一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒及其使用方法与流程

技术特征：
1.一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下材料：(1)秀丽隐杆线虫n2；(2)含有10mg/ml胆固醇的ngm培养基；(3)5mg/ml的大肠杆菌op50菌液；(4)尼罗红染液。2.根据权利要求1所述的治疗肥胖症的药物筛选试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒所用的秀丽隐杆线虫n2为同步化后的线虫，线虫同步化的步骤为：(1)用m9缓冲液将平板上的秀丽隐杆线虫n2冲下来，将冲洗液吸入离心管，5000-7000rpm离心7分钟，去除上清；(2)加入裂解液，在涡旋仪上震荡7min，使秀丽隐杆线虫n2的虫体破裂释放卵；(3)5000-7000rpm离心7min，去除上清，收集沉淀获得大量的秀丽隐杆线虫卵：(4)m9缓冲液冲洗两次，再加入1ml m9缓冲液，置于20℃培养箱中孵化48小时，获得同步化后的秀丽隐杆线虫n2。3.根据权利要求1所述的一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒，其特征在于，所述的尼罗红染液由丙酮配制为0.5mg/ml。4.一种如权利要求1任意一项所述的治疗肥胖症的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法如下：(1)采用治疗肥胖症的药物筛选试剂盒筛选治疗肥胖症的药物，设定模型对照组和药效评价组；(2)药效评价组，将大肠杆菌op50菌液和尼罗红染液均匀涂布在含有待测药物的ngm培养基上，所述大肠杆菌op50菌液和尼罗红染液的体积比为250:1，然后将400—600条秀丽隐杆线虫n2加入ngm培养基并置于20℃恒温培养48h；(3)模型对照组，将大肠杆菌op50菌液和尼罗红染液均匀涂布在含有与待测药物溶液等量的无菌水或溶媒的ngm培养基上，所述大肠杆菌op50菌液和尼罗红染液的体积比为250:1，然后将400—600条秀丽隐杆线虫n2加入ngm培养基并置于20℃恒温培养48h，建立成为肥胖模型作为模型对照组；(4)秀丽隐杆线虫n2的后处理：用m9缓冲液分别将模型对照组和药效评价组中的秀丽隐杆线虫n2从培养基上洗下,收集到离心管中，用m9缓冲液清洗，去除上清，重复3次，再次加入150μlm9缓冲液,20℃脱色2h，去除上清；再加入150μl m9缓冲液清洗，去除上清，重复2次，然后吸取20μl线虫于载玻片上，并加入20μl 20mm nan3固定；(5)在荧光显微镜下观察染色结果并拍照记录，采用统计软件对实验数据进行处理、分析，如果药效评价组的荧光强度低于模型对照组，则证明待测药物具有治疗肥胖的活性；如果药效评价组的荧光强度与模型对照组无显著性差异，则证明待测药物不具有治疗肥胖的活性；以此评价待测药物的治疗肥胖的活性。5.根据权利要求4所述的一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的秀丽隐杆线虫n2为同步化后的线虫，线虫同步化的步骤为：(1)用m9缓冲液将平板上的秀丽隐杆线虫冲下来，将冲洗液吸入离心管，5000-7000rpm离心7分钟，去除上清；(2)加入裂解液，在涡旋仪上震荡7min，使秀丽隐杆线虫的虫体破裂释放卵；
(3)5000-7000rpm离心7min，去除上清，收集沉淀获得大量的秀丽隐杆线虫卵：(4)m9缓冲液冲洗两次，再加入1ml m9缓冲液，置于20℃培养箱中孵化48小时，获得同步化后的秀丽隐杆线虫。6.根据权利要求4所述的一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒的使用方法，其特征在于，所述的尼罗红染液在涂布前加入大肠杆菌op50菌液，使尼罗红染液终浓度为0.002mg/ml。

技术总结
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种治疗肥胖症的药物筛选试剂盒及其使用方法。本发明提供的抗肥胖药物筛选试剂盒包括秀丽隐杆线虫、线虫培养基、大肠杆菌OP50、尼罗红染液，该试剂盒能够用于高通量筛选抗肥胖药物。本发明操作简便，检测快速，适合在筛选抗肥胖药物的领域大规模推广。药物的领域大规模推广。


技术研发人员：李红玉 尤瑾 王宇 邹玥 李洋
受保护的技术使用者：兰州大学
技术研发日：2021.12.02
技术公布日：2022/3/18