一种中药提取物及在制备治疗PSCI药物中的应用和制备方法与流程

一种中药提取物及在制备治疗psci药物中的应用和制备方法
技术领域
1.本技术涉及医药技术领域，具体涉及一种中药提取物在制备治疗卒中后认知障碍药物方面的应用。


背景技术：

2.目前，由于我国人口处于快速的老龄化发展阶段，并随着饮食等生活方式的改变，脑卒中的患病率每年呈递增趋势。脑卒中患者最常见的并发症之一是卒中后认知功能障碍。卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment，psci)是指执行功能、注意力、记忆力、语言能力、视觉空间能力等认知域不同程度受损为主的综合征，由不同程度或不同病因的卒中性脑损伤直接或间接所致，会严重影响患者的生活质量及功能康复，给家庭和社会带来很大的负担。有研究表明，急性脑卒中发生后1周时，认知障碍发生率为61％，6个月后仍有37％的病人遗留有认知功能缺陷，即psci发生率占所有脑卒中患者的三分之一。psci特指卒中后发生的认知障碍，它被认为是可以进行有效防治的认知障碍性疾病，如果进行有效的干预和治疗，可以延缓其向痴呆发展的进程，甚至有所逆转。因此，探讨psci的发病机制，寻找有效治疗的方法，可解决家庭和社会的沉重负担，具有非常大的现实意义。
3.尽管西医治疗psci的药物种类繁多，但尚未发现对卒中认知障碍有明显疗效的药物。目前，只能以预防进一步加重、控制危险因素和认知康复训练为主。因此，我们应当依据传统中医理论知识，借鉴现代医学的研究方法及检测指标，利用我国丰富的中药资源宝库的优势，开展实验研究，充分发挥中医药的优势，开发能够阻断或延缓向痴呆发展的中药复方或单体成分，以适应老龄化社会的需要。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本技术提供一种淫羊藿提取物，提取物包括：淫羊藿苷、朝藿定a和朝藿定c。具体地，提取物包括：≥8.2％的淫羊藿苷、≥1.6％的朝藿定a和≥5.7％的朝藿定c。
5.进一步地，本技术还提供了淫羊藿提取物的制备方法，具体如下：淫羊藿中药材经过水煮，醇沉，大孔树脂吸附，收集洗脱液，浓缩洗脱液，即得。
6.根据本技术中的实施例，提取物在水煮过程中，加水量为药材量的10-30倍，共煎煮2-4次，每次煎煮1-3小时。
7.本技术中的提取物，在醇沉过程中，加入无水乙醇使溶液的含醇量达70％，静置24小时后，滤过，滤液回收乙醇并浓缩。
8.本技术中的提取物，在大孔树脂吸附过程中，使用的是d101型大孔树脂(内径10cm，长100cm)，先以蒸馏水(3倍量柱床体积)洗脱，流速为40ml/分，弃去水洗脱液，再以85％乙醇(4倍量柱床体积)洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至稠膏(相对密度为1.30-1.35，50℃测)，减压干燥(控制真空度：0.08mpa；温度：75-80℃)，粉碎成细粉，过筛，制得。
9.本技术还公开了一种淫羊藿提取物在制备治疗卒中后认知功能障碍的药物中的应用。
10.一种包含上述提取物的治疗卒中后认知障碍的药物，选自口服给药制剂、注射给药制剂和/或外用给药制剂。
11.上述治疗卒中后认知障碍药物的剂型，包括汤剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂、注射剂；优选为口服剂型。
12.有益效果
13.本技术采用缺血性脑卒中认知障碍小鼠模型，研究了淫羊藿提取物对小鼠卒中后认知障碍的治疗作用。实验结果表明，本技术提供的淫羊藿提取物对小鼠卒中后认知障碍具有改善作用，且优于同来源的各单体化合物的功效。
具体实施方式
14.本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本技术。本技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
15.本技术中所用原料及试剂均可由市场购得。
16.下面结合实施例，进一步阐述本发明
17.实施例1：中药提取物的制备
18.取淫羊藿药材20kg，煎煮三次，每次加水为药材量的20倍，每次煎煮2小时，合并煎煮液，滤过；滤液浓缩至相对密度为1.10-1.13(50℃测)的稠膏，放冷；加入无水乙醇，使滤液含醇量达70％，静置24小时，过滤；回收滤液中的乙醇，并浓缩滤液至相对密度为1.18-1.20(50℃测)的稠膏，放至室温；加蒸馏水(与药材重量相同)使稠膏溶解，室温静置约4小时，吸取上清液；通过d101型大孔树脂(内径10cm，长100cm)，以蒸馏水(3倍量柱床体积)洗脱，流速为40ml/分；弃去洗脱液，再以85％乙醇(4倍量柱床体积)洗脱，收集洗脱液，回收乙醇并浓缩至稠膏(相对密度为1.30-1.35，50℃测)；减压干燥(控制真空度：0.08mpa；温度：75-80℃)，粉碎成细粉，过筛，制得。
19.实施例制得的样品采用高效液相色谱测定淫羊藿苷、朝藿定a，朝藿定c(中国药典2000年版一部，附录vid)；
20.色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长为270nm，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。
21.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷、朝藿定a、朝藿定c对照品适量，用甲醇制成每1ml含0.1mg各对照品的混合溶液，即得。
22.供试品溶液的制备：精确称取上述制备的提取物30mg，置于25ml容量瓶内，加60％乙醇20ml，超声处理使提取物溶解，加60％乙醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，收取滤液，即得。
23.测定方法：分别精确吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。
24.测定结果：提取物含淫羊藿苷含量为8.2％、朝藿定a含量为1.6％，朝藿定c含量为5.7％。
25.实施例2：改善小鼠卒中后认知障碍的实验研究
26.药物及试剂：淫羊藿提取物(按照实施例1的方法制备)、淫羊藿苷、朝藿定a、朝藿定c(江苏康缘药业自制)；盐酸多奈哌齐片(卫才药业有限公司)，ach含量测试试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
27.动物：icr小鼠，雄性，25-30g，(扬州大学比较医学中心，scxk(苏)2017-0007)。
28.仪器：线栓(北京沙东生物技术有限公司)，手术显微镜(江苏亿华光学仪器公司)，手术显微器械(上海医疗器械有限公司)，行为学分析系统(topscan)
29.缺血性脑卒中小鼠模型建立
30.采用线栓法制备小鼠右侧大脑中动脉栓塞模型。将小鼠按照45mg/kg给予戊巴比妥钠腹腔麻醉，常规消毒，于颈部纵向切开皮肤，逐层钝性分离、暴露右侧颈总动脉，分离右侧颈内动脉和颈外动脉，用动脉夹阻断颈内动脉和颈总动脉血流，于颈外动脉远端距离分叉处约6mm的地方斜行剪一小口(不剪断动脉，结扎颈外动脉远端，从动脉剪开的小口处插入6-0尼龙线栓，送至颈总动脉，然后扎进预留好的丝线，从破口处剪断颈外动脉，松开颈内动脉上的血管夹，将线栓从远端向近端颈内方向推送，直至遇到轻微阻力不能再前送为止，若无明显血液返流，估计此时置入大脑中动脉的线栓深度约1cm左右，则将颈外动脉残端及线栓结扎，开始记录缺血时间。缺血30分钟后，拔出线栓，缝合皮肤。假手术组除不插线栓外，其余步骤同手术组。在全部造模过程中，手术室温度保持在25摄氏度左右，并在小鼠mcao模型(中脑动脉栓塞模型)建立后，使用烤灯帮助其复温，使其体温保持在37摄氏度左右。
31.水迷宫试验
32.morris水迷宫实验是普遍认可的一种能客观评价学习记忆能力的方法，包括定位航行试验和空间探索试验两个部分。其中定位航行试验历时数天，每天将小鼠面朝池壁分别从4个入水点放入水中，记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间，即为逃避潜伏期。
33.空间探索试验是在定位航行试验后去除平台，然后任选一个入水点将小鼠放入水池中，记录其在一定时间内的游泳轨迹，考察小鼠对原平台的记忆。本实验于造mcao模型后第14天，选取无明显肢体瘫痪的小鼠进行水迷宫测试，记录其逃避潜伏期和穿越原平台次数，最终选取逃避潜伏期和穿越原平台次数与正常小鼠相比有统计学差异的小鼠作为卒中后认知障碍模型小鼠。
34.卒中后认知障碍小鼠的选取标准
35.选取无明显肢体瘫痪，可沿直线爬行，无绕圈行为的小鼠于造模后第14天进行水迷宫测试；选取逃避潜伏期和穿越原平台次数与正常小鼠相比有统计学差异的小鼠为卒中后认知障碍小鼠。
36.药物剂量设计
37.本实验设定的剂量为提取物250mg/kg、淫羊藿苷60mg/kg、朝藿定a 60mg/kg、朝藿定c 60mg/kg，盐酸多奈哌齐片3mg/kg。
38.分组及给药
39.首先将小鼠分为两大组：假手术组12只，卒中后认知障碍各组小鼠共72只。将卒中后认知障碍组小鼠随机分为模型组、提取物组、淫羊藿苷组、朝藿定a组、朝藿定c组，盐酸多奈哌齐片组，每组12只。上述各组小鼠按所在组别分别给予蒸馏水和相应浓度的药物，连续
给药28天。28天后再次进行水迷宫测试。水迷宫试验结束后的第二天进行脑组织取材。在水迷宫测试后、脑组织样品取材前，每组小鼠存活数不低于8只。
40.脑区内乙酰胆碱(ach)的测定
41.分别取各组小鼠的基底前脑和海马组织，按照组织与组织裂解液按重量：体积比为1:9混合，在冰浴中匀浆5分钟后，3000转/分钟，4℃离心10min，取上清液，使用ach含量测试试剂盒和酶标仪，测定组织中ach含量。
42.结果
43.中药提取物对脑卒中认知障碍小鼠水迷宫试验的影响
44.水迷宫实验结果显示，模型组小鼠逃避潜伏期和找到平台的总游泳距离较假手术组显著延长；本技术提取物组相较淫羊藿苷组能更为显著的缩短脑卒中后认知障碍小鼠的逃避潜伏期和找到平台的总游泳距离。朝藿定a组与模型组比较，能够显著减少小鼠的逃避潜伏期，但对总游泳距离未见显著差异。对脑卒中认知障碍模型小鼠的水迷宫实验中朝藿定c组与模型组比较，未见朝藿定c对逃避潜伏期和总游泳距离有显著影响。可见，只有提取物可显著改善脑卒中认知障碍模型小鼠的学习记忆功能。结果见表1。
45.表1中药提取物对脑卒中认知障碍小鼠学习记忆功能的影响
[0046][0047]
注：与假手术组相比，**p《0.01；与模型组相比，#p《0.05，##p《0.01。
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中药提取物对脑卒中认知障碍小鼠脑组织中乙酰胆碱(ach)含量的影响
[0049]
乙酰胆碱是迄今发现的与认知功能、学习记忆关系最为密切的一种神经递质，是广泛应用于评价胆碱能神经系统功能的指标之一。如表2所示，与假手术组相比，卒中后认知障碍模型小鼠在基底前脑和海马组织中的ach含量均显著下降；给予本技术提取物后可显著提高基底前脑和海马部位的ach含量；给予淫羊藿苷也能提高基底前脑和海马中的ach含量，朝藿定a能升高基底前脑中ach含量，而给予朝藿定c后未发现基底前脑和海马中ach含量的显著升高。
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表2本技术中药提取物对脑卒中认知障碍小鼠脑组织中ach含量的影响
[0051][0052][0053]
注：与假手术组相比，**p《0.01；与模型组相比，#p《0.05，##p《0.01。
[0054]
由以上实验可知，本技术的中药提取物可显著缩短卒中后认知障碍模型小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期时间和总游泳距离，有效改善卒中后认知障碍模型小鼠的空间学习记忆能力。且在小鼠基底前脑和海马组织中均检测到乙酰胆碱含量的显著升高。综合以上实验可见，本技术中的提取物对卒中后认知障碍具有良好的改善作用，且效果优于单用淫羊藿苷、朝藿定a和朝藿定c单体。
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综上所述，本技术的提取物对卒中后认知障碍模型小鼠具有明显的治疗作用。
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以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。