皮肤源性多能性前体细胞的制作方法与流程

技术特征：
1.一种皮肤源性多能性前体细胞的制作方法，其中：包括在选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下培养神经嵴干细胞，使其分化为皮肤源性多能性前体细胞的步骤，该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。2.根据权利要求1所述的方法，其中，还包括制作所述神经嵴干细胞的工序，该工序包括在选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下培养多能性干细胞，使其分化为神经嵴干细胞的步骤，该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述层粘连蛋白片段为具有整合素结合活性的层粘连蛋白片段。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述层粘连蛋白片段为含有层粘连蛋白e8片段的层粘连蛋白片段。5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种为结合有基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的所述层粘连蛋白或其片段。6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，在选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下的神经嵴干细胞培养包括：在含有该选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基材上培养该细胞、或在含有该选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基中培养该细胞的步骤。7.根据权利要求2～6中任一项所述的方法，其中，在选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下的多能性干细胞培养包括：在含有该选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基材上培养该细胞、或在含有该选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基中培养该细胞的步骤。8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述神经嵴干细胞培养包括在含有wnt信号激动剂的分化培养基中培养该细胞的步骤。9.根据权利要求2～8中任一项所述的方法，其中，所述多能性干细胞培养包括在含有选自tgfβ信号抑制剂和bmp信号抑制剂中的至少1种的分化培养基中培养该细胞的步骤。10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，所述皮肤源性多能性前体细胞共表达巢蛋白和纤维粘连蛋白。11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，所述神经嵴干细胞为人源性神经嵴干细胞。12.一种神经嵴干细胞的制作方法，其中，包括在选自结合有基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的、层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下，培养多能性干细胞，使其分化为神经嵴干细胞的步骤，
该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和层粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述层粘连蛋白片段为具有整合素结合活性的层粘连蛋白片段。14.根据权利要求12或13所述的方法，其中，所述层粘连蛋白片段为含有层粘连蛋白e8片段的层粘连蛋白片段。15.根据权利要求12～14中任一项所述的方法，其中，所述在选自结合有基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的、层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下的细胞培养包括：在含有选自结合有该基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的、层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基材上培养该细胞；或在含有选自结合有该基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的、层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基中培养该细胞的步骤。16.根据权利要求12～15中任一项所述的方法，其中，所述多能性干细胞培养包括在含有选自tgfβ信号抑制剂和bmp信号抑制剂中的至少1种的分化培养基中培养该细胞的步骤。17.根据权利要求12～16中任一项所述的方法，其中，所述多能性干细胞为人源性多能性干细胞。18.根据权利要求1～17中任一项所述的方法，其中，不使用饲养层细胞而进行所述细胞培养。19.根据权利要求1～18中任一项所述的方法，其中，在不存在异种源性成分下进行所述细胞培养。20.选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种在制造由神经嵴干细胞向皮肤源性多能性前体细胞分化诱导培养的定着材料中的应用，其中，该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和层粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。21.选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种用作由神经嵴干细胞向皮肤源性多能性前体细胞分化诱导培养的定着材料的应用，其中，该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和层粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。22.根据权利要求20或21所述的应用，其中，所述选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种为结合有基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的所述层粘连蛋白或其片段。23.选自结合有基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的、层粘连蛋白及其片段中的至少1种在制造由神经嵴干细胞向多能性干细胞分化诱导培养的定着材料中的应用，其中，该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和层粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。24.选自结合有基底膜蛋白聚糖或含有其增殖因子结合部位的片段的、层粘连蛋白及其片段中的至少1种用作由神经嵴干细胞向多能性干细胞分化诱导培养的定着材料的应
用，其中，该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和层粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。25.根据权利要求20～24中任一项所述的应用，其中，所述层粘连蛋白片段为具有整合素结合活性的层粘连蛋白片段。26.根据权利要求20～25中任一项所述的应用，其中，所述层粘连蛋白片段为含有层粘连蛋白e8片段的层粘连蛋白片段。27.根据权利要求20～26中任一项所述的应用，其中，所述定着材料为含有选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基材、或为具有含有选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种的涂层的培养基材、或为含有选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种的涂层剂、或为含有选自所述层粘连蛋白及其片段中的至少1种的培养基。

技术总结
本发明在由干细胞向皮肤源性多能性前体细胞的分化诱导中，提高皮肤源性多能性前体细胞的收率。一种皮肤源性多能性前体细胞的制作方法，其包括在选自层粘连蛋白及其片段中的至少1种的存在下培养神经嵴干细胞，使其分化为皮肤源性多能性前体细胞的步骤。该层粘连蛋白为选自层粘连蛋白111、层粘连蛋白121、层粘连蛋白332、层粘连蛋白421、层粘连蛋白511和层粘连蛋白521、以及它们的突变体中的至少1种。以及它们的突变体中的至少1种。


技术研发人员：中桐赖子 关口清俊
受保护的技术使用者：国立大学法人大阪大学
技术研发日：2020.08.04
技术公布日：2022/3/18