包含阿普斯特和TYK2抑制剂的组合疗法的制作方法

包含阿普斯特和tyk2抑制剂的组合疗法
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年4月30日提交的国际申请号pct/us2019/029772的优先权，其全部内容在此通过引用并入本文。


背景技术：

3.以市售的n-[2-[(1s)1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺(阿普斯特)，是目前批准用于治疗中度至重度斑块状银屑病和活动性银屑病关节炎两者的磷酸二酯酶4型(pde4)抑制剂。阿普斯特对pde4的抑制提高了免疫细胞中的环磷酸腺苷(camp)水平。这反过来通过减少表达促炎介质如tnf-α、il-23、il-17和其他炎性细胞因子来向下调节炎性反应，并增加产生抗炎介质。研究已表明，在一些患者中斑块状银屑病可在少至仅超过4个月的治疗中获得75％的降低。
[0004]
酪氨酸激酶2(tyk2)，一种细胞内信号酶，激活信号转导子及转录激活子(stat)依赖的il-12、il-23基因表达和功能反应以及i型和iii型干扰素受体。在其他病症中，酪氨酸激酶抑制剂(tki)最近作为用于治疗银屑病和相关病症的有效药剂得到关注。例如，tki抑制剂bms-986165最近在患有中度至重度斑块状银屑病的受试者的ii期临床试验中显示出阳性结果。参见kim papp,m.d.,phase 2trial of selective tyrosine kinase 2inhibition in psoriasis,the new england journal of medicine,sept.12,2018。


技术实现要素：

[0005]
现已发现阿普斯特和tyk2抑制剂6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((2-甲氧基-3-(1-甲基-1h-1,2,4-三唑-3-基)苯基)氨基)-n-(甲基-d3)哒嗪-3-甲酰胺(bms-986165)的组合在刺激th17细胞的条件下协同地降低全血测定中表达的促炎细胞因子。例如，当与单独使用每种药物相比，使用0.01μm bms-986165和1μm阿普斯特的组合对il-17f表达的抑制大于2倍增加。参见例如实施例部分中的表5。在0.1μm浓度的bms-986165和1μm阿普斯特下观察到类似的结果。参见例如表5。与单独使用每种药物相比，bms-986165与1μm阿普斯特的组合还以2倍或更高的值降低il-17a和il-22的细胞因子表达。参见例如表5。
[0006]
还发现阿普斯特和bms-986165的组合引起对某些促炎细胞因子的互补作用。例如，bms-986165在全血测定中增加tnf-α和gm-csf细胞因子，而阿普斯特抑制产生这些细胞因子。参见例如表5，其中对tnf-α，1μm阿普斯特的对照的％是10.7，并且0.01μmbms-986165的对照的％是143.1。然而，当组合施用时，阿普斯特纠正了bms-986165的缺陷从而产生了对tnf-α13.5％抑制的互补作用。参见例如表5。在0.1μm浓度的bms-986165下，并且对细胞因子gm-csf也确立了这一趋势。参见例如表5。这些结果说明bms-986165和阿普斯特的协同和互补药理学作用。
[0007]
除全血测定外，bms-986165和阿普斯特的组合还能对lps刺激的外周血单个核细胞(pbmc)中的某些促炎细胞因子引起互补作用。bms-986165增加il-23、il-12和tnf-α，而
阿普斯特抑制产生这些细胞因子。参见例如实施例部分中的表6。这些结果进一步支持组合bms-986165和阿普斯特在th17相关疾病的治疗中的优势。
[0008]
因此，本文提供了使用有效量的阿普斯特或其药学上可接受的盐以及有效量的tyk2抑制剂如bms-986165治疗受试者中对pde4的抑制有响应的疾病或紊乱的方法。此类疾病和紊乱包括例如炎性疾病如银屑病、银屑病关节炎和溃疡性结肠炎。
[0009]
本文还提供了药物组合物，其包含有效量的阿普斯特，或其药学上可接受的盐以及有效量的tyk2抑制剂如bms-986165。
附图说明
[0010]
图1示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素-17a(il-17a)细胞因子产生(对照的百分比)。
[0011]
图2示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素-17a(il-17a)细胞因子产生。
[0012]
图3示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素-17f(il-17f)细胞因子产生(对照的百分比)。
[0013]
图4示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素-17f(il-17f)细胞因子产生。
[0014]
图5示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素-22(il-22)细胞因子产生(对照的百分比)。
[0015]
图6示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素-22(il-22)细胞因子产生。
[0016]
图7示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的肿瘤坏死因子α(tnf-α)细胞因子产生(对照的百分比)。
[0017]
图8示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的肿瘤坏死因子α(tnf-α)细胞因子产生。
[0018]
图9示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的粒细胞-巨噬细胞集落
刺激因子(gm-csf)细胞因子产生(对照的百分比)。
[0019]
图10示出在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血-管测定中通过阿普斯特和bms-986165的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)细胞因子产生。
[0020]
图11示出在脂多糖(lps)刺激的外周血单个细胞(pbmc)中通过阿普斯特的白细胞介素-23(il-23)细胞因子产生。
[0021]
图12示出在lps刺激的pbmc中通过阿普斯特和tyk2i(bms-986165)的白细胞介素-23(il-23)细胞因子产生。
[0022]
图13示出在lps刺激的pbmc中通过阿普斯特和tyk2i(bms-986165)的白细胞介素-12p40(il-12p40)细胞因子产生。
[0023]
图14示出在lps刺激的pbmc中通过阿普斯特和tyk2i(bms-986165)的白细胞介素-12p70(il-12p70)细胞因子产生。
[0024]
图15示出在lps刺激的pbmc中通过阿普斯特和tyk2i(bms-986165)的肿瘤坏死因子α(tnf-α)细胞因子产生。
[0025]
图16示出在lps刺激的pbmc中通过阿普斯特和tyk2i(bms-986165)的干扰素γ(ifn-γ)细胞因子产生。
[0026]
图17示出在lps刺激的pbmc中通过阿普斯特和tyk2i(bms-986165)的单核细胞趋化蛋白-1(mcp-1)细胞因子产生。
[0027]
图18示出阿普斯特和tyk2i(bms-986165)在il-17a全血中的固定剂量组合作用。
[0028]
图19示出阿普斯特和tyk2i(bms-986165)在il-17f全血中的固定剂量组合作用。
[0029]
图20示出阿普斯特和tyk2i(bms-986165)在il-22全血中的固定剂量组合作用。
[0030]
图21示出阿普斯特和tyk2i(bms-986165)在tnf-α全血中的固定剂量组合作用。
具体实施方式
[0031]
在第一个实施方案中，本文提供了用于治疗对环核苷酸磷酸二酯酶同工酶iv(pde4)的抑制有响应的疾病或紊乱的方法，该方法包括向受试者施用有效量的n-[2-[(1s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺(阿普斯特)，或其药学上可接受的盐，以及有效量的tyk2抑制剂。
[0032]
或者，作为第一个实施方案的一部分，提供有效量的n-[2-[(1s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺(阿普斯特)，或其药学上可接受的盐，以及有效量的tyk2抑制剂在制备用于治疗对环核苷酸磷酸二酯酶同工酶iv(pde4)抑制有响应的疾病或紊乱的药物中的用途。
[0033]
在另一个替代方案中，作为第一个实施方案的一部分，提供有效量的n-[2-[(1s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺(阿普斯特)，或其药学上可接受的盐，以及有效量的tyk2抑制剂，用于治疗对环核苷酸磷酸二酯酶同工酶iv(pde4)的所述抑制有响应的疾病或紊乱。
[0034]
1.定义
[0035]
n-[2-[(1s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺(阿普斯特)公开于美国第6962940号专利，其内容通过
引用并入本文，并且是指具有以下化学结构的化合物：
[0036][0037]
阿普斯特具有在该化学结构和名称中指定为(s)的手性中心。如本文所使用的，该指定名称意味着阿普斯特作为在该位置的所述(s)对映异构体以相对于相应的(r)对映异构体至少80％、90％、95％、98％、99％或99.9％的量光学富集。因此，当阿普斯特在本文中被称为在指定量下是立体异构体或对映异构体纯时，其意指(s)对映异构体以该量富集。例如，至少95％立体异构体纯的n-[2-[(1s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺意味着该化合物含有大于或等于95％的该(s)对映异构体和5％或更少的该(r)对映异构体。
[0038]
除非另有说明，本文所述的施用包括在施用本文所述的tyk2抑制剂之前、同时或之后施用阿普斯特。因此，同时施用对于治疗目的不是必需的。在一个方面，阿普斯特和所公开的tyk2抑制剂一起施用。在另一方面，阿普斯特和所公开的tyk2抑制剂在同一天的不同时间施用。在另一方面，阿普斯特和所公开的tyk2抑制剂在不同时间作为单独的片剂或胶囊施用。在另一方面，阿普斯特和所公开的tyk2抑制剂在同一片剂或胶囊中以固定剂量组合施用。
[0039]
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”和“治疗(treating)”是指逆转、减轻或抑制如本文所述的对pde4的抑制有响应的疾病或紊乱，或其一种或多种症状的进展。
[0040]
术语“受试者”是指动物，如哺乳动物，和例如人。术语“受试者”和“患者”可以互换使用。
[0041]
术语“有效量”或“治疗有效量”是指将引起受试者的生物学或医学响应的本文所述的化合物的量，例如0.001-100毫克/千克体重/天的剂量。
[0042]
术语“药学上可接受的载体”是指无毒的载体、佐剂或媒介，其不会不利地影响与其一起配制的化合物的药理学活性，并且其对于人的使用也是安全的。可用于本公开的组合物中的药学上可接受的载体、佐剂或媒介包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、硬脂酸镁、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质(例如微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖一水合物、十二烷基硫酸钠和交联羧甲基纤维素钠)、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
[0043]
术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的包括无机酸和碱以及有机酸和碱的无毒酸或碱制备的盐。本文所述化合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于包括由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的金属盐或由赖氨酸、n,n
’‑
二苄基乙二胺、氯普鲁
卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)和普鲁卡因制成的有机盐。合适的无毒酸包括但不限于无机酸和有机酸如乙酸、海藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、亚甲基双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。
[0044]“结晶”是指化合物的固体形式，其中在原子的位置中存在原子长程有序。固体的结晶性质可以例如通过检查x射线粉末衍射图来确认。“单晶形式”意味着所述化合物，即n-[2-[(1s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙基]-2,3-二氢-1,3-二氧代-1h-异吲哚-4-基]乙酰胺，是作为单晶或多个晶体存在，其中每个晶体具有相同的晶型(例如晶型b)。当所述晶型被定义为化合物的一种特定百分比的特定单晶形式时，其余部分由无定形形式和/或不同于所指定的一种或多种特定形式的结晶形式组成。在一个方面，例如，公开的晶型是至少80重量％单晶形式、至少90重量％单晶形式、至少95重量％单晶形式，或至少99重量％单晶形式。特定晶型的重量百分比通过特定晶型的重量除以特定晶体总重量，加上存在的其他晶型重量加上存在的无定形形式的重量乘以100％来确定。
[0045]
术语“无定形”是指以非结晶状态或形式存在的固体。无定形固体是分子的无序排列，并且因而不具有可区分的晶格或晶胞，并且因此不具有可定义的长程有序。固体的固态有序可以通过本领域已知的标准技术来确定，例如通过x射线粉末衍射(xrpd)或差示扫描量热法(dsc)。无定形固体也可例如通过使用偏振光显微镜的双折射与结晶固体区分。
[0046]
本文所述晶形的x-射线粉末衍射模式的2-θ值可随仪器的不同而略微变化，并且还取决于样品制备的变化和由于如温度变化、样品位移和是否存在内标等因素引起的批次间变化。因此，除非另外定义，否则本文所述的xrpd模式/分配不应被解释为绝对的且可变化
±
0.2度。本领域公知这种可变性将解释上述因素而不妨碍晶型的明确识别。
[0047]
2.tyk2抑制剂
[0048]
在所公开的方法和组合物中使用的tyk2抑制剂包括阻断酪氨酸激酶2作用的化合物，酪氨酸激酶2是一种由tyk2基因编码的非受体酪氨酸-蛋白激酶。
[0049]
在第二个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂包括但不限于那些在xingrui he等,expert opinion on therapeutics patents 2019,vol.29,no.2,137-149中描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0050]
在第三个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0051][0052]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/032423中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。具有此式的示例性化合物作为第三个实施方案的一部分包括但不限于具有下式的那些：
[0053][0054]
或其药学上可接受的盐。其他tyk2抑制剂作为第三个实施方案的一部分包括在wo2008/139161和wo2010/055304中的那些，其每个的全部内容通过引用并入本文。
[0055]
在第四个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0056][0057]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2013/174895中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。具有此式的示例性化合物作为第四个实施方案的一部分包括但不限于具有下式的那些：
[0058][0059]
或其药学上可接受的盐。其他tyk2抑制剂包括在wo2012/062704中的那些，其全部内容通过引用并入本文。
[0060]
在第五个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0061][0062]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2012/062704中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0063]
在第六个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0064][0065]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/091584中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。具有此式的示例性化合物作为第六个实施方案的一部分包括但不限于具有下式的那些：
[0066][0067]
或其药学上可接受的盐。
[0068]
在第七个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0069][0070]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2016/027195中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。具有此式的示例性化合物作为第七个实施方案的一部分包括但不限于具有下式的那些：
[0071][0072]
或其药学上可接受的盐。
[0073]
在第八个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0074][0075]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如us2017/0240552中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。具有此式的示例性化合物作为第八个实施方案的一部分包括但不限于具有下式的那些：
[0076][0077]
或其药学上可接受的盐。
[0078]
在第九个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0079][0080]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/016206中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0081]
在第十个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0082][0083]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2013/146963中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0084]
在第十一个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0085][0086]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2016/047678中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0087]
在第十二个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自us2015/0299139；wo 2015/069310；us 9505748；wo 2018/0162889；us 2013/0178478；或wo2015/123453中描述的那些，其每个的全部内容通过引用并入本文。
[0088]
在第十三个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0089][0090]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/131080或wo2016/138352中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0091]
在第十四个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0092][0093]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2017/040757中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0094]
在第十五个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0095][0096]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/131080，wo2016/138352和wo2017/040757中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0097]
在第十六个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0098][0099]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2018/071794中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0100]
在第十七个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0101][0102]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量如wo2018/075937中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0103]
在第十八个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0104][0105]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量如us2013/0178478中所述，其全部内容通过引用并入本文。
[0106]
在第十九个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0107][0108]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/123453中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0109]
在第二十个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0110]
[0111]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/089143中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0112]
在第二十一个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0113][0114]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/089143中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0115]
在第二十二个实施方案中，所公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0116][0117]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2018/067432中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0118]
在第二十三个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0119][0120]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2018/093968中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0121]
在第二十四个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0122][0123]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2018/081488中所描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0124]
在第二十五个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0125][0126]
或其药学上可接受的盐，其中
[0127]
r1是任选地被0-7个r
1a
取代的c
1-3
烷基；
[0128]r1a
在每次出现时独立地是氢、氘、f、cl、br、cf3或cn；
[0129]
r2是c
1-6
烷基或-(ch2)
r-3-14元碳环，每个基团被0-4个r
2a
取代；
[0130]r2a
在每次出现时独立地是氢、＝o、卤素、ocf3、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)
p
rc、被0-3个ra取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的c
2-6
烯基、被0-3个ra取代的c
2-6
炔基、被0-1个ra取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-2个ra取代的包含碳原子或1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0131]
r3是c
3-10
环烷基、c
6-10
芳基或含有1-4个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环，每个基团被0-4个r
3a
取代；
[0132]r3a
在每次出现时独立地是氢、＝o、卤素、ocf3、cf3、chf2、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)
p
rc、被0-3个ra取代的c
1-6
烷基、被0-3个ra取代的c
2-6
烯基、被0-3个ra取代的c
2-6
炔基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-3个ra取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-10元杂环；
[0133]
或两个r
3a
与它们所连接的原子一起结合以形成稠合环，其中所述环选自苯基和包含碳原子以及1-4个选自n、s或o的杂原子的5-7元杂环，所述稠合环进一步被r
a1
取代；
[0134]
r4和r5独立地是氢、被0-1个rf取代的c
1-4
烷基、被0-3个rd取代的(ch2)
r-苯基，或包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)p的杂原子的-(ch2)-5-7元杂环；
[0135]r11
在每次出现时独立地是氢、被0-3个rf取代的c
1-4
烷基、cf3、被0-1个rf取代的c
3-10
环烷基、被0-3个rd取代的(ch)
r-苯基，或被0-3个rd取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0136]
ra和r
a1
在每次出现时独立地是氢、f、cl、br、ocf3、cf3、chf2、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)rc、-s(o)2rc、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的c
2-6
烯基、被0-3个ra取代的c
2-6
炔基、被0-3个rf取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-3个rf取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0137]
rb在每次出现时独立地是氢、被0-3个rd取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-2个rd取代的c
3-6
环烷基，或被0-3个rf取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环或被0-3个rd取代的(ch2)
r-苯基；
[0138]
rc是被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的(ch2)
r-c
3-6
环烷基、被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；或
[0139]
rd在每次出现时独立地是氢、f、cl、br、ocf3、cf3、cn、no2、-ore、-(ch2)rc(o)rc、-nrere、-nrec(o)orc、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基，或被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0140]
re在每次出现时独立地选自氢、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的c
3-6
环烷基和被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0141]
rf在每次出现时独立地是氢、卤素、cn、nh2、oh、c
3-6
环烷基、cf3、o(c
1-6
烷基)，或包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂芳基；
[0142]
p是0、1或2；并且
[0143]
r是0、1、2、3或4，其中另外的定义和具体化合物可以在例如us2015/0299139中找到，其全部内容通过引用并入本文。
[0144]
在第二十六个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0145][0146]
或其药学上可接受的盐，其中
[0147]
r1是任选地被0-7个r
1a
取代的c
1-3
烷基
[0148]r1a
在每次出现时独立地是氢、氘、f、cl、br、cf3或cn；
[0149]
r2是被0-4个r
2a
取代的c
1-6
烷基、被0-4个r
2a
取代的c
3-6
环烷基、被0-4个r
2a
取代的c
6-10
芳基、被0-4个r
2a
、nr6r6或orb取代的含有1-4个选自n、o和s的杂原子的5-14元杂环；
[0150]r2a
在每次出现时独立地是氢、＝o、卤素、ocf3、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)
p
rc、被0-3个ra取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-1个ra取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-2个ra取代的包含碳原子或1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0151]
或一个r
2a
和另一个r
2a
，与它们所连接的原子一起结合以形成稠合的5-6元环，其中所述稠合环可以被0-2个ra取代；
[0152]
r3是被0-5个r
3a
取代的-(ch2)
r-3-14元碳环；
[0153]r3a
在每次出现时独立地是氢、＝o、卤素、ocf3、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)
p
rc、被0-3个ra取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-3个ra取代的包含碳原子或1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-10元杂环；
[0154]
或两个r
3a
与它们所连接的原子一起结合以形成稠合环，其中所述环选自苯基和包含碳原子以及1-4个选自n、s或o的杂原子的5-7元杂环，所述稠合环可以进一步被ra取代；
[0155]
r4和r5独立地是氢、被0-1个rf取代的c
1-4
烷基、被0-3个rd取代的(ch2)
r-苯基，或包
含5个碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)-5-7元杂环；
[0156]
r6和r
11
在每次出现时独立地是氢、被0-3个rf取代的c
1-4
烷基、cf3、被0-1个rf取代的c
3-10
环烷基、被0-3个rd取代的(ch)
r-苯基，或被0-3个rd取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0157]
ra在每次出现时是氢、f、cl、br、ocf3、cf3、chf2、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)rc、-s(o)2rc、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、-(ch2)
r-3-14元碳环，或被0-3个rf取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-715元杂环；
[0158]
rb在每次出现时是氢、被0-3个rd取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-2个rd取代的c
3-6
环烷基，或被0-3个rf取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环，或被0-3个rd取代的(ch2)
r-苯基；
[0159]
rc是被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的(ch2)
r-c
3-6
环烷基或被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0160]
rd每次出现时独立地是氢、f、cl、br、ocf3、cf3、cn、no2、ore、-(ch2)rc(o)rc、nrere、-nrec(o)orc、c
1-6
烷基或被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0161]
re在每次出现时独立地选自氢、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的c
3-6
环烷基和被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0162]
rf在每次出现时独立地为氢、卤素、cn、nh2、oh、c
3-6
环烷基、cf3、o(c
1-6
烷基)或包含碳原子和1-4个选自n、o或s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂芳基；
[0163]
p是0、1或2；并且
[0164]
r是0、1、2、3或4。
[0165]
在第二十七个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0166][0167]
或其药学上可接受的盐，其中所述变量是如wo2015/069310中描述的，其全部内容通过引用并入本文。
[0168]
在第二十八个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0169][0170]
或其药学上可接受的盐，其中
[0171]
y是n或cr6；
[0172]
r1是h、c
1-3
烷基或c
3-6
环烷基，每个任选地被0-7个r
1a
取代；
[0173]r1a
在每次出现时独立地是氢、氘、f、cl、br或cn；
[0174]
r2是c
1-6
烷基、被0-1个r
2a
取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或含有1-4个选自n、o和s的杂原子的5-14元杂环，每个基团被0-4个r
2a
取代(为清楚起见，r2旨在包括取代的甲基原子团，例如-c(o)r
2a
)；
[0175]r2a
在每次出现时独立地是氢、＝o、卤素、ocf3、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)
p
rc、被0-3个ra取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的c
2-6
烯基、被0-3个ra取代的c
2-6
炔基、被0-1个ra取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-2个ra取代的包含碳原子或1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0176]
r3是c
3-10
环烷基、c
6-10
芳基或包含1-4个选自n、o和s的杂原子的5-10元杂环，每个基团被0-4个r
3a
取代；
[0177]r3a
每次出现时独立地是氢、＝o、卤素、ocf3、cf3、chf2、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr
11r11
、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)
p
rc、被0-3个ra取代的c
1-6
烷基、被0-3个ra取代的c
2-6
烯基、被0-3个ra取代的c
2-6
炔基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-3个ra取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o
)p
的杂原子的-(ch2)
r-5-10元杂环；
[0178]
或两个r
3a
，与它们所连接的原子一起结合以形成稠合环，其中所述环选自苯基和包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的杂环，每个稠合环被0-3个r
a1
取代；
[0179]
r4和r5独立地是氢、被0-1个rf取代的c
1-4
烷基、被0-3个rd取代的(ch2)
r-苯基或包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)p的杂原子的-(ch2)-5-7元杂环；
[0180]
r6为氢、卤素、c
1-4
烷基、c
1-4
卤代烷基、oc
1-4
卤代烷基、oc
1-4
烷基、cn、no2或oh；
[0181]r11
每次出现时独立地是氢、被0-3个rf取代的c
1-4
烷基、cf3、被0-1个rf取代的c
3-10
环烷基、被0-3个rd取代的(ch)
r-苯基或被0-3个rd取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o或s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0182]
ra和r
a1
每次出现时独立地是氢、f、cl、br、ocf3、cf3、chf2、cn、no2、-(ch2)rorb、-(ch2)rsrb、-(ch2)rc(o)rb、-(ch2)rc(o)orb、-(ch2)roc(o)rb、-(ch2)rnr
11r11
、-(ch2)rc(o)nr
11r11
、-(ch2)rnrbc(o)rc、-(ch2)rnrbc(o)orc、-nrbc(o)nr
11r11
、-s(o)
p
nr“r”、-nrbs(o)
p
rc、-s(o)rc、-s(o)2rc、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-3个ra取代的c
2-6
烯基、被0-3个ra取代的c
2-6
炔基、被0-3个rf取代的-(ch2)
r-3-14元碳环或被0-3个rf取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0183]
rb是氢、被0-3个rd取代的c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、被0-2个rd取代的c
3-6
环烷基，或被0-3个rf取代的包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环或被0-3个rd取代的(ch2)
r-苯基；
[0184]
rc是被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的(ch2)
r-c
3-6
环烷基或被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0185]
rd每次出现时独立地是氢、f、cl、br、ocf3、cf3、cn、no2、-ore、-(ch2)rc(o)rc、-nrere、-nrec(o)orc、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基或被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0186]
re每次出现时独立地选自氢、被0-3个rf取代的c
1-6
烷基、被0-3个rf取代的c
3-6
环烷基和被0-3个rf取代的(ch2)
r-苯基；
[0187]
rf每次出现时独立地是氢、卤素、cn、nh2、oh、c
3-6
环烷基、cf3、o(c
1-6
烷基)或包含碳原子以及1-4个选自n、o和s(o)
p
的杂原子的-(ch2)
r-5-7元杂环；
[0188]
p是0、1或2；并且
[0189]
r是0、1、2、3或4，其中另外的定义和具体化合物是如us9505748和wo2018/0162889中所描述的，其每个的全部内容通过引用并入本文。
[0190]
在第二十九个实施方案中，所述公开的tyk2抑制剂可以选自具有下式的那些：
[0191][0192]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0193]
r1是且
[0194]
r2是
[0195]
在第三十个实施方案中，本文所述的tyk2抑制剂是6-(环丙烷甲酰胺基)-4-((2-甲氧基-3-(1-甲基-1h-1,2,4-三唑-3-基)苯基)氨基)-n-(甲基-d3)哒嗪-3-甲酰胺(bms-986165)，其具有以下化学结构：
[0196][0197]
或其药学上可接受的盐。
[0198]
与阿普斯特组合使用的所述公开的tyk2抑制剂的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合、治疗医师的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。
[0199]
在第三十一个实施方案中，与阿普斯特组合使用的所述公开的tyk2抑制剂(例如，
如在第二至第三十个实施方案的任一个中)的所述有效量范围为0.001至50毫克/千克体重/天。例如，作为第三十一个实施方案的一部分，与阿普斯特组合使用的所述公开的tyk2抑制剂(例如，如在第二至第三十个实施方案的任一个中)的所述有效量范围为约0.1mg/天至约250mg/天，例如，约0.2mg/天至约100mg/天、约0.5mg/天至约50mg/天和约1.0mg至约24mg/天。
[0200]
在第三十二个实施方案中，本文所述的tyk2抑制剂是bms-986165，或其药学上可接受的盐，并且bms-986165或其药学上可接受的盐的所述有效量范围为约0.1mg/天至约250mg/天、约0.1mg/天至约100mg/天、约0.1mg/天至约50mg/天、约0.1mg/天至约25mg/天、0.1mg/天至约15mg/天、约0.1mg/天至约10mg/天、约0.5mg/天至约15mg/天、约0.5mg/天至约10mg/天、约0.1mg/天至约5mg/天、约0.5mg/天至约5mg/天、约1mg/天至约25mg/天、约2mg/天至约14mg/天、约2mg/天至约12mg/天或约3mg/天至约12mg/天的范围内。或者，作为第三十二个实施方案的一部分，bms-986165或其药学上可接受的盐的所述有效量范围为约1mg/天至约15mg/天、约1mg/天至约14mg/天、约2mg/天至约14mg/天、约2mg/天至约12mg/天或约3mg/天至约12mg/天。
[0201]
在第三十三个实施方案中，本文所述的tyk2抑制剂是bms-986165或其药学上可接受的盐，并且bms-986165或其药学上可接受的盐的所述有效量是约0.1mg/天、约0.5mg/天、约1.0mg/天、约2mg/天、约3mg/天、约4mg/天、约5mg/天、约6mg/天、约7mg/天、约8mg/天、约9mg/天、约10mg/天、约11mg/天或约12mg/天。或者，作为第三十三个实施方案的一部分，bms-986165或其药学上可接受的盐的所述有效量是约2mg/天、约3mg/天、约4mg/天、约5mg/天、约6mg/天、约7mg/天、约8mg/天、约9mg/天、约10mg/天、约11mg/天或约12mg/天。在另一替代方案中，作为第三十三个实施方案的一部分，bms-986165或其药学上可接受的盐的所述有效量是约6mg/天。在另一替代方案中，作为第三十三个实施方案的一部分，bms-986165或其药学上可接受的盐的所述有效浓度是约1nm至约1μm(例如，约0.01μm至约0.1μm)。
[0202]
3.阿普斯特
[0203]
如上所述，阿普斯特作为(s)对映异构体光学富集。在第三十四个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的阿普斯特的立体异构纯度大于90％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十三个实施方案任一个中所述。或者，作为第三十四个实施方案的一部分，本文所述的方法和组合物中阿普斯特的立体异构纯度大于95％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十三个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十四个实施方案的一部分，本文所述的方法和组合物中的阿普斯特的立体异构纯度大于97％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十三个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十四个实施方案的一部分，本文所述的方法和组合物中的阿普斯特的立体异构纯度大于98％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十三个实施方案的任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十四个实施方案的一部分，本文所述的方法和组合物中的阿普斯特的立体异构纯度大于99％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十三个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十四个实施方案的一部分，本文所述的方法和组合物中的阿普斯特的立体异构纯度大于99.5％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十三
个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十四个实施方案的一部分，本文所述的方法和组合物中的阿普斯特的立体异构纯度大于99.9％，其中所述tyk2抑制剂和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十三个实施方案任一个中所述。
[0204]
阿普斯特的多晶形式包括在所公开的方法和组合物中，并且包括例如，在us9018243中描述的那些，其全部内容通过引用并入本文。在第三十五个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为单晶形式，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十四个实施方案任一个中所述的。
[0205]
在第三十六个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为单晶形式b，其通过在选自10.1
°
、13.5
°
、20.7
°
和26.9
°
的2θ角处的x-射线粉末衍射峰表征，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十四个实施方案任一个中所述。或者，作为第三十六个实施方案的一部分，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为单晶形式b，其通过在选自10.1
°
、13.5
°
、15.7
°
、18.1
°
、20.7
°
、24.7
°
和26.9
°
的2θ角处的x-射线粉末衍射峰表征，其中阿普斯特以及tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十四个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十六个实施方案的一部分，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为单晶形式b，其通过在选自10.1
°
、13.5
°
、15.7
°
、16.3
°
、18.1
°
、20.7
°
、22.5
°
、24.7
°
、26.2
°
、26.9
°
和29.1
°
的2θ角处的x-射线粉末衍射峰表征，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所描述的，例如，如第一至第三十四个实施方案任一个中所述。
[0206]
在第三十七个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为至少90％的单晶形式b，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十六个实施方案任一个中所述。或者，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为至少95％的单晶形式b，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十六个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特为至少99％的单晶形式b，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如在第一至第三十六个实施方案任一个中所述。
[0207]
与所公开的tyk2抑制剂组合使用的阿普斯特或其药学上可接受的盐的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合、治疗医师的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。
[0208]
例如，在第三十八个实施方案中，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约0.5mg至约1000mg/天、约1mg至约1000mg/天、约5mg至约500mg/天、约10mg至约200mg/天、约10mg至约100mg/天、约40mg至约100mg/天、约20mg至约40mg/天、约0.1mg至约10mg/天、约0.5mg至约5mg/天、约1mg至约20mg/天和约1mg至约10mg/天、约1mg至约100mg/天、约1mg至约80mg/天、约5mg至约70mg/天、约10mg至约60mg/天和约10mg至约40mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。或者，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约10mg至约60mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约40mg至约100mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其
他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约40mg至约100mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案的任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约4mg至约10mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约4mg至约10mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量的范围为约10mg至约40mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量为约1mg/天、约2mg/天、约3mg/天、约4mg/天、约5mg/天、约10mg/天、约15mg/天、约20mg/天、约25mg/天、约30mg/天、约35mg/天、约40mg/天、约45mg/天、约50mg/天、约55mg/天或约60mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量为约30mg/天或约60mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特以约30mg，每天一次的剂量施用，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，第一到第三十七个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特以约30mg，每天两次的剂量施用，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，第一到第三十七个实施方案的任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特或其药学上可接受的盐的所述有效量为约10mg/天或约40mg/天，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案的任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特以约10mg，每天一次或两次的剂量施用，其中阿普斯特以及tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案的任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特以约20mg，每天一次或两次的剂量施用，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，作为第三十八个实施方案的一部分，阿普斯特的所述有效浓度为约100nm至约10μm(例如，从约0.1μm至约1μm)，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，如在第一至第三十七个实施方案任一个中所述。
[0209]
在第三十九个实施方案中，使用以下滴定方案将阿普斯特滴定至约30mg的剂量，每天施用两次：
[0210]
第1天：早晨约10mg；
[0211]
第2天：早晨约10mg和晚上约10mg；
[0212]
第3天：早晨约10mg和晚上约20mg；
[0213]
第4天：早晨约20mg和晚上约20mg；
[0214]
第5天：早晨约20mg和晚上约30mg；以及
[0215]
第6天及其后：约30mg，每天两次，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案的任一个中所述。或者，使用以下滴定方案将阿普斯特滴定至约40mg/天至约100mg/天之间的剂量：
[0216]
第1天：早晨约10mg；
[0217]
第2天：早晨约10mg和晚上约10mg；
[0218]
第3天：早晨约10mg和晚上约20mg；
[0219]
第4天：早晨约20mg和晚上约20mg；
[0220]
第5天：早晨约20mg和晚上约30mg；以及
[0221]
第6天及其后：约40mg/天至约100mg/天之间，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在另一个替代方案中，使用以下滴定方案将阿普斯特滴定至约20mg的剂量，每天施用两次：
[0222]
第1天：早晨约10mg；
[0223]
第2天：早晨约10mg和晚上约10mg；
[0224]
第3天：早晨约10mg和晚上约20mg；
[0225]
第4天：早晨约20mg和晚上约20mg；
[0226]
第5天：早晨约20mg和晚上约30mg；以及
[0227]
第6天及其后：约20mg，每日两次，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在又一个替代方案中，使用以下滴定方案将阿普斯特滴定至约4mg/天至约10mg/天之间的剂量：
[0228]
第1天：早晨约1mg；
[0229]
第2天：早晨约1mg和晚上约1mg；
[0230]
第3天：早晨约1mg和晚上约2mg；
[0231]
第4天：早晨约2mg和晚上约2mg；
[0232]
第5天：早晨约2mg和晚上约3mg；以及
[0233]
第6天及其后：约4mg/天至约10mg/天之间，其中阿普斯特以及tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。在又一个替代方案中，使用以下滴定方案将阿普斯特滴定至约3mg的剂量，每天施用两次：
[0234]
第1天：早晨约1mg；
[0235]
第2天：早晨约1mg和晚上约1mg；
[0236]
第3天：早晨约10mg和晚上约2mg；
[0237]
第4天：早晨约2mg和晚上约2mg；
[0238]
第5天：早晨约2mg和晚上约3mg；以及
[0239]
第6天及其后：约3mg，每日两次，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十七个实施方案任一个中所述。
[0240]
3.组合物和施用
[0241]
本文还提供了包含治疗有效量的阿普斯特或其药学上可接受的盐的药物组合物；和治疗有效量的tyk2抑制剂(例如，bms-986165)。所公开的药物组合物的特征包括上述要素，例如，如第一至第三十八个实施方案任一个中所述的要素。
[0242]
还提供了包含治疗有效量的阿普斯特或其药学上可接受的盐的药物组合物；和治疗有效量的tyk2抑制剂(例如bms-986165)，用于治疗对pde4的抑制有响应的疾病或紊乱。所公开的药物组合物的特征包括上述要素，例如，如第一至第三十八个实施方案任一个中所述的要素。
[0243]
药物组合物和单一单位剂型，其包含如上所述(例如，如第一至第三十八个实施方案任一个中)单独或一起以固定剂量用于施用的阿普斯特和tyk2抑制剂(例如，bms-986165)。所公开的方法和组合物的单一单位剂型适于口服、粘膜(例如，鼻、舌下、阴道、口腔或直肠)、肠胃外(例如，皮下、静脉内、弹丸式注射、肌内或动脉内)或经皮施用于患者。剂型的示例包括但不限于：片剂；囊形片；胶囊，如软弹性明胶胶囊；扁囊剂；口含片；菱形含片药物；分散体；栓剂；软膏剂；巴布膏剂(泥敷剂poultices)；糊剂；粉末；敷料；霜剂；膏药；溶液；片；气雾剂(例如，鼻腔喷雾剂或吸入剂)；凝胶剂；适于口服或经粘膜施用于患者的液体剂型，包括混悬剂(例如水性或非水性液体混悬剂，水包油乳剂或油包水液体乳剂)、溶液和酏剂；适于肠胃外施用于患者的液体剂型；和无菌固体(例如，结晶或无定形固体)，其可被重组合以提供适于肠胃外施用于患者的液体剂型。
[0244]
所述剂型的组成、形状和类型将通常根据其用途而变化。例如，与用于相同疾病的慢性治疗的剂型相比，用于炎症或相关紊乱的急性治疗的剂型可含有更大量的一种或多种活性成分。类似地，与用于治疗相同疾病的口服剂型相比，肠胃外剂型可含有更少量的一种或多种其所包含的活性成分。本发明所涵盖的特定剂型彼此不同的这些和其他方式对于本领域技术人员来说将是显而易见的。参见，例如，remington's pharmaceutical sciences,18th ed.,mack publishing,easton pa.(1990)。
[0245]
在第三十九个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特经肠胃外、皮、粘膜、鼻、颊、舌下或口服施用，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十八个实施方案任一个中所述。或者，作为第三十九个实施方案的一部分，口服施用所公开的方法和组合物中的阿普斯特，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十八个实施方案的任一个中所述。
[0246]
在第四十个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特以片剂或胶囊的形式口服施用，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十九个实施方案任一个中所述。
[0247]
在第四十一个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特被配制成缓释形式，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十九个实施方案任一个中所述。
[0248]
在第四十二个实施方案中，所公开的方法和组合物中的阿普斯特被配制为速释形式，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第三十九个实施方案任一个中所述。
[0249]
在第四十三个实施方案中，所公开的方法和组合物中的所述阿普斯特和所述tyk2
抑制剂两者以固定剂量组合以一天一次的制剂施用，其中阿普斯特以及所述tyk2抑制剂的其他特征和相关特征如本文所述，例如，如第一至第四十二个实施方案任一个中所述。
[0250]
4.通过本文所公开的方法和组合物治疗的病症
[0251]
对使用本文公开的方法和组合物的pde4抑制有响应的疾病或病症包括例如病毒性、遗传性、炎性、过敏性和自身免疫性病症。
[0252]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的疾病或紊乱选自慢性阻塞性肺疾病、哮喘、慢性肺炎性疾病、高氧肺泡损伤、炎性皮肤病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、类风湿性脊柱炎、骨关节炎、特应性皮炎、类风湿性脊柱炎、抑郁症、骨关节炎、接触性皮炎、强直性脊柱炎、狼疮、狼疮肾炎、皮肤红斑狼疮、系统性红斑狼疮、麻风结节性红斑、干燥综合征、炎性肠病、克罗恩病，白塞病和溃疡性结肠炎。
[0253]
在一个方面，对pde4抑制有响应的所述疾病或紊乱选自银屑病、银屑病关节炎、接触性皮炎、系统性红斑狼疮、皮肤红斑狼疮，和溃疡性结肠炎。
[0254]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是银屑病。在另一方面，对pde4的抑制有响应的疾病或紊乱是银屑病，并且所治疗的受试者是光疗法或系统疗法的候选者。
[0255]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是斑块状银屑病。在另一方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是斑块状银屑病，并且所治疗的受试者是光疗法或系统疗法的候选者。
[0256]
在一个方面，对pde4的抑制的有响应的所述疾病或紊乱是中度至重度斑块状银屑病。在另一方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是重度斑块状银屑病，并且所治疗的受试者是光疗法或系统疗法的候选人。
[0257]
在一个方面，对pde4的抑制的有响应的所述疾病或紊乱是银屑病关节炎。
[0258]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是活动性银屑病关节炎。
[0259]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是心脏病，如充血性心力衰竭、心肌病、肺水肿、内毒素介导的脓毒性休克、急性病毒性心肌炎、心脏同种异体移植排斥和心肌梗塞。
[0260]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或病症是hiv、肝炎、成人呼吸窘迫综合征、骨吸收疾病、囊性纤维化，脓毒性休克、脓毒症、内毒素性休克、血液动力学休克、脓毒症综合征、缺血后再灌注损伤、脑膜炎、纤维化疾病、恶病质、移植排斥、骨质疏松症、多发性硬化症和辐射损伤。
[0261]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是头、甲状腺、颈、眼、皮肤、口腔、咽喉、食道、胸、骨、血液、骨髓、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳腺、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏、肾上腺、皮下组织、淋巴结、心脏及其组合的癌症。
[0262]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是多发性骨髓瘤、恶性黑素瘤、恶性神经胶质瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴细胞b细胞白血病、急性淋巴细胞t细胞白血病、急性髓性白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病，急性巨核细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性未分化白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤和急性淋巴细胞白血病、髓细胞白血病、淋巴细胞白血病和髓细胞白血病。
[0263]
在一个方面，对pde4的抑制有响应的所述疾病或紊乱是实体瘤，如肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜肉瘤、间皮瘤、尤文氏肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、肾母细胞瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、卡波西肉瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质瘤、脑膜瘤，黑色素瘤、成神经细胞瘤和视网膜细胞瘤。
[0264]
实施例
[0265]
1.材料
[0266]
表1：全血测定：研究材料和试剂。
[0267][0268]
表2：lps刺激的pbmc测定：研究材料和试剂
[0269]
[0270][0271]
表3：用于研究的供试品
[0272][0273]
2.一般方法
[0274]
在知情同意和供体去标识化后，通过celgene供体程序接收全血。所有志愿者都是健康的，并且在抽血前至少72小时未服用任何药物。将血液收集在肝素钠管中。该测定在所述抽血后2小时内开始。
[0275]
在两种不同的刺激条件下进行健康供体人全血的离体刺激。条件th0是用包含抗-cd3/抗-cd28的管刺激。条件th17是用包含抗-cd3/抗-cd28加il-1β、il-6和il-23的管刺激。将全血分离到15毫升锥形管中并用dmso、单独的阿普斯特、单独的bms-986165或bms-986165与阿普斯特的组合预处理。最终浓度为0.2％dmso，1μm单独的阿普斯特，1μm、0.1μm、0.01μm和0.001μm单独的bms-986165以及与1μm阿普斯特的组合。将血充分混合，然后在37℃/5％co2孵箱中孵化1小时。
[0276]
将抗-cd3/抗-cd28(最终浓度分别为200ng/ml和330ng/ml)管在台面上融解30分钟，并随后标记。按压柱塞，然后折断。将管放置在直立的支架中，使得所述柱塞一侧在支架中指向下并且所述管盖指向上。当血液与化合物孵化时，将人重组il-6、il-1β和il-23以下列浓度添加到所有th17管中：120ngil-6、120ng il-1b和150ng il-23。使用无菌无热原移液器吸头将1ml预处理的全血置于每个管中。更换盖，所述管的内容物通过颠倒3次而混合。将所述管立即置于37℃加热块中并孵化42小时(管盖端)。
这42小时后，将所述管从加热块中取出，拧开顶部，并取出250μl的上清液并转移到三个96孔聚丙烯板中。将样品立即在-80℃下冷冻。然后将上清液在室温下融解，并通过luminex multi-plexmagpix技术(millipore)检测纯细胞因子的产生或通过elisa(abcam)检测il-22。相应地遵循制造商的程序。
[0277]
外周血单个细胞(pbmc)分离：在知情同意和供体去标识化后，通过celgene供体程序接收全血。所有志愿者都是健康的，并且在抽血前至少72小时未服用任何药物。将血液收集在肝素钠管中并在抽血2小时内用于pbmc分离。在pbmc分离之前，用含有2％fbs的pbs溶液(2％fbs-pbs)1:1稀释全血。将13ml淋巴细胞分离液装入所述管中，并将25ml所述稀释血液装在所述淋巴细胞分离液的顶部。以1200g离心15分钟，并打开制动器用于细胞分离，然后将分离的pbmc转移到新的管中。用2％fbs-pbs洗涤pbmc并以800g离心10分钟。将颗粒状物重新悬浮于2％fbs-pbs中并通过40μm细胞过滤器过滤以获得单细胞悬浮液。使用3ml rbc裂解缓冲液以消除分离群体中的红细胞。分离的pbmc用2％fbs-pbs洗涤并重新悬浮于含有10％fbs和抗生素的rpmi生长培养基中。
[0278]
对于实施例6-11，分离来自9个健康供体的pbmc并进行离体lps-刺激用于il-23、il-12p40、il-12p70、tnf-α、ifn-γ和mcp-1细胞因子分析。将pbmc以每孔200,000个细胞的密度在含有10％fbs的200μl rpmi生长培养基中接种在96孔板中，随后用dmso和化合物处理。每个孔接受相同量的dmso，其以0.3％v/v为最终浓度。根据表4如下所示进行化合物处理的系列稀释。化合物处理2小时后，以100ng/ml为最终浓度的lps用作刺激物。然后将pbmc在37℃/5％co2孵箱中孵化16小时。
[0279]
表4：用于pbmc测定的化合物处理条件
[0280][0281]
孵化16小时后，将上清液收集到新的96-孔聚丙烯板中并以4000rpm离心10分钟以除去细胞碎片。根据制造商的程序，通过luminexbio-plex多重免疫测定(bio-rad)测量细胞因子产生。为了确保上清液水平处于用于测定的标准细胞因子的范围内，将样品稀释5倍用于il-12p40和27-plex测定，并使用纯样品用于il-23测定。
[0282]
3.数据分析
[0283]
使用milliplex analyst(millipore)进行对细胞因子分析的数据处理，并将原始数据输出至excel模板用于细胞因子分析。使用graphpad prism 7.0(graphpadsoftware，inc.，lajolla，ca)绘制来自所述模板的数据，并表示为pg/ml或对照的％。还使用单向anova和dunnett的事后检验进行统计分析。
[0284]
使用bio-plex管理器进行对pbmc测定的数据处理，并将原始数据输出至excel模板用于细胞因子分析。使用graphpad prism 7.0(graphpad software，inc.，la jolla，ca)绘制数据并表示为dmso对照的％。使用单向anova和tukey的多重比较检验进行统计分析。
[0285]
为了评价阿普斯特和bms-986165的组合作用，通过比较两种药剂的组合响应与理论累加响应分析来自两种独立处理的数据。使用分数乘积法计算两种药剂(a和b)的预期累加作用：(fu)a,b＝(fu)a
×
(fu)b；其中fu＝未受处理影响的分数。当组合中观察到的未受
影响的分数小于(fu)a,b时测定组合的协同作用，而当组合中观察到的未受影响的分数等于(fu)a,b时测定累加作用。当组合中观察到的未受影响的分数大于(fu)a,b时表明部分累加作用。
[0286]
实施例1
[0287]
在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28、il-1β、il-6和il-23(th17)刺激的全血中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素17a细胞因子产生
[0288]
在th0和th17两种条件下分析来自4个健康供体的全血的il-17a、il-17f、il-22、tnf-α和gm-csf细胞因子产生。使用管系统单独地和组合地用阿普司特和tyk2抑制剂bms-986165两者对所述血进行预处理。位于图1中的il-17a结果显示对照的il-17a％，并且所有数据标准化为th17 dmso对照。阿普斯特在th0条件下抑制28％的il-17a细胞因子表达且在th17条件下无作用。bms-986165在两种刺激条件下都具有类似的作用，并且在0.001-1μm下抑制10-25％的il-17a表达。在th0条件下，当阿普斯特与bms-986165组合时，观察到与1μm bms-986165的协同作用，il-17a降低65％。在th17条件下，1μm阿普斯特和0.01μm、0.1μm和1μm mbs-986165的组合存在协同作用，对il-17a的抑制分别为24％、44％和85％。图2显示每毫升il-17a水平的皮克数。与th0刺激相比，在th17刺激条件中il-17a水平增加387％。在th0条件中阿普斯特将il-17a水平从138pg/ml降低至93pg/ml。bms-986165在1μm下将il-17a水平降低至97pg/ml。在th0刺激下，阿普斯特与1μm bms-986165的组合进一步将il-17a水平降低至24pg/ml。在th17条件下，刺激对照测得为532pg/ml，并且阿普斯特不抑制il-17a水平。bms-986165在0.01μm下将il-17a水平降低至519pg/ml，在0.1μm下将il-17a水平降低至428pg/ml且在1μm下将il-17a水平降低至383pg/ml。1μm阿普斯特与bms-986165的组合使il-17a水平在0.01μm bms-986165下降低至379pg/ml，在0.1μm bms-986165下降低至328pg/ml且在1μmbms-986165下降低至68pg/ml。
[0289]
实施例2
[0290]
在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28、il-1β、il-6和il-23(th17)刺激的全血中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素17f细胞因子产生
[0291]
il-17f细胞因子表达数据在图3和图4中。阿普斯特在th0条件下抑制69％的il-17f产生且在th17条件下抑制49％的il-17f产生。bms-986165在th0和th17两种刺激下对il-17f具有相似的作用。在0.001μm的最低浓度下具有31％抑制，和在0.01μm下具有34％il-17f表达的抑制、在0.1μm下具有70％il-17f表达的抑制且在1μm下具有95％的il-17f表达的抑制的剂量反应(th17结果)。在th0条件下，1μm阿普斯特与bms-986165的组合部分累加，具有从在0.001μm下60％至在1μm下95％的抑制范围。在th17条件下，较低浓度的bms-986165与阿普斯特组合显示协同作用。在th17刺激条件下，阿普斯特与在0.001μm下的bms-986165组合抑制68％的il-17f产生，与在0.01μm下的bms-986165组合抑制70％的il-17f产生，与在0.1μm下的bms-986165组合抑制94％的il-17f产生，且与在1μm下的bms-986165组合抑制99％的il-17f产生。在th0刺激对照中il-17f的水平为1085pg/ml，且在th17刺激中增加至6524pg/ml。阿普斯特在th0刺激中将il-17f降低至368pg/ml，且在th17刺激中降低至3643pg/ml。在两种刺激条件中，bms-986165在0.1和1μm下显著降低il-17f。当与阿普斯特组合时和在两种刺激条件下，在bms-986165的所有浓度下都存在il-17f的显著抑制。
[0292]
实施例3
[0293]
在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血中通过阿普斯特和bms-986165的白细胞介素22细胞因子产生
[0294]
il-22细胞因子表达数据在图5和图6中。阿普斯特在th0条件下抑制85％的il-22细胞因子表达且在th17条件下抑制41％的il-22细胞因子表达。在th0刺激条件下，bms-986165在0.01μm下抑制16％的il-22，在0.1μm下抑制86％的il-22且在1μm下抑制91％的il-22。在th17刺激条件下，bms-986165在0.001μm下对il-22细胞因子表达没有作用，但在0.01μm下抑制17％的il-22细胞因子表达，在0.1μm下抑制60％的il-22细胞因子表达，在1μm下抑制70％的il-22细胞因子表达。在th0条件下，该组合具有与单独的阿普斯特类似的作用，在所有浓度bms-98616下抑制～90％。在th17条件下的该组合是增效剂，在0.01μm浓度下抑制60％il-22细胞因子表达，和在0.1μm浓度下抑制90％il-22细胞因子表达。所述th0刺激对照具有1085pg/ml的il-22且th17对照为6524pg/ml。阿普斯特在th0条件下将il-22水平显著降低至368pg/ml且在th17条件下显著降低至3643pg/ml。bms-986165在0.1μm和1μm下的两种刺激条件中显著降低il-22细胞因子表达。当与阿普斯特组合时和在两种刺激条件下，在bms-986165的所有浓度下都显著抑制il-22。
[0295]
实施例4
[0296]
在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28，il-1β，il-6和il-23(th17)刺激的全血中通过阿普斯特和bms-986165的tnf-α细胞因子产生
[0297]
tnf-α细胞因子表达数据位于图7和图8中。阿普斯特在th0条件中抑制90％的tnf-α水平且在th17条件中抑制94％的tnf-α水平。在th0刺激中，bms-986165在0.001μm下使tnf-α表达增加21％，在0.01μm下使tnf-α表达增加43％且在0.1μm下使tnf-α表达增加61％。在1μm的最高浓度下的bms-986165抑制66％的tnf-α细胞因子表达。在th17条件下，用bms-986165观察到在tnf-α产生中类似的增加，在0.01μm下增加19％且在0.1μm下增加77％。在th17刺激条件下，用1μm bms-986165也抑制tnf-α(68％)。1μm阿普斯特与bms-986165的组合降低80-95％(th0)和93-96％(th17)的tnf-α水平，与单一药剂阿普斯特的作用类似。两种刺激条件对tnf-α水平具有类似作用，所述th0刺激对照为1380pg/ml，和所述th17刺激对照为1436pg/ml。阿普斯特通过在th0条件中将水平降低至148pg/ml和在th17条件中降低至91pg/ml显著抑制tnf-α。在th17条件中通过在0.1μm下的bms-986165的tnf-α水平的增加是显著的。在两种刺激条件下，使用1μmbms-986165的tnf-α水平的抑制是显著的。在所有浓度和在两种刺激条件下，阿普斯特与bms-986165的组合显著抑制tnf-α水平。
[0298]
实施例5
[0299]
在抗-cd3/抗-cd28(th0)或抗-cd3/抗-cd28、il-1、il-6和il-23(th17)刺激的全血中通过阿普斯特和bms-986165的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子细胞因子产生
[0300]
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)细胞因子表达结果在图9和图10中。阿普斯特在th0条件下使gm-csf细胞因子表达降低80％且在th17条件下降低66％。bms-986165在两种条件下都增加gm-csf细胞因子的表达。在th0条件中，bms-986165在0.001μm下使gm-csf增加19％，在0.01μm下使gm-csf增加36％，在0.1μm下使gm-csf增加110％，在1μm下使gm-csf增加31％。当阿普斯特(0.1μm)添加到bms-986165时，存在60-80％的gm-csf细胞因子表达的抑制。在th17刺激中，bms-986165在0.01μm下使gm-csf增加41％，在0.1μm下使gm-csf增加139％和在1μm下使gm-csf增加104％。当添加阿普斯特时，存在40-73％的gm-csf细
胞因子表达的抑制。在th0和th17刺激对照中gm-csf的总pg/ml分别为409和637。阿普斯特在两种刺激条件下均显著抑制gm-csf。通过在0.1μm(th0和th17两种)和1μm(th17)下的bms-986165的gm-csf的增加是显著的。在所有浓度和两种刺激条件下，阿普斯特和bms-986165的组合显著降低gm-csf细胞因子水平。
[0301]
实施例6
[0302]
在lps刺激的pbmc中用阿普斯特和tyk2i(bms-986165)处理的il-23产生
[0303]
分析来自9个健康供体的pbmc在lps刺激条件中的细胞因子产生(图11至图17)。图11和图12中的结果显示il-23的水平。图11显示阿普斯特降低lps刺激的pbmc中的il-23产生。来自dmso处理的lps刺激的pbmc的il-23水平被设定为100％(对照)，细胞因子水平显示为与对照相比的标准化值(％)。与通过阿普斯特降低il-23水平相反，图12显示bms-986165诱导lps刺激的pbmc中il-23水平。在0.2μm-2μm的范围内，与dmso组相比，bms-986165诱导il-23增加20倍。阿普斯特与bms-986165的组合能够降低通过bms-986165的il-23的诱导。随着阿普斯特水平的增加，il-23水平显著降低。使用anova和turkey的多重比较进行统计学分析以比较单独用bms-986165的每个处理。当bms-986165与浓度为0.037μm的低水平的阿普斯特组合时，il-23显著降低(****p《0.001)。当与1μm阿普斯特组合时，il-23的诱导被90％抑制，并且几乎达到与单独的阿普斯特类似的水平。因此，与单独的阿普斯特处理相比，用1μm阿普斯特的组合处理的曲线没有显著差异。
[0304]
实施例7
[0305]
在lps刺激的pbmc中用阿普斯特和tyk2i(bms-986165)处理的il-12p40产生
[0306]
图13中的结果显示与dmso处理的lps刺激的pbmc组相比的il-12p40的标准化水平。阿普斯特以剂量依赖性方式降低il-12p40，而bms-986165增加il-12p40。bms-986165与阿普斯特的组合显著降低bms-986165对il-12p40的诱导。用1μm阿普斯特，通过bms-986165诱导的增加的il-12p40被85％抑制，并且几乎达到与单独的阿普斯特类似的水平。使用anova和turkey的多重比较进行统计学分析以比较单独用bms-986165的每个处理。****p《0.001。
[0307]
实施例8
[0308]
在lps刺激的pbmc中用阿普斯特和tyk2i(bms-986165)处理的il-12p70产生
[0309]
图14中的结果显示与dmso处理的lps刺激的pbmc组相比的il-12p70的标准化水平。阿普斯特以剂量依赖性方式降低il-12p70，而bms-986165增加il-12p70。bms-986165与阿普斯特的组合显著降低通过bms-986165的il-12p70的诱导。在组合处理中，0.3μm和1μm均显著降低通过bms-986165诱导的il-12p70水平，并且与单独阿普斯特相比没有显著差异。使用anova和turkey的多重比较进行统计学分析以比较单独用bms-986165的每个处理。****p《0.001。
[0310]
实施例9
[0311]
在lps刺激的pbmc中用阿普斯特和tyk2i(bms-986165)处理的tnf-α产生
[0312]
图15中的结果显示与dmso处理的lps刺激的pbmc组相比的tnf-α的标准化水平。阿普斯特以剂量依赖性方式降低tnf-α水平，然而，bms-986165诱导tnf-α的1.2-1.5倍增加。bms-986165和阿普斯特的组合显著降低tnf-α的水平。使用anova和turkey的多重比较进行统计学分析以比较单独用bms-986165的每个处理。****p《0.001。
[0313]
实施例10
[0314]
在lps刺激的pbmc中用阿普斯特和tyk2i(bms-986165)处理的ifn-γ产生
[0315]
图16中的结果显示与dmso处理的lps刺激的pbmc组相比的ifn-γ的标准化水平。单独的阿普斯特和单独的bms-986165两者以剂量依赖性方式降低ifn-γ。bms-986165和阿普斯特的组合在降低ifn-γ水平中具有协同作用，与单一化合物处理相比，其显著降低ifn-γ水平。使用anova和turkey的多重比较进行统计学分析以比较单独用bms-986165的每个处理。****p《0.001。
[0316]
实施例11
[0317]
在lps刺激的pbmc中用阿普斯特和tyk2i(bms-986165)处理的mcp-1产生
[0318]
图17中的结果显示与dmso处理的lps刺激的pbmc组相比的mcp-1的标准化水平。单独的阿普斯特和单独的bms-986165两者以剂量依赖性方式降低mcp-1。bms-986165和阿普斯特的组合在降低mcp-1水平中具有协同作用。使用anova和turkey的多重比较统计学分析以比较单独用bms-986165的每个处理。****p《0.001。
[0319]
数据总结
[0320]
以下表5提供在离体测定中阿普斯特和bms-986165对刺激的全血的细胞因子作用的总结。协同作用加粗显示，并且互补作用以下划线显示。
[0321]
用tyk2抑制剂bms-986165 /-阿普斯特在th0(抗-cd3/抗-cd28)或th17(抗-cd3/抗-cd28 il-1β，il-6和il-23)条件中在所述truculture测定中测试四个健康供体的全血48小时。bms-986165在th0和th17条件下抑制il-17a，il-17f和il-22细胞因子表达。在th17条件下，当与阿普斯特组合时，这些细胞因子进一步减少，对il-17a，il-17f和il-22具有协同作用。bms-986165增加tnf-α和gm-csf的产生，而阿普斯特抑制这些细胞因子的产生。当bms-986165与阿普斯特组合时，存在对tnf-α和gm-csf细胞因子表达的互补作用，阿普斯特纠正bms-986165的缺陷。这些组合的作用提供了用于治疗对pde4的抑制有响应的疾病或紊乱的方法，如用于治疗炎性疾病(例如，银屑病、银屑病关节炎和溃疡性结肠炎)。
[0322]
表5
[0323]
[0324][0325]
以下表6提供阿普斯特和bms-986165对lps刺激的pbmc的细胞因子作用的总结。红色箭头表示诱导，和绿色箭头表示细胞因子的产生减少。
[0326]
在有或没有bms-986165或阿普斯特或两者的组合的lps刺激的条件中测试来自9个健康供体的pbmc。单独的bms-986165处理诱导il-23、il-12p40、il-12p70和tnf-α，而单独的阿普斯特处理降低这些细胞因子。当bms-986165与阿普斯特组合时，与dmso对照组相比，这些细胞因子未改变或减少。这些结果表明阿普斯特可通过bms-986165抑制诱导这些细胞因子。阿普斯特和bms-986165两者均降低ifn-γ和mcp-1产生，并且两者的组合以协同作用进一步降低这两种细胞因子。bms-986165抑制th17谱系细胞因子，其提供一种用于治疗其中th17细胞因子涉及发病机理的疾病的方法。然而，通过bms-986165的一些促炎细胞因子如il-23、il-12和tnf-α的诱导可能是疾病治疗中的不利因素。其中il-23、il-12和tnf-α降低的阿普斯特和bms-986165的组合作用显示出组合这两种化合物在治疗炎性疾病如银屑病、银屑病关节炎和溃疡性结肠炎中的优势。
[0327]
表6
[0328][0329]
诱导
[0330]
无变化
[0331]
减少
[0332]
实施例12
[0333]
全血中阿普斯特和tyk2i(bms-986165)固定剂量组合
[0334]
以下列固定剂量，在il-17a、il-17f、il-22和tnf-α全血中测试阿普斯特和bms-986165：2mg bid bms-986165，6mg qdbms-986165，6mg bid bms-986165，10mg bid阿普斯特，20mgbid阿普斯特和30mg bid阿普斯特。这些浓度来自观察到的平均血浆浓度或从临床药代动力学数据外推。
[0335]
如图18-21所示，6mg qd剂量浓度的bms-986165没有最大程度地抑制il-17a、il-17f或il-22，并且其升高tnf-α。参见图18-21。然而，添加在10至30mg bid剂量浓度下的阿普斯特补偿了这一点，并防止了所述tnf-α升高。参见图18-21。即使低浓度的阿普斯特也显示有作用。例如，20mg bid剂量的阿普斯特补偿了il-17f的次优抑制，并且10mg bid剂量的阿普斯特补偿了il-22的次优抑制，并且防止tnf-α的增加。该数据支持bms-986165(例如，在6mg qd下)和阿普斯特(例如，10-20mg qd或bid)协同使用以抑制il-17和il-22，并减少tnf-α产生，用于治疗由这些细胞因子驱动的炎性疾病如银屑病、银屑病关节炎、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、化脓性汗腺炎和白塞氏病。