药物组合的制作方法

1.本发明一般地涉及肿瘤学领域。特别地，本发明涉及包含式(i)化合物和抗pd-1抗体的药物组合，用于治疗与wnt通路相关的疾病和/或病症。


背景技术：

2.本说明书中对任何先前出版物(或从其衍生的信息)或任何已知事项的引用不是也不应视为承认或准许或任何形式地暗示此先前出版物(或从其衍生的信息)或已知事物构成本说明书所涉及开发领域中的公知常识的一部分。
3.癌症通常用化学疗法和/或放射疗法治疗。虽然通常能有效破坏大量肿瘤细胞，但这种疗法通常会留下许多对治疗具有耐药性的肿瘤细胞。这些耐药性细胞可增殖以形成新的肿瘤，然后对治疗产生耐药性。因此，不断使用已知的化疗药物组合导致多重耐药('mdr')肿瘤细胞的产生。
4.增殖性疾病(例如肿瘤)的模式是多因素的。例如，过去四十年的研究已经认识到，细胞毒性药物(或抗增殖药物)包括干扰微管形成的抗代谢剂、能够交联dna的烷化剂、能够通过阻断dna复制而干扰dna烷基化的铂类药物、抗肿瘤抗生素药物、拓扑异构酶抑制剂等。在治疗这类疾病时，具有不同机制的药物可以组合(即联合治疗)具有益的效果，包括有效治疗mdr肿瘤细胞并且尽量减少副作用例如不良细胞毒性。此处的困难在于，并非所有已知的抗增殖药物都提供有用或有益的组合效果，因此许多实验室的研究目前集中在开发新的和有用的抗增殖联合用药上。
5.因此，通常需要制备克服或改善一个或多于一个上述困难的药物组合。


技术实现要素：

6.本发明提供药物组合，其包含：
7.a)具有以下结构的式(i)化合物：
[0008][0009]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
[0010]
b)抗pd-1抗体分子或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0011]
在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子是派姆单抗。
[0012]
本文公开治疗对象中与wnt通路相关的增殖性疾病或病症的方法，该方法包括向对象施用如本文定义的药物组合。
[0013]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症是结直肠癌或子宫内膜癌。
[0014]
本文公开如本文定义的药物组合，其用于治疗对象的与wnt通路相关的增殖性疾病或病症。
[0015]
本文公开本文定义的药物组合在制备用于治疗对象中与wnt通路相关的增殖性疾病或病症的药物中的用途。
附图说明
[0016]
本发明的实施方案在下文中仅通过非限制性实例的方式参照附图进行描述，其中：
[0017]
图1：具有未知原发肿瘤(可能为胆管癌)的患者202-101的ffpe肿瘤组织是从c1d17给药前和给药后的配对活检中制备的。通过ihc/opal分析切片并且在vectra3(perkin elmer)上进行分析。cd8

与foxp3

和cd4

与foxp3

细胞的比率用从单个染色切片上测量的3个高倍视野确定的数字标绘。
[0018]
图2：来自患有未知原发性(可能为胆管癌)202-101(t4-t3)和mss crc102-102(t2-t1)患者(携带rspo基因融合)的ffpe和冷冻肿瘤组织使用泛癌免疫面板进行纳米串分析。(a)分组分析显示两个样品的给药前和给药后变化相似。(b)显示两种癌症类型常见的大多数上调和下调基因。(c和d)分别显示具有rspo融合的crc患者和具有未知原发肿瘤(可能为胆管癌)的患者的大多数上调和下调基因。红色基因符号表示两个患者中上调或下调的基因。
具体实施方式
[0019]
本发明提供药物组合，其包含：
[0020]
a)具有以下结构的式(i)化合物：
[0021][0022]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物；和
[0023]
b)抗pd-1抗体分子或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0024]
不受理论束缚，本发明基于如下发现：式(i)化合物可与抗pd-1抗体分子相容作为治疗癌症(例如微卫星稳定型(mss)结直肠癌或子宫内膜癌)的组合疗法。本发明人发现式(i)化合物(化合物a)导致肿瘤中浸润淋巴细胞的增加和cd8

与foxp
3
t细胞的比率增加。此外，纳米串分析显示，例如pdcd1和ifng的基因高度上调，而例如检查点激酶atm和趋化因子ccl15的其他基因高度下调。肿瘤浸润淋巴细胞(tils)的增加和肿瘤环境的变化表明，肿瘤已从免疫“冷”肿瘤转变为免疫“热”肿瘤，并且可进一步用抗pd-1抗体分子治疗。
[0025]
本公开中，术语“药物组合”是指非固定组合。术语“非固定组合”是指活性成分，例如式(i)化合物，即具有以下结构的式(i)化合物：
[0026][0027]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物和抗pd-1抗体分子或其药学上可接受的盐或溶剂化物均作为单独的实体同时或顺序施用至患者，没有特定时间限制，其中这种施用在患者体内提供治疗有效水平的两种化合物。
[0028]
术语“组合”或“与
……
组合”并不意指治疗或治疗剂必须同时施用和/或配制用于一起递送，虽然这些递送方法在本文描述的范围内。组合中的治疗剂可与一种或多于一种其他额外疗法或治疗剂同时施用、在其之前或之后施用。治疗剂或治疗方案可以任何顺序施用。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和/或时间表施用。将进一步理解的是，该组合中使用的额外治疗剂可在不同组合物中一起或分开施用。通常，预期组合使用的额外治疗剂的使用水平不超过它们单独使用时的水平。在一些实施方案中，组合使用的水平将低于单独使用的水平。
[0029]
例如，可在施用式(i)化合物之前施用抗pd-1抗体分子。还可在施用式(i)化合物之后施用抗pd-1抗体分子。式(i)化合物也可与抗pd-1抗体分子同时施用。在一个实施方案中，式(i)化合物每天施用一次(例如通过口服施用)，而抗pd-1抗体分子每21天施用一次(例如通过静脉输注)。
[0030]
如本文所述，组合伙伴可具有协同活性，同时引起较少的由wnt信号通路抑制引起的副作用，例如骨密度降低。
[0031]
术语“药学上可接受的盐”可形成例如酸加成盐，优选与有机或无机酸形成的盐。合适的无机酸例如卤酸，例如盐酸。合适的有机酸例如羧酸或磺酸，例如富马酸或甲磺酸。为了分离或纯化的目的，还可使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗用途，仅使用药学上可接受的盐或游离化合物(在适用于药物制剂形式的情况下)，因此这些是优选的。本文中对游离化合物的任何引用应理解为也指相应的盐，视情况而定。如本文所述，抑制剂的盐优选为药学上可接受的盐；形成药学上可接受的盐的合适抗衡离子是本领域已知的。
[0032]
术语“药学上可接受的”是指如下那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其适合用于与人和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。
[0033]
术语“抑制”或“抑制剂”包括给定分子例如免疫检查点抑制剂例如抗pd-1抗体分子的特定参数例如活性的降低。例如，该术语包括抑制至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性，例如pd-1或pd-l1活性。因此，抑制不必是100％。
[0034]
术语“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括例如单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白fc区的全长抗体)。抗体分子包含全长抗体、或全长免疫球蛋白链、或全长抗体的抗原结合或功能片段、或全长免疫球蛋白链。抗体分子也可以是多特异性抗体分子，例如，其包含多个免疫球蛋白
可变域序列，其中多个第一免疫球蛋白可变域序列对第一表位具有结合特异性，多个第二免疫球蛋白可变域序列对第二表位具有结合特异性。
[0035]
抗体分子可以衍生化或连接到另一个功能分子(例如，另一个肽或蛋白质)。衍生化方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述抗体的衍生化和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可以功能性连接(通过化学偶联、基因融合、非共价结合或其他方式)至一个或多于一个其他分子实体，例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、可检测试剂、细胞毒剂、药剂和/或蛋白质或肽，其可介导抗体或抗体部分与另一分子(例如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)结合。
[0036]
抗体的“结合片段”或“抗原结合片段”旨在表示保留结合抗体靶标(通常也称为抗原)的能力的任何肽、多肽或蛋白质。在一个实施方案中，这种“抗原结合片段”选自fv、scfv(sc表示单链)、fab、f(ab')2、fab'、scfv-fc片段或双抗体，或其半衰期将通过化学修饰增加的任何片段，例如添加聚(亚烷基)二醇，例如聚(乙二醇)(“peg化”)(称为fv-peg、scfv-peg、fab-peg、f(ab')
2-peg或fab'-peg)(聚乙二醇的“peg”)，或通过并入脂质体进行修饰。在一个实施方案中，“抗原结合片段”将构成或将包含它们所源自的抗体的可变重链或轻链的部分序列，所述部分序列足以保留与由其演变的抗体相同的结合特异性和足够的亲和力，例如至少等于1/100，作为进一步的实例，至少等于由其演变的抗体对靶标的亲和力的1/10。
[0037]
抗pd-1抗体分子可以是本领域已知的抗pd-1抗体。在一个实施方案中，抗pd-1抗体是mdx-1106(也称为mdx-1106-04、ono-4538、bms-936558或纳武单抗)。在一个实施方案中，抗pd-1抗体是纳武单抗(cas登记号：946414-94-4)。纳武单抗(也称为bms-936558或mdx1106；bristol-myers squibb)是特异性阻断pd-1的全人源igg4单克隆抗体。美国8,008,449专利和wo2006/121168公开纳武单抗(克隆5c4)和特异性结合pd-1的其他人单克隆抗体。ranburorizumabu(也称为派姆单抗或mk03475；merck)是特异性结合pd-1的人源化igg4单克隆抗体。派姆单抗公开于美国8,354,509专利和wo2009/114335中。在一些实施方案中，抗pd-1抗体是匹地利珠单抗。匹地利珠单抗(ct-011；cure tech)是结合pd1的人源化igglk单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗pd-1单克隆抗体公开于wo2009/101611中。在一个实施方案中，抗pd-1抗体是pdr-001，其是wo2015/112900中描述的人源化单克隆抗体。us 8,609,089、us 2010028330和/或us 20120114649中公开其他抗pd1抗体。其他抗pd-1抗体包括amp 514(amplimmune)。
[0038]
抗pd-1抗体分子可选自纳武单抗(opdivo)、派姆单抗(keytruda)、匹地利珠单抗或pdr-001。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子是派姆单抗。
[0039]
应该理解，本公开的抗pd-1抗体分子或抗pd-1抗体分子可具有另外的保守或非必需氨基酸置换，这些置换对其功能没有实质影响。
[0040]
本文公开治疗对象中与wnt通路相关的增殖性疾病或病症的方法，该方法包括向对象施用如本文定义的药物组合。可在足够的时间和条件下施用药物组合以治疗对象的与wnt通路相关的增殖性疾病或病症。
[0041]
术语“治疗”包括例如，将如本文所述的wnt抑制剂或其药学上可接受的盐与抗pd-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合治疗性施用至需要这种治疗的温血动物、特别是
人类，其目的是治愈疾病或对疾病消退或延缓疾病进展产生影响。术语“治疗”任何疾病或病症是指改善疾病或病症[例如减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)，以预防或延迟疾病或病症的发作或发展或进展。
[0042]
术语“患者”或“对象”是指温血动物。在一个最优选的实施方案中，对象或患者是人。如本文所公开的，它可以是已诊断并且需要治疗疾病或病症的人。
[0043]
如本文所定义的方法可包括向有需要的对象施用有效量的药物组合。如本文所定义的术语“有效量”是指以作为对此引发、治疗或预防有效的单剂量或一系列剂量的一部分向有需要的个体施用一定量的药剂。有效量将根据待治疗个体的健康和身体状况、待治疗个体的分类群、组合的制剂、医疗状况的评估和其他相关因素而变化。预计该量会落在可通过常规试验确定的相对宽泛范围内。
[0044]
术语“癌症”和“癌”是指或描述哺乳动物的生理状况，其通常部分以不受调节的细胞生长为特征。如本文所用，术语“癌症”是指非转移性和转移性癌症，包括早期癌症和晚期癌症。术语“癌前的”是指通常先于或发展成癌症的病症或生长。“非转移性”是指良性的或保留在原发部位并且未渗入淋巴或血管系统或除原发部位以外的组织的癌症。通常，非转移性癌症是0、i或ii期癌症，偶尔是iii期癌症的任何癌症。“早期癌症”是指不具有侵袭性或转移性或分类为0、i或ii期癌症的癌症。术语“晚期癌症”通常指iii期或iv期癌症，但也可指ii期癌症或ii期癌症的亚期。本领域技术人员将理解，将ii期癌症分类为早期癌症或晚期癌症取决于癌症的特定类型。癌症的说明性实例包括但不限于乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、结直肠癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、甲状腺癌、肾癌、癌、黑色素瘤、脑癌、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、直肠癌和食道癌。
[0045]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症与wnt通路的上调相关。
[0046]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症选自癌症、纤维化、干细胞和糖尿病性视网膜病、类风湿性关节炎、银屑病和心肌梗塞。
[0047]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症选自宫颈癌、结肠癌、结直肠癌、乳腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、头颈癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、慢性淋巴细胞白血病、间皮瘤、黑色素瘤、胰腺癌、基底细胞癌、骨肉瘤、肝细胞癌、威尔姆斯瘤、髓母细胞瘤、肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化、肾纤维化、干细胞和糖尿病视网膜病变、类风湿性关节炎、银屑病和心肌梗塞。
[0048]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症是肺癌、前列腺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、结直肠癌或子宫内膜癌。
[0049]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症是结直肠癌。在一个实施方案中，增殖性疾病或病症是微卫星稳定型结直肠癌。
[0050]
在一个实施方案中，增殖性疾病或病症是子宫内膜癌。
[0051]
式(i)化合物的剂量可以变化并且可以几分钟、几小时、几天、几周、几月或几年的间隔发生或在这些时期中的任何一个期间连续发生。在一个实施方案中，该方法包括每天向对象施用式(i)化合物一次。在一个实施方案中，该方法包括每两天施用式(i)化合物一次(即每隔一天一次)。在一个实施方案中，方法包括每三、四、五、六或七天施用式(i)化合物一次。在一个实施方案中，方法包括每天施用式(i)化合物两次或三次。方法可包括向对
象口服施用式(i)化合物。式(i)化合物可以单剂量或一系列剂量施用。式(i)化合物也可作为离散单元或离散单元的组合施用。
[0052]
抗pd-1抗体分子的剂量方案可以从例如每周一次到每2周、3周或4周一次而变化。在一个实施方案中，方法包括每21天向对象施用抗pd-1抗体分子一次。方法可包括通过静脉输注向对象施用抗pd-1抗体分子。方法可包括通过静脉注射向对象施用抗pd-1抗体分子。
[0053]
式(i)化合物可以如下剂量施用：约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约21mg、约22mg、约23mg、约24mg、约25mg、约26mg、约27mg、约28mg、约29mg、约30mg、约31mg、约32mg、约33mg、约34mg、约35mg、约36mg、约37mg、约38mg、约38mg、约39mg、约40mg、约41mg、约42mg、约43mg、约44mg、约45mg、约46mg、约47mg、约48mg、约49mg或约50mg。在一个实施方案中，式(i)化合物以约24mg的剂量施用至对象。在一个实施方案中，式(i)化合物以约16mg的剂量施用至对象。在一个实施方案中，式(i)化合物以约8mg的剂量施用至对象。在一个实施方案中，式(i)化合物以约4mg的剂量施用至对象。
[0054]
抗pd-1抗体分子可以如下剂量施用：约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg或约400mg。在一个实施方案中，抗pd-1抗体分子以约200mg的剂量施用至对象。
[0055]
除非特别说明或从上下文中是明显的，否则如本文所用的术语“约”理解为在本领域的正常容差范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可理解为在规定值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％以内。除非上下文是清楚的，否则本文提供的所有数值都可由术语约来修饰。
[0056]
合适的剂量和给药方案可以由主治医师确定并且可以取决于病症的严重程度以及待治疗患者的一般年龄、健康状况和体重。例如，给药方案(例如式(i)化合物的给药方案)可在治疗过程中改变，使得在治疗过程中增加或减少剂量或频率。给药方案还可包括给药中断。
[0057]
在一个实施方案中，方法进一步包括施用骨保护剂。骨保护剂可以是狄诺塞麦或唑来膦酸或两者。
[0058]
抗体分子可通过本领域已知的多种方法施用，但对于许多治疗应用，优选的施用途径/方式是静脉注射或输注。对于静脉注射或输注，治疗组合物在制造和储存条件下通常应该是无菌和稳定的。组合物可配制为溶液、微乳液、分散体、脂质体或其他适合高抗体浓度的有序结构。可通过将所需量的活性化合物(即抗体或抗体部分)与一种成分或根据需要时多种成分的组合并入适当溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性化合物并入含有基本分散介质和所需其他成分的无菌载体中来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其从其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何另外所需成分的粉末。溶液的适当流动性可以例如通过使用诸如卵磷脂的涂层、通过在分散的情况下保持所需粒度以及通过使用表面活性
剂来保持。可通过在组合物中包含延迟吸收的药剂例如单硬脂酸盐和明胶，使可注射组合物的吸收延长。
[0059]
应该理解，施用途径和/或模式将根据所需结果而变化。例如，活性化合物可与保护化合物免于快速释放的载体一起制备，例如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微囊化递送系统。可使用可生物降解的生物可相容聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这种制剂的许多方法已获得专利或为本领域技术人员所公知(例如sustained and controlled release drug delivery systems,j.r.robinson,ed.,marcel dekker,inc.,new york,1978)。
[0060]
本文公开用作药物的如本文定义的药物组合。
[0061]
本文公开如本文定义的药物组合，其用于治疗对象中与wnt通路相关的增殖性疾病或病症。
[0062]
本文公开如本文定义的药物组合在制备用于治疗对象的与wnt通路相关的增殖性疾病或病症的药物中的用途。
[0063]
本文公开式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗对象中与wnt通路相关的增殖性疾病或病症的药物中的用途，其中将所述药物与抗pd-1抗体分子或其药学上可接受的盐或溶剂化物一起施用至有需要的对象。
[0064]
本文公开抗pd-1抗体分子或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗对象中与wnt通路相关的增殖性疾病或病症的药物中的用途，其中将所述药物与式(i)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物一起施用至有需要的对象。
[0065]
本文提供包含本文公开的药物组合的药物组合物。在一个实施方案中，提供包含式(i)化合物和抗pd-1抗体的药物组合物。在一个实施方案中，提供包含式(i)化合物的药物组合物和包含抗pd-1抗体的药物组合物。
[0066]
组合物可包含任何合适的载体、稀释剂或赋形剂。这些包括所有常规溶剂、分散介质、填料、固体载体、涂层、抗真菌剂和抗菌剂、皮肤渗透剂、表面活性剂、等渗吸附剂等。应该理解，本发明的组合物还可包括其他补充生理活性剂。
[0067]
载体必须是药学上“可接受的”，含义是与组合物的其他成分相容并且对对象无害。组合物包括适合于口服、直肠、鼻腔、局部(包括颊和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)施用的那些。组合物可以方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域众所周知的任何方法制备。这种方法包括将活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，组合物如下制备：将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者均匀并且紧密地结合，然后如果需要将产品成型。
[0068]
适用于口服施用的本发明组合物可作为离散单元存在，例如胶囊、小袋或片剂，各自含有预定量的活性成分；作为粉末或颗粒存在；作为在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液存在；或作为水包油液体乳液或油包水液体乳液存在。活性成分也可作为丸剂、药糖剂或糊剂存在。
[0069]
片剂可通过压缩或模塑，任选地与一种或多种辅助成分一起制成。压制片剂可通过如下制备：在合适的机器中压制自由流动形式例如粉末或颗粒的活性成分，任选地与黏合剂(例如惰性稀释剂)、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠)表面活性剂或分散剂混合。可通过在合适机器中将粉末状化合物与惰性
液体稀释剂润湿的混合物进行模压来制备模印片。可任选地对片剂进行包衣或刻痕，并且可使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素来配制从而提供其中活性成分的缓慢释放或受控释放以提供所需的释放曲线。片剂可任选地提供有肠溶包衣，以提供在肠道的部分而不是胃的释放。
[0070]
适于在口腔内局部施用的组合物包括锭剂，其包含在调味基质中的活性成分，调味基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；包含在惰性基质中的活性成分，惰性基质例如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶；和包含在合适液体载体中的活性成分的漱口剂。
[0071]
适于皮肤局部施用的组合物可包含溶解或悬浮在任何合适载体或基质中的化合物，并且可以是洗剂、凝胶剂、霜剂、糊剂、软膏剂等形式。合适的载体包括矿物油、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯、乳化蜡、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。透皮贴剂也可用于施用本发明的化合物。
[0072]
用于直肠施用的组合物可作为具有合适基质的栓剂存在，所述基质包括例如可可脂、甘油、明胶或聚乙二醇。
[0073]
适于阴道施用的组合物可作为阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂存在，其除了活性成分外，还含有本领域已知的合适载体。
[0074]
适于肠胃外施用的组合物包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、杀菌剂和使组合物与预期接受者的血液等渗的溶质；水性和非水性无菌悬浮液，其可包括悬浮剂和增稠剂。组合物可存在于单位剂量或多剂量密封容器例如安瓿和小瓶中，并且可在冷冻干燥(冻干)条件下储存，使用前即刻仅需要添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可由前述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
[0075]
优选的单位剂量组合物是含有如上文所述日剂量或日单位、日亚剂量，或其适当部分的活性成分的那些组合物。
[0076]
应该理解的是，除了上面特别提到的活性成分之外，本发明的组合物还可包括本领域常规的其他药剂，例如，考虑到所讨论的组合物的类型，那些适合于口服施用的药剂可包括其他药剂，例如黏合剂、甜味剂、增稠剂、调味剂、崩解剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂和/或延时剂。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄原胶、膨润土、海藻酸或琼脂。合适的调味剂包括薄荷油、冬青油、樱桃、橙子或覆盆子调味剂。合适的包衣剂包括丙烯酸和/或甲基丙烯酸和/或其酯的聚合物或共聚物、蜡、脂肪醇、玉米蛋白、虫胶或麸质。合适的防腐剂包括苯甲酸钠、维生素e、α-生育酚、抗坏血酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石粉。合适的延时剂包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
[0077]
在整个本说明书和随后的陈述中，除非上下文另有要求，否则措辞“包含”和例如“包括”和“含有”等变体将理解为暗示包括所述的整数或步骤或者一组整数或一组步骤，但不排除任何其他整数或步骤或者一组整数或一组步骤。
[0078]
本说明书中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述/该”包括复数方面，除非上下文另有明确规定。因此，例如，提及“一种制剂”包括单一制剂以及两种或更多种制剂；提及“一种药剂”包括单一药剂以及两种或更多种药剂；提及“本公开”包括本公开教导的单一方面和多个方面；等等。此处教导和充分公开的方面包含在术语“发明”中。所有方面都充分公
开在本发明的范围内。
[0079]
本领域技术人员将理解，除了具体描述的那些之外，本文描述的本发明易于进行变化和修改。应该理解，本发明包括落入精神和范围内的所有这种变化和修改。本发明还包括本说明书中单独或共同提及或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征中的任何两种或更多种的任何和所有组合。
[0080]
现将参考以下实施例描述本发明的某些实施方案，其仅旨在说明的目的，并非旨在限制上文所述的一般性范围。
[0081]
实施例
[0082]
实施例1
[0083]
制备式(i)化合物
[0084]
合成胺
[0085]
suzuki方法a：将芳基卤化物(1当量)、硼酸(1.5当量)和碳酸钠(2当量)在甲苯(0.08m)和水(0.32m)中的搅拌溶液用氩气脱气15分钟。将四(三苯基膦)钯(0)(0.05当量)加入反应混合物并且将反应混合物加热回流16小时。原料反应完成后，将反应混合物浓缩并且向反应混合物中加入水并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用na2so4干燥并且真空浓缩。将粗制化合物通过柱色谱法纯化以提供纯化产物。
[0086]
合成6-苯基哒嗪-3-胺
[0087][0088]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):7.96-7.94(d,j＝8hz,2h),7.82-7.80(d,j＝9.2hz,1h),7.48-7.35(m,3h),6.86-6.84(m,1h),6.64(br s,2h)。lc-ms:m/z 172.0(m h)，纯度为82％。
[0089]
酰胺偶联方法a：向商购可得的2-(1,3-二甲基-2,6-二氧代-2,3-二氢-1h-嘌呤-7(6h)-基)乙酸,1(1当量)的二氯甲烷(0.01m)的搅拌溶液中，加入hatu(1.3当量)、三乙胺(1.5当量)和相应的胺(1当量)。在室温下搅拌反应混合物。反应完成后，向反应混合物中加入水，并且用二氯甲烷萃取混合物。有机层用盐水溶液洗涤，用无水na2so4干燥，在真空下浓缩，得到粗制产物。将粗制产物通过柱色谱进一步纯化。
[0090]
2-(1,3-二甲基-2,6-二氧代-1,2,3,6-四氢-7h-嘌呤-7-基)-n-(6-苯基哒嗪-3-基)乙酰胺(也称为2-(1,3-二甲基-2,6-二氧-2,3-二氢-1h-嘌呤-7(6h)-基)-n-(6-苯基哒嗪-3-基)乙酰胺)。
[0091][0092]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ(ppm):11.77(s,1h),8.32-8.25(m,2h),8.12-8.10(m,3h),7.57-7.49(m,3h),5.37(s,2h),3.46(s,3h),3.19(s,3h)。lc-ms:m/z 390.1(m h)，纯度为99％。
[0093]
实施例2
[0094]
化合物a的单剂活性增加细胞表面pd-1表达和基因上调，使肿瘤更“热”[0095]
具有未知原发肿瘤(可能为胆管癌)的患者202-101的ffpe肿瘤组织是从c1d17给药前和给药后的配对活检中制备的。通过ihc/opal
tm
分析切片并且在vectra3(perkin elmer)上进行分析。在vectra3上以400x放大倍数在每个高倍视野中对细胞进行计数，并且从最少n＝3个不同视野绘制平均值
±
sd。cd8

与foxp3

和cd4

与foxp3

细胞的比率通过从单次染色确定的数字标绘(图1)。
[0096]
化合物a作为单剂改变免疫环境基因表达水平以使肿瘤更热
[0097]
使用泛癌免疫面板对来自未知原发(可能是胆管癌)202-101(t4-t3)和mss crc 102-102(t2-t1)患者(携带rspo基因融合)的ffpe和冷冻肿瘤组织进行纳米串分析(图2a)。分组分析显示两个样品的给药前和给药后变化相似(图2b)。显示两种癌症类型常见的大多数上调和下调基因(图2c和图2d)。分别显示具有rspo融合的crc患者和具有未知原发肿瘤(可能是胆管癌)的患者中的大多数上调和下调基因。红色基因符号表示在两个患者中上调或下调的基因。
[0098]
实施例3
[0099]
剂量递增研究
[0100]
将首先测试化合物a与标准剂量的派姆单抗的3 3剂量递增研究。在这项研究中，不同剂量(例如8mg、16mg或24mg)的化合物a将与派姆单抗(例如200mg)同时施用，以确定用于剂量扩展的化合物a的推荐剂量(rd)。
[0101]
实施例4
[0102]
剂量扩展研究
[0103]
主要目标
[0104]
评估每隔一天以16mg的推荐剂量(rd)(根据剂量递增研究的结果可调整为8mg或24mg)作为单剂口服施用化合物a的安全性直至疾病进展，然后与派姆单抗(pd-1抑制剂)组合，如通过监测不良事件(ae)、成像评估、12导联心电图读数、东部肿瘤协作组表现状态、临床实验室测试结果和生命体征测量在患有晚期或转移性或不可切除的实体恶性肿瘤的两个患者组中测量，根据治疗医师的意见，这些实体恶性肿瘤是难治性、不耐受或不适合可治疗的。
[0105]
评估每隔一天以16mg rd作为单剂和与派姆单抗(pd-1抑制剂)组合而口服施用的化合物a的耐受性。耐受性评估将通过监测疲劳和胃肠道症状以及适用时两组晚期或转移性或不可切除的实体恶性肿瘤患者(第1组和第2组[亚组2a、2b和2c])中的免疫相关副作用来进行，根据治疗医师的意见，这些实体恶性肿瘤是难治的、不耐受的或不适合可治疗的。
[0106]
患者群体
[0107]
推荐剂量的化合物a(式(i)化合物)作为单剂直至进展，然后与派姆单抗(pd-1抑制剂)组合，进行或不进行骨保护性治疗(狄诺塞麦，以及如果狄诺塞麦没有观察到反应则随后的唑来膦酸)。根据治疗医师的意见，患有晚期或转移性或不可切除的实体恶性肿瘤患者将分为两组，根据治疗医师的意见，这些实体恶性肿瘤是难治的、不耐受的或不适合可治疗的。
[0108]
第1组将包括多达20名mss结直肠癌(crc)患者，其使用d3 rspo基因融合测试而前
瞻性选择为存在涉及r-海绵蛋白(rspo)2或rspo3(融合ad)的四种不同复发基因融合中的一种。
[0109]
第2组包括多达45名患者，其分为三个亚组；
[0110]
·
亚组2a(n＝15)：使用d3 rspo基因融合测试，前瞻性选择不存在涉及rspo2或rspo3(融合a-d)的所有四种不同复发基因融合的mss-crc患者；
[0111]
·
亚组2b(n＝15)：将在没有前瞻性选择的情况下招募的mss卵巢癌患者(针对另外的突变)；和
[0112]
·
亚组2c(n＝15)：将在没有前瞻性选择的情况下招募的mss子宫内膜癌患者(针对另外的突变)。
[0113]
研究设计
[0114]
将在使用推荐剂量的16mg化合物a作为单剂每隔一天口服一次的治疗期间收集初步疗效和安全性数据，并且在进展后，在一项开放标签、非随机研究中与派姆单抗(pd-1抑制剂)组合，进行或不进行骨保护治疗(如果使用狄诺塞麦没有观察到反应，则使用狄诺塞麦和随后的唑来膦酸)。建议在增加派姆单抗治疗前完成两个周期(6周)的化合物a单一疗法。然而，在增加派姆单抗之前完成至少1个周期(3周)的化合物a单一疗法是可接受的。出于安全以外的原因未完成最短持续时间1个周期(21天)的化合物a单一疗法的患者可进行替换。骨保护治疗的实际给药方案和频率将基于观察到的骨吸收生物标志物(β-ctx)的血清水平。
[0115]
持续时间
[0116]
单剂治疗期(剂量扩大)—根据recist 1.1版(如果患者未进入派姆单抗组合治疗阶段)，施用化合物a直至疾病进展，开始新的癌症治疗，或完成12个治疗周期(1个周期：21天)。
[0117]
组合治疗期——根据irecist，施用化合物a和派姆单抗直至疾病进展、开始新的癌症治疗或完成12个治疗周期(1个周期：21天)。在单剂或组合治疗期间，只要申办者同意，完成12个治疗周期(1个周期：21天)的患者可继续治疗，直至疾病进展、出现不可接受的毒性、患者退出或失去临床益处。
[0118]
研究药物、剂量和施用途径(剂量扩大)
[0119]
所有患者将接受推荐剂量的16mg化合物a作为单剂直至疾病进展，然后与派姆单抗组合直至确认疾病进展或失去临床益处。派姆单抗将每21天以200mg(30分钟静脉输注)的剂量施用。在研究期间的任何时间，如果不耐受，化合物a可减至每隔一天服用8mg。
[0120]
骨保护治疗、剂量和施用途径：
[0121]
当β-ctx血清水平》1000pg/ml时，狄诺塞麦将以每28天120mg sc的起始剂量施用。如果狄诺塞麦(sc)治疗1周后，β-ctx水平未降低至《1000pg/ml，则将停用狄诺塞麦并且开始每3-4周以4mg的剂量静脉注射唑来膦酸。如果在(依次)施用狄诺塞麦和唑来膦酸后，β-ctx水平在3周内(连续3次评估)未降低至《1000pg/ml，则将对患者停止研究。在狄诺塞麦或唑来膦酸治疗期间，患者还将根据研究者的临床判断每天口服1000mg或更高剂量的钙，每天口服维生素d(至少400iu)。