验证：系统适用性、专属性（分离度和加样回收）、检测限和定量限、线性和范围、精密度和溶液稳定性，其方法学验证结果如下：
本发明使用气相色谱法测定异山梨醇中硫酸二异丙酯，采用衍生溶液进行柱前衍生化，采用ecd检测器进行异山梨醇中硫酸二异丙酯的分离测定，在ecd检测器上灵敏度更好，该方法较未经柱前衍化的方法检测限更低，本发明首次公开了采用衍生溶液进行柱前衍生化，采用ecd检测器检测异山梨醇中硫酸二异丙酯的含量，为解决异山梨醇中硫酸二异丙酯的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确、检测限低的检测方法，该方法能检测异山梨醇中硫酸二异丙酯的含量，从而有效保障用药安全，便于异山梨醇的质量控制。
附图说明
11.图1为本发明空白溶液图谱图2为本发明参比溶液图谱图3为本发明测试溶液图谱图4为本发明系统适用性图谱
具体实施方式
12.以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
13.实施例1：（1）配制溶液：稀释液：乙腈；衍生溶液：取碘化钠60g，抗坏血酸1g，精密称定，置100ml量瓶中，加适量水溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度：碘化钠600mg/ml、抗坏血酸10mg/ml）空白溶液：精密量上述稀释液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：碘化钠120mg/ml、抗坏血酸2mg/ml）硫酸二异丙酯储备液：取20ml量瓶，加稀释液适量，取硫酸二异丙酯约25mg，精密称定，加稀释液稀释至刻度，摇匀；取200ml量瓶，加稀释液适量，精密移取该溶液5.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；取200ml量瓶，加稀释液适量，精密移取该溶液5.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀。（浓度：0.7812μg/ml）参比溶液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液10.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0625μg/ml）灵敏度溶液：取50ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液5.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；取20ml量瓶，加稀释液适量，精密移取该溶液5.0ml，置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0156μg/ml）测试溶液：取异山梨醇样品约125mg，精密称定，置20ml量瓶中，加适量稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：异山梨醇5.0mg/ml）选择性溶液：取异山梨醇样品约125mg，精密称定，置20ml量瓶中，加适量稀释液溶解，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液2.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0625μg/ml、异山梨醇5.0mg/ml）测试溶液（加标）：取异山梨醇样品约125mg，精密称定，置20ml量瓶中，加适量稀释液溶解，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液2.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干
燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；同法配制6份。（浓度：硫酸二异丙酯0.0625μg/ml、异山梨醇5.0mg/ml）loq溶液：根据灵敏度溶液所得硫酸二异丙酯的s/n值，调节稀释比例至硫酸二异丙酯的s/n值≥10；溶液涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；同法配制6份。
14.lod溶液：精密移取loq溶液6.0ml，置20ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。
15.线性-loq溶液：见定量限和检测限项下的loq溶液配制。
16.线性50%溶液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液5.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0312μg/ml）线性80%溶液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液8.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0500μg/ml）线性100%溶液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液10.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0625μg/ml）线性120%溶液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液12.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0750μg/ml）线性150%溶液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液15.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温。（浓度：硫酸二异丙酯0.0937μg/ml）准确度loq储备液：根据定量限和检测限项下loq溶液配制；同法配制3份。
17.准确度100%稀释液：取50ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液5.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；同法配制3份。（浓度：0.0625μg/ml）准确度150%稀释液：取100ml量瓶，加稀释液适量，精密移取上述硫酸二异丙酯储备液15.0ml置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；同法配制3份。（浓度：0.0937μg/ml）准确度loq溶液：取异山梨醇样品适量，精密称定，置量瓶中，加适量稀释液溶解，精密移取上述准确度loq储备液适量置该瓶中，加稀释液稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封，摇匀；配制成异山梨醇浓度为5mg/ml，硫酸二异丙酯为loq浓度的溶液；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；同法配制3份。
18.准确度100%溶液：取异山梨醇样品约125mg，精密称定，置20ml量瓶中，加适量准确度100%稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；同法配制3份。（浓度：硫酸二异丙酯0.0625μg/ml、异山梨醇5.0mg/ml）准确度150%溶液：取异山梨醇样品约125mg，精密称定，置20ml量瓶中，加适量准确度150%稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取该溶液4.0ml、衍生溶液1.0ml，置20ml顶空瓶中，加盖密封；涡旋1分钟后，置鼓风干燥箱80℃加热1小时，放冷置室温；同法配制3份。（浓度：硫酸二异丙酯0.0937μg/ml、异山梨醇5.0mg/ml）（2）色谱条件：仪器：气相色谱仪带ecd检测器、顶空自动进样器、电子分析天平。
19.色谱柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱（如db-624 30m
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0.53mm，3.0μm或极性相当的色谱柱）柱温：70℃保持0min，以5℃/min升温至150℃保持0min；进样口温度：220℃；检测器温度：250℃；分流比：10：1；载气：n2；流速：1.5ml/min；进样体积：1ml；顶空平衡温度：80℃；平衡时间：40min；备注：后运行240℃保持5min，流量3ml/min；（3）测定方法：待系统稳定后，进空白溶液1针，灵敏度溶液1针，参比溶液6针，测试溶液1针，记录色谱图。
20.计算：硫酸二异丙酯（ppm）=(ru/rs)
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(cs/cu)其中：ru：测试溶液图谱中硫酸二异丙酯的峰面积；rs：6针参比溶液图谱中硫酸二异丙酯的平均峰面积；cs：参比溶液中硫酸二异丙酯的浓度(μg/ml)；cu：测试溶液的浓度(g/ml)。
21.实施例2：系统适用性系统适用性是通过测定灵敏度溶液中硫酸二异丙酯的s/n值以及6针参比溶液中硫酸二异丙酯峰面积的rsd而实现的；要求灵敏度溶液中硫酸二异丙酯的s/n值以及6针参比溶液中硫酸二异丙酯峰面积的rsd应符合可接受标准。
22.实施例3：专属性专属性是通过测定空白溶液对硫酸二异丙酯检测有无干扰；选择性溶液中硫酸二异丙酯与相邻色谱峰之间的分离度而实现的；要求空白溶液对硫酸二异丙酯检测应无干扰，选择性溶液中硫酸二异丙酯与相邻色谱峰之间的分离度应符合可接受标准。
23.实施例4：精密度重复性：重复性是通过测定6份测试溶液（加标）中硫酸二异丙酯测定结果的rsd而实现，要求6份测试溶液（加标）中硫酸二异丙酯测定结果的rsd应符合可接受标准。
24.实施例5：检测限和定量限检测限是通过检测其响应信号与噪声之比（s/n）≥3而得到的，定量限是通过检测其响应信号与噪声之比（s/n）≥10而得到的。在该浓度水平，重复考察6份loq溶液，要求6份loq溶液中硫酸二异丙酯单位浓度峰面积的rsd应符合可接受标准，来证实定量限测定结果具有一定的精密度。
25.实施例6：线性和范围在loq~150%限度浓度范围内选6个浓度点，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标画曲线，要求曲线的线性相关系数的平方（r2）和y轴截距的绝对值与100%浓度的响应值的比值应符合可接受标准。
26.实施例7：准确度准确度是通过测定被测组分实测浓度和理论浓度之间的回收率和回收率的总rsd（n=9）而实现的，要求被测组分在各浓度范围内的回收率和回收率的总rsd（n=9）应符合可接受标准。
27.实施例8：耐用性考察参比溶液、测试溶液和选择性溶液在室温放置一段时间内进样，检测结果随时间变化规律，为检测时参比溶液和测试溶液的放置时间提供依据