具有漂白催化剂和吉氏芽孢杆菌蛋白酶的餐具清洗剂的制作方法

具有漂白催化剂和吉氏芽孢杆菌蛋白酶的餐具清洗剂
1.本发明涉及含有漂白剂的餐具清洗剂，其包含至少一种吉氏芽孢杆菌(bacillus gibsonii)蛋白酶。本文所述的相应清洁方法和试剂的使用也是本发明的部分。
2.酶在清洗剂和清洁剂中的使用在现有技术中已确立了数十年。它们根据其特殊活性作用于扩展所讨论的试剂的性能范围。这些特别包括水解酶，例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶。所提到的前三种酶水解蛋白质、淀粉和脂肪，并且因此直接促成污垢的去除。特别使用纤维素酶是由于其组织效应。蛋白酶是用于实际上所有现代有效清洗剂和清洁剂的历史最悠久的酶。这使得其成为所有技术上最重要的酶之一。其中，依次地，枯草杆菌蛋白酶类型的蛋白酶(枯草杆菌酶、枯草杆菌肽酶，ec 3.4.21.62)是特别重要的，并且由于催化活性的氨基酸而是丝氨酸蛋白酶。它们充当非特异性内肽酶，并且水解肽或蛋白质内部的任何酸酰胺键。它们的最佳ph通常在明显的碱性范围内。例如，在r.siezen的论文"subtilases:subtilisin-like proteases"，r.bott和c.betzel发表的"subtilisin enzymes，new york，1996"中的第75-95页中给出了此家族的概述。枯草杆菌酶天然地由微生物形成。特别地，通过芽孢杆菌属(bacillus)物种形成且分泌的枯草杆菌蛋白酶是最重要的枯草杆菌酶组。在清洗剂和清洁剂中，蛋白酶用于分解待清洁物品上的含蛋白质污渍。
3.餐具清洗剂对于消费者以多种产品形式可获得。除传统的液体手洗餐具清洗剂之外，随着家用洗碗机的普及，自动餐具清洗剂已特别地得到了极大的重视。这些自动餐具清洗剂通常以固体形式，例如作为粉末或片剂供应给消费者。
4.自动清洁剂的制造商的主要目标之一是改善这些清洁剂的清洁性能，其中最近关注的是在低温清洁过程中或在伴随减少的水消耗的清洁过程中的清洁性能。
5.然而，含蛋白质污渍，尤其是蛋渍，和可漂白污渍，尤其是茶渍，代表了经常不能令人满意地去除的顽固污渍。现代餐具清洗剂，特别是自动餐具清洗剂，经常不能满足关于去除此类污渍的要求。因此，仍然需要特别是即使在较低的清洁温度下，也可靠地去除含蛋白质污渍和可漂白污渍的餐具清洗剂，特别包括自动餐具清洗剂。
6.在这方面，欧洲专利申请ep0846155公开了脂肪酶的添加增加了漂白剂对茶渍的作用。氨基酸作为漂白稳定剂的用途出现于欧洲专利申请ep0476257。
7.本发明的目的是进一步改善餐具清洗剂的清洁性能，特别是对含蛋白质污渍和/或可漂白污渍，特别是茶渍的清洁性能。
8.一般而言，在任何情况下，仅所选的蛋白酶适用于含表面活性剂的液体制剂。许多蛋白酶在此类制剂中并未显示出足够的催化性能。因此，对于蛋白酶在清洁剂中的使用，当它们在洗涤循环期间的条件下的高催化活性和稳定性是特别期望的。
9.因此，在第一个方面，本发明的目的是包含过氧化氢源、漂白催化剂和吉氏芽孢杆菌蛋白酶的餐具清洗剂，所述吉氏芽孢杆菌蛋白酶包含的氨基酸序列在其整个长度上与seq id no:1中给出的氨基酸序列具有至少70％的序列相同性，并且在对应于在每种情况下都与根据seq id no:1的编号有关的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置上具有氨基酸取代。
10.本发明的一个进一步目的是包含过氧化氢源、漂白催化剂和吉氏芽孢杆菌蛋白酶
的餐具清洗剂，所述吉氏芽孢杆菌蛋白酶在其整个长度上与seq id no:1中给出的氨基酸序列具有至少70％的序列相同性，并且在对应于在每种情况下基于根据seq id no:1的编号的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置上具有氨基酸取代q12l、i43v、m122l、d127p、n154s、t156a、g160s、m211n、m211l、p212d、p212h或a222s中的至少一种。
11.本发明的另一个目的是用于生产此类餐具清洗剂的方法，以及用于去除硬表面，特别是餐具上的含蛋白质污渍，特别是蛋渍，和/或可漂白污渍，特别是茶渍的方法。
12.本发明的另一个目的是此类餐具清洗剂用于清洁硬表面，特别是餐具，特别是用于去除含蛋白质污渍，特别是蛋渍，和/或可漂白污渍，特别是茶渍的用途。
13.通过研究下述详细描述和权利要求，本发明的这些和其它方面、特征和优点对于本领域技术人员将变得显而易见。来自本发明的一个方面的任何特征均可以用于本发明的任何其它方面。此外，容易理解的是，在本文中含有的实例预期描述且说明而非限制本发明，并且特别地，本发明并不限于这些实例。
14.除非另有说明，否则所有百分比都按照wt.％进行指示。以格式“从x到y”指示的数值范围也包括所陈述的值。如果以这种格式指示了几个优选的数值范围，则容易理解的是，还包括起因于各种端点的组合的所有范围。如本文使用的，“至少一个/种”意指一个/种或更多个/种，即1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14个/种或更多个/种。如本文使用的，“餐具清洗剂”与术语“清洁剂”或“试剂”同义，并且表示用于清洁硬表面，特别是餐具的组合物，如说明书中解释的。如本文使用的，与数值有关的“约”、“大约(ca.)”或“大约”涉及相应数值
±
10％，优选
±
5％。
15.本发明基于本发明人的以下惊人发现：包含蛋白酶的餐具清洗剂不仅对含蛋白质污渍，特别是蛋渍具有改善的清洁性能，而且与漂白催化剂组合，具有非常好的漂白性能，并且因而显示了对可漂白污渍，特别是茶渍非常好的清洁性能，所述蛋白酶包含的这样氨基酸序列，其在其整个长度上与seq id no:1中给出的氨基酸序列具有至少70％的序列相同性，并且在对应于各自基于根据seq id no:1的编号的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置上具有至少一个氨基酸取代。
16.这是特别令人惊讶的，因为迄今为止此类吉氏芽孢杆菌蛋白酶与餐具清洗剂的清洁性能改善并不相关，特别是与含蛋白质污渍和可漂白污渍无关。特别地，对可漂白污渍的非常好的清洁性能是惊人的，因为蛋白酶一般对清洗剂和清洁剂中的漂白剂敏感，并且在漂白剂的存在下无法良好地工作。根据本发明的蛋白酶看起来不仅对清洁剂中的漂白剂较不敏感，并且因此显示了对含蛋白质污渍通常改善的清洁性能，而且在根据本发明的试剂(mittel)的优选实施方案中，在相应的蛋白酶和漂白催化剂之间还存在关于清洁性能，特别是关于对茶渍的清洁性能的协同作用。
17.根据本发明的试剂的进一步优选实施方案即使在低温下和/或用短洗涤循环也显示了此类有利的清洁性能。在本发明的含义内的低温优选为10至50℃，优选为15至45℃并且特别优选为20至40℃。短洗涤循环优选持续最多60分钟、45分钟或最多仅30分钟。根据本发明的试剂的进一步优选实施方案还显示了改善的最终漂洗性能。
18.清洁性能描述了餐具清洗剂，特别是自动餐具洗涤清洗剂，部分或完全去除现有污渍的能力。在本发明的范围内，包含蛋白酶或由该试剂形成的清洁液的餐具清洗剂和蛋
白酶本身均具有分别的清洁性能。因此，酶的清洁性能对试剂或由试剂形成的清洁液的清洁性能做出贡献。
19.清洁液应理解为意指使含有餐具清洗剂的用溶液，其作用于硬表面并因此与硬表面上存在的污渍接触。清洁液通常在清洁过程开始时产生，并且餐具清洗剂例如在洗碗机或其它合适的容器中用水稀释。
20.清洁性能可以在含有以如本文指定剂量的自动餐具清洗剂和蛋白酶的系统中进行确定，其中待比较的蛋白酶以相同浓度(基于活性蛋白质)使用，并且根据miele gsl(程序45℃，21
°
dh)中的ikw方法，确定针对茶、肉、意大利面、蛋和/或焦糖布蕾的污渍的清洁性能。基于活性、纯化的蛋白质，预期用于这种洗涤系统的清洗剂中的蛋白酶浓度为0.001至0.1wt.％，优选为0.01至0.06wt.％。
21.用于此类洗涤系统的参考试剂可以如下组成：
[0022][0023]
有关蛋白酶的活性等价使用确保了，即使活性物质/总蛋白质的比率(比活性的值)分散，也可以比较分别的酶促性质，例如对某些污渍的清洁性能。一般而言，低比活性可以通过添加更大量的蛋白质得到补偿。此外，如果待检查的酶在活性测试中对于测试底物具有不同的亲和力，则待检查的酶也可以以相同的物质量或按重量计的量使用。在此上下文中，表述“相同的物质量”涉及待调查的酶的摩尔用量。术语“相等重量”涉及待调查的酶
的相同重量的使用。
[0024]
在其它方面，用于确定蛋白酶活性的方法是酶技术领域的技术人员众所周知，并且由酶技术领域的技术人员常规使用的。例如，此类方法公开于tenside，第7卷(1970)，第125-132页中。蛋白酶活性通常以蛋白酶单位(pu)指示。合适的蛋白酶活性是例如每ml洗涤液或洗涤过程2.25、5或10pu。然而，蛋白酶活性并不等于零。
[0025]
可以使用已知方法确定蛋白质浓度，所述方法例如bca法(二辛可宁酸；2,2'-二喹啉基-4,4'-二羧酸)或双缩脲法(gornall等人，1948，j.biol.chem.，177:751-766)。在这方面，可以通过使用合适的不可逆抑制剂滴定活性中心并确定残留活性，来确定活性蛋白质浓度(参照m.bender等人，1966，j.am.chem.soc.88(24):5890-5913)。
[0026]
根据本发明的蛋白酶特别是在清洗剂或清洁剂中显示出酶促活性，即它们能够水解肽和蛋白质。因此，根据本发明的蛋白酶是催化蛋白质/肽底物中的酰胺键/肽键水解并因此能够切割蛋白质或肽的酶。此外，根据本发明的蛋白酶优选是成熟蛋白酶，即没有信号肽和/或前肽的催化活性分子。除非另有说明，否则给出的序列也各自指成熟(加工的)酶。
[0027]
在本发明的各个实施方案中，蛋白酶是游离酶。这意指蛋白酶可以直接与试剂的所有组分一起作用，并且如果试剂是液体试剂，则蛋白酶与试剂的溶剂(例如水)直接接触。在其它实施方案中，试剂可以含有与其它分子形成相互作用复合物或含有“包衣”的蛋白酶。在这种情况下，个别蛋白酶分子或多重蛋白酶分子可以通过周围结构与试剂的其它组成成分分开。此类分离结构可以起于但不限于囊泡如胶束或脂质体。周围结构也可以是病毒颗粒、细菌细胞或真核细胞。在各个实施方案中，试剂可以包括表达根据本发明的蛋白酶的吉氏芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)的细胞、或者此类细胞的细胞培养上清液。
[0028]
令人惊讶地，正是在根据本发明的餐具清洗剂中的那些蛋白酶一方面改善对含蛋白质污渍，特别是蛋渍的清洁性能，并且另一方面，在与根据本发明的试剂中的漂白催化剂的相互作用中，带来对可漂白污渍，特别是茶渍的改善的清洁性能，所述蛋白酶包含这样的氨基酸序列，其在其整个长度上与seq id no:1中给出的氨基酸序列具有至少70％的序列相同性，并且在对应于各自基于根据seq id no:1的编号的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212和222的至少一个位置上具有氨基酸取代。在这方面，优选存在协同相互作用。
[0029]
此外，在各个实施方案中，根据本发明使用的吉氏芽孢杆菌蛋白酶含有选自以下的至少一个氨基酸取代：q12l、i43v、m122l、d127p、n154s、t156a、g160s、m211n、m211l、p212d、p212h，在每种情况下基于根据seq id no:1的编号。
[0030]
在进一步优选的实施方案中，根据本发明使用的蛋白酶含有下述氨基酸取代变体之一：(i)i43v；(ii)m122l、n154s和t156a；(iii)m211n和p212d；(iv)m211l和p212d；(v)g160s；(vi)d127p、m211l和p212d；(vii)p212h；或(viii)q12l、m122l和a222s，其中每种情况下的编号基于根据seq id no:1的编号。
[0031]
在本发明的进一步实施方案中，根据本发明使用的蛋白酶包含这样的氨基酸序列，其在其整个长度上优选与seq id no:1中给出的氨基酸序列至少70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％和98.8％相同，并且在每种情况下基于根
据seq id no:1的编号包含(a)对应于根据seq id no:1的编号中的位置12、43、122、127、154、156、160、211、212或222的一种或多种氨基酸取代12l、43v、122l、127p、154s、156a、160s、211n、211l、212d、212h或222s。
[0032]
在本发明的上下文中，由此蛋白酶包含所述取代的特征意指它含有在相应位置中的至少一种相应氨基酸，即并非所有10个位置都以其它方式例如通过蛋白酶的片段化而突变或缺失。
[0033]
核酸序列或氨基酸序列的相同性通过序列比较进行确定。该序列比较基于现有技术中建立且常用的blast算法(参照例如，altschul等人(1990)“basic local alignment search tool,”j.mol.biol.215:403-410，以及altschul等人(1997):“gapped blast and psi-blast:a new generation of protein database search programs,”nucleic acids res.，25:3389-3402)，并且原则上通过彼此分配的核酸序列或氨基酸序列中的核苷酸或氨基酸的类似序列而发生。表中所示的有关位置的分配被称为比对。现有技术中可用的另一种算法是fasta算法。使用计算机程序创建序列比较(比对)，特别是多重序列比较。例如，clustal系列(参照例如，chenna等人(2003)“multiple sequence alignment with the clustal series of programs,”nucleic acid res.31:3497-3500)、t-coffee(参照例如，notredame等人(2000)“t-coffee:a novel method for multiple sequence alignments,”j.mol.biol.302:205-217)或者基于这些程序或算法的程序是频繁使用的。使用计算机程序vectorsuite 10.3(invitrogen corporation，1600 faraday avenue，carlsbad，kalifornien，usa)与预定的默认参数的序列比较(比对)，以及其序列比较基于clustalw的alignx模块也是可能的。除非另有说明，否则本文给出的序列相同性通过blast算法进行确定。
[0034]
此类比较还允许得出关于所比较序列的相似性的结论。它通常以相同性百分比给出，即在所述序列中或在相应位置的比对中的相同核苷酸或氨基酸原子团的比例。更广泛的同源性概念在氨基酸序列的情况下考虑了保守的氨基酸交换，即具有相似化学活性的氨基酸，因为它们通常在蛋白质内进行相似的化学活性。因此，所比较序列的相似性也可以陈述为同源性百分比或相似性百分比。可以提供关于整个多肽或基因或者仅关于各个区域的相同性和/或同源性信息。因此，不同核酸或氨基酸序列的同源或相同区域由序列中的匹配来定义。此类区域经常包含相同的功能。它们可以很小并且仅包含几个核苷酸或氨基酸。经常地，此类小区域进行对于蛋白质的总体活性必需的功能。因此，将序列匹配仅与个别的、任选地小区域相关联可能是有利的。然而，除非另有说明，否则本技术中的相同性或同源性信息涉及所指示的特定核酸序列或氨基酸序列的整个长度。在本发明的上下文中，氨基酸位置对应于seq id no:1中的数字指定位置的指示因此意指，在如上文定义的比对中，相应位置与seq id no:1中的数字指定位置相关。
[0035]
本发明的一个进一步目的是具有蛋白酶的清洁剂，其特征在于所述蛋白酶可以通过一种或多种保守氨基酸取代，从作为起始分子的根据本发明的蛋白酶获得。术语“保守氨基酸取代”意指一个氨基酸原子团与另一个氨基酸原子团的交换(取代)，其中这种交换并不导致在所交换氨基酸的位置处的极性或电荷变化，例如一个非极性氨基酸原子团与另一个非极性氨基酸原子团的交换。在本发明的范围内的保守氨基酸取代包括例如：g＝a＝s、i＝v＝l＝m、d＝e、n＝q、k＝r、y＝f、s＝t、g＝a＝i＝v＝l＝m＝y＝f＝w＝p＝s＝t。
[0036]
本发明的另一个目的是具有蛋白酶的清洁剂，其特征在于所述蛋白酶可以通过片段化、缺失、插入或取代诱变，从作为起始分子的根据本发明的蛋白酶获得，并且包含在至少50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、261、262、263、264、265、266、267、268或269个邻接氨基酸的长度上匹配起始分子的氨基酸序列。
[0037]
例如，能够在酶的末端处或环中缺失个别氨基酸，而蛋白酶解活性在该过程中并不丧失或减弱。此外，此类片段化或缺失、插入或取代诱变也可以例如降低所涉及的酶的变应原性，并且因此改善其整体适用性。即使在诱变之后，酶也有利地保留其蛋白酶解活性，即它们的蛋白酶解活性至少对应于起始酶的蛋白酶解活性。其它取代也可以显示出有利的效应。单个和多重邻接氨基酸均可以与其它氨基酸交换。
[0038]
根据本发明的蛋白酶可以另外特别地通过一个或多个突变，例如取代，或通过与聚合物偶联而得到稳定。在贮存期间和/或在使用期间例如在洗涤过程中的稳定性增加，导致更长的酶促活性并因此改善清洁性能。原则上，考虑了现有技术中描述的和/或适当的所有稳定化选项。通过酶本身的突变实现的那些稳定化是优选的，因为此类稳定化在酶回收之后并不需要任何进一步的工作步骤。用于稳定化的进一步可能性是例如：
[0039]-例如通过将涉及钙结合的一种或多种氨基酸与一种或多种带负电荷的氨基酸交换，和/或通过在两种氨基酸精氨酸和甘氨酸的至少一种序列中引入序列改变，改变金属离子的结合，特别是钙结合位点；
[0040]-通过引起在蛋白质的表面上或在蛋白质的表面处的氨基酸序列改变的突变，来保护免于更多变性剂如表面活性剂的影响；
[0041]-将靠近n末端的氨基酸与很可能经由非共价相互作用接触分子的剩余部分的那些氨基酸交换，因此促成球状结构的维持。
[0042]
优选的实施方案是其中酶以几种方式得到稳定的那些实施方案，因为几种稳定突变相加地或协同地起作用。
[0043]
本发明还涉及如上所述的蛋白酶，其特征在于它具有至少一种化学修饰。具有此类改变的蛋白酶被称为衍生物，即蛋白酶被衍生化。在本技术的上下文中，衍生物因此应理解为意指其纯氨基酸链已进行化学修饰的那些蛋白质。此类衍生化可以例如通过表达蛋白质的宿主细胞在体内实现。在这方面，低分子量化合物如脂质或寡糖的偶联特别值得注意。然而，衍生化也可以例如通过氨基酸侧链的化学转换、或通过另一种化合物与蛋白质的共价键合在体外进行。例如，能够将胺与酶的羧基偶联，以便改变等电点。例如，另一种此类化合物也可以是另一种蛋白质，其经由双功能化学化合物与根据本发明的蛋白质结合。衍生化也应理解为意指与大分子载体的共价键合或合适的大分子笼形结构中的非共价包含。例如，衍生化可能影响底物特异性或与底物的结合强度，或者当偶联的物质是抑制剂时，引起酶促活性的暂时阻断。例如，对于贮存期间，这可能是有利的。此类修饰可能进一步影响稳定性或酶促活性。它们还可以用于降低蛋白质的变应原性和/或免疫原性，并且因此例如增加其皮肤相容性。例如，与大分子化合物例如聚乙二醇的偶联可以在稳定性和/或皮肤相容性方面改善蛋白质。根据本发明的蛋白质的衍生物也可以在最广泛的含义上理解为意指这些蛋白质的制剂。取决于回收、加工或制备，蛋白质可以与各种其它物质进行交联，所述各种其它物质例如来自生产微生物的培养物。蛋白质也可能已有意地加入其它物质中，例如
以增加其贮存稳定性。因此，根据本发明的蛋白质的所有制剂也符合本发明。这也与它是否在特定制剂中实际上显示出这种酶促活性无关。这是因为可能期望它在贮存期间没有活性或仅具有低活性，并且仅在使用时显示出其酶促功能。例如，这可以经由适当的伴随物质加以控制。
[0044]
众多蛋白酶，且特别是枯草杆菌蛋白酶形成为所谓的前蛋白，即连同前肽和信号肽一起形成，其中信号肽的功能通常是确保蛋白酶从产生其的细胞释放到周质或细胞周围的培养基内，而前肽通常是蛋白酶正确折叠所必需的。信号肽和前肽通常是前蛋白的n末端部分。信号肽在天然条件下通过信号肽酶与蛋白酶的剩余部分分离。然后发生由前肽支持的蛋白酶的正确最终折叠。然后蛋白酶处于其活性形式并切割前肽本身。在前肽已分离后，当时成熟的蛋白酶，特别是枯草杆菌蛋白酶，无需最初存在的n末端氨基酸而发挥其催化活性。对于一般而言且特别是在本发明的范围内的技术应用，成熟蛋白酶，即在其生产后进行加工的酶，优选于前蛋白。蛋白酶也可以在多肽链产生后通过产生其的细胞进行修饰，例如通过附着糖分子、甲酰化、胺化等。此类修饰是翻译后修饰，并且可以但不必具有对蛋白酶功能的影响。
[0045]
如本文使用的，“变体”涉及天然蛋白酶的天然或人工生成的变体，其具有从参考形式进行修饰的氨基酸序列。除上文讨论的氨基酸改变之外，根据本发明的蛋白酶还可以具有其它氨基酸改变，特别是氨基酸取代、插入或缺失。此类蛋白酶例如通过靶向遗传改变，即通过诱变方法进行开发，并且对于特定应用或关于特定性质(例如关于其催化活性、稳定性等)进行优化。此外，根据本发明的核酸可以引入重组方法内，并且因此可以用于生成全新类型的蛋白酶或其它多肽。目的是将靶向突变例如取代、插入或缺失引入已知分子内，以便例如改善酶的清洁性能。为此目的，特别地可以改变分子的表面电荷和/或等电点，并且因此改变其与底物的相互作用。例如，特别是对于在清洗剂和清洁剂中的使用，可以改变酶的净电荷，以便影响底物结合。可替代地或另外，一种或多种相应的突变可以增加酶的稳定性或催化活性，并且因此改善其清洁性能。个别突变例如个别取代的有利性质可以相互补充。因此可以在本发明的范围内进一步开发这样的蛋白酶，其已经关于某些性质，例如关于其针对表面活性剂和/或漂白剂和/或其它组分的稳定性进行优化。
[0046]
关于与恰好一个氨基酸位置有关的取代(氨基酸交换)的描述，在本文中使用下述约定：首先，以国际上使用的单字母代码的形式指定天然存在的氨基酸，随后为相关的序列位置，且最后为所插入的氨基酸。同一多肽链内的几个交换通过斜线分开。对于插入，另外的氨基酸遵循序列位置命名。在缺失的情况下，缺少的氨基酸由符号例如星号或破折号替换，或者在相应位置之前指示δ。例如，p14h描述了在位置14处的脯氨酸由组氨酸的取代，p14ht描述了在位置14处的氨基酸组氨酸之后的苏氨酸插入，并且p14*或δp14描述了在位置14处的脯氨酸缺失。该命名法是酶技术领域的技术人员已知的。
[0047]
在这种情况下，通过根据本发明的蛋白酶的氨基酸序列与如seq id no:1中给出的、来自吉氏芽孢杆菌的蛋白酶的氨基酸序列的比对，来限定氨基酸位置。此外，位置的分配取决于成熟蛋白质。如果与根据seq id no:1的来自吉氏芽孢杆菌的蛋白酶相比，根据本发明的蛋白酶的氨基酸序列包含更多数目的氨基酸原子团，则特别地也使用这种分配。从来自吉氏芽孢杆菌的蛋白酶的氨基酸序列中的上述位置进行，根据本发明使用的蛋白酶中的改变位置是在比对中精确地分配给这些位置的那些位置。
[0048]
在本发明的一个进一步实施方案中，蛋白酶的特征在于，与包含的氨基酸序列对应于seq id no:1中给出的氨基酸序列的蛋白酶相比，其清洁性能没有显著降低，即具有至少80％的参考洗涤性能，优选至少100％，更优选至少110％或更多。清洁性能可以如上所述进行确定。
[0049]
基于蛋白酶的活性蛋白质含量，根据本发明的餐具清洗剂越来越优选地含有其量为1
×
10-8
至10wt.％、0.00001至2wt.％、0.001至1wt.％、0.007至0.8wt.％、0.025至0.5wt.％，且特别优选0.04至0.38wt.％的蛋白酶。
[0050]
根据本发明的餐具清洗剂还包含漂白活化剂。这些物质优选为强化漂白的过渡金属盐或过渡金属络合物，例如mn-、fe-、co-、ru-或mo-salen络合物或羰基络合物。具有含n三脚架配体的mn-、fe-、co-、ru-、mo-、ti-、v-和cu-络合物，以及co-、fe-、cu-和ru-氨络合物也可以用作漂白催化剂。
[0051]
特别优选使用处于氧化阶段ii、iii、iv或iv的锰的络合物，其优选含有具有供体功能n、nr、pr、o和/或s的一种或多种大环配体。优选地，使用具有氮供体功能的配体。特别优选在根据本发明的试剂中使用漂白催化剂，其含有作为大分子配体的1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me-tacn)、1,4,7-三氮杂环壬烷(tacn)、1,5,9-三甲基-1,5,9-三氮杂环十二烷(me-tacd)、2-甲基-1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me/me-tacn)和/或2-甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me/tacn)。合适的锰络合物是例如[mn
iii2
(μ-o)1(μ-oac)2(tacn)2](clo4)2、[mn
iii
mn
iv
(μ-o)2(μ-oac)1(tacn)2](bph4)2、[mn
iv4
(μ-o)6(tacn)4](clo4)4、[mn
iii2
(μ-o)1(μ-oac)2(me-tacn)2](clo4)2、[mn
iii
mn
iv
(μ-o)1(μ-oac)2(me-tacn)2](clo4)3、[mn
iv2
(μ-o)3(me-tacn)2](pf6)2和[mn
iv2
(μ-o)3(me/me-tacn)2](pf6)2(oac＝oc(o)ch3)。
[0052]
其特征在于它们含有选自强化漂白的过渡金属盐和过渡金属络合物的漂白催化剂，优选选自锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me-tacn)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me/me-tacn)的络合物的餐具清洗剂，特别是自动餐具清洗剂，根据本发明是优选的，因为上述漂白催化剂可以特别显著地改善清洁结果。
[0053]
特别是具有中心原子mn和co的上述强化漂白的过渡金属络合物，优选以至多5wt.％，特别是0.0025至1wt.％，且特别优选0.01至0.30wt.％的量使用，在每种情况下基于含有漂白剂催化剂的组合物的总重量。然而，在特殊情况下，也可以使用更多的漂白催化剂。
[0054]
根据本发明的餐具清洗剂进一步包含过氧化氢源。这些是在水中传递或可以传递h2o2的化合物。过氧化氢源优选为漂白剂，其中氧漂白剂根据本发明是优选的。
[0055]
在充当漂白剂并在水中产生h2o2的化合物组中，过碳酸钠、四水合过硼酸钠和一水合过硼酸钠具有特别的重要性。可以使用的漂白剂的进一步实例是过氧焦磷酸盐、柠檬酸过氧化氢合物以及产生h2o2的过酸盐或过酸，例如过氧化苯甲酸盐、过氧化邻苯二甲酸盐、双过壬酸酞亚氨过酸或双过十二烷二酸
[0056]
此外，也可以使用来自有机漂白剂的组的漂白剂。通常的有机漂白剂是二酰基过氧化物，例如过氧化二苯甲酰。其它通常的有机漂白剂是过氧酸，其中烷基过氧酸和芳基过氧酸作为实例特别值得一提。
[0057]
过氧化氢源优选以2至30wt.％，并且越来越优选地4至25wt.％、5至20wt.％且特
别优选6至15wt.％的量包含在根据本发明的餐具清洗剂中，分别基于餐具清洗剂的总重量。优选的餐具清洗剂的特征还在于，在每种情况下基于自动餐具洗涤清洗剂的总重量，餐具清洗剂含有2至20wt.％，优选3至18wt.％，且特别是4至15wt.％的过碳酸钠。
[0058]
因而，根据本发明的餐具清洗剂的特别优选的实施方案的特征在于，所述漂白催化剂选自增强漂白的过渡金属盐和过渡金属络合物，优选选自锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me-tacn)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me/me-tacn)的络合物，和/或所述过氧化氢源是过碳酸钠、过硼酸钠四水合物或过硼酸钠一水合物或它们的组合。漂白催化剂非常特别地优选是锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me-tacn)的络合物，特别是[mn
iv2
(μ-o)3(me-tacn)2](pf6)2、或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(me/me-tacn)或其混合物，以及过氧化氢源过碳酸钠。漂白催化剂和过氧化氢源优选以上述量存在于所提到的组合中。
[0059]
例如，根据本发明的餐具清洗剂，特别是自动餐具清洗剂，还可以含有漂白活化剂，以便在60℃及以下的温度下清洁时实现改善的漂白效果。在过水解条件下，导致优选具有1至10个c原子，特别是2至4个c原子的脂族过氧羧酸，和/或任选取代的过苯甲酸的化合物可以用作漂白活化剂。具有所述c原子数的o酰基和/或n酰基和/或任选取代的苯甲酰基的物质是合适的。多酰化亚烷基二胺是优选的，其中四乙酰乙基乙二胺(taed)已证明是特别合适的。
[0060]
这些漂白活化剂优选以0.1至10wt.％，特别是0.1至8wt.％，尤其是2至8wt.％，且特别优选2至6wt.％的量使用，在每种情况下基于试剂的总重量。
[0061]
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的餐具清洗剂是自动餐具清洗剂。依照本技术，自动餐具清洗剂是可以在自动餐具洗涤过程中用于清洁弄脏的餐具的组合物。因此，根据本发明的自动餐具清洗剂不同于自动漂洗助剂，其总是与自动餐具清洗剂组合使用并且其自身不具有任何清洁效果。
[0062]
机器洗涤的餐具经常遭受比手动洗涤的餐具更高的要求。在机器清洁后，餐具不仅应该不含食物残渣，还应该没有由于水的硬度或其它矿物盐的任何发白的污渍，所述发白的污渍来自由于缺乏润湿剂的干燥水滴。现代机器餐具清洗剂通过整合清洁和/或维护和/或水软化和/或漂洗活性成分来满足这些要求，并且例如是消费者所熟知的“2合1”或“3合1”餐具清洗剂。自动餐具清洗剂含有助洗剂作为用于清洁和漂洗成功的必要组分。一方面，这些助洗剂增加了清洁液的碱度，其中脂肪和油随着碱度增加而乳化且皂化，并且另一方面，通过络合水溶液中含有的钙离子，它们降低了清洁液的水硬度。
[0063]
此外，根据本发明的餐具清洗剂可以包含选自以下的至少一种进一步成分：表面活性剂、助洗剂、(阴离子)聚合物、玻璃腐蚀抑制剂、腐蚀抑制剂及它们的组合。它们还可能含有与水混溶的有机溶剂、进一步的酶、螯合剂、电解质、ph调节剂和/或进一步的助剂，例如荧光增白剂、灰化抑制剂、颜色转移抑制剂、泡沫调节剂、以及染料和香料及它们的组合。在本发明的一个进一步实施方案中，根据本发明的餐具清洗剂是无磷的。从环境的观点来看，根据本发明的无磷餐具清洗剂是特别有利的。
[0064]
试剂的成分优选彼此匹配。关于清洁性能和/或漂洗性能和/或沉积物抑制的协同作用是优选的。在10至100℃的温度范围内，特别是在15至100℃、20至70℃、20至60℃、20至50℃、20至40℃、15至30℃和15至25℃的温度范围内存在的协同作用是特别优选的。
[0065]
根据本发明的餐具清洗剂，特别是自动餐具清洗剂，可以含有一种或多种表面活性剂，其中阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂及其混合物是特别合适的。
[0066]
在阴离子型表面活性剂中优选的是具有至少一个硫酸盐或磺酸盐基团的那些。具有至少一个硫酸盐或磺酸盐基团的阴离子型表面活性剂优选选自脂肪醇硫酸盐、烷烃磺酸盐和烷基苯磺酸盐。此处优选的是c12-18脂肪醇硫酸盐(fas)，例如sulfopon k35(cognis，德国)，仲c13-17烷烃磺酸盐(sas)，例如hostapur sas 93(clariant，德国)，以及线性c8-18烷基苯磺酸盐，尤其是十二烷基苯磺酸盐(las)。根据本发明，术语“硫酸盐”和“磺酸盐”不仅包括以盐的形式存在的有关阴离子化合物，还包括游离酸，即相应的烷基硫酸或烷基磺酸。根据本发明的餐具清洗剂中具有至少一个硫酸盐或磺酸盐基团的阴离子型表面活性剂优选以0.1至20wt.％，特别优选0.5至15wt.％，特别是2.5至10wt.％的量包含。
[0067]
非离子型表面活性剂是根据本发明的清洁剂的优选组分，其中通式r
1-ch(oh)ch2o-(ao)
w-(a'o)
x-(a”o)
y-(a'”o)
z-r2的非离子型表面活性剂是优选的，在所述通式中，r1代表直链或支链、饱和或者单不饱和或多不饱和的c
6-24-烷基或-烯基原子团；r2代表具有2至26个碳原子的线性或支链烃原子团；a、a’、a
”’
和a”'’彼此独立地代表来自基团-ch2ch2、-ch2ch
2-ch2、-ch
2-ch(ch3)、-ch
2-ch
2-ch
2-ch2、-ch
2-ch(ch3)-ch
2-、-ch
2-ch(ch
2-ch3)的原子团，并且w、x、y和z代表0.5至120的值，其中x、y和/或z也可以为0。
[0068]
通过加入通式r
1-ch(oh)ch2o-(ao)
w-(a’o)
x-(a”o)
y-(a
”’
o)
z-r2的上述非离子型表面活性剂，随后也称为“羟基混合醚”，与不含表面活性剂的系统相比，以及与含有例如来自聚烷氧基化脂肪醇组的替代非离子型表面活性剂的系统相比，根据本发明的含酶制剂的清洁性能可以令人惊讶地得到显著改善。
[0069]
通过使用在一个或两个末端烷基原子团上具有一个或多个游离羟基的这些非离子型表面活性剂，可以基本上改善在根据本发明的清洁剂制剂中包含的酶的稳定性。
[0070]
特别优选的是封端的聚(氧烷基化)非离子型表面活性剂，根据式r1o[ch2ch2o]
x
ch2ch(oh)r2，除代表具有2至30个碳原子，优选具有4至22个碳原子的线性或支链、饱和或不饱和、脂族或芳族烃原子团的原子团r1之外，其还包含具有1至30个碳原子的线性或支链、饱和或不饱和、脂族或芳族烃原子团r2，其中x代表1至90的值，优选30至80的值，且特别是30至60的值。
[0071]
式r1o[ch2ch(ch3)o]
x
[ch2ch2o]ych2ch(oh)r2的表面活性剂是特别优选的，其中r1代表具有4至18个碳原子的线性或支链的脂族烃原子团或其混合物，r2代表具有2至26个碳原子的线性或支链的烃原子团或其混合物，并且x代表0.5至1.5的值，且y代表至少15的值。这些非离子型表面活性剂的组包括例如c
2-26
脂肪醇-(po)
1-(eo)
15-40-2-羟基烷基醚，还特别是c
8-10
脂肪醇-(po)
1-(eo)
22-2-羟基癸基醚。
[0072]
还特别优选的是式r1o[ch2ch2o]
x
[ch2ch(r3)o]ych2ch(oh)r2的封端的聚(氧烷基化)非离子型表面活性剂，其中r1和r2彼此独立地代表具有2至26个碳原子的线性或支链、饱和或者单不饱和或多不饱和的烃原子团，r3彼此独立地选自-ch3、-ch2ch3、-ch2ch
2-ch3、-ch(ch3)2，但优选代表-ch3，并且x和y彼此独立地代表1至32的值，具有r3＝-ch3以及对于x为15至32的值和对于y为0.5至1.5的值的非离子型表面活性剂是非常特别优选的。
[0073]
可以优选使用的进一步的非离子型表面活性剂是式r1o[ch2ch(r3)o]
x
[ch2]kch(oh)[ch2]jor2的封端的聚(氧烷基化)非离子型表面活性剂，其中r1和r2代表具有1至30个碳
原子的线性或支链、饱和或不饱和、脂族或芳族烃原子团，r3代表h或甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、2-丁基或2-甲基-2-丁基原子团，x代表1至30的值，并且k和j代表1至12，优选1至5的值。如果值x≥2，则上式r1o[ch2ch(r3)o]
x
[ch2]kch(oh)[ch2]jor2中的每一个r3可以是不同的。r1和r2优选为具有6至22个碳原子的线性或支链、饱和或不饱和、脂族或芳族烃原子团，其中具有8至18个c原子的原子团是特别优选的。对于原子团r3，h、-ch3或-ch2ch3是特别优选的。对于x特别优选的值在1至20，特别是6至15的范围内。
[0074]
如上所述，如果x≥2，则上式中的每一个r3可以是不同的。以这种方式，方括号中的环氧烷单元可以变化。例如，如果x代表3，则可以选择原子团r3以便形成环氧乙烷(r
3＝
h)或环氧丙烷(r3＝ch3)单元，其可以以任何顺序连接在一起，例如(eo)(po)(eo)、(eo)(eo)(po)、(eo)(eo)(eo)、(po)(eo)(po)、(po)(po)(eo)和(po)(po)(po)。此处作为实例对于x已选择了值3，并且当然可以是更大的，其中变动范围随着x的值增加而增加，并且包括例如与少量(po)基团组合的大量(eo)基团，或反之亦然。
[0075]
上式的特别优选的封端的聚(氧烷基化)醇具有k＝1和j＝1的值，并且因此前式简化为r1o[ch2ch(r3)o]
x ch2ch(oh)ch2or2。在上式中，r1、r2和r3如上文定义的，并且x代表从1到30，优选从1到20，且特别是从6到18的数目。其中原子团r1和r2具有9至14个c原子，r3代表h，且x采取从6到15的值的表面活性剂是特别优选的。
[0076]
最后，通式r
1-ch(oh)ch2o-(ao)
w-r2的非离子型表面活性剂已证明是特别有效的，其中r1代表直链或支链、饱和或者单不饱和或多不饱和的c
6-24-烷基或烯基原子团；r2代表具有2至26个碳原子的线性或支链烃原子团；a代表来自基团-ch2ch2、-ch2ch
2-ch2、-ch
2-ch(ch3)的原子团，并且w代表1至120，优选10至80，特别是20至40的值。这些非离子型表面活性剂的组包括例如c
4-22
脂肪醇-(eo)
10-80-2-羟基烷基醚，还特别是c
8-12
脂肪醇-(eo)
22-2-羟基癸基醚和c
4-22
脂肪醇-(eo)
40-80-2-羟基烷基醚。
[0077]
优选的清洁剂的特征在于该清洁剂含有至少一种非离子型表面活性剂，优选来自羟基混合醚组的非离子型表面活性剂，相对于清洁剂的总重量，所述非离子型表面活性剂按重量计的比例优选为0.2至10wt.％，更优选为0.4至7.0wt.％，且特别是0.6至6.0wt.％。
[0078]
除上述非离子型表面活性剂之外，用于自动餐具洗涤方法中的根据本发明的优选清洁剂还含有进一步的表面活性剂，特别是两性表面活性剂。然而，相对于这些清洁剂的总重量，阴离子型表面活性剂的比例优选是有限的。因此，优选的自动餐具清洗剂的特征在于它们含有基于其总重量小于5.0wt.％，优选小于3.0wt.％，特别优选小于2.0wt.％的阴离子型表面活性剂。特别地为了避免过度发泡，并不使用更大数量的阴离子型表面活性剂。
[0079]
根据本发明的清洁剂的另一种优选组分是络合剂。特别优选的络合剂是膦酸盐，条件是它们的使用是法规允许的。除1-羟基乙烷-1,1-二膦酸之外，络合膦酸盐还包括许多不同的化合物，例如二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(dtpmp)。在该应用中特别优选羟基烷烃或氨基烷烃膦酸盐。在羟基烷烃膦酸盐中，1-羟基乙烷-1,1-二膦酸盐(hedp)作为共助剂具有特别的重要性。它优选作为钠盐使用，二钠盐以中性方式反应，而四钠盐以碱性方式(ph 9)反应。可能的氨基烷烃膦酸盐优选包括乙二胺四亚甲基膦酸盐(edtmp)、二亚乙基三胺五亚甲基膦酸盐(dtpmp)及其更高级的同系物。它们优选以中性反应性钠盐的形式使用，例如作为edtmp的六钠盐或作为dtpmp的七钠盐和八钠盐。在膦酸盐的类别中，hedp优选用作助洗剂。氨基烷烃膦酸盐另外具有显著的重金属结合能力。相应地，特别是如果试剂还含有漂
白剂，则可能优选使用氨基烷烃膦酸盐，特别是dtpmp，或使用所提到的膦酸盐的混合物。
[0080]
在本技术的上下文中的优选试剂含有来自以下组的一种或多种膦酸盐：氨基三亚甲基膦酸(atmp)和/或其盐；乙二胺四(亚甲基膦酸)(edtmp)和/或其盐；二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(dtpmp)和/或其盐；1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(hedp)和/或其盐；2-膦酸丁烷-1,2,4-三羧酸(pbtc)和/或其盐；六亚甲基二胺四(亚甲基膦酸)(hdtmp)和/或其盐；次氮基三(亚甲基膦酸)(ntmp)和/或其盐。
[0081]
特别优选的清洁剂是含有1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(hedp)或二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(dtpmp)作为膦酸盐的那些清洁剂。当然，根据本发明的介质可以含有两种或更多种不同的膦酸盐。根据本发明优选的清洁剂的特征在于，所述清洁剂含有来自膦酸盐组，优选1-羟基乙烷-1,1-二膦酸盐的至少一种络合剂，其中相对于清洁剂的总重量，膦酸盐按重量的比例优选为0.1至8.0wt.％，更优选为0.2至5.0wt.％，且特别是0.5至3.0wt.％。
[0082]
根据本发明的试剂还优选含有助洗剂。助洗剂特别包括硅酸盐和碳酸盐。
[0083]
聚羧酸盐/聚羧酸、聚合聚羧酸盐、天冬氨酸、聚缩醛、糊精、其它有机共助剂和膦酸盐作为有机共助剂特别值得一提。这些类别的物质在下文进行描述。需要时，这种有机共助剂物质可以以至多40wt.％，特别是至多25wt.％，且优选1wt.％至8wt.％的量包含。
[0084]
可以使用的有机助洗剂是可以以游离酸和/或其钠盐的形式使用的聚羧酸，例如，其中聚羧酸应理解为意指携带多于一个酸官能团的那些羧酸。例如，这些是柠檬酸，己二酸，琥珀酸，戊二酸，苹果酸，酒石酸，马来酸，富马酸，糖二酸，羧甲基菊粉，单体和聚合氨基聚羧酸特别是甘氨酸二乙酸、甲基甘氨酸二乙酸、次氮基三乙酸(nta)，亚氨基二琥珀酸酯例如乙二胺-n,n'-二琥珀酸和羟基亚氨基二琥珀酸酯，乙二胺四乙酸和聚天冬氨酸，聚膦酸特别是氨基三(亚甲基膦酸)、乙二胺四(亚甲基膦酸)、赖氨酸四(亚甲基膦酸)和1-羟基乙烷-1,1-二膦酸，聚合羟基化合物如糊精，以及聚合(聚)羧酸，特别是通过使多糖、聚合丙烯酸、甲基丙烯酸、马来酸及其混合聚合物氧化而获得的聚羧酸盐，其还可能含有在聚合物中聚合的不含羧酸功能性的小部分的可聚合物质。需要时，这种有机助洗剂物质可以以至多50wt.％，特别是至多25wt.％，且优选10wt.％至20wt.％的量包含。
[0085]
除其助洗剂效果之外，游离酸通常还具有作为酸化组分的性质，并且因此也用于设置清洁剂的较低和较温和的ph。此处特别值得一提的是柠檬酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、葡糖酸及其任何混合物。柠檬酸或柠檬酸的盐特别优选用作助洗剂。进一步特别优选的助洗剂物质选自甲基甘氨酸二乙酸(mgda)、谷氨酸二乙酸酯(glda)、天冬氨酸二乙酸酯(asda)、羟乙基亚氨基二乙酸酯(heida)、亚氨基二琥珀酸酯(ids)和乙二胺二琥珀酸酯(edds)、羧甲基菊粉和聚天冬氨酸盐。
[0086]
在优选的实施方案中，柠檬酸和/或柠檬酸盐用作水溶性有机助洗剂。特别优选使用5至25wt.％，优选7.5至12.5wt.％的柠檬酸和/或5至25wt.％，优选7.5至12.5wt.％的柠檬酸盐，优选碱金属柠檬酸盐，更优选柠檬酸钠。柠檬酸/柠檬酸盐可以各自以其水合物的形式使用，例如柠檬酸可以以一水合物的形式使用，而柠檬酸盐可以以柠檬酸三钠二水合物的形式使用。
[0087]
聚合聚羧酸盐也适合作为助洗剂。这些是例如聚丙烯酸或聚甲基丙烯酸的碱金属盐，例如具有500至70,000g/摩尔的相对分子质量的那些碱金属盐。在本文件的上下文中，对于聚合聚羧酸盐给出的摩尔质量是特定酸形式的重均摩尔质量mw，其原则上已使用凝胶
渗透色谱法(gpc)进行确定，其中已使用uv检测器。测量针对外部聚丙烯酸标准进行，由于其与测试聚合物的结构关系，所述外部聚丙烯酸标准产生了实际的分子量值。这些规格显著不同于对于其使用聚苯乙烯磺酸作为标准的分子量规格。针对聚苯乙烯磺酸测量的摩尔质量一般显著高于本文件中指定的摩尔质量。
[0088]
合适的聚合物特别是聚丙烯酸酯，其优选具有2,000至20,000g/摩尔的分子质量。由于其优异的溶解性，来自该组的摩尔质量为2,000至10,000g/摩尔，且特别优选3,000至5,000g/摩尔的短链聚丙烯酸酯依次又可以是优选的。
[0089]
另外，共聚聚羧酸盐是合适的，特别是丙烯酸与甲基丙烯酸的那些以及丙烯酸或甲基丙烯酸与马来酸的那些。已发现含有50wt.％至90wt.％丙烯酸和50wt.％至10wt.％马来酸的丙烯酸与马来酸的共聚物是特别合适的。基于游离酸，其相对分子质量一般为2,000至70,000g/摩尔，优选为20,000至50,000g/摩尔，且特别是30,000至40,000g/摩尔。
[0090]
除先前描述的助洗剂之外，具有清洁作用的聚合物也可以包含在清洁剂中。相对于根据本发明的清洁剂的总重量，聚合物按重量计的比例优选为0.1至20wt.％，更优选为1.0至15wt.％，且特别是2.0至12wt.％。
[0091]
特别是来自共聚聚磺酸盐组的含有磺酸基的聚合物，优选用作具有清洁作用的聚合物。除含有磺酸基的单体之外，这些共聚聚磺酸盐还含有来自不饱和羧酸组的至少一种单体。
[0092]
作为不饱和羧酸，特别优选使用式r1(r2)c＝c(r3)cooh的不饱和羧酸，其中r1至r3彼此独立地代表-h、-ch3、具有2至12个碳原子的直链或支链的饱和烷基原子团、具有2至12个碳原子的直链或支链的单不饱和或多不饱和的烯基原子团、-nh2、-oh或-cooh-取代的如上定义的烷基或烯基原子团，或者代表-cooh或-coor4，其中r4是具有1至12个碳原子的饱和或不饱和、直链或支链的烃原子团。特别优选的不饱和羧酸是丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、α-氯丙烯酸、α-氰基丙烯酸、巴豆酸、α-苯基丙烯酸、马来酸、马来酸酐、富马酸、衣康酸、柠康酸、亚甲基丙二酸、山梨酸、肉桂酸或其混合物。当然也可以使用不饱和二羧酸。
[0093]
对于含磺酸基的单体，式r5(r6)c＝c(r7)-x-so3h的那些单体是优选的，其中r5至r7彼此独立地代表-h、-ch3、具有2至12个碳原子的直链或支链的饱和烷基原子团、具有2至12个碳原子的直链或支链的单不饱和或多不饱和的烯基原子团、-nh2、-oh或-cooh-取代的烷基或烯基原子团，或者代表-cooh或-coor4，其中r4是具有1至12个碳原子的饱和或不饱和、直链或支链的烃原子团，并且x代表任选存在的间隔基团，其选自其中n＝0至4的-(ch2)
n-、其中k＝1至6的-coo-(ch2)
k-、-c(o)-nh-c(ch3)
2-、-c(o)-nh-c(ch3)
2-ch
2-和-c(o)-nh-ch(ch2ch3)-。
[0094]
在这些单体中，式h2c＝ch-x-so3h、h2c＝c(ch3)-x-so3h和ho3s-x-(r6)c＝c(r7)-x-so3h的那些单体是优选的，其中r6和r7彼此独立地选自-h、-ch3、-ch2ch3、-ch2ch2ch3和-ch(ch3)2，并且x代表任选存在的间隔基团，其选自其中n＝0至4的-(ch2)
n-、其中k＝1至6的-coo-(ch2)
k-、-c(o)-nh-c(ch3)
2-、-c(o)-nh-c(ch3)
2-ch
2-和-c(o)-nh-ch(ch2ch3)-。
[0095]
特别优选的含磺酸基的单体是1-丙烯酰胺-1-丙磺酸、2-丙烯酰胺-2-丙磺酸、2-丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸、2-甲基丙烯酰胺-2-甲基-1-丙磺酸、3-甲基丙烯酰胺-2-羟基-丙磺酸、烯丙基磺酸、甲代烯丙基磺酸、烯丙氧基苯磺酸、甲代烯丙氧基苯磺酸、2-羟基-3-(2-丙烯氧基)丙磺酸、2-甲基-2-丙烯-1-磺酸、苯乙烯磺酸、乙烯基磺酸、丙烯酸3-磺丙
酯、甲基丙烯酸3-磺丙酯、磺基甲基丙烯酰胺、磺甲基甲基丙烯酰胺、以及上述酸或其水溶性盐的混合物。
[0096]
在聚合物中，磺酸基可以全部或部分以中和形式存在。部分或完全中和的含磺酸基的共聚物的使用根据本发明是优选的。根据本发明优选使用的磺基共聚物的摩尔质量可以变化，以便使聚合物的性质适应所需的预期用途。优选的自动餐具清洗剂的特征在于，所述共聚物具有2,000至200,000g/摩尔，优选4,000至25,000g/摩尔，且特别是5,000至15,000g/摩尔的摩尔质量。
[0097]
在另一个优选实施方案中，共聚物不仅包含含羧基的单体和含磺酸基的单体，而且包含至少一种非离子、优选疏水性单体。特别地，根据本发明的自动餐具清洗剂的漂洗性能能够通过使用这些疏水改性的聚合物得到改善。
[0098]
含有共聚物的餐具清洗剂根据本发明是优选的，所述共聚物包含i)含有羧酸基团的单体，ii)含有磺酸基的单体，iii)非离子单体。通过使用这些三元共聚物，与含有磺基聚合物而不添加非离子单体的可比较的餐具清洗剂相比，已能够改善根据本发明的自动餐具清洗剂的漂洗性能。
[0099]
作为非离子单体，优选使用通式r1(r2)c＝c(r3)-x-r4的单体，其中r1至r3彼此独立地代表-h、-ch3或-c2h5，x代表选自-ch
2-、-c(o)o-和-c(o)-nh-的任选存在的间隔基团，并且r4代表具有2至22个碳原子的直链或支链的饱和或不饱和的烷基原子团，优选具有6至22个碳原子的芳族原子团。特别优选的非离子单体是丁烯、异丁烯、戊烯、3-甲基丁烯、2-甲基丁烯、环戊烯、己烯、己烯-1,2-甲基戊烯-1、3-甲基戊烯-1、环己烯、甲基环戊烯、环庚烯、甲基环己烯、2,4,4-三甲基戊烯-1、2,4,4-三甲基戊烯-2,2,3-二甲基己烯-1、2,4-二甲基己烯-1、2,5-二甲基己烯-1、3,5-二甲基己烯-1、4,4-二甲基己烷-1、乙基环己烯、1-辛烯、具有10个或更多个碳原子的α-烯烃(例如1-癸烯、1-十二烯、1-十六烯、1-十八烯和c
22
α-烯烃)、2-苯乙烯、α-甲基苯乙烯、3-甲基苯乙烯、4-丙基苯乙烯、4-环己基苯乙烯、4-十二烷基苯乙烯、2-乙基-4-苄基苯乙烯、1-乙烯基萘、2-乙烯基萘、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸戊酯、丙烯酸己酯、甲基丙烯酸甲酯、n-(甲基)丙烯酰胺、丙烯酸-2-乙基己酯、甲基丙烯酸-2-乙基己酯、n-(2-乙基己基)丙烯酰胺、丙烯酸辛酯、甲基丙烯酸辛酯、n-(辛基)丙烯酰胺、丙烯酸月桂酯、甲基丙烯酸月桂酯、n-(月桂基)丙烯酰胺、丙烯酸十八酯、甲基丙烯酸十八酯、n-(硬脂酰)丙烯酰胺、山嵛酰丙烯酸二十二烷酯、甲基丙烯酸二十二烷酯和n-(二十二烷基)丙烯酰胺或其混合物。
[0100]
相对于根据本发明的清洁剂的总重量，含磺酸基的共聚物按重量计的比例优选为0.1至15wt.％，更优选为1.0至12wt.％，且特别是2.0至10wt.％。
[0101]
根据本发明的清洁剂可以含有有机溶剂作为进一步的组分。添加有机溶剂对这些试剂的酶稳定性和清洁性能具有有利作用。优选的有机溶剂衍生自一元醇或多元醇、链烷醇胺或乙二醇醚。溶剂优选选自乙醇、正丙醇或异丙醇、丁醇、乙二醇、丙二醇或丁二醇、甘油、二甘醇、丙基二甘醇或丁基二甘醇、己二醇、乙二醇甲醚、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚、乙二醇单正丁醚、二甘醇甲醚、二甘醇乙醚、丙二醇甲醚、丙二醇乙醚或丙二醇丙醚、二丙二醇甲醚或二丙二醇乙醚、甲氧基三甘醇、乙氧基三甘醇或丁氧基三甘醇、1-丁氧基乙氧基-2-丙醇、3-甲基-3-甲氧基丁醇、丙二醇叔丁基醚和这些溶剂的混合物。相对于根据本发明的清洁剂的总重量，这些有机溶剂按重量计的比例优选为0.1至10wt.％，更优选为0.2至
8.0wt.％，且特别是0.5至5.0wt.％。在稳定清洁剂方面特别有效的特别优选的有机溶剂是甘油以及1,2-丙二醇。含有优选地来自甘油和1,2-丙二醇组的至少一种多元醇的液体清洁剂根据本发明是优选的，其中相对于清洁剂的总重量，多元醇按重量计的比例优选为0.1至10wt.％，更优选为0.2至8.0wt.％，且特别是0.5至5.0wt.％。其它优选的有机溶剂是有机胺和链烷醇胺。根据本发明的清洁剂优选含有以0.1至10wt.％，更优选0.2至8.0wt.％，且特别是0.5至5.0wt.％的量的这些胺，在每种情况下基于其总重量。特别优选的链烷醇胺是乙醇胺。
[0102]
根据本发明的清洁剂的另一种优选组分是糖醇(alditol)。糖醇的组包括式hoch2[ch(oh)]nch2oh的非环状多元醇。糖醇包括例如甘露糖醇、异麦芽糖醇、乳糖醇、山梨糖醇和木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇和阿拉伯糖醇。已发现山梨糖醇关于酶稳定性是特别有利的。相对于清洁剂的总重量，糖醇按重量计的比例优选为1.0至10wt.％，更优选为2.0至8.0wt.％，且特别是3.0至6.0wt.％。
[0103]
根据本发明的试剂有利地含有以2μg至20mg，优选5μg至17.5mg，更优选20μg至15mg，且最特别优选50μg至10mg/g试剂的量的蛋白酶。进一步地，包含在试剂中的蛋白酶和/或试剂的其它成分可以用这样的物质进行包被，所述物质在室温或水的不存在下对酶是不可渗透的，并且在试剂的使用条件下变得对酶可渗透。因此，本发明的此类实施方案的特征在于，所述蛋白酶由在室温或水的不存在下对酶是不可渗透的物质进行包被。此外，清洁剂本身可以包装在容器优选透气的容器中，所述清洁剂在使用前不久或在洗涤过程期间从所述容器中释放出来。
[0104]
本发明的这些实施方案包括根据本发明的试剂的所有固体、粉末、颗粒、片剂形式、液体、凝胶或糊状施用形式，其也可以任选地由多个相组成，并且可以以压缩形式或未压缩形式存在。试剂可以作为可流动的粉末存在，特别地具有300g/l至1200g/l，特别是500g/l至900g/l或600g/l至850g/l的堆密度。试剂的固体剂型还包括含有固体试剂的挤出物、颗粒、片剂或小袋，其既可以存在于大容器中，也可以按份存在。可替代地，试剂也可以采取液体、凝胶或糊状形式，例如非水性液体清洗剂或非水性糊状物的形式、或者水性液体清洗剂或含水糊状物的形式。试剂也可以作为单组分系统存在。此类试剂由一个相组成。可替代地，试剂也可以由多个相组成(多组分系统)。相应地，此类试剂被分成几种组分，例如两个液相、两个固相或一个液相和一个固相。基于水和/或有机溶剂的液体产品形式可以以增稠的形式，即以凝胶的形式存在。
[0105]
如果物质(例如组合物)或试剂在25℃和1,013毫巴下处于固体物理状态，则它是根据本发明的定义的固体。
[0106]
如果物质(例如组合物)或试剂在25℃和1,013毫巴下处于流体物理状态，则它是根据本发明的定义的液体。液体还包括凝胶形式。
[0107]
如果根据本发明的清洁剂以液体形式存在，则它们优选含有基于其总重量的40wt.％，优选50至90wt.％，且特别是60至80wt.％的水。
[0108]
本文所述的清洁剂，特别是餐具清洗剂，甚至更优选自动餐具清洗剂，优选预包装成计量单位。这些计量单位优选包含对于清洁循环所需的活性清洁物质的量。优选的计量单位具有12至30g，优选14至26g，且特别是15至22g的重量。特别优选这样选择上述计量单位的体积及其空间形状，使得预包装的单位可以经由洗碗机的投配室进行投配。因此，计量
单位的体积优选为10至35ml，优选为12至30ml。
[0109]
自动餐具清洗剂，特别是预制的计量单位，特别优选具有水溶性包裹物。水溶性包裹物优选由水溶性薄膜材料制成，所述水溶性薄膜材料选自聚合物或聚合物混合物。包裹物可以由一层或者两层或更多层水溶性薄膜材料制成。第一层和另外层(如果存在的话)的水溶性薄膜材料可以是相同或不同的。特别优选的是这样的薄膜，其例如可以在它们已充满试剂后进行胶粘和/或密封，以形成包装例如管或小袋。
[0110]
水溶性包装可以具有一个或多个腔室。试剂可以包含在水溶性包裹物的一个或多个腔室(如果存在的话)中。试剂的量优选对应于餐具洗涤周期所需的全部或一半剂量。
[0111]
水溶性包裹物优选含有聚乙烯醇或聚乙烯醇共聚物。含有聚乙烯醇或聚乙烯醇共聚物的水溶性包裹物显示出良好的稳定性，伴随足够高水平的水溶性，特别是冷水溶解性。用于生产水溶性包裹物的合适的水溶性薄膜优选基于聚乙烯醇或聚乙烯醇共聚物，其分子量在5,000至1,000,000g/摩尔，优选20,000至500,000g/摩尔，特别优选30,000至100,000g/摩尔，且特别是40,000至80,000g/摩尔的范围内。用于根据本发明的水溶性包装的水溶性包裹物中的合适的水溶性薄膜是由monosol llc例如以名称m8630、c8400或m8900销售的薄膜。其它合适的薄膜包括来自aicello chemical europe gmbh的以名称pt、ga、kc或kl的薄膜，或者来自kuraray的vf-hp薄膜。
[0112]
此类水溶性包裹物也已经在专利申请wo2004031338a和wo2003099985a中进行描述，所述专利申请的公开内容在此整体引入作为参考。
[0113]
酶一般不以纯蛋白质的形式提供，而是以稳定、可贮存和可转运的制剂形式提供。这些预包装的制剂包括例如通过造粒、挤出或冻干获得的固体制剂，或者，特别是在液体或凝胶剂的情况下，酶的溶液，其有利地是最大限度地浓缩的，具有低含水量和/或补充有稳定剂或其它助剂。此外，能够将两种或更多种酶配制在一起，使得单个颗粒显示出多种酶活性。
[0114]
根据本发明的清洁剂可以专一地含有如本文定义的吉氏芽孢杆菌蛋白酶。可替代地，它们也可以含有其它酶，其浓度对于试剂的有效性是有利的。因此，本发明的一个进一步实施方案由进一步包含一种或多种进一步的酶的试剂代表。可以优选使用的进一步的酶是可以在根据本发明的试剂中显示出催化活性的所有酶，特别是脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶、甘露聚糖酶、鞣酸酶、木聚糖酶、黄原胶酶、木葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、果胶酶、卡拉胶酶、过水解酶、氧化酶、氧化还原酶或不同于根据本发明的蛋白酶的另一种蛋白酶、以及其混合物。基于活性蛋白质，酶在每种情况下有利地以1x 10-8
至5wt.％的量包含在试剂中。越来越优选地，基于活性蛋白质，每种进一步的酶以1x 10-7
至3wt.％、0.00001至1wt.％、0.00005至0.5wt.％、0.0001至0.1wt.％，并且特别优选0.0001至0.05wt.％的量包含在根据本发明的试剂中。特别优选地，酶显示出对特定污渍或斑点的协同清洁性能，即在试剂组合物中包含的酶在其清洁性能方面相互支持。非常特别优选地，在根据本发明包含的蛋白酶和根据本发明的试剂的进一步的酶之间，特别包括在所述蛋白酶和淀粉酶和/或脂肪酶之间存在此类协同作用。协同效应不仅可以在不同酶之间出现，而且还可以在一种或多种酶与根据本发明的试剂的其它成分之间出现。
[0115]
蛋白酶的实例是来自解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)的枯草杆菌蛋白酶bpn'和来自地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)的carlsberg、蛋白酶pb92、
枯草杆菌蛋白酶147和309、来自迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)的蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶dy，以及热敏酶、蛋白酶k以及蛋白酶tw3和tw7，其属于枯草杆菌酶，但不再属于狭义的枯草杆菌蛋白酶。枯草杆菌蛋白酶carlsberg可以商品名从novozymes公司以进一步开发的形式获得。枯草杆菌蛋白酶147和309分别以商品名和由novozymes公司销售。以名称上市的蛋白酶变体衍生自来自迟缓芽孢杆菌dsm 5483的蛋白酶。进一步可用的蛋白酶是例如可从novozymes公司以商品名和获得的酶，其以商品名和由danisco/genencor公司销售，其以商品名由advanced biochemicals ltd.公司销售，其以商品名由wuxi snyder bioproducts ltd.公司销售，其以商品名和由amano pharmaceuticals ltd.公司销售，并且以名称蛋白酶k-16由kao corp销售。特别优选使用国际专利申请wo2008086916和wo2007131656中公开的来自吉氏芽孢杆菌和短小芽孢杆菌(bacillus pumilus)的蛋白酶。进一步有利地可用的蛋白酶公开于专利申请wo9102792、wo2008007319、wo9318140、wo0144452、gb1243784、wo9634946、wo2002029024和wo2003057246中。可以使用的进一步的蛋白酶是天然存在于微生物嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)特别是嗜麦芽窄食单胞菌k279a、中间芽孢杆菌(bacillus intermedius)和球形芽孢杆菌(bacillus sphaericus)中的那些蛋白酶。
[0116]
淀粉酶的实例是来自地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌或嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillus stearothermophilus)的α-淀粉酶，以及特别地其已对于在清洁剂中的使用进行改善的开发。来自地衣芽孢杆菌的酶可从novozymes以名称以及从danisco/genencor以名称st获得。这种α-淀粉酶的开发产品可从novozymes以商品名和ultra，从danisco/genencor以名称oxam，以及从daiwa seiko inc.，tokyo，日本作为获得。来自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶通过novozymes以名称上市，并且来自嗜热脂肪芽孢杆菌的α-淀粉酶的衍生变体也通过novozymes以名称和上市。此外，为此目的，应该强调的是来自芽孢杆菌属物种a 7-7(dsm 12368)的α-淀粉酶和来自bacillus agaradherens(dsm 9948)的环糊精葡萄糖基转移酶(cgtase)。此外，可以使用在国际专利申请wo2003002711、wo2003054177和wo2007079938中公开的淀粉分解酶，所述国际专利申请的公开内容因此明确地提及或者其公开内容因此明确地包括在本专利申请中。还可以使用所有提到的分子的融合产物。此外，可从novozymes以商品名获得的来自黑曲霉(aspergillus niger)和米曲霉(a.oryzae)的α-淀粉酶的开发是合适的。可以有利地使用的其它商业产品是例如同样来自novozymes的以及或stainzyme或stainzyme以及amplify
tm
或amplify prime
tm
。根据本发明还可以使用可以通过点突变获得的这些酶的变体。
[0117]
特别是由于其甘油三酯切割活性而使用，而且也为了从合适的前体原位生成过酸的脂肪酶或角质酶的实例，包括例如最初得自柔毛腐质霉(humicola lanuginosa)(疏棉状嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosus))的脂肪酶或由其进一步开发，特别是在所提到的
位置中具有从脂肪酶起始的下述氨基酸交换中的一种或多种的那些脂肪酶：d96l、t213r和/或n233r，特别优选t213r和n233r。脂肪酶例如由novozymes公司以商品名ultra、和销售。可以有利地使用的另一种脂肪酶可从novozymes以商品名获得。此外，例如，也可以使用最初从茄病镰刀菌(fusarium solani pisi)和特异腐质霉(humicola insolens)中分离的角质酶。还可以使用的脂肪酶可从amano以名称lipase和lipaselipasebacillus sp.lipaselipase和lipase获得。例如，可以使用来自danisco/genencor公司的脂肪酶或角质酶，其起始酶最初从门多萨假单胞菌(pseudomonas mendocina)和茄病镰刀菌(fusarium solanii)中分离。作为其它重要的商业产品，应该提到最初由gist-brocades(现为danisco/genencor)上市的制剂m1和由meito sangyo kk以名称lipaselipase和lipase上市的酶，以及来自genencor的产品
[0118]
为了增加漂白效果，根据本发明可以使用氧化还原酶例如氧化酶、加氧酶、过氧化氢酶、过氧化物酶(例如卤-、氯-、溴-、木质素、葡萄糖或锰过氧化物酶)、双加氧酶或漆酶(酚氧化酶、多酚氧化酶)。有利地，另外添加与酶相互作用的有机化合物，特别优选芳族化合物，以便增强有关氧化还原酶(增强剂)的活性，或者在极大不同的氧化还原电位的情况下，确保氧化酶和污渍(介质)之间的电子流动。
[0119]
本发明的一个进一步目的是用于清洁硬表面，特别是餐具的方法，其特征在于在至少一个方法步骤中，使用根据本发明的试剂。
[0120]
优选的清洁方法是自动餐具洗涤方法。在此类方法中，例如借助于门中的分配室或借助于洗碗机的内部的附加分配容器，可以将根据本发明的清洁剂分配到清洁液内。可替代地，清洁剂也可以直接应用于脏餐具或洗碗机的内壁之一，例如门的内侧。根据本发明的方法在商购可得的洗碗机的内部进行。在洗碗机的情况下，清洁程序一般可以在进行餐具洗涤方法之前由用户选择且确定。在根据本发明的方法中使用的洗碗机清洁程序包括至少一个预洗循环和一个清洁循环。包括进一步的清洁或漂清循环例如漂洗循环的清洁程序根据本发明是优选的。根据本发明的方法特别优选是包括预洗循环、清洁循环和漂洗循环的清洁程序的部分。根据本发明的方法优选与清洁程序结合使用，在所述清洁程序中，洗涤液在清洁循环期间被加热。在根据本发明的方法的一个优选实施方案中，根据本发明的清洁剂在其期间分配到洗碗机的内部的清洁循环的特征在于，在所述循环期间清洁液的温度上升到高于30℃，优选高于40℃，且特别是高于50℃的值。
[0121]
在各个实施方案中，上述方法的特征在于所述蛋白酶在0至100℃，优选10至70℃，更优选30至50℃，且最优选45℃的温度下使用。
[0122]
对于根据本发明的蛋白酶和含有其的试剂描述的所有方面、目的和实施方案也适用于本发明的主题、相应的方法和用途。因此，在这一点上在适当的点上明确参考本公开内容，其中应注意本公开内容也适用于根据本发明的上述用途。
实施例
[0123]
根据本发明的餐具清洗剂的清洁性能的确定
[0124]
测试了以餐具清洗剂片剂形式的商业自动餐具清洗剂的清洁性能，所述餐具清洗剂片剂含有作为过氧化氢源(漂白剂)的15wt.％过碳酸钠、作为漂白催化剂的0.03wt.％mn-me-tacn(mn-tacn)、以及作为漂白活化剂的2.2wt.％taed，在每种情况下向其中加入蛋白酶颗粒1或2。蛋白酶各自与相同的活性蛋白质一起使用。
[0125]
在miele gsl洗碗机(程序：45℃，水硬度21
°
dh)中，依照ikw方法确定清洁性能。在清洁程序起始之前，将餐具清洗剂片剂放入计量装置中。在每种情况下进行三次测定，在每种情况下对其结果取平均值。根据从1到10的等级，目视评估清洁性能，其中值10是最佳评级(没有可辨别的残留物)。如果改善为至少1.0，则值被视为显著的。结果显示于下表中。
[0126]
表1：
[0127][0128]
表2：
[0129][0130]
表3：
[0131][0132][0133]
蛋白酶颗粒1含有根据wo2017215925中描述的seq id no:5的蛋白酶。
[0134]
蛋白酶颗粒2含有比率为1.5:1的蛋白酶2a(根据来自wo2016000973的seq id no:6的蛋白酶)和蛋白酶2b(来自novozymes)的组合。
[0135]
令人惊讶地，已发现了当使用蛋白酶颗粒1时，除对含蛋白质污渍的显著改善的清洁性能之外，还可以观察到对茶渍的显著改善的清洁性能。