松花粉益生菌发酵型化妆品原料的制作方法及应用与流程

1.本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及一种松花粉益生菌发酵型化妆品原料的制作方法，还涉及上述原料的应用。


背景技术：

2.松花粉为松科植物马尾松、油松或同属数种植物的干燥花粉。花粉是植物的粗细胞，素有“完全营养素”和“微营养库”之美誉。近20年来，国内外对花粉有益成分、药理作用和生理功能进行了大量的研究，证实其对人体六十多种疾病具有良好的防治效果，在医药、保健品、功能性食品以及日用化妆口领域有着广阔的开发前景。
3.自古松花粉就是食疗、美容之珍品，其在护肤品上的应用具有悠久历史，清《本草从新》记载松花粉“善糁诸痘疮伤损并湿烂不痂”。现代科学研究表明，松花粉含有多种维生素、蛋白质、氨基酸、脂肪等营养成分，被誉为“超级微型营养库”。其中的花粉黄酮、皂苷等活性成分具有美白、抗衰老、抗菌抗炎功效，经常用于化妆品中。
4.目前，对于松花粉的提取往往采用沸水浸提，这种浸提方法效率低，且有效物质难以较大程度的被提取，因此急需一种简单易行的方法解决上述问题。
5.cn111671084a披露了一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法，包括以下的步骤：(1)将破壁松花粉与水混合，使用纤维素酶和果胶酶进行酶解处理；(2)进行发酵环境调节，并灭菌；(3)接种菌种，发酵5-7天；(4)将步骤(3)获得的发酵液分离，得上清液与沉淀；(5)将步骤(4)获得的沉淀进行热回流提取，分离得上清液；(6)将步骤(4)与步骤(5)获得的上清液合并，浓缩干燥得发酵松花粉提取物。通过上述方法提取获得的产品，显著降低了发酵松花粉提取物的致敏性，且显著提高了发酵松花粉的抗氧化活性。但是关于上述的化妆品的用途并未完全开发出来。


技术实现要素：

6.本发明提供了一种松花粉益生菌发酵型化妆品原料的制作方法，具体如下：一种松花粉益生菌发酵型化妆品原料的制作方法，包括如下步骤：（1）取适量破壁松花粉和水混合，复合酶酶解，灭菌，冷却得到发酵底物；（2）发酵底物接种益生菌种进行发酵处理；其中，益生菌种为鼠李糖乳酸杆菌、副干酪乳杆菌、嗜热链球菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、植物乳酸杆菌、酵母菌中的至少一种；（3）发酵结束后，分离沉淀，得发酵上清液，二次浸提处理，得浸提上清液，合并上清液得到松花粉益生菌发酵液。
7.优选的，（1）中，破壁松花粉的制备条件为：超微破壁粉碎10~20min，至细度大于1500目。
8.优选的，（1）中，破壁松花粉与水的重量比为1:30；复合酶为酸性纤维素酶、酸性果胶酶、淀粉酶、蛋白酶、糖化酶中的至少两种；
复合酶添加量为1%~5%（重量），酶解条件为：50℃-65℃，ph=5.0-6.5，搅拌2-3h。
9.优选的，（1）中，灭菌条件为：85℃巴氏灭菌处理30min。
10.优选的，（2）中，发酵底物接种3%（重量）鼠李糖乳酸杆菌、3%（重量）副干酪乳杆菌和3%（重量）植物乳酸杆菌；发酵条件为：37℃，静置培养5-7d。
11.优选的，（3）中，分离处理采用离心法；其中离心条件为：转速8000~10000r/min，离心时间10~20min。
12.优选的，（3）中，二次浸提处理采用回流方式；回流条件为：80℃~100℃，回流浸提30~60min。
13.优选的，（3）中，合并上清液为将发酵上清液和二次浸提上清液进行合并，进行防腐处理；其中，防腐处理为松花粉发酵液冷却至45℃以下后添加3%（重量）戊二醇。
14.优选的，复合酶为酸性纤维素酶、酸性果胶酶和酸性蛋白酶，复合酶添加量为：酸性纤维素酶、酸性果胶酶和酸性蛋白酶各添加1%（重量）；酶解条件：55℃~65℃，ph=5.5~6.5，搅拌2~3h。
15.本发明的有益效果在于，通过酶解后益生菌发酵在沸水浸提处理，与传统沸水浸提工艺相比，增加了有效成分黄酮和皂苷含量，并提高了溶出率。
附图说明
16.图1为实施例1中的松花粉益生菌发酵液在b16黑色素细胞（mtt，酪氨酸酶，黑色素）评价实验结果；图2为实施例1中的松花粉益生菌发酵液在体外抗氧化（dpph，超氧阴离子，羟自由基）评价实验结果。
具体实施方式
17.下面通过具体实施例形式对本发明作更进一步的说明，但本发明并不局限于此，凡是与本技术相同或相近的技术方案均属于本发明的内容。
18.实施例11、称取超微破壁后的松花粉20g，添加600ml的蒸馏水，充分搅拌均匀后，调节ph到6.5；2、搅拌的同时加入0.2g酸性纤维素酶、0.2g酸性果胶酶、0.2g蛋白酶，60℃条件下搅拌酶解2小时；3、将酶解好的酶解液转入灭菌设备，85℃巴氏灭菌30分钟，随入转入无菌操作台，冷却至40℃时，接入提前培养好的植物乳酸杆菌、鼠李糖乳酸杆菌、副干酪乳酸杆菌，各接种量占总质量的5%；4、转入37℃培养相，静置培养，每天取测ph及还原糖，还原糖不再下降，视为发酵结束；5、分离发酵液，采用离心方式，转速8000r/min，时间10min；6、收集发酵液备用，将湿沉淀补水至620g转入至回流瓶内，沸水回流浸提1小时；
7、分离浸提上清液，与发酵液混合；8、待发酵液冷却降温45℃以下，加入总质量3%戊二醇溶液进行防腐。
19.对上述制得的产品进行b16黑色素细胞实验和体外抗氧化能力测试，结果显示（见图1和图2），本发明制备的松花粉益生菌发酵液具有较好的黑色素抑制作用和优异的抗氧化功能。
20.实施例21、称取超微破壁后的松花粉20g，添中600ml的蒸馏水，充分搅拌均匀后，调节ph至5.5；2、搅拌的同时加入0.2g酸性纤维素酶、0.2g酸性果胶酶、0.2g蛋白酶，50℃条件下搅拌酶解3小时；3、将酶解好的酶解液转入灭菌设备，85℃巴氏灭菌30分钟，随入转入无菌操作台，冷却至40℃时，接入提前培养好的植物乳酸杆菌，接种量占总质量的10%；4、转入37℃培养相，静置培养，每天取测ph及还原糖，还原糖不再下降，视为发酵结束；5、分离发酵液，采用离心方式，转速8000r/min，时间15min；6、收集发酵液备用，将湿沉淀补水至620g转入至回流瓶内，沸水回流浸提1小时；7、分离浸提上清液，与发酵液混合；8、待发酵液冷却降温45℃以下，加入总质量3%戊二醇溶液进行防腐。
21.实施例31、称取超微破壁后的松花粉20g，添中600ml的蒸馏水，充分搅拌均匀后，调节ph至6.0；2、搅拌的同时加入0.2g酸性纤维素酶、0.2g酸性果胶酶、0.2g蛋白酶，55℃条件下搅拌酶解2.5小时；3、将酶解好的酶解液转入灭菌设备，85℃巴氏灭菌30分钟，随入转入无菌操作台，冷却至40℃时，接入提前培养好的植物乳酸杆菌、鼠李糖乳酸杆菌，各接种量占总质量的5%；4、转入37℃培养相，静置培养，每天取测ph及还原糖，还原糖不再下降，视为发酵结束；5、分离发酵液，采用离心方式，转速8000r/min，时间20min；6、收集发酵液备用，将湿沉淀补水至620g转入至回流瓶内，沸水回流浸提1小时；7、分离浸提上清液，与发酵液混合；8、待发酵液冷却降温45℃以下，加入总质量3%戊二醇溶液进行防腐。
22.实施例41、称取超微破壁后的松花粉20g，添中600ml的蒸馏水，充分搅拌均匀后，调节ph至5.5；2、搅拌的同时加入0.2g酸性纤维素酶、0.2g酸性果胶酶、0.2g蛋白酶，60℃条件下搅拌酶解3小时；3、将酶解好的酶解液转入灭菌设备，85℃巴氏灭菌30分钟，随入转入无菌操作台，冷却至40℃时，接入提前培养好的植物乳酸杆菌、嗜热链球菌、解淀粉芽孢杆菌，各接种量
占总质量的3.5%；4、转入37℃培养相，静置培养，每天取测ph及还原糖，还原糖不再下降，视为发酵结束；5、分离发酵液，采用离心方式，转速8000r/min，时间15min；6、收集发酵液备用，将湿沉淀补水至620g转入至回流瓶内，沸水回流浸提1小时；7、分离浸提上清液，与发酵液混合；8、待发酵液冷却降温45℃以下，加入总质量3%戊二醇溶液进行防腐。
23.实施例51、称取超微破壁后的松花粉20g，添中600ml的蒸馏水，充分搅拌均匀后，调节ph6.5；2、搅拌的同时加入0.2g酸性纤维素酶、0.2g酸性果胶酶、0.2g蛋白酶，55℃条件下搅拌酶解2小时；3、将酶解好的酶解液转入灭菌设备，85℃巴氏灭菌30分钟，随入转入无菌操作台，冷却至40℃时，接入提前培养好的副干酪乳酸杆菌、鼠李糖乳酸杆菌，各接种量占总质量的7.5%；4、转入37℃培养相，静置培养，每天取测ph及还原糖，还原糖不再下降，视为发酵结束；5、分离发酵液，采用离心方式，转速8000r/min，时间10min；6、收集发酵液备用，将湿沉淀补水至620g转入至回流瓶内，沸水回流浸提1小时；7、分离浸提上清液，与发酵液混合；8、待发酵液冷却降温45℃以下，加入总质量3%戊二醇溶液进行防腐。
24.对比例1未进行酶解与混合菌发酵，其余操作与实施例1相同将对比例1沸水浸提的样品与实施例1（酶解 混合菌发酵 沸水浸提）做对比，分别测定了得率、总糖含量、黄酮含量、蛋白质含量和皂苷含量，对比结果如下表1所示：表1：不同工艺含量检测对比表明显的，酶解 混合菌发酵 沸水浸提相比传统沸水浸提，增加了有效成分黄酮和皂苷含量，并提高了溶出率。