马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法与流程

技术特征：
1.一种crrna，其特征在于，包括锚定序列片段和向导序列片段，所述向导序列片段与马拉色菌的its序列特异性结合，所述向导序列片段的核苷酸序列如seq id no.01至seq id no.10中的至少一种所示。2.根据权利要求1所述的crrna，其特征在于，所述锚定序列片段的核苷酸序列如seq id no.11所示。3.一种试剂盒，其特征在于，包括crispr/cas检测体系，所述crispr/cas检测体系包括如权利要求1或2所述的crrna。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述crispr/cas检测体系还包括cas蛋白和信号报告探针，所述锚定序列片段与所述cas蛋白特异性结合，所述信号报告探针的序列如seq id no.34所示，5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团选自fam、vic、hex、rox、joe、cy3、cy5中的一种；所述荧光淬灭基团选自tamra、bhq-1、bhq-2、bhq-3中的一种。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述crispr/cas检测体系还包括neb buffer、乙酸镁激活剂、磷酸肌酸、肌酸激酶、dntps、atp、dtt、醋酸钾、重组酶uvsx、重组酶uvsy、单链结合蛋白或bsu聚合酶中的至少一种。7.根据权利要求3至6任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包括rpa扩增体系，所述rpa扩增体系包括上游引物片段和下游引物片段，所述上游引物片段的核苷酸序列如seq id no.27所示，所述下游引物片段的核苷酸序列如seq id no.28所示。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述rpa扩增体系还包括rpa酶预混液或激活剂中的至少一种；所述rpa扩增体系的反应温度为37~42℃。9.权利要求1至2任一项所述crrna或权利要求3至8任一项所述试剂盒在非疾病诊断目的鉴别马拉色菌种属中的应用。

技术总结
本发明公开了一种马拉色菌的检测组合物、试剂盒及其检测方法。本发明所提供的马拉色菌检测引物组及试剂盒，结合了RPA高效扩增与CRISPR/Cas检测技术的特异靶向性优势，具有扩增效率高、特异性强、操作简单等特点，与念珠菌、霉菌、孢子丝菌等其他常见致病性真菌及人类基因组DNA均无交叉反应。本发明提供的试剂盒所有检测步骤不依赖温度变化、无需昂贵PCR仪或复杂的变温条件，因此反应速度更快、成本更低。本发明提供的试剂盒可直接用于检测临床病原性真菌样本，无需培养，满足临床早期快速精准诊断需求，同时有助于快速鉴定常规形态学或组织病理学难以鉴别的菌株。或组织病理学难以鉴别的菌株。或组织病理学难以鉴别的菌株。


技术研发人员：杜蔚安 黄怀球 郑阳阳 吳榕 陆春 黄茜 黄志杰 邓诗莹
受保护的技术使用者：中山大学附属第三医院
技术研发日：2022.01.17
技术公布日：2022/2/23