嵌合抗原受体和使用方法与流程

技术特征：
1.编码嵌合抗原受体(car)的分离的核酸分子，所述嵌合抗原受体(car)包含至少一个细胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜肿瘤坏死因子受体超家族(tnfrsf)结构域和至少一个细胞内信号转导结构域。2.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述抗原是癌症抗原。3.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码的至少一个细胞外抗原结合结构域包含与所述抗原结合的抗体的至少一个单链可变片段。4.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码的至少一个细胞外抗原结合结构域包含与所述抗原结合的抗体的至少一个重链可变区。5.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码的至少一个细胞外抗原结合结构域、所述至少一个细胞内信号转导结构域或二者通过接头或间隔区结构域与所述跨膜结构域连接。6.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中在编码的细胞外抗原结合结构域之前是编码前导肽的序列。7.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码的细胞外抗原结合结构域靶向包含以下的抗原：cd19、cd20、cd22、ror1、间皮素、cd33、cd38、cd123(il3ra)、cd138、bcma(cd269)、gpc2、gpc3、fgfr4、c-met、psma、糖脂f77、egfrviii、gd-2、ny-eso-1 tcr、mage a3 tcr，或其任意组合。8.权利要求7所述的分离的核酸分子，其中所述编码的细胞外抗原结合结构域包含抗cd19 scfv抗原结合结构域、抗cd20 scfv抗原结合结构域、抗cd22 scfv抗原结合结构域、抗ror1 scfv抗原结合结构域、抗间皮素scfv抗原结合结构域、抗cd33 scfv抗原结合结构域、抗cd38 scfv抗原结合结构域、抗cd123(il3ra)scfv抗原结合结构域、抗cd138 scfv抗原结合结构域、抗bcma(cd269)scfv抗原结合结构域、抗gpc2 scfv抗原结合结构域、抗gpc3 scfv抗原结合结构域、抗fgfr4 scfv抗原结合结构域、抗c-met scfv抗原结合结构域、抗pmsa scfv抗原结合结构域、抗糖脂f77 scfv抗原结合结构域、抗egfrviii scfv抗原结合结构域、抗gd-2 scfv抗原结合结构域、抗ny-eso-1 tcr scfv抗原结合结构域、抗mage a3 tcr scfv抗原结合结构域，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，或其任意组合。9.权利要求5所述的分离的核酸分子，其中编码的接头或间隔区结构域来源于cd8的细胞外结构域，并且与跨膜tnfrsf16结构域、跨膜tnfrsf19结构域、或其任意组合连接。10.权利要求5所述的分离的核酸分子，其中所述接头或间隔区结构域来源于tnfrsf 16或tnfrsf 19的细胞外结构域，并且与跨膜tnfrsf16结构域、跨膜tnfrsf19结构域、或其任意组合连接。11.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述跨膜tnfrsf结构域包含跨膜tnfrsf16结构域、跨膜tnfrsf19结构域、或其任意组合。12.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码tnfrsf16跨膜结构域的核酸序列包含seq id no：1的核酸序列，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。13.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码tnfrsf19跨膜结构域的核酸序列包含seq id no：3的核苷酸序列，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序
列。14.权利要求10所述的分离的核酸分子，其中编码tnfrsf16接头结构域的核酸序列包含seq id no：25的核苷酸序列，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。15.权利要求10所述的分离的核酸分子，其中编码tnfrsf19接头结构域的核酸序列包含seq id no：23的核苷酸序列，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。16.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述car还包含以下跨膜结构域，所述跨膜结构域包含选自以下的蛋白质的跨膜结构域：t细胞受体的α、β或ζ链、cd28、cd3ε、cd45、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137和cd154，或其任意组合。17.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码的至少一个细胞内信号转导结构域还包含cd3ζ细胞内结构域。18.权利要求17所述的分离的核酸分子，其中所述编码的至少一个细胞内信号转导结构域相对于所述cd3ζ细胞内结构域布置在c端侧。19.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中编码的至少一个细胞内信号转导结构域包含共刺激结构域、初级信号转导结构域，或其任意组合。20.权利要求19所述的分离的核酸分子，其中编码的至少一个共刺激结构域包含以下的功能性信号转导结构域：ox40、cd70、cd27、cd28、cd5、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、dap10、dap12和4-1bb(cd137)，或其任意组合。21.权利要求1所述的分离的核酸分子，其还包含前导序列。22.权利要求21所述的分离的核酸分子，其中前导核苷酸序列包含seq id no：5的核苷酸序列。23.嵌合抗原受体(car)，其由权利要求1所述的分离的核酸分子编码。24.权利要求23所述的car，其包含至少一个细胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜tnfrsf结构域和至少一个细胞内信号转导结构域。25.权利要求24所述的car，其中所述细胞外抗原结合结构域包含与所述抗原结合的抗体的至少一个单链可变片段。26.权利要求24所述的car，其中所述细胞外抗原结合结构域包含与所述抗原结合的抗体的至少一个重链可变区。27.权利要求24所述的car，其中所述细胞外抗原结合结构域包含cd19、cd20、cd22、ror1、间皮素、cd33、cd38、cd123(il3ra)、cd138、bcma(cd269)、gpc2、gpc3、fgfr4、c-met、psma、糖脂f77、egfrviii、gd-2、ny-eso-1 tcr、mage a3 tcr，或其任意组合。28.权利要求27所述的car，其中所述细胞外抗原结合结构域包含抗cd19 scfv抗原结合结构域、抗cd20 scfv抗原结合结构域、抗cd22 scfv抗原结合结构域、抗ror1 scfv抗原结合结构域、抗间皮素scfv抗原结合结构域、抗cd33 scfv抗原结合结构域、抗cd38 scfv抗原结合结构域、抗cd123(il3ra)scfv抗原结合结构域、抗cd138 scfv抗原结合结构域、抗bcma(cd269)scfv抗原结合结构域、抗gpc2 scfv抗原结合结构域、抗gpc3 scfv抗原结合结构域、抗fgfr4 scfv抗原结合结构域、抗c-met scfv抗原结合结构域、抗pmsa scfv抗原结
合结构域、抗糖脂f77 scfv抗原结合结构域、抗egfrviii scfv抗原结合结构域、抗gd-2 scfv抗原结合结构域、抗ny-eso-1 tcr scfv抗原结合结构域、抗mage a3 tcr scfv抗原结合结构域，或其具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，或其任意组合。29.权利要求24所述的car，其中所述至少一个跨膜tnfrsf结构域包含跨膜tnfrsf19结构域、跨膜tnfrsf16结构域，或其任意组合。30.权利要求29所述的car，其中所述tnfrsf16跨膜结构域包含seq id no：2的氨基酸序列，或与seq id no：2的氨基酸序列具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。31.权利要求29所述的car，其中所述tnfrsf19跨膜结构域包含seq id no：4的氨基酸序列，或与seq id no：4的氨基酸序列具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。32.权利要求24所述的car，其中编码的至少一个细胞外抗原结合结构域、所述至少一个细胞内信号转导结构域或二者通过接头或间隔区结构域与所述跨膜结构域连接。33.权利要求32所述的car，其中所述接头或间隔区结构域来源于tnfrsf 16或tnfrsf 19的细胞外结构域，并且与跨膜tnfrsf16结构域、跨膜tnfrsf19结构域、或其任意组合连接。34.权利要求33所述的car，其中tnfrsf16接头结构域包含seq id no：25的氨基酸序列，或与seq id no：25的氨基酸序列具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。35.权利要求33所述的car，其中tnfrsf19接头结构域包含seq id no：24的氨基酸序列，或与seq id no：24的氨基酸序列具有85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列。36.权利要求24所述的car，其中所述至少一个细胞内信号转导结构域包含共刺激结构域和初级信号转导结构域。37.权利要求36所述的car，其中所述至少一个细胞内信号转导结构域包含共刺激结构域，所述共刺激结构域包含选自以下的蛋白质的功能性信号转导结构域：ox40、cd70、cd27、cd28、cd5、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、dap10、dap12和4-1bb(cd137)，或其组合。38.载体，其包含权利要求1所述的核酸分子。39.权利要求38所述的载体，其中所述载体选自：dna载体、rna载体、质粒载体、黏粒载体、疱疹病毒载体、麻疹病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体，或其组合。40.权利要求38所述的载体，其还包含启动子。41.权利要求40所述的载体，其中所述启动子是诱导型启动子、组成型启动子、组织特异性启动子、自杀型启动子或其任意组合。42.细胞，其包含权利要求38所述的载体。43.权利要求42所述的细胞，其中所述细胞是t细胞。44.权利要求43所述的细胞，其中所述t细胞是cd8 t细胞。45.权利要求42所述的细胞，其中所述细胞是人细胞。
46.制备细胞的方法，其包括用权利要求38所述的载体转导t细胞。47.产生经rna改造细胞群的方法，其包括将体外转录的rna或合成rna引入细胞中，其中所述rna包含权利要求1所述的核酸分子。48.在哺乳动物中提供抗肿瘤免疫的方法，其包括向所述哺乳动物施用有效量的权利要求42所述的细胞。49.在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，其包括以有效地在所述哺乳动物中治疗或预防癌症的量向所述哺乳动物施用权利要求23所述的car。50.药物组合物，其包含抗肿瘤有效量的人t细胞群，其中所述t细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的核酸序列，其中所述car包含至少一个细胞外抗原结合结构域、至少一个接头结构域、至少一个跨膜tnfrsf结构域、至少一个细胞内信号转导结构域，并且其中所述t细胞是患有癌症的人的t细胞。51.权利要求50所述的药物组合物，其中所述至少一个跨膜tnfrsf结构域包含跨膜tnfrsf16结构域、跨膜tnfrsf19结构域或其组合。52.权利要求50所述的药物组合物，其中所述t细胞是患有血液学癌症的人的t细胞。53.权利要求52所述的药物组合物，其中所述血液学癌症是白血病或淋巴瘤。54.权利要求53所述的药物组合物，其中所述白血病是慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性淋巴细胞白血病(all)或慢性髓细胞性白血病(cml)。55.权利要求53所述的药物组合物，其中所述淋巴瘤是套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤。56.权利要求52所述的药物组合物，其中所述血液学癌症是多发性骨髓瘤。57.权利要求50所述的药物组合物，其中人癌症包括成体癌，其包括口腔和咽癌(舌、口、咽、头和颈)、消化系统癌症(食管、胃、小肠、结肠、直肠、肛门、肝、肝内胆管、胆囊、胰腺)、呼吸系统癌症(喉、肺和支气管)、骨和关节癌、软组织癌症、皮肤癌(黑素瘤、基底细胞和鳞状细胞癌)、儿科肿瘤(神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤)、中枢神经系统的肿瘤(脑、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、胶质瘤)，以及乳腺、生殖系统(子宫颈、子宫体、卵巢、外阴、阴道、前列腺、睾丸、阴茎、子宫内膜)、泌尿系统(膀胱、肾和肾盂、输尿管)、眼和眼眶、内分泌系统(甲状腺)以及脑和其他神经系统的癌症，或其任意组合。58.治疗患有与肿瘤抗原的表达升高相关的疾病、障碍或病症的哺乳动物的方法，所述方法包括向对象施用包含抗肿瘤有效量的t细胞群的药物组合物，其中所述t细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的核酸序列，其中所述car包含至少一个细胞外抗原结合结构域、至少一个接头或间隔区结构域、至少一个跨膜tnfrsf结构域、至少一个细胞内信号转导结构域，其中所述t细胞是患有癌症的对象的t细胞。59.在有此需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用包含抗肿瘤有效量的t细胞群的药物组合物，其中所述t细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的核酸序列，其中所述car包含至少一个细胞外抗原结合结构域、至少一个接头或间隔区结构域、至少一个跨膜tnfrsf结构域、至少一个细胞内信号转导结构域，其中所述t细胞是患有癌症的对象的t细胞。60.权利要求58或59所述的方法，其中所述至少一个跨膜tnfrsf结构域包含跨膜tnfrsf16结构域、跨膜tnfrsf19结构域或其组合。
61.用于产生表达嵌合抗原受体的细胞的方法，所述方法包括向细胞中引入权利要求1所述的分离的核酸。62.根据权利要求61所述的用于产生表达嵌合抗原受体的细胞的方法，其中所述细胞是t细胞或包含t细胞的细胞群。

技术总结
本申请涉及嵌合抗原受体和使用方法，具体公开了包含肿瘤坏死因子受体超家族成员跨膜结构域的嵌合抗原受体。还公开了与所述嵌合抗原受体相关的核酸、重组表达载体、宿主细胞、抗原结合片段和药物组合物。还公开了在对象中治疗或预防癌症的方法和制备嵌合抗原受体T细胞的方法。的方法。的方法。


技术研发人员：里马斯
受保护的技术使用者：美天施生物科技有限公司
技术研发日：2016.10.07
技术公布日：2022/3/15