视黄醇或其衍生物的纳米脂质运输载体及其制备方法与流程

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种视黄醇或其衍生物的纳米脂质运输载体。


背景技术：

2.视黄醇及其衍生物因其安全有效的特点，在化妆品、尤其是抗衰老护肤品中应用十分广泛，而且得到绝大多数消费者的认可。但是视黄醇及其衍生物在实际应用过程中，因为对光照、温度、水、氧气等等各种因素都非常敏感，导致视黄醇及其衍生物在储存、生产、货架期以及使用过程中大部分被降解，从而无法真正发挥其功效。
3.当前业内开发了多种视黄醇及其衍生物的稳定技术，真正的结果往往不是很理想。对比文件us20030232091a1提供了一种以疏水性材料为核心，把视黄醇包裹于其中的方法，50℃的条件下其视黄醇含量从100％降至4周后的50％，而且是在抗氧剂bht的存在下实现的，而大量文献和行业经验证明bht能够稳定视黄醇。即便如此，这种技术在实际应用中仍然不能满足市场的需求。


技术实现要素：

4.针对现有技术存在的上述问题，本发明提供一种视黄醇或其衍生物的纳米脂质运输载体及其制备方法。
5.具体来说，本发明涉及如下方面：
6.1.一种视黄醇或其衍生物的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述纳米脂质运输载体包括视黄醇或其衍生物、液态脂质、固态脂质和乳化剂，其中所述纳米脂质运输载体中，视黄醇或其衍生物的质量占比为0.05％-0.5％，所述液态脂质的质量占比为0.01％-5％，所述固态脂质的质量占比为0.016％-10％，所述乳化剂的质量占比为0.02％-20％。
7.2.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，视黄醇或其衍生物的质量占比为0.05％-0.3％，所述液态脂质的质量占比为0.5-3％，优选为0.7-2％，所述固态脂质的质量占比为1-6％，优选为1.5-4％，所述乳化剂的质量占比为0.1-10％，优选为0.1-5％。
8.3.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述视黄醇或其衍生物选自视黄醇、视黄醛、视黄酸、视黄醇醋酸酯、视黄醇棕榈酸酯、视黄醇丙酸酯、羟基频哪醇视黄酸酯中的一种或两种以上。
9.4.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述液态脂质选自甘油三酯类、碳酸酯类、长链直链烷烃类、异山梨醇酐醚类中的一种或两种以上，优选为甘油三酯类、碳酸酯类中的一种或两种；
10.优选的，所述甘油三酯类选自辛癸酸三甘油酯，所述碳酸酯类选自碳酸二辛酯，所述长链直链烷烃类选自角鲨烷，所述异山梨醇酐醚类选自异山梨醇酐二甲醚。
11.5.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述固态脂质选自脂肪醇酯、植物蜡中的一种或两种以上，优选为脂肪醇酯；
12.优选的，所述脂肪醇酯选自霍霍巴酯类、鲸蜡醇棕榈酸酯中的一种或两种，所述植物蜡选自大花可可籽脂、巴西棕榈蜡、小烛树蜡中的一种或两种以上。
13.6.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述乳化剂选自ppg聚醚类、聚甘油脂肪酸酯类中的一种或两种，优选为ppg聚醚类；
14.优选的，所述ppg聚醚类选自ppg-6-癸基十四醇聚醚-20，所述聚甘油脂肪酸酯类选自peg-4聚甘油-2硬脂酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯中的一种或两种以上。
15.7.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述液态脂质和固态脂质的质量比为0.1-0.6:1，优选为0.2-0.6:1。
16.8.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述乳化剂与所述液态脂质和所述固态脂质之和的质量比为0.4-3.5:1，优选为0.9-1.6:1。
17.9.根据项1所述的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述纳米脂质运输载体还包括增稠剂、防腐剂、香精、着色剂中的一种或两种以上。
18.10.项1-9中任一项所述的纳米脂质运输载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
19.将所述固态脂质、所述液态脂质和所述乳化剂在50℃-95℃下加热熔化；
20.加入所述视黄醇或其衍生物；
21.加入相同温度的水，转相乳化完全后冷却到室温，得到纳米脂质运输载体。
22.本发明通过调整纳米脂质载体的组成，在不添加额外稳定剂的条件下，能显著提高视黄醇及其衍生物的稳定性，同时，通过油脂、乳化剂的选择和配比，可以在纳米脂质载体制备过程中避免磷脂和无机盐的使用。本发明制备的视黄醇及其衍生物纳米脂质载体在45℃不避光条件下存储3个月，其含量不低于初始含量的55％。
具体实施方式
23.下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
24.除非另外定义，本说明书中有关技术的和科学的术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此间所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括其中定义为准，另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具限制性。以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但不用来限制本发明的范围。
25.维生素a是一种脂溶性维生素，有机化合物，化学式是c20h30o，对热、酸、碱稳定，易被氧化，紫外线可促进其氧化破坏。维生素a包括a1及a2，a1即视黄醇。视黄醇及其衍生物已在化妆品、尤其是抗衰老护肤品中广泛应用。针对视黄醇及其衍生物在实际应用过程中的不稳定性问题，本发明提供一种视黄醇或其衍生物的纳米脂质运输载体，其特征在于，所述纳米脂质运输载体包括视黄醇或其衍生物、液态脂质、固态脂质和乳化剂。其中所述纳米脂质运输载体中，视黄醇或其衍生物的质量占比为0.05％-0.5％，优选为0.05％-0.3％，例如可以为0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％。所述液态脂质的质量占比为0.01％-5％，优选为0.5-3％，进一步优选为0.7-2％，例如可以为0.01％、0.1％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％。所述固态脂质的质量占比为0.016％-10％，优选为
1-6％，进一步优选为1.5-4％，例如可以为0.016％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％。所述乳化剂的质量占比为0.02％-20％，优选为0.1-10％，进一步优选为0.1-5％，例如可以为0.02％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％。
26.其中，所述视黄醇或其衍生物选自视黄醇、视黄醛、视黄酸、视黄醇醋酸酯、视黄醇棕榈酸酯、视黄醇丙酸酯、羟基频哪醇视黄酸酯的一种或两种以上。
27.所述液态脂质是常温下呈液态的脂质，其选自甘油三酯类、碳酸酯类、长链直链烷烃类、异山梨醇酐醚类中的一种或两种以上，优选为甘油三酯类、碳酸酯类中的一种或两种；优选的，所述甘油三酯类选自辛癸酸三甘油酯，所述碳酸酯类选自碳酸二辛酯，所述长链直链烷烃类选自角鲨烷，所述异山梨醇酐醚类选自异山梨醇酐二甲醚。
28.所述固态脂质是常温下呈固态的脂质，其选自脂肪醇酯、植物蜡中的一种或两种以上，优选为脂肪醇酯；优选的，所述脂肪醇酯选自霍霍巴酯类、鲸蜡醇棕榈酸酯中的一种或两种，所述植物蜡选自大花可可籽脂、巴西棕榈蜡、小烛树蜡中的一种或两种以上。
29.进一步地，所述视黄醇纳米脂质运输载体不需要使用磷脂，磷脂是常用的乳化剂，但价格较昂贵，且乳化油脂的能力较低，选择低成本和高乳化力的其它类型乳化剂，可以大幅降低生产制造成本。
30.选用本发明的乳化剂可以满足上述条件，所述乳化剂选自ppg聚醚类、聚甘油脂肪酸酯类中的一种或两种，优选为ppg聚醚类；优选的，所述ppg聚醚类选自ppg-6-癸基十四醇聚醚-20，所述聚甘油脂肪酸酯类选自peg-4聚甘油-2硬脂酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯中的一种或两种以上。
31.在一个具体的实施方式中，所述液态脂质和固态脂质的质量比为0.1-0.6:1，优选为0.2-0.6:1，例如可以为0.1:1、0.15:1、0.2:1、0.25:1、0.3:1、0.35:1、0.4:1、0.45:1、0.5:1、0.6:1。
32.在一个具体的实施方式中，所述乳化剂与所述液态脂质和所述固态脂质之和的质量比为0.4-3.5:1，优选为0.9-1.6:1，例如可以为0.4:1、0.9:1、1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1。
33.进一步地，所述纳米脂质运输载体还可以根据实际的应用需要包括增稠剂、防腐剂、香精、着色剂中的一种或两种以上。
34.所述增稠剂选自丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10，emt-10)、黄原胶、纤维素及其衍生物、卡波姆、丙烯酸酯类共聚物、丙烯酸酯类衍生物的共聚物中的一种或几种。
35.所述防腐剂选自尼泊金酯类、苯甲酸、山梨酸、辛酰羟肟酸、甲醛释放体、多元醇中的一种或几种。
36.所述香精选自(日用)香精或其他精油。
37.所述着色剂选自酸性红、酸性蓝、紫色色素、黑色色素、棕色色素中的一种或几种。
38.进一步地，所述视黄醇纳米脂质运输载体不需要使用无机盐。在实际应用中，很多乳化体系对盐不耐受，容易造成体系破乳、聚合物崩解、活性物盐析、体系刺激性增加等不良影响。
39.在一个具体的实施方式中，所述纳米脂质运输载体由视黄醇或其衍生物、液态脂
质、固态脂质、乳化剂和水组成。
40.在一个具体的实施方式中，所述纳米脂质运输载体由视黄醇或其衍生物、液态脂质、固态脂质、乳化剂、增稠剂和水组成。
41.在一个具体的实施方式中，所述纳米脂质运输载体由视黄醇或其衍生物、液态脂质、固态脂质、乳化剂、增稠剂、防腐剂、香精、着色剂和水组成。
42.在一个具体的实施方式中，所述纳米脂质运输载体由视黄醇或其衍生物、辛癸酸三甘油酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、ppg-6-癸基十四醇聚醚-20、增稠剂和水组成。
43.在一个具体的实施方式中，所述纳米脂质运输载体由视黄醇或其衍生物、碳酸二辛酯、霍霍巴酯类、巴西棕榈蜡、ppg-6-癸基十四醇聚醚-20、增稠剂和水组成。
44.本发明还提供纳米脂质运输载体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
45.将所述固态脂质、所述液态脂质和所述乳化剂在50℃-95℃下加热熔化；
46.加入所述视黄醇或其衍生物；
47.加入相同温度的水，转相乳化完全后冷却到室温，得到纳米脂质运输载体。
48.其中本发明所述的转相乳化是指随着水不断加入，体系从油多水少的油包水状态，转化为油少水多的水包油状态。所述方法还可以进一步包括在转相乳化完全后冷却到室温后加入增稠剂、防腐剂、香精、着色剂的步骤。
49.实施例1
50.将1.5g鲸蜡醇棕榈酸酯、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水(加入过程中体系完成转相)，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
51.实施例2
52.将1.5g鲸蜡醇棕榈酸酯、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的peg-4聚甘油-2硬脂酸酯混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
53.实施例3
54.将1.5g鲸蜡醇棕榈酸酯、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
55.实施例4
56.将1.5g鲸蜡醇棕榈酸酯、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的聚甘油-10硬脂酸酯混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米
20混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
71.实施例12
72.将2.5g霍霍巴酯类、1g巴西棕榈蜡、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至85-95℃熔化，加入0.3g视黄醇棕榈酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入85-95℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
73.实施例13
74.将2.5g霍霍巴酯类、1g巴西棕榈蜡、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至85-95℃熔化，加入0.3g视黄醇溶解搅拌均匀后，缓慢加入85-95℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
75.实施例14
76.将2.3g鲸蜡醇棕榈酸酯、0.1g辛癸酸三甘油酯、4g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
77.实施例15
78.将2.5g霍霍巴酯类、1g巴西棕榈蜡、0.9g辛癸酸三甘油酯、1g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至85-95℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入85-95℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀。结果显示无法得到纳米脂质运输载体。
79.对比例1
80.将2.4g辛癸酸三甘油酯、4g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
81.对比例2
82.将2.4g鲸蜡醇棕榈酸酯、4g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀，得纳米脂质运输载体。
83.对比例3
84.将1.5g鲸蜡醇棕榈酸酯、0.9g辛癸酸三甘油酯、4g的硬脂醇聚醚-21混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀。结果显示无法得到纳米脂质运输载体。
85.对比例4
86.将15g鲸蜡醇棕榈酸酯、9g辛癸酸三甘油酯、40g的ppg-6-癸基十四醇聚醚-20混合加热至75-85℃熔化，加入0.1g羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、0.2g视黄醇丙酸酯溶解搅拌均匀后，缓慢加入75-85℃的去离子水(加入过程中体系完成转相)，使反应体系的重量为99g，快速冷却降温至室温。加入1g增稠剂丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物(sepinov emt 10)，溶胀搅拌均匀。结果显示无法得到纳米脂质运输载体。
87.上述各实施例和对比例的具体条件如表1所示。
88.表1
89.[0090][0091]
试验例
[0092]
稳定性实验
[0093]
通过hplc法检测实施例1-15、对比例1-4制备的纳米脂质运输载体中初始羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、视黄醇丙酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯的含量(m
初始
)，然后将纳米脂质运输载体45度放置3个月后测定纳米脂质运输载体中羟基频哪醇视黄酸酯(hpr)、视黄醇丙酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯的含量(m
3个月
)，并计算纳米脂质运输载体45度放置3个月后的残留量，结果如表3。
[0094]
残留量％＝m
3个月
/m
初始
*100％
[0095]
其中，hpr(羟基频哪酮视黄酸酯)含量检测方法如下：
[0096]
样品前处理：准确称取样品0.5g(精确至0.0001g)，于25ml具塞比色管中，用乙腈定容至刻度，用涡旋混合器混匀，超声提取20min。取一定量的溶液于10ml离心管中，在10000r/min条件下离心10min，离心后的上清液经0.22μm有机相滤膜过滤，滤液供测试。
[0097]
色谱条件：
[0098]
流动相：a相：乙腈；b相：0.1％甲酸水溶液：称取1g(精确至0.0001g)，用水溶解并定容至1000ml，经0.45μm水相微孔滤膜过滤，并超声脱气20min。
[0099]
仪器：高效液相色谱仪，二极管阵列检测器(安捷伦hplc 1260)
[0100]
色谱柱：zorbax eclipse plus c18(4.6*250mm*5μm)；
[0101]
检测波长：380nm；
[0102]
流动相比例：a:b＝95：5(v/v)等度洗脱；
[0103]
流速：1ml/min；
[0104]
柱温：35℃；
[0105]
进样量：5μl。
[0106]
视黄醇丙酸酯/视黄醇棕榈酸酯/视黄醇含量检测方法如下：
[0107]
样品前处理：准确称取样品1g(精确至0.0001g)，于10ml具塞比色管中，加入异丙醇溶液涡旋混合，用异丙醇溶液定容至刻度。超声提取20min，混匀后取5ml溶液于10ml离心管中，10000r/min条件下离心10min，上清液过0.22μm滤膜，滤液待测。
[0108]
色谱条件：
[0109]
仪器：高效液相色谱仪，二极管阵列检测器(安捷伦hplc 1260)
[0110]
色谱柱：zorbax eclipse plus c18(4.6*250mm*5μm)；
[0111]
流动相：甲醇；
[0112]
检测波长：325nm；
[0113]
流速：1ml/min；
[0114]
柱温：35℃；
[0115]
进样量：5μl。
[0116]
表3
[0117][0118]
注：“—”代表未检测到结果
[0119]
本发明实施例制备的视黄醇及其衍生物纳米脂质载体具有很好的稳定性，尤其是实施例1-13，在45℃不避光条件下存储3个月，其含量不低于初始含量的55％。
[0120]
这说明本发明在合适的油脂、乳化剂的选择和配比下，即液态脂质0.01％-5％，固态脂质0.016％-10％，乳化剂0.02％-20％，并进一步优选液态脂质和固态脂质的质量比为0.1-0.6:1，乳化剂与液态脂质和所述固态脂质之和的质量比为0.4-3.5:1，制成的纳米脂质载体可以显著提高视黄醇及其衍生物的稳定性，并且可以在纳米脂质载体制备过程中避免磷脂和无机盐的使用，从而减少因磷脂、无机盐存在而产生的不稳定或破乳问题。