一种用于FVII基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒及其检测方法和应用与流程

技术特征：
1.一种用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下组分：裂解液、蛋白酶k、耐热磁珠、转化液、脱硫试剂、漂洗液、洗脱液、fvii-323ins10扩增试剂、fvii甲基化扩增试剂、扩增试剂、fvii甲基化测序引物、fvii323ins10测序引物和阳性对照。2.根据权利要求1所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述fvii甲基化扩增试剂如序列表seq id no:1～seq id no:2所示；fvii-323ins10扩增试剂如序列表seq id no:3～seq id no:4所示。3.根据权利要求1所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述fvii甲基化测序引物、fvii323ins10测序引物分别如序列表seq id no:5～seq id no:6所示。4.根据权利要求3所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述fvii甲基化测序引物对应的测序区域为fvii-m待检序列，如序列表seq id no:7所示；fvii-323ins10测序引物对应的测序区域为fvii-323ins10待检序列，如序列表seq id no:8所示。5.根据权利要求4所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述fvii-m待检序列对应fvii-m分配指令如序列表seq id no:9所示；fvii-323ins10待检序列对应fvii-323ins10分配指令如序列表seq id no:10所示。6.根据权利要求1所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述fvii甲基化扩增试剂包括：fvii-m前引物，fvii-m后引物，dntps、链置换dna聚合酶，单链dna结合蛋白，结合单链核酸的重组酶和海藻糖。7.根据权利要求1所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述fvii-323ins10扩增试剂包括：fvii-323ins10前引物，fvii-323ins10后引物，dntps、链置换dna聚合酶，单链dna结合蛋白，结合单链核酸的重组酶和海藻糖。8.根据权利要求1所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照，包括浓度为20ng/ul的fvii 2％甲基化、fvii-323ins10杂合子基因组dna。9.一种采用根据权利要求1～8任一项所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：a.裂解液进行样本裂解；b.加入磁珠和乙醇进行结合；c.一部分吸磁，取上清，加入转化液进行20min转化，另一部分直接漂洗；d.漂洗后，加入脱硫试剂进行脱硫处理；e.漂洗后直接洗脱，获得转化后基因组dna；f.将所述扩增反应液与5ul待测基因组dna，采用rpa进行扩增；g.将10ul反应产物与3ul测序引物分别进行结合；h.焦磷酸测序；i.确定fvii启动子的甲基化状态。10.一种根据权利要求1～9任一项所述的用于fvii基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒及其检测方法的应用，其特征在于，所述检测方法用于fvii基因多态性及甲基化
联合检测。

技术总结
本发明公开了一种用于FVII基因多态性及甲基化联合检测的检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述试剂盒包括如下组分：裂解液、蛋白酶K、耐热磁珠、转化液、脱硫试剂、漂洗液、洗脱液、FVII-323Ins10扩增试剂、FVII甲基化扩增试剂、扩增试剂、FVII甲基化测序引物、FVII323Ins10测序引物和阳性对照。本发明采用RPA扩增和优化焦磷酸测序技术为组合对替莫唑胺敏感性相关的FVII甲基化进行检测，通过RPA恒温扩增FVII，快速、有效地在恒定温度下产生大量扩增产物，通过直接与羧基修饰素结合的氨基标记单链DNA特异捕获单链DNA，洗涤后加入测序引物和测序原料，进行焦磷酸测序，简化了提取、转化、扩增、测序处理的流程和时间；试剂盒可为临床替莫唑胺个性化用药给出基因角度的建议。建议。建议。


技术研发人员：周虹桥 孙悦 刘丹
受保护的技术使用者：上海普然生物科技有限公司
技术研发日：2021.11.10
技术公布日：2022/3/8