一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法与流程

1.本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法。


背景技术：

2.1,3-丙烷磺内酯，cas：1120-71-4，其化学结构如下式i所示：
[0003][0004]
根据2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，1,3-丙烷磺酸内酯在2a类致癌物清单中，故，在药物合成工艺中，需要严格控制1,3-丙烷磺内酯的含量，否则会对药物安全性产生重要影响。
[0005]
目前《美国药典》usp、《欧洲药典》ep、《日本药典》jp及《中国药典》ch.p.均没有收载相应的分离检测方法，也无现有技术公开其检测方法。为了更好更准确地控制产品中的杂质，保证药品的质量，需要研究适合于1,3-丙烷磺内酯的分析方法。


技术实现要素：

[0006]
本发明的目的在于提供一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法。本发明的方法能够有效分离测定1,3-丙烷磺内酯的含量，方法的灵敏度高，专属性好，准确度可靠，可用于药物中1,3-丙烷磺内酯的质量控制。
[0007]
一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法，包括：采用十八烷基硅烷键合相填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为氨水或铵盐的水溶液，b相为乙腈。
[0008]
在一些实施例中，所述色谱柱的填料为亚乙基桥杂化颗粒(beh)。
[0009]
所述的色谱柱选自waters xbridge c18柱或waters xbridge
tm c18的一种。在一些实施例中，所述的色谱柱为waters xbridge c18柱，购自waters厂家。
[0010]
所述的铵盐选自甲酸铵或乙酸铵中的一种。在一些实施例中，所述的a相选自氨水，有利于分离检测的进行。
[0011]
在一些实施例中，所述氨水或铵盐与水的体积比为5:10000至2:1000体积。在一些实施例中，所述氨水与水的体积比为1:1000。
[0012]
在一些实施例中，a相与b相的体积比为95:5至5:95。在一些实施例中，a相与b相的体积比为95:5。在一些实施例中，a相与b相的体积比为5:95。
[0013]
在一些实施例中，a相与b相的按照下表进行梯度洗脱：
[0014]
时间(min)a相(％)b相(％)09555955
5.0159515595
[0015]
在一些实施例中，所述的分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法，可包括以下步骤或按以下步骤实现：
[0016]
1)取含1,3-丙烷磺内酯的待测样品适量，加入溶剂溶解，混匀；
[0017]
2)设置仪器参数：检测器、色谱柱、离子源、扫描模式、流动相的流速、柱温；
[0018]
3)取一定量步骤1)的溶液，注入高效液相色谱质谱联用仪中，完成1,3-丙烷磺内酯的分离测定。
[0019]
步骤1)中所述的溶剂为乙腈。
[0020]
步骤1)中，每1ml所述溶剂可含待测样品5mg～40mg。在一些实施例中，步骤1)中，每1ml所述溶剂含待测样品20mg。
[0021]
步骤2)中，检测器为单重四极杆ms检测器。
[0022]
步骤2)中，离子源可为esi离子源。
[0023]
步骤2)中，扫描模式可为sim m/z＝140( )。
[0024]
所述流动相的流速可为0.1ml/min～0.5ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为0.1ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为0.3ml/min。在一些实施例中，步骤2)中，流动相的流速为0.5ml/min。
[0025]
步骤2)中，色谱柱柱箱温度为15℃～40℃。在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为20℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为35℃；在一些实施例中，色谱柱柱箱温度为40℃。
[0026]
步骤3)中，所述样品溶液进样量可为1μl～20μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为2μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为3μl。在一些实施例中，所述样品溶液进样量为4μl。
[0027]
在一些实施例中，所述的分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法，包括以下步骤或可按以下步骤实现：
[0028]
1)取含1,3-丙烷磺内酯的待测样品适量，加入乙腈溶解，混匀；
[0029]
2)设置流动相的流速为0.1ml/min～0.5ml/min检测器为单重四极杆ms检测器，色谱柱为waters xbridge c18柱，，流动相的流速为0.1ml/min～0.5ml/min，色谱柱柱箱温度为15℃～40℃；
[0030]
3)取步骤1)的样品溶液1μl～20μl，注入高效液相色谱质谱联用仪中，完成1,3-丙烷磺内酯的分离测定。
[0031]
高效液相色谱质谱联用仪可为美国agilent 1260型高效液相色谱质谱联用系统及工作站或其他适宜可行的系统。
[0032]
在一些实施例中，所述的一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法，包括：采用十八烷基硅烷键合相填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为碱的水溶液，b相为乙腈。
[0033]
在一些实施例中，所述的一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法，包括：采用亚乙基桥杂化颗粒(beh)填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为0.1％的氨水溶液，b相为乙腈。
[0034]
在一些实施例中，所述的一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法，包括：采用亚乙基桥杂化颗粒(beh)填料的色谱柱，流动相分为a相和b相，a相为0.1％的氨水溶液，b相为乙
腈；所述a相与b相按下表进行梯度洗脱：
[0035]
时间(min)a相(％)b相(％)095559555.0159515595
[0036]
采用本发明所述的分离方法，分离检测1,3-丙烷磺内酯的时间可在15分钟以内。
[0037]
在上文或下文的内容中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现1％、2％、5％、7％、8％或10％等差异。
[0038]
本发明提供的方法，可以将药物中1,3-丙烷磺内酯杂质进行有效分离，分离度达到1.5以上或2.5以上或5以上，完全基线分离，可解决1,3-丙烷磺内酯在紫外检测器中相应低，低浓度的1,3-丙烷磺内酯检测结果不准确的问题。本发明的方法简单、快捷、准确且灵敏度高。
附图说明
[0039]
图1实施例1中空白溶液色谱图；
[0040]
图2实施例1中对照溶液色谱图；
[0041]
图3实施例1中供试品溶液色谱图；
[0042]
图4实施例1中供试品加标溶液色谱图；
[0043]
图5实施例2中空白溶液色谱图；
[0044]
图6实施例2中对照溶液色谱图；
[0045]
图7实施例2中供试品溶液色谱图；
[0046]
图8实施例2中供试品加标溶液色谱图；
[0047]
图9实施例3中空白溶液色谱图；
[0048]
图10实施例3中检测限溶液1色谱图；
[0049]
图11实施例3中检测限溶液2色谱图；
[0050]
图12实施例3中检测限溶液3色谱图；
[0051]
图13实施例3中对照溶液色谱图；
[0052]
图14实施例3中供试品溶液色谱图；
[0053]
图15实施例3中供试品加标溶液1色谱图；
[0054]
图16实施例3中供试品加标溶液2色谱图；
[0055]
图17实施例3中供试品加标溶液3色谱图。
具体实施方式
[0056]
本发明实施例公开了一种分离检测1,3-丙烷磺内酯的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0057]
本发明实施例中，
[0058]
按照以下公式计算供试品中残留1,3-丙烷磺内酯的含量：
[0059][0060]
式中：a
t
为供试品溶液中待测杂质的峰面积；
[0061]as
为对照品溶液连续进样3针待测杂质峰面积的平均值；
[0062]wt
为供试品溶液的称样量，mg；
[0063]ws
为配制对照品溶液所称取待测杂质的质量，mg；
[0064]dt
为供试品溶液的稀释倍数；
[0065]ds
为对照品溶液的稀释倍数；
[0066]
p为对照品的含量，％。
[0067]
回收率计算公式如下：
[0068][0069]
测定加入量(μg)＝w
t s
×
(c
t s-c
t
)
×
1000，
[0070]
理论加入量(μg)＝cs×
v，
[0071][0072]
式中：w
t s
为供试品加标溶液的称样量，mg；
[0073]ct s
为供试品加标溶液中测得的杂质残留量，ppm；
[0074]ct
为供试品溶液中测得的杂质残留量，ppm；
[0075]cs
为供试品加标溶液中加入的对照品储备液中杂质的浓度，μg/ml；
[0076]
v为供试品加标溶液中加入的对照品储备液的体积，ml；
[0077]ws
为对照品储备液中相应杂质的称量样，mg；
[0078]ds
为对照品溶液的稀释倍数；
[0079]
p为对照品的含量，％。
[0080]
本发明中，n/a表示无。
[0081]
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0082]
仪器：美国agilent 1260型高效液相色谱质谱联用系统及工作站；自动进样。
[0083]
实施例1
[0084]
仪器与条件
[0085]
色谱条件：
[0086]
色谱柱：waters xbridge c18柱，2.1*150mm，3.5μm；
[0087]
检测器：单重四极杆ms；
[0088]
离子源：esi；
[0089]
扫描模式：sim m/z＝140( )；
[0090]
流速：0.3ml/min；
[0091]
柱温：35℃；
[0092]
进样量：2μl；
[0093]
流动相a：0.1％nh3.h2o
[0094]
流动相b：乙腈；
[0095]
洗脱梯度：
[0096]
时间(min)a相b相090559055.011090151090
[0097]
运行时间：15min；
[0098]
后运行时间：5min；
[0099]
实验步骤
[0100]
空白溶液：乙腈。
[0101]
1,3-丙烷磺内酯对照品储备液1：称取1,3-丙烷磺内酯62.70mg，于25ml容量瓶中，以乙腈溶解定容即得。
[0102]
1,3-丙烷磺内酯对照品储备液2：移取1.0ml对照品储备液1于50ml容量瓶中，以乙腈定容即得。
[0103]
1,3-丙烷磺内酯对照品溶液：移取1.0ml对照品储备液2于50ml容量瓶中，以乙腈定容即得。
[0104]
供试品溶液：称取供试品伏拉瑞韦约100mg于5ml容量瓶中，以乙腈溶解定容即得。
[0105]
供试品加标溶液：称取供试品伏拉瑞韦约100mg于5ml容量瓶中，以1,3-丙烷磺内酯对照品溶液溶解定容即得。
[0106]
取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液按照上述条件进行分析，记录色谱图，结果见下表1：
[0107]
表1：
[0108][0109]
实施例2
[0110]
仪器与条件
[0111]
色谱条件：
[0112]
色谱柱：waters xbridge c18柱，2.1*150mm，3.5μm；
[0113]
检测器：单重四极杆ms；
[0114]
离子源：esi；
[0115]
扫描模式：sim m/z＝140( )；
[0116]
流速：0.3ml/min；
[0117]
柱温：35℃；
[0118]
进样量：4μl；
[0119]
流动相a：0.1％nh3.h2o；
[0120]
流动相b：乙腈；
[0121]
洗脱梯度：
[0122][0123][0124]
运行时间：15min；
[0125]
后运行：5min；
[0126]
实验步骤
[0127]
空白溶液：乙腈；
[0128]
1,3-丙烷磺内酯对照品储备液1：称取1,3-丙烷磺内酯62.70mg，于25ml容量瓶中，以乙腈溶解定容即得；
[0129]
1,3-丙烷磺内酯对照品储备液2：移取1.0ml对照品储备液1于50ml容量瓶中，以乙腈定容即得；
[0130]
1,3-丙烷磺内酯对照品溶液：移取1.0ml对照品储备液2于50ml容量瓶中，以乙腈定容即得；
[0131]
供试品溶液：称取供试品伏拉瑞韦约100mg于5ml容量瓶中，以乙腈溶解定容即得；
[0132]
供试品加标溶液：称取供试品伏拉瑞韦约100mg于5ml容量瓶中，以1,3-丙烷磺内酯对照品溶液溶解定容即得；
[0133]
取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液按照上述条件进行lc-ms分析，记录色谱图，结果见下表2：
[0134]
表2：
[0135][0136]
实施例3
[0137]
仪器与条件
[0138]
色谱条件：
[0139]
色谱柱：waters xbridge c18柱，2.1*150mm，3.5μm；
[0140]
检测器：单重四极杆ms；
[0141]
离子源：esi；
[0142]
扫描模式：sim m/z＝140( )；
[0143]
流速：0.3ml/min；
[0144]
柱温：35℃；
[0145]
进样量：4μl；
[0146]
流动相a：0.1％nh3.h2o；
[0147]
流动相b：乙腈；
[0148]
洗脱梯度：
[0149]
时间(min)a相b相095559555.0159515595
[0150]
运行时间：15min；
[0151]
后运行：5min；
[0152]
实验步骤
[0153]
空白溶液：乙腈。
[0154]
1,3-丙烷磺内酯对照品储备液1：称取1,3-丙烷磺内酯62.25mg，于25ml容量瓶中，以乙腈溶解定容即得。
[0155]
1,3-丙烷磺内酯对照品储备液2：移取1.0ml对照品储备液1于50ml容量瓶中，以乙腈定容即得。
[0156]
1,3-丙烷磺内酯对照品溶液：移取1.0ml对照品储备液2于50ml容量瓶中，以乙腈定容即得。
[0157]
供试品溶液：称取供试品伏拉瑞韦约100mg于5ml容量瓶中，以乙腈溶解定容即得。
[0158]
供试品加标溶液：称取供试品伏拉瑞韦约100mg于5ml容量瓶中，以1,3-丙烷磺内酯对照品溶液溶解定容即得，平行配制三份。
[0159]
检测限溶液：移取3.0ml 1,3-丙烷磺内酯对照品溶液于10ml容量瓶中，以乙腈定容即得。
[0160]
取空白溶液、检测限溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液按照以下的序列表(表a)及上述条件进行分析，记录色谱图，结果见表3-表7。
[0161]
表a：
[0162][0163][0164]
结果分析：
[0165]
表3：系统适用性结果
[0166][0167]
表4：专属性结果
[0168][0169][0170]
表5：检测限结果
[0171][0172]
表6：准确度结果
[0173][0174]
表7：溶液稳定性结果
[0175][0176][0177]
由实施例3可知：本发明的方法具有能简单、快捷、灵敏度高，准确度高检测药物中杂质1,3-丙烷磺内酯的优点。