用于伤口愈合的新抗氧化剂组合物的制作方法

1.本发明归为美容和/或治疗行业，并且具体地涉及用于局部使用的具有抗氧化剂和水合活性的新组合物，其促进伤口愈合并且可用于皮肤损伤的治疗性和/或美容性处理。
2.本发明的新组合物对象引入了某些试剂和成分，包括半乳甘露聚糖和类胡萝卜素，其出乎意料地改善了伴随活性氧物质发生的广泛伤口的愈合和治愈活性。


背景技术：

3.皮肤中的创伤或损伤定义为粘膜皮肤完整性的破裂，其可由创伤或缺血有意引起。因此，伤口被认为是畸形或中断，其可能影响从表皮到更深的结构。
4.愈合过程是局部现象，其中身体的几个区域共同的要素参与其中，并且容易想象环境和生理因素对愈合进展具有巨大的影响，并且可以随着愈合时间以及在存在或不存在并发症的情况下影响疤痕的质量。
5.在这方面，处理伤口是一种挑战，主要是被认为是慢性的伤口，因为它们没有经历有序和及时的过程以促进解剖学和功能完整性，并且它们持续数月或甚至数年，呈现频繁的复发。
6.考虑到这些损伤是慢性的并且在更长或更短的时间内呈现复发的可能性，它们可以导致患者的心理社会反响，达到它们可以引起生活方式改变的程度，延长离开家庭的时间，引起人们如何看自己的改变，这对每个个体有不同的影响，达到更小或更大的强度，此外是进行日常活动的限制。
7.因此，使用局部产品来帮助组织修复过程具有巨大的价值，因为通过局部处理可以达到理想的愈合条件。
8.必须考虑的是，伤口的局部处理不仅表明将产品植入病变的床中，而且还针对伤口的愈合状态、床中存在的组织、渗出液等方面评价伤口。
9.为了该目的，市场上有各种各样的产品，已知有约2000种用于处理伤口的产品，从最简单到最复杂的覆盖物，它们在各种类型的伤口中积极地干扰愈合过程的各个阶段。
10.考虑到具有不同适应症和作用机制的局部产品的这种巨大多样性，根据伤口的特征，它们被分类为上皮再生(epithelialising)、吸收、清创、抗生素和防腐产品。这些产品中的许多具有高成本，而其它产品则需要专业人员的干预以适当地应用。
11.愈合过程是一个复杂而脆弱的过程；因此，它易于被中断和破坏，这导致形成不愈合或获得病理性愈合状态的慢性伤口。
12.通常，伤口愈合过程需要炎症的适当处理和适当环境(湿度、温度、清洁度)的维持，以维持对细胞活力及其增殖能力的刺激。
13.在愈合过程的第一阶段(炎症阶段)，伤口暴露于活性氧物质，例如超氧化物(o
2-)、过氧化氢(h2o2)，以及羟基自由基(ho2)和单线态氧(1o2)。
14.这些活性氧物质表现为对抗细菌的防御屏障和愈合过程的信号传导分子。然而，当它们没有被适当地调节并且产生过量时，如在慢性伤口的情况下所发生的，这些在伤口
中引起严重的损伤并且显著地减慢愈合过程。
15.抗氧化剂在现有技术中作为由活性氧物质引起的损害的抑制剂是众所周知的。
16.现有技术公开了许多用于处理和治愈伤口的含有抗氧化剂的组合物。
17.专利us7094431描述了一种组合物，其包含氧化锌、钙通道阻滞剂、可溶性维生素以及抗菌和杀真菌剂。
18.专利us6046160描述了包含通过淀粉、抗坏血酸、i型胶原、α-生育酚乙酸酯的水解获得的d-葡萄糖多糖的组合物。
19.专利us5874479描述了用于处理伤口的组合物，其包含丙酮酸盐、抗氧化剂以及饱和和不饱和脂肪酸的混合物。
20.然而，尽管上述发明被报道可用于在伤口治愈过程中抑制活性氧物质的产生，但它们中没有一个显示出是完全令人满意的。
21.最后，专利ep2583682描述了用于处理伤口的包含半乳甘露聚糖和乙酰半胱氨酸的组合的抗氧化剂组合物。本专利中描述的发明代表了从组成的观点来看与本发明最接近的现有技术。如将在整个本说明书中针对所提到的专利的目的而开发的，本发明呈现了需要显著应用优点的更好且出乎意料的功能。
22.本发明提供了具有显著改善的处理和治愈开放性伤口和烧伤的活性的组合物，其具有优于现有技术的组合物的基线抗氧化能力。组合物的这种新性质转化为在较低浓度的活性成分下的更大抗氧化效力。


技术实现要素：

23.本发明涉及一种具有抗氧化活性的新组合物及其用途，其包含类胡萝卜素与半乳甘露聚糖的组合，其用于促进、加速和/或利于哺乳动物的包括烧伤、光老化、辐射损伤以及急性和慢性伤口在内的任何类型的开放性伤口和皮肤损伤的愈合，以及用于预防在哺乳动物的完整皮肤中形成损伤。
24.本发明的作者已经发现，与现有技术的其它抗氧化剂组合物相比，半乳甘露聚糖和类胡萝卜素的组合以出乎意料的方式刺激愈合过程中的成纤维细胞和角质形成细胞的细胞增殖以及开放性伤口的闭合。
25.本发明的组合物的出乎意料的疗效是由于较高的基线抗氧化能力，即在组合物中存在某些亲水性和脂质抗氧化剂，特别是半乳甘露聚糖和类胡萝卜素的组合，其显著增加了该组合对活性氧物质，特别是对单线态氧的抗氧化能力的幅度，从而防止了先前处理的缺点，例如抗氧化活性的损失以及不能有效地中和一些活性氧物质(例如单线态氧)。这种较高的基线抗氧化能力必然转化为本发明组合物的更大有效性、活性成分的更低浓度和/或更长的时间。
26.因此，本发明人得出结论，选择某些类胡萝卜素，尤其是番茄红素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、角黄素、隐黄质、虾青素、辣椒红、玉米黄质、叶黄素、阿朴胡萝卜素醛紫黄质等，与半乳甘露聚糖组合，就在愈合过程和闭合开放性伤口期间刺激成纤维细胞和角质形成细胞的细胞增殖而言，允许获得出乎意料的令人满意的结果。
27.这就是为什么本发明的一个方面涉及包含半乳甘露聚糖和类胡萝卜素的抗氧化剂组合物，其用于哺乳动物的皮肤损伤的治疗性和/或美容性处理。
28.本发明的另一个目的是如前述段落中所定义的组合物，其还包含姜黄作为额外的抗氧化剂。
29.本发明的另一目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其中所述类胡萝卜素可含有选自包括以下物质的组中的一种或多种类胡萝卜素：番茄红素、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、角黄素、隐黄质、虾青素、辣椒红、玉米黄质、叶黄素、阿朴胡萝卜素醛紫黄质。
30.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其中所述半乳甘露聚糖选自包括以下物质的组：瓜尔胶、决明胶、他拉胶、牧豆树胶、胡芦巴胶和刺槐豆胶。
31.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其还包含其它活性成分，所述其它活性成分选自包括以下物质的组：姜黄，微量营养素，维生素，矿物质，微量元素，抗生素和天然植物提取物。
32.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其中皮肤的治疗性和/或美容性处理包括：改善在活性氧物质存在下发生的伤口的愈合和治愈过程，包括哺乳动物的包括烧伤、光老化、辐射损伤以及急性和慢性伤口在内的任何类型的开放性伤口和皮肤损伤的愈合；以及预防在哺乳动物的完整皮肤中形成损伤。
33.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其中所述处理包括用于急性创伤和手术伤口、割伤、擦伤、裂伤、疮疡、烧伤、烫伤、皮肤刺激、瘘管、手术开裂、辐射损伤、静脉溃疡、动脉溃疡、压力溃疡、糖尿病足溃疡、混合病因溃疡、炎性皮肤损伤、皮肤癌和慢性或坏死伤口的治疗性和/或愈合处理。
34.本发明的另一个目的是包含半乳甘露聚糖、番茄红素和姜黄的抗氧化剂组合物。
35.本发明的另一个目的是如前述段落中定义的包含半乳甘露聚糖、番茄红素和姜黄的抗氧化剂组合物，其用于哺乳动物的皮肤损伤的治疗性和/或美容性处理。
36.本发明的另一个目的是一种组合物，相对于所述组合物的总重量，所述组合物包含0.1-5％的刺槐豆胶、0.0001-1％的番茄红素和0.0001-1％的姜黄。
37.本发明的另一个目的是如前述段落中任一项所定义的组合物，其中皮肤的治疗性和/或美容性处理包括：改善在活性氧物质存在下发生的伤口的愈合和治愈过程，包括哺乳动物的包括烧伤、光老化、辐射损伤以及急性和慢性伤口在内的任何类型的开放性伤口和皮肤损伤的愈合；以及预防在哺乳动物的完整皮肤中形成损伤。
38.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其中所述处理包括用于急性创伤和手术伤口、割伤、擦伤、裂伤、疮疡、烧伤、烫伤、皮肤刺激、瘘管、手术开裂、辐射损伤、静脉溃疡、动脉溃疡、压力溃疡、糖尿病足溃疡、混合病因溃疡、炎性皮肤损伤、皮肤癌和慢性或坏死伤口的治疗性和/或愈合处理。
39.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其配制用于局部使用，选自包括以下物质的组：乳膏、霜剂、微乳液、凝胶、水凝胶、软膏、脂质体、粉末和水溶液或悬浮液。
40.本发明的另一个目的是如前述段落中任一段所定义的组合物，其为具有25000至70000mpa
·
s(rv 05 5rpm)的粘度的水凝胶形式。
附图说明
41.图1：图显示了实施例2中描述的“伤口闭合或愈合”试验的结果，其针对于含有相
胡萝卜素、α-胡萝卜素和番茄红素。在一个具体实施方式中，形成本发明组合物一部分的类胡萝卜素是纯提取物或亲水性分散体形式的β-胡萝卜素和/或番茄红素。类胡萝卜素通过本领域技术人员熟知的技术获得。最常用的方法是植物材料提取方法，例如通过溶剂、超临界流体等提取，或通过微生物方法或化学合成的方法。
52.番茄红素存在于番茄和其它红色水果和蔬菜中，例如红胡萝卜、红辣椒、西瓜和番木瓜。特别地，可以通过用合适的溶剂提取从番茄的整个果实、果肉、皮或种子中提取番茄红素。
53.获得番茄红素的方法可以使用来自食品工业加工副产物的番茄(lycopersicumesculentum)和/或类似物种的整个果实或其部分进行。在这种情况下，在磷脂(例如稳定剂和表面活性剂)的存在下，用芳族或脂族烃或者用与水不混溶的溶剂对部分脱水的新鲜材料进行提取。浓缩提取物直至形成油，或分馏直至获得所需浓度的番茄红素。出于本发明的目的，可以使用番茄红素浓度为0.0001-1.0％，优选0.001％的天然或合成提取物、分散体等。市场上可得到的番茄红素产品是：dms nutritional products ag销售的番茄红素；lycored销售的10％cwd；basf销售的10cwd/s或10％dc等。
54.番茄红素也可以从生物合成的天然来源获得，例如真菌如布拉霉属(blakeslea)、笄霉属(choanephora)或须霉属(phycomyces)的深层培养物。在这种情况下，该方法由以下步骤组成：用醇直接处理生物合成的天然来源(发酵液)并分离纯化的湿生物质。然后通过将生物质干燥并且破碎或破裂来调节纯化的生物质，用有机溶剂固液提取番茄红素，浓缩富集的提取物，通过加入醇进行沉淀/结晶，过滤，最后干燥。
55.本发明的组合物含有选自由以下组成的组中的一种或多种类胡萝卜素：虾青素、玉米黄质、角黄素、辣椒红、叶黄素、紫黄质、β-胡萝卜素、α-胡萝卜素和番茄红素。在本发明的一个具体实施方式中，组合物可含有选自由以下组成的组的类胡萝卜素的混合物：虾青素、叶黄素、紫黄质、β-胡萝卜素、α-胡萝卜素和番茄红素，其中所述组合物至少含有类胡萝卜素番茄红素。在本发明的另一个具体实施方式中，所述组合物仅含有类胡萝卜素番茄红素。在一个具体实施方式中，形成本发明组合物一部分的类胡萝卜素是纯提取物或亲水性分散体形式的β-胡萝卜素和/或番茄红素。
56.如前述部分所定义的类胡萝卜素或其混合物以相对于组合物总重量0.0001-1.0重量％的比例存在于组合物中。更优选地，相对于组合物的总重量，本发明的组合物包含0.0001-0.01重量％的类胡萝卜素或其混合物。
57.在本发明的一个具体实施方式中，所述组合物包含相对于最终组合物重量0.0001-1.0重量％的比例的β-胡萝卜素和/或番茄红素。
58.半乳甘露聚糖是由甘露糖主链与由半乳糖单元形成的支链形成的多糖类型的生物聚合物。更具体地，主链由通过(1
→
4)键连接的β-d-吡喃甘露糖单元与通过(1
→
6)键连接的α-d-吡喃半乳糖分支形成。
59.可用于本发明目的的半乳甘露聚糖包括天然和/或改性的半乳甘露聚糖。存在相对大量的半乳甘露聚糖，其组成根据其来源而变化。出于本发明的目的，考虑使用以下：瓜尔胶、决明胶、他拉胶、牧豆树胶、胡芦巴胶和在刺槐豆籽(ceratonia siliqua)的胚乳中发现的刺槐豆籽胶。在本发明的具体实施方式中，所述组合物的半乳甘露聚糖是刺槐豆籽胶。
60.合适的改性多糖胶包括天然或经取代的多糖胶的酯，例如羧甲基酯、乙二醇酯和丙二醇酯。经取代的多糖胶的实例是甲基纤维素。本发明的组合物可包含如前述部分所定义的单一树胶或几种树胶的混合物。
61.树胶，特别是半乳甘露聚糖树胶是公知的材料。参见例如industrial gums:polysaccharides&their derivatives,whistler r.l.and bemiller j.n.(eds.),第三版,academic press(1992)和davidson r.l.,handbook of water-soluble gums&resins,mcgraw-hill,inc.,n.y.(1980)。大多数树胶可在市场上以几种形式获得，通常为粉末形式，并且易于在食品和局部组合物中使用。例如，市场上可获得的粉末形式的刺槐豆籽胶是：lbg siciliasrl,italy销售的ilcar,s.r.l.,italy销售的不同产品等。
62.对于获得例如刺槐豆胶，存在各种方法：碱性化学提取法和干机械法。
63.在碱性化学法中，将选择并烘干的果实浸入25％naoh溶液中5天以提取种子。随后，通过搅拌使它们在80
±
2℃的温度下使用0.75％naoh经受湿热10至15分钟。将它们用大量的水洗涤直到观察到种子脱离，并使其浸泡24小时，定期更换水。将胚乳从外壳、皮层和子叶中手动分离，将其放入35
±
2℃的烘箱中16小时，在电磨机中研磨，并通过60号筛(测量尺寸为250微米)过筛以获得胶。
64.在干机械法中，将选择并干燥的果实研磨并过筛，分离种子的外果皮和中果皮，将其烘箱干燥16小时，然后研磨并过筛，从胚乳中分离出外壳、皮层和子叶，将其在电磨机中研磨直到获得胶，其使用60号筛(测量尺寸为250微米)过筛。
65.本发明的组合物包含相对于组合物总重量的重量比为0.05％至5.0％的半乳甘露聚糖。优选地，本发明的组合物包含相对于组合物总重量为0.1-5重量％，更优选地，相对于组合物总重量为0.5-3重量％的半乳甘露聚糖。
66.在本发明的一个具体实施方式中，该组合物包含相对于组合物总重量的重量比为0.1％至5.0％的刺槐豆胶，以及相对于组合物总重量的重量比为0.0001％至1.0％的番茄红素。
67.任选地，除了类胡萝卜素和半乳甘露聚糖之外，本发明的组合物还可以包含选自由以下组成的组的其它活性成分：姜黄，其它抗氧化剂如抗坏血酸、生育酚、α-硫辛酸、花色素苷、没食子酸，表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg)、阿魏酸、辅酶q10、角鲨烯、类黄酮、白藜芦醇、聚乙二醇、硒、半胱氨酸，微量营养素如维生素、矿物质和微量元素，抗生素和具有愈合皮肤或对皮肤有益的活性的天然植物提取物(芦荟、积雪草(centella asiatica)、金缕梅(hamamelis)、金鸡菊(plantgo lanceolata)、薰衣草(lavandula)、狭叶紫锥菊(echinacea angustifolia)、聚合草(symphytum officinale)、果香菊(chamaemelum nobile)、金盏花(calendula officinalis)和蜡菊(helichrysum italicum))。
68.在本发明的一个具体实施方式中，设想在包含半乳甘露聚糖和类胡萝卜素的本发明组合物中引入姜黄。
69.在本发明的优选实施方式中，所述组合物包含刺槐豆胶、番茄红素和姜黄。
70.姜黄是印度西南部的生姜科的草本植物。该植物的提取物可以以两种方式使用：作为姜黄(粗提物)，以及作为姜黄素(经纯化或精制的状态)。获得这种成分的方法是本领域技术人员公知的。此外，存在许多可用于本发明目的的商业姜黄产品，例如由以下公司销售的那些：德国aquanova ag销售的以及美国undersunbiomedtech corp,ca、中
国xian geekee biotech co.,ltd.、西班牙proquimac pfc,s.a.、印度himachal pharmaceuticals、西班牙sancolor,s.a.销售的其它产品。
71.在前述段落中详细描述的那些实施方式中，其中将溶于乙醇的姜黄引入包含类胡萝卜素和半乳甘露聚糖的组合物中，本发明组合物中姜黄相对于组合物总重量的重量比为0.0001-1.0％。
72.在本发明的一个具体实施方式中，所述组合物包含相对于组合物总重量的重量比为0.1-5.0重量％的刺槐豆胶、相对于组合物总重量的重量比为0.0001-1.0重量％的番茄红素和相对于组合物总重量的重量比为0.0001-1.0重量％的姜黄。
73.关于在本发明的组合物中可以形成制剂的一部分的维生素，考虑以下：水溶性维生素，例如复合维生素b(硫胺素、核黄素、烟酸、吡哆醇、叶酸、维生素b12、生物素、泛酸)和维生素c；和脂溶性维生素，例如维生素a、维生素d、维生素e和维生素k，以及它们的前体、类似物和衍生物。本发明的优选实施方式设想在组合物中引入α-生育酚(维生素e)和抗坏血酸(维生素c)。这些成分可在市场上获得，例如通过以下公司获得：荷兰koninklijke dsm n.v.；德国nhu europe gmbh；法国pmc isochem；美国alpha environmental；美国spectrum chemical mfg.corp.
74.在如前述段落中详细描述的那些实施方式中，其中将维生素引入包含类胡萝卜素和半乳甘露聚糖的组合物中，本发明组合物中维生素、它们的前体、类似物和衍生物相对于组合物总重量的重量比为0.0001-5.0％。
75.同样，在前述段落中详细描述的那些实施方式中，其中将维生素引入包含类胡萝卜素、半乳甘露聚糖和姜黄的组合物中，本发明组合物中维生素、它们的前体、类似物和衍生物相对于组合物总重量的重量比为0.0001-5.0％。
76.另外，在如前述段落中详细描述的那些实施方式中，其中将维生素引入包含番茄红素、刺槐豆胶和姜黄的组合物中，本发明组合物中维生素、它们的前体、类似物和衍生物相对于组合物总重量的重量比为0.0001-5.0％。
77.形成本发明组合物的一部分的活性成分在药学上可接受的局部赋形剂中施用至皮肤的受影响区域。出于本发明的目的，药学上可接受的局部赋形剂是任何药学上可接受的制剂，其可以施用于皮肤表面以便局部、真皮、皮内或透皮施用本发明所述的组合物。
78.本发明的局部制剂通过根据本领域熟知的方法将如上所述的组合物的成分和/或成分的混合物与局部赋形剂混合来制备，例如通过常规参考教科书提供的方法，如remington:the science and practice of pharmacy(alfonso r.gennaro编,第19版.1995)；ghosh,t.k.；等。
79.用于局部施用如上所述的本发明制剂和组合物的局部赋形剂可以是本领域已知的用于局部施用的任何赋形剂，例如乳膏或霜剂；微乳液；凝胶；水凝胶、软膏；脂质体；粉末和水溶液或悬浮液。
80.在一个优选的实施方式中，用于施用上述化合物的局部赋形剂是乳液、凝胶、水凝胶或软膏。乳剂(如乳膏和霜剂)是适用于本发明的局部制剂。可用作局部赋形剂的乳剂(如乳膏和霜剂)及其制备描述于remington:the science and practice of pharmacy 282-291(alfonso r.gennaro编,第19版.1995)。
81.在另一个实施方式中，用于施用上述制剂或组合物的局部赋形剂是凝胶，例如两
相凝胶或单相凝胶。适用于本发明的凝胶和水凝胶描述于remington:the science and practice of pharmacy 15171518(alfonso r.gennaro编,第19版.1995)。
82.在另一个实施方式中，用于施用上述制剂或组合物的局部赋形剂是通过雾化器或具有无气系统的容器以喷雾形式施用的混合物。关于后者，应该指出的是，“无气系统”具有类似于气溶胶的外观，但在其计量系统方面不同于常规容器。它们与连续真空系统一起工作，因此不需要使用推进剂或防腐剂。含有它的产品既不与空气接触，也不直接用手处理，因此其没有细菌污染。当其被消耗时，内部活塞向上推动内容物，因此产品不被浪费。本领域技术人员知晓以所讨论的给药形式适当配制本发明组合物所必需的技术和赋形剂。
83.通常，可用于本发明目的的聚合物增稠剂(胶凝剂)包括本领域技术人员已知的那些，例如化妆品和药物工业中常用的亲水和水醇胶凝剂。优选地，亲水或水醇胶凝剂包括(b.f.goodrich,cleveland,ohio)、(kingston technologies,dayton,n.j.)、(aqualon,wilmington,del.)、“(aqualon,wilmington,de)或(isp technologies,wayne,n.j.)。优选地，胶凝剂占组合物的约0.05重量％至约4重量％。更特别地，的组合物的优选重量百分比为约0.2％至约0.6％。
84.是以通用名卡波姆表示的多种丙烯酸交联聚合物之一。将这些聚合物溶解在水中并在用苛性物质如氢氧化钠、氢氧化钾、三乙醇胺或其它胺碱中和时形成透明或稍微混浊的凝胶。
85.在另一个优选的实施方式中，用于施用上述化合物的局部赋形剂是软膏。适用于本发明的软膏是本领域熟知的，并且描述于remington:the science and practice of pharmacy 1585-1591(alfonso r.gennaro编,第19版.1995).
86.在另一个实施方式中，用于本发明局部制剂的局部赋形剂是水溶液或悬浮液，优选水溶液。适用于本发明的水性局部制剂描述于remington:the science and practice of pharmacy 1563-1576(alfonso r.gennaro编,第19版.1995).
87.本发明局部制剂的ph优选为约3至约8，更优选约5.5至约6.5。为了稳定ph，优选包括有效量的缓冲剂。在一个实施方式中，缓冲剂以制剂的约0.05重量％至约1重量％的量存在于局部制剂中。为了调节ph，可以根据需要使用酸或碱，例如盐酸、柠檬酸、乳酸、乙酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、磷酸氢二钠、硼酸钠等。
88.优选地，本发明的凝胶或水凝胶形式的局部制剂的粘度为25至70pa
·
s(约25000至70000pa
·
s)。
89.本发明的局部制剂可以包含药学上可接受的赋形剂，例如remington:the science and practice of pharmacy(alfonso r.gennaro编,第19版.1995)中列出的那些，包括但不限于保护剂、吸附剂、缓和剂、润肤剂、防腐剂、保湿剂、缓冲剂、溶剂试剂、皮肤渗透剂和表面活性剂。
90.本发明的组合物可以含有额外的抗氧化剂，例如抗坏血酸及其酯、亚硫酸氢钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、生育酚；以及螯合剂，例如edta和柠檬酸。
91.合适的湿润剂包括但不限于甘油、山梨醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。
92.适用于本发明的缓冲剂包括但不限于乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、乳酸缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。
93.合适的溶剂试剂包括但不限于季铵氯化物、环糊精、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。
94.合适的皮肤渗透剂包括但不限于乙醇、异丙醇、辛基苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、n-癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、甘油单油酸酯和丙二醇单油酸酯)和n-甲基吡咯烷酮。
95.在本发明的优选实施方式中，组合物以凝胶形式存在，并且包含以下成分和它们相对于组合物总重量的重量比：
96.0.1％-1.0％的卡波姆
97.0.05％-0.5％的edta
98.1.0％-20.0％的甘油
99.0.05％-5.0％的刺槐豆胶
100.0.0001％-0.01％的姜黄
101.0.0001％-1.0％的番茄红素
102.0.1％-10.0％的抗坏血酸
103.0.0001％-2.5％的α-生育酚
104.适量的h2o
105.在本发明的另一个优选实施方式中，组合物以凝胶形式存在，并且包含以下成分和它们相对于组合物总重量的重量比：
106.0.1％-1.0％的卡波姆
107.0.05％-0.5％的edta
108.1.0％-20.0％的甘油
109.0.05％-5.0％的刺槐豆胶
110.0.0001％-1.0％的番茄红素
111.0.1％-10.0％的抗坏血酸
112.0.0001％-2.5％的α-生育酚
113.适量的h2o
114.在本发明的另一个优选实施方式中，组合物以凝胶形式存在，并且包含以下成分和它们相对于组合物总重量的重量比：
115.0.1％-1.0％的卡波姆
116.0.05％-0.5％的edta
117.1.0％-20.0％的甘油
118.0.05％-5.0％的瓜尔胶
119.0.0001％-0.01％的姜黄
120.0.0001％-1.0％的β-胡萝卜素
121.0.1％-10.0％的抗坏血酸
122.0.00001％-2.5％的α-生育酚
123.适量的h2o
124.在本发明的另一个优选实施方式中，组合物以凝胶形式存在，并且包含以下成分和它们相对于组合物总重量的重量比：
125.0.1％-1.0％的卡波姆
126.0.05％-0.5％的edta
127.1.0％-20.0％的甘油
128.0.05％-5.0％的瓜尔胶
129.0.0001％-1.0％的β-胡萝卜素
130.0.1％-10.0％的抗坏血酸
131.0.00001％-2.5％的α-生育酚
132.适量的h2o
133.本发明的局部制剂通过将如上所述的组合物的成分与如下的药学上和/或美容上可接受的局部赋形剂和添加剂混合来制备：在温和连续搅拌下，将卡波姆在一半最终体积的水中水合(混合物a)。将半乳甘露聚糖与甘油混合，并通过搅拌加入40％的最终水(混合物b)。一旦卡波姆正确水合，则在搅拌下将不同组分依次加入混合物a中。在这些组分中，包括以下物质：edta、姜黄、抗坏血酸、α-生育酚、番茄红素、其它类胡萝卜素等。将两种混合物(a和b)合并，一旦获得良好的产物均匀性，则将卡波姆活化，并且用氢氧化钠或与卡波姆相容的另一种ph校正剂调节ph，直到获得样品的最终ph，并且添加剩余的必需水。
134.本发明的组合物旨在用于皮肤上的美容和/或治疗用途。所述美容和/或治疗应用将包括对皮肤的任何有益效果，其目的是改善或处理，包括甚至治愈需要促进、加速和/或利于哺乳动物的开放性皮肤伤口和/或烧伤的修复、水合和愈合的任何皮肤状况或皮肤损伤，且不论损伤的起源、严重程度和/或受影响的表面如何。皮肤损伤的范围可以从浅表刺激、撕裂，到影响真皮、表皮和其它深层组织如肌肉、筋膜、连接组织的深层损伤，所述损伤甚至使骨和腱和其它类型的皮下结构暴露。
135.具体地，本发明的制剂用于治疗性和/或愈合处理急性创伤和手术伤口、烧伤、烫伤、瘘管、手术开裂、静脉溃疡、动脉溃疡、压力溃疡、糖尿病足溃疡、混合病因溃疡、炎性皮肤损伤、水分损伤、刺激、撕裂、撕脱、割伤、穿刺、咬伤、皮肤癌和慢性或坏死伤口。
136.此外，设想了本发明的制剂用于美容处理与年龄相关且由游离氧自由基存在引起的皮肤损伤的应用，尤其是由于内部和/或外部原因引起的皮肤老化，所述原因例如是阳光、营养差、环境污染、压力、烟草、药物、酒精、干燥皮肤、炎性疾病、皮炎、弹性丧失和皮肤中的胶原含量。
137.为了处理根据本发明在前述段落中详细描述的皮肤病，将组合物局部施用于受影响的区域。例如，如果需要，首先用肥皂溶液或防腐剂洗涤施用区域，然后用大量生理盐水溶液、乳酸林格氏液或其它合适的溶液洗涤。用无菌纱布小心干燥受损区域后，将产品施用于受损区域，将该区域用一层产品覆盖。
138.通常，根据本发明施用于皮肤的组合物的量取决于产品的药物或化妆品形式和皮肤损伤的特征而变化，但是，例如，对于水凝胶，其可以在0.1cm的薄层或多达5cm以上的厚层之间变化。在空腔化伤口的情况下，水凝胶必须完全覆盖空腔。取决于损伤的类型和受影响的皮肤区域是否被覆盖，施用方案可以在每天2至6次之间变化，或在通常在3至60天之间的时间段内每2或3天变化，直到皮肤损伤改善或治愈，尽管在一些情况下施用可以延长数月。
139.由本发明的组合物产生的处理和/或美容效果与现有技术中已知的其它类似处理
相比具有出乎意料和显著的优点。与本发明最接近的现有技术由欧洲专利ep1206271b1代表，其描述了用于皮肤美容和/或治疗性处理的抗氧化剂组合物，其尤其包含半乳甘露聚糖(例如刺槐豆胶)、n-乙酰半胱氨酸和任选的姜黄。
140.本发明的组合物显示了出乎意料地优于ep1206271b1中提到的组合物的生物效应，这是基于抗氧化能力的增加导致愈合活性增加10-30％，这代表了可用于处理的有利结果，尤其是处理持续时间的减少和患者遭受疼痛的时间的减少。另外，本发明的组合物显示出更大的稳定性，这同时影响功效和它们在与皮肤接触期间的作用持续时间。同样地，关于产品的生产、储存和分配，其更大的稳定性为其提供了竞争性的、经济上的和后勤上的优点。
141.实施例
142.实施例1：组合物制剂
143.将产物以两相混合，向卡波姆的水合溶液中加入edta、姜黄、番茄红素、抗坏血酸、生育酚。将刺槐豆半乳甘露聚糖在甘油中润湿，然后用40％的最终水水合。将两相混合并用氢氧化钠溶液活化卡波姆的胶凝直到获得ph6.5。因此，获得的产品将由具有以下配方的水凝胶形式的组合物组成：
144.0.3％的卡波姆
145.0.1％的edta
146.5.0％的甘油
147.3.0％的半乳甘露聚糖
148.0.16％的乙醇 0.0001％的姜黄
149.0.0001％的番茄红素
150.0.15％的抗坏血酸
151.0.02％的α-生育酚
152.naoh调节至6.5
153.足量h2o，补足重量。
154.一旦产品通过湿热灭菌，则初始粘度为25000-35000mpa
·
s(rv 055rpm)。随着时间的推移并且由于用刺槐豆半乳甘露聚糖制备的非牛顿流体固有的性质(触变性)，水凝胶的粘度增加直到达到70000mpa
·
s的粘度(rv055rpm)。
155.实施例2：体外伤口愈合试验或划痕试验
156.体外伤口愈合试验或划痕试验是在培养组织的单层细胞中测量产物刺激细胞增殖(上皮成纤维细胞或角质形成细胞)和闭合无细胞的切口(gash)的能力。为了使切口在所有孔中均匀，将细胞接种在含有相同大小的硅酮块的孔中，这防止细胞在块体所占据的区域中粘附。因此，将上皮成纤维细胞接种在具有硅酮块或屏障的24孔板中。培育12小时后，除去屏障，并将细胞与分别或组合含有组分[不同浓度的刺槐豆半乳甘露聚糖(lbg，0.2、0.1和0.01％)，番茄红素(0.001％)]和乙酰半胱氨酸(nac，5mm)的培养基一起培育24-72小时。基于用不同处理获得的孔的图像来评估细胞覆盖的孔的整个表面或细胞的数目。
[0157]
所进行的试验的结果示于图1中，图1示出了被迁移到切口区域的成纤维细胞覆盖的孔的表面积。可以观察到，用0.2％半乳甘露聚糖和0.001％番茄红素处理的孔显示出更多的迁移细胞，使得它们能够覆盖比用0.2％半乳甘露聚糖和5mm乙酰半胱氨酸处理的孔明
显更大的面积。该体外结果表明在0.2％半乳甘露聚糖和0.001％番茄红素存在下的细胞具有更高的体内覆盖伤口的能力。
[0158]
随后，如图2a-2c所示，可以确定半乳甘露聚糖和番茄红素之间的组合在体外愈合试验中产生了最好的结果，其中在该条件下细胞覆盖的面积显著大于单独的半乳甘露聚糖或半乳甘露聚糖 nac的组合(图2a)。图2b和2c显示了体外愈合模型的图像，其中可以观察到切口的面积及其由成纤维细胞的定殖。可以观察到，相对于5mmnac，0.001％番茄红素如何诱导更好的体外愈合(图2b)，并且相对于0.1％半乳甘露聚糖和0.1％半乳甘露聚糖 5mmnac，使用0.1％半乳甘露聚糖 0.001％番茄红素的组合在愈合方面获得了更好结果(图2c)。
[0159]
实施例3：动物临床试验
[0160]
通过专门处理皮肤伤口的兽医进行临床现场研究(内部方案pro-12)，以测试本发明的抗氧剂组合物(实施例1的配方)相比于市售水凝胶(vexoderm 其组成包含半乳甘露聚糖、n-乙酰半胱氨酸和姜黄)的功效。所得定性结果的总结详见下表1。
[0161]
表1：比较在用ep1206271b1的制剂(半乳甘露聚糖 乙酰半胱氨酸 姜黄)和本发明的凝胶制剂(半乳甘露聚糖 番茄红素 姜黄)处理的动物中观察到的临床特征的试验的定性结果的汇总( 优异； 非常好； 良好； 合适；-不良)。
[0162][0163]
应用根据本发明配制的凝胶的两个临床案例的特征如下所示。临床案例由具有使用ep1206271b1中所示配方的水凝胶的先前经验的兽医进行，使得可进行两种类型制剂之间的比较。
[0164]
犬(英国斗牛犬)急性湿性皮炎(热点)的案例
[0165]
一只未绝育的4岁英国斗牛犬患者因瘙痒和颈部的恶臭病变被送至诊所。该区域呈现出难闻气味、明显红斑、脱毛和少许血状渗出物。更仔细的检查后，发现两处伴随脓液和渗出物的发炎的潮湿病变疼痛区域。这种类型的损伤是典型的急性湿性皮炎(热点)。将该区域剃毛并清洁。将该区域消毒后，大量施用所述组合物(实施例1)，即用半乳甘露聚糖和番茄红素配制的水凝胶。开具了全身抗生素和nsaid，并建议主人：1)每12小时清洗该区域；2)在最初的两天还施用局部皮质类固醇乳膏控制瘙痒；3)在施用所述乳膏2小时后施用
半乳甘露聚糖和番茄红素水凝胶。如图3所示，7天后，观察到损伤的显著改善，并且认为它们在开始用本发明的水凝胶处理后的第14天闭合。
[0166]
犬阴茎创伤的案例
[0167]
一只4岁雄性犬科患者可能由于创伤而导致阴茎出现较大坏死损伤。在动物截瘫损伤的康复期间，为了处理，用盐水溶液和无菌纱布清洁溃疡区域，直接施用本发明的组合物(实施例1)，即用刺槐豆半乳甘露聚糖和番茄红素配制的水凝胶，并用凡士林浸渍的纱布敷料覆盖。鉴于敷料由于与尿液接触而经常变湿，兽医建议主人经常清洗该区域，施用本发明的水凝胶并将其覆盖。如图4所示，治愈迅速发生，在第三天实现坏死组织的完全消除，在开始处理后第6天伤口完全治愈，使得阴茎恢复功能。
[0168]
实施例4：对制剂抗氧化能力的稳定性分析
[0169]
该研究分析了水凝胶的相同制剂在25
±
2℃下的稳定性，除了包含乙酰半胱氨酸(5mm)之外，还有其被番茄红素(0.0001)、维生素c(0.15)和维生素e(0.02)的组合替代。在以下时间在不同试管中进行分析：3、6、9和12个月。在这些时间，通过orac试验并使用(一种水溶性维生素e衍生物)产生标准曲线来测定抗氧化能力。在每个分析时间将每种水凝胶的数据标准化为初始值(时间零点)。结果表明本发明的制剂随时间保持了更好的抗氧化能力，即本发明的制剂比具有乙酰半胱氨酸作为抗氧化剂的制剂更稳定(图5)。