一种通用型动物疫病抗体检测免疫层析方法与应用与流程

技术特征：
1.一种通用型动物疫病抗体检测免疫层析试纸条，其特征在于，采用免疫层析试纸结合抗原生物素探针的方法对动物疫病抗体进行检测；所述免疫层析试纸包括支撑层、从测试端依次固定在支撑层上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及手柄端的吸水垫；所述硝酸纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；所述结合垫采用吸附有胶体金标记的spa或二抗igg的玻璃纤维棉制成；所述检测线喷涂有链霉亲和素；所述质控线喷涂有非检测对象种属的igg抗体；所述抗原生物素探针为动物疫病靶标物抗原与生物素偶联获得抗原生物素探针；所述抗原生物素探针的制备方法为：(1)向0.1-0.5ml二甲基亚砜中加入3-6mg生物素充分溶解，得混合物a；(2)向0.5ml双蒸水中加入3-6mg edc充分溶解，然后在室温搅拌下加入到混合物a的溶液中，反应30min，得混合物b；(3)将0.5-10mg动物疫病靶标物抗原在搅拌状态下加入到混合物b的溶液中，室温反应2h后，磷酸缓冲盐溶液透析3d，获得抗原生物素探针。2.如权利要求1所述的免疫层析试纸条的检测方法，其特征在于，所述检测方法为：先在样品孔中加入10-800倍稀释后的待测样品90μl；然后在样品孔中加入10μl/孔、每孔含0.1-10μg的抗原生物素探针，混合均匀；最后，插入所述的免疫层析试纸，10min后观察读取结果。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，结果判定的方法为：在质控线处出现紫红色线，说明本试纸有效；仅在质控线处出现一条紫红色线，而检测线处不出现紫红色线，说明待检测样品为阴性；在质控线和检测线处出现两条紫红色线，说明待检测样品为阳性。4.如权利要求1所述的免疫层析试纸条在动物疫病抗体检测中的应用。

技术总结
本发明提供一种通用型动物疫病抗体检测免疫层析方法与应用，采用免疫层析试纸结合抗原生物素探针的方法对动物疫病抗体进行检测；所述免疫层析试纸包括支撑层、从测试端依次固定在支撑层上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜及手柄端的吸水垫；所述硝酸纤维素膜层上依次设置有检测线和质控线；所述结合垫采用吸附有胶体金标记的SPA或二抗IgG的玻璃纤维棉制成；所述检测线喷涂有链霉亲和素；所述质控线喷涂有非检测对象种属的IgG抗体；所述抗原生物素探针为动物疫病靶标物抗原与生物素偶联获得抗原生物素探针。可用于一种/几种动物种属的绝大多数疫病抗体的检测。绝大多数疫病抗体的检测。绝大多数疫病抗体的检测。


技术研发人员：杨苏珍 孙亚宁 杨继飞 郭军庆 邢广旭 邢云瑞 范璐 张改平
受保护的技术使用者：河南省农业科学院动物免疫学重点实验室
技术研发日：2021.12.03
技术公布日：2022/3/1