用于调节免疫反应的甘油-甘露-庚糖ADP衍生物的制作方法

用于调节免疫反应的甘油-甘露-庚糖adp衍生物
技术领域
1.本发明涉及作为adp-庚糖生物合成通路中的某些细菌代谢物的衍生物的化合物、包含其的组合物以及其在疗法中的使用方法。


背景技术：

2.关于炎性反应机制的研究已经鉴定出充当必需的信号传导组分的各种蛋白激酶。蛋白激酶的缺陷通常与人类炎性疾病、癌症和糖尿病的发病机理相关。
3.α-酶是独特的蛋白激酶超家族，显示出与典型的蛋白激酶的序列相似性很小。已鉴定出总共六个α激酶成员，包括α-蛋白激酶1(alpk1)、alpk2、alpk3、细长因子-2激酶(eef2k)、和瞬时受体电位阳离子通道m6和m7(trpm6和trpm7)(ryazanov ag等人,curr biol 1999 9(2):r43-45；ryazanov ag等人,proc natl acad sci usa 1997 94(10):4884-4889)。alpk1最初被鉴定为上皮细胞中含有筏(raft)的蔗糖异构酶(si)囊泡的新组分(heinet m等人,j.biol.chem.2005 280(27):25637-43)。已显示alpk1将肌球蛋白1磷酸化并且在细胞外转运至顶端质膜中起重要作用。在小鼠中转座子插入的alpk1纯合子失活性突变导致运动协调缺陷，这可以通过过表达全长alpk1来补救(chen m等人,bmc neurosci.2011 12:1)。
4.遗传关联研究揭示出痛风、慢性肾病、心肌梗塞和糖尿病的风险中涉及alpk1(wang sj等人,j.mol.med.2011 89:1241-51；ko am等人,j.intl.epidemiol.2013 42:466-474；chiba t et al.,human cell 2015 28:1-4；yamada y等人j med genet 2013 50:410-418；fujimaki t等人,biomed report 2014 2:127-131；shimotaka s等人,biomed report 1 2013 940-44；yamada y等人,biomed.report 2015 doi:10.3892/br.2015.439)。
5.包括肺癌、结直肠癌和乳腺癌的癌症中也牵涉到alpk1激活(liao等人scientific reports 2016 6:27350；strietz等人,oncotarget 2016 1-16)。
6.最近的研究已揭示出alpk1是由某些细菌激活的先天免疫反应的重要调节因子。例如，通过aplk1响应于福氏志贺氏菌(s.flexneri)、鼠伤寒沙门氏菌(s.typhimurium)、和脑膜炎奈瑟氏球菌(neisseria meningitides)感染而促进tifa寡聚和白细胞介素8(il-8)的表达，表明它是针对细菌的先天免疫的关键调节因子(milivojevic等人,plospathog 2017 13(2):e1006224)。zimmerman等人描述了由幽门螺杆菌(helicobacter pylori)iv型分泌系统触发的alpk1和tifa依赖性先天免疫反应。(zimmermann等人,cell reports 2017 20(10):2384-95)。这两项研究均表明细菌代谢物庚糖-1,7-双磷酸(hbp)激活tifa依赖性先天免疫。
7.存在其临床表现是由炎症和各种感染引起的许多疾病、障碍和病症。需要用于调节靶组织中的炎症以治疗此类疾病、障碍和病症的新方法。本公开文本通过提供作为adp-庚糖生物合成通路中hbp下游的某些代谢物的衍生物的化合物来满足这种需要。


技术实现要素：

8.本发明部分基于以下发现：细菌代谢物的某些衍生物并且特别是d-甘油-d-甘露-庚糖-1β-adp(h1badp)的衍生物具有令人惊讶的生物活性。h1badp在图1所示的大肠杆菌(e.coli)生物合成通路中d-甘油-β-d-甘露-庚糖1,7-二磷酸酯(庚糖1,7二磷酸酯或“hbp”)的下游。本发明诸位发明人先前将这种代谢物以及d-甘油-β-d-甘露-庚糖-1-磷酸酯(hmp1bp)和l-甘油-d-甘露-庚糖-1β-adp(h1b-adp-6l)表征为能够激活alpk1依赖性促炎信号转导。鉴于目前alpk1及其在通过细菌代谢物激活先天免疫中的作用的知识，该生物活性是出乎意料的。大肠杆菌h1b-adp生物合成通路在图1中示出。
9.本公开文本提供了由本文所述的式i、ia、ib、ic、1d和1e表示的h1badp的另外衍生物，其与母体分子相比具有改善的化学和/或生物学特性。
10.因此，本公开文本提供了化合物、包含其的组合物(包括药物组合物)和方法，其涉及通过施用由式i(包括本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e)表示的化合物调节免疫反应，治疗癌症，增强对靶抗原的免疫反应，治疗肝脏疾病或障碍(包括非酒精性脂肪性肝炎(nash)以及由丙型肝炎病毒(hcv)和乙型肝炎病毒(hbv)引起的疾病和障碍)，以及治疗或预防由如本文所述的感染原引起的疾病或障碍。在一些实施方案中，本公开文本提供了调节受试者的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含由本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e表示的化合物的组合物。
11.本公开文本提供了由式(i)的表示的化合物、由式i表示的化合物、或其立体异构体、稳定同位素、前药或药学上可接受的盐：
12.本发明公开了作为alpk1激动剂的新型杂环化合物。所述化合物由式(i)表示：
13.其中a1、a2、l1、l2、l3、z1、z2、w1、w2、r1、r2、r3、r4、r5、r6和r7如本文中所定义。在本公开文本的范围中还包括式i的化合物的立体异构体、互变异构体、稳定同位素、前药、和药学上可接受的盐。
14.a1和a2独立地选自o、s和-c(r8r9)-，其中r8和r9独立地选自h、d、-oh、n3、-cn、卤素和任选的经取代的基团，所述任选的经取代的基团选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烷酰氧基和芳烷氧基，其中所述任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基；a1或a2中的至少一个是-c(r8r9)；其中a1中的r8或r9可以与a2中的r8或r9环化以形成c3-c6环烷基和含有3至9个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，各自任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基取代；
15.l1和l2独立地选自o、ch2、chf和cf2；
16.l3是o、s、ch2或ch(oh)；
17.z1和z2独立地选自o和s；
18.w1是-c(r
10r11
)-，其中r
10
和r
11
独立地选自h、d、-oh、卤素、和选自以下的任选经取代的基团：c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4-卤代烷氧基、c1-c4烯氧基、芳烷氧基、和经由c-末端c(o)o-连接的1-6元寡肽基和r
12
co
2-，其中r
12
选自c1-c20烷基、c1-c20烯基、c1-c20烷氧基、c1-c20烯氧基、c1-c20烷基氨基、c3-c6环烷基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基和经由n-末端n连接的1-6元寡肽基；其中对于r
10
和r
11
的任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基；
19.当w1是-c(r
10r11
)-时，其中r
10
是f，并且其他如上所定义，w2是h或任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基、c1-c3烯氧基和r
12
co
2-的取代基取代的c1-c3烷基，其中r
12
是c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷基氨基、c3-c6环烷基、含有3至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的环杂烷基、c6-c10芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；
20.w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1选自-o-或-nh-；w3选自键或任选地被1-3个独立地选自卤素、-oh、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基、c1-c3烯氧基的取代基取代的c1-c3亚烷基；其中r
13
是经由c-末端羰基连接的1-6元寡肽基或r
14
q2c(o)-；其中q2是键、-o-或-nh-；r
14
是经由n-末端n连接的1-6元寡肽基或选自c5-c20烷基、c5-c20亚烷基和r
15-q
3-q
4-q
5-的任选经取代的基团；其中q3、q4和q5独立地选自键、芳基、含有5至6个环原子的杂芳基、c3-c6环烷基和含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，并且q3、q4和q5中至少有一个不是键；r
15
是选自c1-c18烷基和c1-c18烷氧基的任选经取代的基团，其中对于r
14
和r
15
的所述任选的取代基是1-3个独立地选自卤素、-oh、-co2h、c1-c4烷氧基羰基、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷氧基c3-c6环烷基和c3-c6环烷氧基的取代基；r1是芳基或含有6至10个环原子并且具有1-4个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基，其中r1任选地被1-3个选自以下的取代基取代：d、卤素、-oh、＝o、cn、nh2和选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、(r
16r17
)n-和(r
16r17
)nco-的任选经取代的基团，其中r
16
和r
17
独立地选自h和选自以下的任选经取代的基团：c1-c4烷基、c3-c6环烷基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、芳基、芳基烷基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基烷基；其中所述任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、cn、nh2和c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基和c3-c6环烷基的取代基；
21.r2、r3和r4独立地选自h、d、卤素、c1-c4烷基和c1-c4卤代烷基；
22.r5、r6和r7独立地选自h、-oh、卤素和r
12
co
2-，并且r5、r6和r7中的至少两个是-oh或r
12
co
2-，其中r
12
选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烯氧基、c1-c4烷基氨基、c3-c6环烷基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、c6-c10芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；其中r5、r6和r7中的任何两个相邻基团可以环化以形成含有5至9个环成员并且具
有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，各自任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基取代。
23.在实施方案中，本公开文本提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的式1的化合物和药学上可接受的载体。
24.在实施方案中，本公开文本提供了一种用于调节需要这种治疗的受试者的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，所述用于调节免疫反应的方法选自先天免疫的激活和适应性免疫的激活。
25.在实施方案中，本公开文本提供了一种用于治疗需要这种治疗的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，所述癌症选自软组织肉瘤、乳腺癌、头颈癌、黑色素瘤、宫颈癌、膀胱癌、血液系统恶性肿瘤、胶质母细胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、肺癌、梅克尔细胞癌、小肠癌、甲状腺癌、急性骨髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、胃癌、胃肠道间质瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、肝癌、白血病、淋巴瘤、t细胞淋巴瘤、脑癌、和多发性骨髓瘤。在实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、头颈癌、黑色素瘤、肾癌、肺癌、梅克尔细胞癌、和淋巴瘤。
26.在实施方案中，本公开文本提供了一种用于增强受试者对靶抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物，作为起增强对靶抗原的免疫反应的作用的疫苗或免疫佐剂。在实施方案中，所述靶抗原是选自腺病毒、乙型柯萨奇病毒、巨细胞病毒、东部马脑炎病毒、埃博拉病毒、肠病毒71、eb病毒、乙型流感嗜血杆菌(hib)、丙型肝炎病毒(hcv)、疱疹病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、人乳头瘤病毒(hpv)、钩虫、马尔堡病毒、诺如病毒、呼吸道合胞病毒(rsv)、轮状病毒、伤寒沙门氏菌(salmonella typhi)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、化脓链球菌(streptococcus pyogenes)、水痘、西尼罗病毒、鼠疫耶尔森杆菌(yersinia pestis)、和寨卡病毒的感染原的抗原。在实施方案中，如本文所述的式1的化合物充当用于治疗或预防炭疽、龋齿、美洲锥虫病、登革热、白喉、埃立克体病、甲型或乙型肝炎、疱疹、季节性流感、日本脑炎、麻风病、莱姆病、疟疾、麻疹、腮腺炎、包括脑膜炎和败血病的脑膜炎球菌病、盘尾丝虫河盲症、疫咳(百日咳)、肺炎球菌病、脊髓灰质炎、狂犬病、风疹、血吸虫病、严重急性呼吸综合征(sars)、带状疱疹、天花、梅毒、破伤风、肺结核、兔热病、蜱传脑炎病毒、伤寒热、锥虫病、黄热病、或内脏利什曼病的疫苗的疫苗佐剂。
27.在实施方案中，本公开文本提供了一种用于治疗可通过激活受试者细胞中的nfkb、p38、和jnk细胞信号传导通路的治疗而改善的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，所述疾病或障碍选自肺结核、脑膜炎、肺炎、溃疡、脓毒症、鼻炎、哮喘、过敏、copd、炎性肠病、关节炎、肥胖症、辐射诱导的炎症、银屑癣、特应性皮炎、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、阿尔茨海默氏病、系统性红斑狼疮(sle)、自身免疫性甲状腺炎(格雷夫病)、多发性硬化症、强直性脊柱炎大疱性疾病、和由所述丙型肝炎病毒(hcv)、所述乙型肝炎病毒(hbv)或所述人免疫缺陷病毒(hiv)引起的疾病和障碍。
28.在实施方案中，本公开文本提供了一种用于治疗或预防有需要的受试者的由选自细菌、病毒、或寄生生物的感染原引起的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，所述感染原是细菌。在实施方案中，所述感染原是病毒。在实施方案中，所述感染原是寄生生物。在实施方案中，所述细菌是革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌。在实施方案中，所述革兰氏阴性细菌选自：鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumanii)、伴放线杆菌(aggregatobacteractinomycetemcomitans)、杆菌状巴尔通体(bartonella bacilliformis)、汉氏巴尔通体(bartonella.henselae)、五日热巴尔通体(bartonella quintana)、双歧杆菌疏螺旋体(bifidobacterium borrelia)、百日咳博德特氏菌(bortadella pertussis)、布鲁氏菌属物种(brucella sp)、洋葱伯克霍尔德菌(burkholderiacepacis)、类鼻疽伯克霍尔德菌(burkholderiapsedomallei)、空肠弯曲杆菌(campylobacter jejuni)、人心杆菌(cardiobacterium hominis)、胎儿弯曲杆菌(campylobacter fetus)、肺炎衣原体(chlamydia pneumonia)、沙眼衣原体(chlymydia trachomatis)、艰难梭菌(clostridium difficile)、蓝藻细菌(cyanobacteria)、侵蚀艾肯菌(eikennellacorrodens)、肠杆菌(enterobacter)、粪肠球菌(enterococcus faccium)、大肠杆菌(escherichia coli)、大肠杆菌0157、土拉弗朗西斯菌(franceillatularensis)、具核梭杆菌(fusobacterium nucleatum)、流感嗜血杆菌(haemophilus influenza)、嗜沫嗜血杆菌(haemophilusaphrophilus)、杜克雷嗜血杆菌(haemophilusducreyi)、副流感嗜血杆菌(haemophilusparainfluenzae)、幽门螺杆菌(helicobacter pylori)、金格杆菌(kingellakingae)、肺炎克雷伯杆菌(klebsiella pneumonia)、军团杆菌(legionella bacteria)、嗜肺军团菌血清1型(legionella pneumophila serogroup 1)、钩端螺旋体属(leptospria)、摩氏摩根菌(morganella morganii)、淋病奈瑟氏菌(neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟氏菌(neisseria meningitidis)、奇异变形杆菌(proteus mirabilis)、普通变形杆菌(proteus vulgaris)、粘化变形杆菌(proteus myxofaciens)、雷氏普罗威登斯菌(providencia rettgeri)、产碱普罗威登斯菌(providencia alcalifaciens)、斯氏普罗威登斯菌(providencia stuartii)、绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、少动假单胞菌(pseudomonas paucimobilis)、恶臭假单胞菌(pseudomonas putida)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)、食酸假单胞菌(pseudomonas acidovorans)、立克次体属(rickettsiae)、肠道沙门氏菌(salmonella enterica)、伤寒沙门氏菌(salmonella typhi)、甲型副伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌(salmonella.dublin)、亚利桑那沙门氏菌(salmonella arizonae)、猪霍乱沙门氏菌(salmonella choleraesuis)、粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)、痢疾志贺氏菌(schigelladysenteriae)、福氏志贺氏菌(schigellaflexneri)、鲍氏志贺氏菌(schigella boydii)、宋内志贺氏菌(schigellasonnei)、密螺旋体属(treponema)、嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)、霍乱弧菌(vibrio cholerae)、拟态弧菌(vibrio mimicus)、溶藻弧菌(vibrio alginolyticus)、霍氏弧菌(vibrio hollisae)、副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)、创伤弧菌(vibrio vulnificus)和鼠疫耶尔森杆菌(yersinia pestitis)。在实施方案中，所述革兰氏阳性细菌选自放线菌属(actinomycetes)、炭疽杆菌(bacillus anthracis)、枯草杆菌(bacillus subtilis)、破伤
风梭菌(clostridium tetani)、产气荚膜梭菌(clostridium.perfingens)、肉毒梭菌(clostridium botulinum)、破伤风梭菌(clostridium tetani)、白喉棒状杆菌(corynebacterium diphtheriae)、粪肠球菌(enterococcus faecalis)、屎肠球菌(enterococcus faecium)、红斑丹毒丝菌(erysipelothrixruhsiopathiae)、单核细胞增生利斯特菌(listeria monocytogenes)、麻风分枝杆菌(mycobacterium leprae)、结核分支杆菌(mycobacterium tuberculosis)、支原体属(mycoplasma)、诺卡氏菌属(nocardia)、丙酸菌属(propionibacerium)、绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、肺炎双球菌(pneumococci)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(vancomycin resistant staphylococcus aureus)(mrsa)、耐万古霉素金黄色葡萄球菌(vancomycin resistant staphylococcus aureus)(vrsa)、路邓葡萄球菌(staphylococcus lugdunensis)、腐生葡萄球菌(staphylococcus saprophyticus)、肺炎链球菌(streptococcus pneumonia)、化脓链球菌(streptococcus pyogenes)、和突变链球菌(streptococcus mutants)。在实施方案中，所述病毒选自埃博拉病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、单纯性疱疹病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、人乳头瘤病毒(hpv-6、hpv-11)、人sars冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、麻疹病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、sars冠状病毒、和黄热病病毒。在实施方案中，所述寄生生物选自棘阿米巴属物种(acanthamoeba spp)、美洲锥虫病(american tryppanosomiasis)、狒狒巴拉姆希阿米巴(balamuthia mandnillanis)、分歧巴贝虫(babesia divergenes)、双芽巴贝虫(babesia bigemina)、马巴贝西虫(babesia equi)、微小巴贝西虫(babesia microfti)、邓肯巴贝西虫(babesia duncani)、结肠小袋绦虫(balantidium coli)、芽囊原虫属物种(blastocystis spp)、隐孢子虫属物种(cryptosporidium spp)、环孢子虫(cyclospora cayetanensis)、脆弱双核阿米巴(dientamoeba fragilis)、阔节裂头绦虫(diphyllobothrium latum)、亚马逊利什曼原虫(leishmania amazonesis)、福氏纳格里阿米巴原虫(naegleria fowderi)、恶性疟原虫(plasmodium falciparum)、间日疟原虫(plasmodium vivax)、卵形疟原虫柯氏亚种(plasmodium ovalecurtisi)、三日疟原虫(plasmodium malariae)、西伯氏鼻孢子虫(rhinosporidiumseeberi)、牛-人肉孢子虫(sarcocystisbovihominis)、猪人肉孢子虫(sarcocystisssuihominis)、刚地弓形虫(toxoplasma gondii)、阴道滴虫(trichmonas vaginalis)、布氏锥虫(trypanosoma brucei)、克氏锥虫(trypanosoma cruzi)、和多头绦虫(taenia multiceps)。
29.在任何前述方法的实施方案中，所述方法可以进一步包括向所述受试者施用一种或多种另外的治疗剂或免疫调节剂及其组合。在实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂选自抗微生物剂，诸如抗细菌剂、抗病毒剂或抗寄生生物剂，抗癌剂，或用于治疗肺结核、脑膜炎、肺炎、溃疡、脓毒症、鼻炎、哮喘、过敏、copd、炎性肠病、关节炎、肥胖症、辐射诱导的炎症、银屑癣、特应性皮炎、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、阿尔茨海默氏病、系统性红斑狼疮(sle)、自身免疫性甲状腺炎(格雷夫病)、多发性硬化症、和强直性脊柱炎大疱性疾病的治疗剂。
30.在用于治疗癌症的方法的实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂是免疫调节剂。在实施方案中，所述免疫调节剂选自免疫检查点调节因子的抑制剂或拮抗剂、免疫刺激
分子、和免疫共刺激分子的激动剂中的一种或多种。在实施方案中，所述免疫检查点调节因子的抑制剂或拮抗剂是pd-1/pd-l1抑制剂。在实施方案中，所述pd-1/pd-l1抑制剂选自纳武单抗、派姆单抗、匹迪单抗(pidilizumab)、bms-936559、阿特珠单抗、度伐鲁单抗、和阿维鲁单抗。在实施方案中，所述免疫调节剂选自干扰素α(infα)、干扰素基因刺激因子(“sting”)激动剂、tlr激动剂(例如，雷西莫特)、和抗ox40(cd134)激动剂抗体。在实施方案中，所述免疫共刺激分子的激动剂是抗ox40(cd134)激动剂抗体。在实施方案中，所述癌症选自晚期黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、膀胱癌、霍奇金淋巴瘤、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、急性骨髓性白血病(aml)、梅克尔细胞癌、多发性骨髓瘤、宫颈癌、和肉瘤。
31.在实施方案中，所述一种或多种另外的免疫调节剂是免疫检查点调节因子的抑制剂或拮抗剂、或针对免疫检查点调节因子的疫苗。在实施方案中，所述一种或多种另外的免疫调节剂是免疫免疫检查点调节因子(诸如共刺激分子)的激动剂，例如ox40(cd134)的激动剂。在实施方案中，所述免疫检查点调节因子选自程序化细胞死亡1(pd-1)受体(cd279)、pd-1(例如，pd-l1)的配体、细胞毒性t-淋巴细胞相关蛋白4(ctla4)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(可替代地，tnfrsf9、4-1bb)和4-1bb配体、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(可替代地，tnfrsf4、ox40)和ox40配体、糖皮质激素诱导的tnfr相关蛋白(gitr)、肿瘤坏死因子受体超家族成员7(可替代地，tnfrsf7、分化簇27、cd27)、tnfrsf25和tnf样配体1a(tl1a)、tnf受体超家族成员5(可替代地，tnfrsf5、cd40)和cd40配体、疱疹病毒进入介体(hvem)-肿瘤坏死因子配体超家族成员14(可替代地，tnfsf14、light)-淋巴毒素α(lta)、疱疹病毒进入介体-(hvem)-b-和t-淋巴细胞弱化因子(btla)-cd160(可替代地，tnfsf14)、淋巴细胞激活基因3(lag3)、t细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域分子-3(tim3)、唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(siglec)、诱导t细胞共刺激因子(icos)和icos配体、b7-h3(b7家族，可替代地cd276)、含有v-set结构域的t细胞激活抑制因子1(vtcn1，可替代地b7-h4)、含有v型免疫球蛋白结构域的t细胞激活抑制因子(vista)、人内源性逆转录病毒-h长末端重复关联蛋白2(hhla2)-跨膜和免疫球蛋白结构域2(tmigd2)、嗜乳脂蛋白、自然杀伤细胞受体2b4(可替代地，nkr2b4、cd244)和b细胞膜蛋白(cd48)、具有免疫球蛋白(ig)和免疫受体酪氨酸基抑制基序结构域(tigit)的t细胞免疫受体及脊髓灰质炎病毒受体(pvr)家族成员、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)、免疫球蛋白样转录物(ilt)和白细胞免疫球蛋白样受体(lir)、自然杀伤细胞2族蛋白成员d(nkg2d)和自然杀伤细胞2族蛋白成员a(nkg2a)、主要组织相容性复合体(mhc)i类多肽相关序列a(mica)和mhc i类多肽相关序列b(micb)、自然杀伤细胞受体2b4(cd244)、集落刺激因子1受体(csf1r)、吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)、转化生长因子β(tgfβ)、腺苷-外核苷酸酶三磷酸二磷酸水解酶1(cd39)-5'-核苷酸酶(cd73)、c-x-c基序趋化因子受体4(cxcr4)和c-x-c基序趋化因子配体12(cxcl12)、磷脂酰丝氨酸、信号调节蛋白α(sirpa)和整合素相关蛋白(cd47)、血管内皮生长因子(vegf)、和神经菌毛素。
32.在实施方案中，所述一种或多种另外的免疫调节剂是疫苗。
33.在用于治疗癌症的方法的实施方案中，所述疫苗是针对肿瘤抗原的疫苗。在实施方案中，所述肿瘤抗原选自糖蛋白100(gp100)、粘蛋白1(muc1)、和黑色素瘤相关抗原3(magea3)。
34.在实施方案中，所述一种或多种另外的免疫调节剂是t细胞，优选嵌合抗原受体t
细胞。在实施方案中，所述一种或多种另外的免疫调节剂是重组蛋白，优选选自粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、白介素7(il-7)、il-12、il-15、il-18、和il-21。
35.在任何前述方法的实施方案中，所述组合物可以包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
36.在实施方案中，本公开文本提供了一种用于治疗需要这种治疗的受试者的肝脏疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。在实施方案中，所述肝脏疾病或障碍选自肝癌、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、和由所述丙型肝炎病毒(hcv)或所述乙型肝炎病毒(hbv)感染引起的疾病或障碍。
37.在任何前述方法的实施方案中，受试者可以是脊椎动物。在实施方案中，受试者是人。
38.本公开文本还提供了一种疫苗组合物或疫苗佐剂组合物，其包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物，以及载体。
39.在实施方案中，本公开文本提供了一种疫苗组合物或疫苗佐剂组合物，其包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
40.在实施方案中，本公开文本提供了一种药物组合物，其包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
41.在实施方案中，本公开文本提供了一种治疗需要这种治疗的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，所述方法进一步包括向所述受试者施用pd-1/pd-l1抑制剂或免疫共刺激分子的激动剂。在实施方案中，所述pd-1/pd-l1抑制剂选自纳武单抗、派姆单抗、匹迪单抗、bms-936559、阿特珠单抗、度伐鲁单抗、和阿维鲁单抗。在实施方案中，所述免疫共刺激分子的激动剂是抗ox40(cd134)激动剂抗体。根据前述方法，所述受试者可以是人类受试者并且所述癌症可以是如上文所述的癌症。在实施方案中，所述癌症是实体瘤。在实施方案中，所述癌症是难治的。
42.本公开文本进一步提供了一种用于疗法的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
43.本公开文本还提供了一种用于在调节需要这种治疗的受试者的免疫反应的方法中使用的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
44.本公开文本还提供了一种用于在治疗需要这种治疗的受试者的癌症的方法中使用的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
45.本公开文本还提供了一种用于在增强需要这种治疗的受试者的免疫反应的方法中使用的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
46.本公开文本还提供了一种用于在治疗需要这种治疗的受试者的可通过激活受试者细胞中的nfkb、p38、和jnk细胞信号传导通路的治疗而改善的疾病或障碍的方法中使用的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和
衍生物。
47.本公开文本还提供了一种用于治疗或预防有需要的受试者的由选自细菌、病毒、或寄生生物的感染原引起的疾病或障碍的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物。
48.本公开文本还提供了一种用于在治疗需要这种治疗的受试者的癌症的方法中使用的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物，并且所述方法包括所述alpk1激动剂与免疫调节剂的组合疗法，所述免疫调节剂选自免疫检查点调节因子的抑制剂或拮抗剂、免疫刺激分子、和免疫共刺激分子的激动剂中的一种或多种。
49.本公开文本还提供了一种用于在治疗需要这种治疗的受试者的肝脏疾病或障碍的方法中使用的组合物，所述组合物包含本文所述的式i、ia、ib、ic、1d或1e的化合物及其前药、类似物和衍生物，其中所述肝脏疾病或障碍任选地选自肝癌、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、和由丙型肝炎病毒(hcv)或乙型肝炎病毒(hbv)的感染引起的疾病或障碍。
附图说明
50.图1：细菌h1b-adp-生物合成通路的示意图。
51.图2a-c：在静脉内注射hbv后在hbv-aav小鼠模型中，腹膜内注射化合物28(0.1mg/kg)导致(a)hbv dna表达(拷贝/μl)的下调，并且导致更低的(b)血清中hbsag水平以及(c)血清中hbeag。
52.图3：与单独注射hbsag，adw时相比，hbsag，adw 化合物28(以1nmol的剂量注射)在小鼠中展现出针对hbsag，adw增加的igg反应。n＝8/组。
53.图4a-c：当用30μg/剂量猪胰弹性蛋白酶(ppe)腹膜内注射时，化合物28(4nmol和20nmol)引起(a)嗜酸性粒细胞，(b)树突细胞和(c)嗜中性粒细胞的产生降低。*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001，t检验。
54.图5a-b：在皮下注射作为阴性对照的pbs或者10nmol化合物15或化合物28的c57/b6小鼠中，在治疗后24小时(a)或48小时(b)时的rantes水平，n＝3只动物/组。通过ms inflammation cba试剂盒(bd 552364)分析血清中的rantes水平。
55.图6：将hek293细胞用h1b-adp衍生物(a1、a2、a3和a4)或化合物28处理4小时，然后使用il-8酶联免疫测定(elisa)分析il-8分泌。il-8分泌指示alpk1激活。示出了ec50值。
56.图7a-b：将hek293-nfkb-ap报告细胞用h1b-adp衍生物a1、a2、a3、a4(a)；或a18、a26、a27、a28和a30(b)处理。在每个实验中都包括化合物28用于参考。将细胞用化合物处理7小时，然后使用磷酸对硝基苯酯(pnpp)作为底物分析分泌的碱性磷酸酶。nf-kb驱动的碱性磷酸酶表达指示alpk1激活。示出了ec50值。化合物a18没有任何活性，并且图中未示出。
具体实施方式
57.本公开文本提供了作为adp-庚糖生物合成通路中的某些细菌代谢物的衍生物的化合物、包含其的组合物以及其在疗法中的使用方法。定义
58.如本文所用，术语“alpk1”可以指人alpk1基因的两个剪接变体同种型1或同种型2
之一。各同种型共享相同的激酶结构域。对于参考，人alpk1基因由entrez基因id 80216鉴定。
59.如本文所用，术语“alpk1的激活”是指alpk1激酶活性的激活。在实施方案中，本公开文本提供了通过提供alpk1激动剂激活alpk1的方法，所述alpk1激动剂可以是例如alpk1激活配体，诸如hbp，或其前药、类似物或衍生物。用于制造合成hbp的方法是已知的，例如，如在inuki s等人organic letter 2017 19(12):3079-82中所述。在实施方案中，所述alpk1激动剂选自hmp-1bp和h1b-adp及其前药、类似物或衍生物。在实施方案中，所述alpk1激动剂是h1b-adp，或其前药、类似物或衍生物。在一些实施方案中，本公开文本提供了通过提供由式i、ia、ib、ic、1d或1e表示的alpk1激动剂激活alpk1的方法。
60.如本文所用，术语“烷基”是指具有所指示数目的碳原子的直链或支链的饱和脂族基团。烷基可以包含任何数目的碳，诸如c1-2、c1-3、c1-4、c1-5、c1-6、c1-7、c1-8、c1-9、c1-10、c2-3、c2-4、c2-5、c2-6、c3-4、c3-5、c3-6、c4-5、c4-6和c5-6。例如，c1-6烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。烷基还可以指具有最多20个碳原子的烷基，诸如但不限于庚基、辛基、壬基、癸基等。烷基可以是经取代或未经取代的。在一些实施方案中，烷基是被1-2个取代基取代的。作为非限制性例子，合适的取代基包括卤素和羟基。
61.如本文所用，“烯基”是指具有至少2个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃。烯基可以包含任何数目的碳，诸如c2、c
2-3
、c
2-4
、c
2-5
、c
2-6
、c
2-7
、c
2-8
、c
2-9
、c
2-10
、c3、c
3-4
、c
3-5
、c
3-6
、c4、c
4-5
、c
4-6
、c5、c
5-6
、和c6。烯基可以具有任何合适数目的双键，包括但不限于1、2、3、4、5或更多个。烯基可以是经取代或未经取代的。
62.如本文所用，术语“亚烷基”是指具有所指示数目的碳原子并且连接至少两个其他基团的直链或支链的饱和脂族基团，即二价烃基。与亚烷基连接的两个部分可以连接至亚烷基的相同原子或不同原子。例如，直链亚烷基可以是-(ch2)n-的二价基团，其中n是1、2、3、4、5或6。代表性亚烷基包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、异亚丙基、亚丁基、异亚丁基、仲亚丁基、亚戊基和亚己基。亚烷基可以是经取代或未经取代的。在一些实施方案中，亚烷基是被1-2个取代基取代的。作为非限制性例子，合适的取代基包括卤素和羟基。
63.如本文所用，术语“烷氧基(alkoxy或alkoxyl)”是指具有氧原子的烷基，所述氧原子将所述烷基连接至附接点：烷基-o-。至于烷基，烷氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c1-6。烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、2-丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。烷氧基可以是经取代或未经取代的。
64.如本文所用，术语“烯氧基(alkenyloxy或alkenyloxyl)”是指具有氧原子的如上所定义的烯基，所述氧原子将烯基连接至附接点：烯基-o-。烯氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c1-6。烯氧基可以进一步被其中所述的各种取代基取代。烯氧基可以是经取代或未经取代的。
65.如本文所用，术语“烷基胺”或“烷基氨基”是指具有氮原子的烷基，所述氮原子将所述烷基连接至附接点：烷基-n-。至于烷基，烷氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c1-6。
66.如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
67.如本文所用，术语“卤代烷基”是指其中一些或全部氢原子被卤素原子替代的如上
所定义的烷基。至于烷基，卤代烷基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c
1-6
。例如，卤代烷基包括三氟甲基、氟甲基等。
68.如本文所用，术语“卤代烷氧基(haloalkoxyl或haloalkoxy)”是指其中一些或全部氢原子被卤素原子取代的如上所定义的烷氧基。至于烷基，卤代烷氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c
1-6
。烷氧基可以被1、2、3或更多个卤素取代。
69.如本文所用，术语“烷酰基”是指具有羰基的烷基，所述羰基将烷基连接至附接点：烷基-c(o)-。至于烷基，烷酰氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c1-4。例如，烷酰基包括乙酰基、丙酰基、丁酰基等。
70.如本文所用，术语“烷酰氧基”是指具有氧原子的烷酰基，所述氧原子将烷酰基连接至附接点：烷基-c(o)-o-。至于烷基，烷酰氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c1-4。示例性烷酰氧基包括乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基等。
71.如本文所用，术语“氧代”是指通过双键(＝o)连接至附接点的氧原子。
72.如本文所用，术语“芳基”是指具有任何合适数目的环原子和任何合适数目的环的芳族环系。芳基可以包含任何合适数目的环原子，诸如6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个环原子以及从6至10、6至12、或6至14个环成员。芳基可以是单环的，稠合以形成双环或三环基团，或通过键连接以形成联芳基。代表性芳基包括苯基、萘基和联苯基。其他芳基包括具有亚甲基连接基团的苄基。一些芳基具有从6至12个环成员，诸如苯基、萘基或联苯基。其他芳基具有从6至10个环成员，诸如苯基或萘基。一些其他的芳基具有6个环成员，诸如苯基。芳基可以是经取代或未经取代的。在一些实施方案中，芳基是被1-2个取代基取代的。作为非限制性例子，合适的取代基包括卤素、羟基、-no2、c1-8烷基、c1-8烷氧基。
73.如本文所用，术语“芳烷氧基”是指具有烷基和氧原子的如上所定义的芳基，所述氧原子将芳基连接至附接点：芳基-烷基-o-。至于烷基，芳烷氧基可以具有任何合适数目的碳原子，诸如c1-4。
74.如本文所用，术语“杂芳基”是指含有5至12个环原子的单环或稠合双环芳族环组件，其中1至5个环原子是杂原子，诸如n、o或s。另外的杂原子也可以是有用的，包括但不限于b、al、si和p。杂原子也可以被氧化，诸如但不限于-s(o)-和-s(o)
2-。杂芳基可以包括任何数目的环原子，诸如3至6、4至6、5至6、3至8、4至8、5至8、6至8、3至9、3至10、3至11、或3至12个环成员。杂芳基中可以包含任何合适数目的杂原子，诸如1、2、3、4、或5、或1至2、1至3、1至4、1至5、2至3、2至4、2至5、3至4、或3至5。杂芳基可以具有从5至9个环成员和从1至4个杂原子、或从5至9个环成员和从1至3个杂原子、或从5至6个环成员和从1至4个杂原子、或从5至6个环成员和从1至3个杂原子。杂芳基可以包括诸如吡咯、吡啶、咪唑、吡唑、三唑、四唑、吡嗪、嘧啶、哒嗪、三嗪(1,2,3-、1,2,4-和1,3,5-异构体)、嘌呤。杂芳基也可以稠合至芳族环系，诸如苯基环，以形成包括但不限于以下的成员：苯并吡咯，诸如吲哚和异吲哚；苯并吡啶，诸如喹啉和异喹啉、苯并吡嗪(喹喔啉)、苯并嘧啶(喹唑啉)；苯并哒嗪，诸如酞嗪和噌啉；苯并噻吩；和苯并呋喃。其他杂芳基包括通过键连接的杂芳基环，诸如联吡啶。杂芳基可以是经取代或未经取代的。
75.如本文所用，“环烷基”是指含有从3至8个环原子或所指示数目的原子的饱和环组件。环烷基可以包含任何数目的碳，诸如c
3-6
、c
4-6
、c
5-6
、c
3-8
、c
4-8
、c
5-8
、c
6-8
。环烷基环包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、和环辛基。环烷基可以是经取代或未经取代的。
76.如本文所用，“杂环基”是指具有3至12个环成员和1至4个n、o和s中的杂原子的饱和环系。另外的杂原子也可以是有用的，包括但不限于b、al、si和p。杂原子也可以被氧化，诸如但不限于-s(o)-和-s(o)
2-。n原子可以进一步被取代以形成叔胺或铵盐。杂环烷基可以包括任何数目的环原子，诸如3至6、4至6、5至6、3至8、4至8、5至8、6至8、3至9、3至10、3至11、或3至12个环成员。杂环烷基中可以包含任何合适数目的杂原子，诸如1、2、3、或4，或1至2、1至3、1至4、2至3、2至4、或3至4个。杂环烷基可以包括诸如以下的基团：氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷、氮杂环辛烷、奎宁环、吡唑烷、咪唑烷、哌嗪(1,2-、1,3-和1,4-异构体)、环氧乙烷、四氢呋喃、噁烷(四氢吡喃)、氧杂环庚烷、硫杂环戊烷(四氢噻吩)、硫杂环己烷(四氢噻喃)、噁唑烷、异噁唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、二氧戊环、二硫杂环戊烷、吗啉等。杂环烷基可以是未经取代的或经取代的。例如，杂环烷基尤其可以被c
1-6
烷基或氧代(＝o)取代。
77.本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体、区域异构体和单独的异构体(例如，单独的对映异构体)均旨在涵盖在本发明的范围内。在一些实施方案中，本发明的化合物是基本上不含其他形式的特定对映异构体、异头物、或非对映异构体。
78.本公开文本的某些化合物包含一个或多个硫代磷酸酯部分。本公开文本总体上将硫代磷酸酯部分显示为
79.然而，本领域技术人员应认识到硫代磷酸酯部分可以与以下相互转化
80.本公开文本的硫代磷酸酯部分的所有稳定相互转化都在本技术的范围内。
81.如本文所用，术语“基本上不含”是指10％或更少量的另一种形式，优选8％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、或更少量的另一种形式。在一些实施方案中，异构体是立体异构体。实施方案的详细描述
82.本公开文本提供了由式(i)的表示的化合物、由式i表示的化合物、或其立体异构体、互变异构体、稳定同位素、前药或药学上可接受的盐：其中
83.a1和a2独立地选自o、s和-c(r8r9)-，其中r8和r9独立地选自h、d、-oh、n3、-cn、卤素
和任选的经取代的基团，所述任选的经取代的基团选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烯氧基和芳烷氧基，其中所述任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基；a1或a2中的至少一个是-c(r8r9)；其中a1中的r8或r9可以与a2中的r8或r9环化以形成c3-c6环烷基和含有3至9个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，各自任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基取代；l1和l2独立地选自o、ch2、chf和cf2；l3是o、s、ch2或ch(oh)；z1和z2独立地选自o和s；w1是-c(r
10r11
)-，其中r
10
和r
11
独立地选自h、d、-oh、卤素、和选自以下的任选经取代的基团：c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4-卤代烷氧基、c1-c4烯氧基、芳烷氧基、经由c-末端c(o)o-连接的1-6元寡肽基和r
12
co
2-，其中r
12
选自c1-c20烷基、c1-c20烯基、c1-c20烷氧基、c1-c20烯氧基、c1-c20烷基氨基、c3-c6环烷基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基和经由n-末端n连接的1-6元寡肽基；其中对于r
10
和r
11
的任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基；并且
84.当w1是-c(r
10r11
)-时，其中r
10
是f，并且其他如上所定义，w2是h或任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基、c1-c3烯氧基和r
12
co
2-的取代基取代的c1-c3烷基，其中r
12
是c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷基氨基、c3-c6环烷基、含有3至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的环杂烷基、c6-c10芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；
85.w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1选自-o-或-nh-；w3选自键或任选地被1-3个独立地选自卤素、-oh、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基、c1-c3烯氧基的取代基取代的c1-c3亚烷基；其中r
13
是经由c-末端羰基连接的1-6元寡肽基或r
14
q2c(o)-；其中q2是键、-o-或-nh-；r
14
是经由n-末端n连接的1-6元寡肽基或选自c5-c20烷基、c5-c20亚烷基和r
15-q
3-q
4-q
5-的任选经取代的基团；其中q3、q4和q5独立地选自键、芳基、含有5至6个环原子的杂芳基、c3-c6环烷基和含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，并且q3、q4和q5中至少有一个不是键；r
15
是选自c1-c18烷基和c1-c18烷氧基的任选经取代的基团，其中对于r
14
和r
15
的所述任选的取代基是1-3个独立地选自卤素、-oh、-co2h、c1-c4烷氧基羰基、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷氧基c3-c6环烷基和c3-c6环烷氧基的取代基；
86.r1是芳基或含有6至10个环原子并且具有1-4个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基，其中r1任选地被1-3个选自以下的取代基取代：d、卤素、-oh、＝o、cn、nh2和选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、(r
16r17
)n-和(r
16r17
)nco-的任选经取代的基团，其中r
16
和r
17
独立地选自h和选自以下的任选经取代的基团：c1-c4烷基、c3-c6环烷基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、芳基、芳烷基、含有5至10个环原子
并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基烷基；其中所述任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、cn、nh2和c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基和c3-c6环烷基的取代基；
87.r2、r3和r4独立地选自h、d、卤素、c1-c4烷基和c1-c4卤代烷基；
88.r5、r6和r7独立地选自h、-oh、卤素和r
12
co
2-，并且r5、r6和r7中的至少两个是-oh或r
12
co
2-，其中r
12
选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烯氧基、c1-c4烷基氨基、c3-c6环烷基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、c6-c10芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；其中r5、r6和r7中的任何两个相邻基团可以环化以形成含有5至9个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，各自任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基取代。
89.在一些实施方案中，式i的化合物由式ia的化合物和/或其立体异构体、稳定同位素、前药或药学上可接受的盐表示：
90.其中：y1和y2独立地选自h、d、-oh、n3、-cn、卤素和选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烯氧基和芳烷氧基的任选经取代的基团；其中所述任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基；并且r
1-r7、l
1-l3、z1、z2、w1和w2是上面定义的。
91.在一些实施方案中，式ia的化合物中的y1和y2独立地选自h、d、-oh、卤素、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、和c1-c4烯氧基；并且r
1-r7、l
1-l3、z1、z2、w1和w2如上所定义。
92.在一些实施方案中，式ia的化合物中的y1和y2独立地选自-oh、卤素、c1-c4烷基、和c1-c4烷酰氧基；并且r
1-r7、l
1-l3、z1、z2、w1和w2是上面定义的。
93.在一些实施方案中，式i的化合物由式ib的化合物和/或其立体异构体、稳定同位素、前药或药学上可接受的盐表示：
其中：n1和n2各自是独立地选自0-2的整数；x1和x2独立地选自h、d、-oh、n3、-cn、卤素和选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烯氧基和芳烷氧基的任选经取代的基团；其中所述任选的取代基是1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c4烷基和c1-c4烷氧基的取代基；并且r
1-r7、l
1-l3、z1、z2、w1和w2是上面定义的。
94.在一些实施方案中，式ib的n1和n2各自是0。
95.在一些实施方案中，式ib的x1和x2独立地选自h、d、c1-c4烷氧基和c1-c4烷基；并且r
1-r7、l
1-l3、z1、z2、w1和w2是上面定义的。
96.在一些实施方案中，式i的化合物由式ic的化合物和/或其立体异构体、稳定同位素、前药或药学上可接受的盐表示：其中：a1是-c(r
10r11
)-、o或s；并且r
1-r9、l
1-l3、z1、z2、w1和w2是上面定义的。
97.在一些实施方案中，式i、ia、ib、和ic中的r2、r3、和r4各自是h。
98.在一些实施方案中，式i、ia、ib、和ic中的r5、r6、和r7各自独立地选自-oh、和c1-c4烷酰氧基-。
99.在一些实施方案中，在式i、ia、ib、和ic中，l3是o。
100.在一些实施方案中，在式i、ia、ib、和ic中，l2是o。
101.在一些实施方案中，在式i、ia、ib、和ic中，l1是o或s。
102.在一些实施方案中，式i、ia、ib、和ic中的w1是-c(r
10r11
)-，其中r
10
和r
11
独立地选自h、d、-oh、卤素、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4-卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烯氧基、r
12
co
2-，其中r
12
选自c1-c20烷基、c1-c20烷氧基、c1-c20烷酰氧基和c1-c20烯氧基。
103.在一些实施方案中，式i、ia、ib、和ic中的w1是-c(r
10r11
)-，其中r
10
和r
11
独立地选自h、d、-oh、卤素和c1-c10烷酰氧基。
104.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1是-o-；w3是c1亚烷基，并且r
13
是经由c-末端羰基连接的1-6元寡肽基；
105.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1是-o-；w3是c1亚烷基并且r
13
是r
14
q2c(o)-；其中r
14
是经由n-末端基团连接的1-6元寡肽基，q2是键；
106.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1是-o-；w3是c1亚烷基，并且r
13
是r
14
q2c(o)-；其中r
14
是选自c5-c20烷基和c5-c20亚烷基的任选经取代的基团，q2是键；
107.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1是-o-；w3是c1亚烷
基，并且r
13
是r
14
q2c(o)-；q2是键，其中r
14
是选自r
15-q
3-q
4-q
5-的任选经取代的基团；其中q3、q4和q5独立地选自键、芳基、含有5至6个环原子的杂芳基、c3-c6环烷基和含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基，并且q3、q4和q5中至少有一个不是键；r
15
是选自c1-c18烷基和c1-c18烷氧基的任选经取代的基团，其中对于r
14
和r
15
的所述任选的取代基是1-3个独立地选自卤素、-oh、-co2h、c1-c4烷氧基羰基、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷氧基c3-c6环烷基和c3-c6环烷氧基的取代基；
108.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1是-o-；w3是c1亚烷基，并且r
13
是r
14
q2c(o)-；q2是键，其中r
14
是选自r
15-q
3-q
4-q
5-的任选经取代的基团；其中q3、q4和q5独立地选自键、芳基，并且q3、q4和q5中的至少一个不是键；r
15
是选自c1-c18烷基和c1-c18烷氧基的任选经取代的基团，其中对于r
14
和r
15
的所述任选的取代基是1-3个独立地选自卤素、-oh、-co2h、c1-c4烷氧基羰基、c1-c4烷基、c1-c4卤代烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷氧基c3-c6环烷基和c3-c6环烷氧基的取代基；
109.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的w2是r
13-q
1-w
3-，其中q1是-o-；w3是c1亚烷基，并且r
13
是r
14
q2c(o)-；其中r
14
是选自c5-c20烷基的任选经取代的基团，并且q2是键；
110.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的r1选自
111.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的r1选自
112.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的r1选自
113.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的r1选自
其中
114.r
18
和r
19
独立地选自h和选自杂环基c6-c10芳基烷基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基烷基、r
20
co-和r
21
s(o)
2-的任选经取代的基团；其中对于1-3个取代基的取代基独立地选自卤素、oh、＝o、cn、nh2、c1-c3烷基、c1-c3卤代烷基、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷氧基、c3-c6环烷基、c3-c6环烷氧基、含有4至6个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、c6-c10芳基、c6-c10卤代芳基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基、和含有5至10个环原子并且具有1至3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的卤代杂芳基；r
20
和r
21
是c1-c20烷基、c1-c20烯基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、c6-c10芳基、c6-c10卤代芳基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的卤代杂芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的卤代杂芳基。
115.在一些实施方案中，式i、ia、ib和ic中的r1选自其中r
22
和r
23
独立地选自h、d卤素、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4-环烷基和c1-c4-环烷氧基。
116.在一些实施方案中，式i的化合物由式id的化合物和/或其立体异构体、稳定同位素、前药或药学上可接受的盐表示：其中r
5-r7、r
10
、r
14
、r
18
、q1、y1、y2、z1和z2如上所定义。
117.在一些实施方案中，式i的化合物由式ie的化合物和/或其立体异构体、稳定同位
素、前药或药学上可接受的盐表示：其中
118.z1和z2独立地选自o和s，其中z1和z2中的至少一个是s；
119.w2是h或任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基、c1-c3烯氧基和r
12
co
2-的取代基取代的c1-c3烷基，其中r
12
是c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷基氨基、c5-c20烷基、c5-c20烯基、c5-c20烷氧基、c5-c20烯氧基、c5-c20烷基氨基、c3-c6环烷基、含有3至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的环杂烷基、芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基；并且r
1-r7、r
11
、l
1-l3、y1、y2和w2是上面定义的。
120.在式ie的实施方案中，z2是s并且z1是o。
121.在式ie的实施方案中，z2是s并且z1是s。
122.在式ie的实施方案中，r2、r3和r4各自是h。
123.在式ie的实施方案中，r5、r6和r7各自独立地选自-oh、和c1-c4烷酰氧基。
124.在式ie的实施方案中，l3是o。
125.在式ie的实施方案中，l2是o。
126.在式ie的实施方案中，l1是o。
127.在式ie的实施方案中，r
11
选自h、d、-oh、卤素、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4-卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基、c1-c4烯氧基和r
12
co
2-，其中r
12
选自c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4烷酰氧基和c1-c4烯氧基。
128.在式ie的实施方案中，r
11
选自h、d、-oh和卤素。
129.在式ie的实施方案中，r
11
是h。
130.在式ie的实施方案中，w2是任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh、＝o和c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷基、c1-c3卤代烷氧基、c1-c3烯氧基和r
12
co
2-的取代基取代的c1-c3烷基，其中r
12
是c1-c烷基、c1-c4烷氧基和c1-c4烷基氨基。
131.在式ie的实施方案中，w2是任选地被1-3个独立地选自d、卤素、-oh和r
12
co
2-的取代基取代的c1-c3烷基，其中r
12
是c1-c3烷基。
132.在式ie的实施方案中，w2是任选地被1个选自-oh和r
12
co
2-的取代基取代的c1烷基，其中r
12
是c1-c3烷基。
133.在实施方案中，当w2是r
12
co
2-时，r
12
选自c5-c20烷基、c5-c20烯基、c5-c20烷氧基、c5-c20烯氧基、c5-c20烷基氨基，并且式ie中的r1选自
134.在实施方案中，式ie中的r1选自
135.在实施方案中，式ie中的r1选自
136.在实施方案中，式ie中的r1选自其中
137.r
18
和r
19
独立地选自h和选自杂环基c6-c10芳基烷基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基烷基、r
20
co-和r
21
s(o)
2-的任选经取代的基团；其中对于1-3个取代基的取代基独立地选自卤素、oh、＝o、cn、nh2、c1-c3烷基、c1-c3卤代烷基、c1-c3烷氧基、c1-c3卤代烷氧基、c3-c6环烷基、c3-c6环烷氧基、含有4至6个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、c6-c10芳基、c6-c10卤代芳基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂芳基、和含有5至10个环原子并且具有1至3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的卤代杂芳基；r
20
和r
21
是c1-c20烷基、c1-c20烯基、含有4至6个环成员并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的杂环基、c6-c10芳基、c6-c10卤代芳基、含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的卤代杂芳基、和含有5至10个环原子并且具有1-3个选自n、o和s的杂原子作为环成员的卤代杂芳基；
138.在实施方案中，式ie中的r1选自
其中r
22
和r
23
独立地选自h、d卤素、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4-环烷基和c1-c4-环烷氧基。
139.在一些实施方案中，当w2是r
12
co
2-时，r
12
选自c5-c20烷基、c51-c20烯基、c5-c20烷氧基、c5-c20烯氧基、c5-c20烷基氨基，并且式ie中的r1是
140.在实施方案中，y1和y2独立地选自h、d、-oh、卤素、c1-c4烷基、c1-c4烷氧基、c1-c4卤代烷基、c1-c4卤代烷氧基、c1-c4烷酰氧基和c1-c4烯氧基。
141.在实施方案中，y1和y2独立地选自-oh、卤素、c1-c4烷基和c1-c4烷酰氧基。
142.在实施方案中，y1和y2各自是-oh。
143.在实施方案中，式i的化合物选自
[0144][0144][0145][0146][0147]
[0148][0149][0150][0151][0152][0153][0153][0154][0155]
[0156][0156][0157][0158][0159][0160]
在实施方案中，式ie的化合物选自
[0161][0162]
[0163][0164][0165]
在实施方案中，式i的化合物是本技术的实施例中所述的化合物。
[0166]
可以使用方案i、ii、iii、iv、v、vi和vii中所述的通用方法以及示例性实施方案中所述的技术来制备本公开文本的化合物。
[0167]
在实施方案中，本公开文本提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的式1的化合物和药学上可接受的载体。
[0168]
在一些实施方案中，相对于参考化合物，本文所述的式i的化合物的生物活性得到改善。在一些实施方案中，参考化合物是d-甘油-d-甘露-庚糖-1β-adp(本文也称为h1badp或h1b-d-adp)，其具有以下结构或其非对映异构体l-甘油-d-甘露-庚糖-1β-adp(在本文中也称为h1b-adp-6l或h1b-l-adp)。
[0169]
在实施方案中，本公开文本提供了一种alpk1激动剂，其呈本文所述式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的形式。
[0170]
在实施方案中，本公开文本提供了通过施用本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物治疗癌症的方法。在所述治疗癌症的方法的进一步实施方案中，本公开文本提供了一种组合疗法，其包括施用本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物与免疫检查点调节剂的组合，所述免疫检查点调节剂选自检查点抑制剂(诸如抗pd-1/pd-l1抗体)和免疫共刺激分子的激动剂(诸如抗ox40(cd134)激动剂抗体)。不受任何具体理论的束缚，诸位发明人提出，本文所述的h1b-adp及其衍生物可以促进肿瘤浸润抗原呈递细胞(apc)的抗原呈递功能以及肿瘤特异性t细胞增殖与分化。此外，这些分子还可以通过增加肿瘤细胞中的pd-l1表达来加强肿瘤特异性cd8

t细胞向肿瘤的募集。
[0171]
在实施方案中，本公开文本提供了调节受试者的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。
[0172]
在实施方案中，本公开文本提供了增强受试者对靶抗原的免疫反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，靶抗原可以是感染原的抗原，诸如细菌抗原、病毒抗原、或寄生生物的
抗原。在实施方案中，抗原是肿瘤抗原。根据这些实施方案中的任何一个，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以用作用于治疗或预防由感染原引起的疾病或障碍、或用于治疗癌症、或用于治疗可用疫苗组合物治疗的另一种疾病或障碍(包括例如阿尔茨海默氏病)的疫苗组合物的佐剂。在实施方案中，抗原选自治疗阿尔茨海默氏病的淀粉样蛋白。在实施方案中，抗原选自治疗癌症的糖蛋白100(gp100)、粘蛋白1(muc1)、和黑色素瘤相关抗原3(magea3)。在实施方案中，癌症选自乳腺癌、卵巢癌、或前列腺癌。在实施方案中，癌症是htlv-1t-嗜淋巴细胞白血病。
[0173]
在实施方案中，癌症是黑色素瘤，并且本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以用作talimogenelaherparepvec(t-vec)治疗的佐剂，或可以用于与t-vec的组合疗法方案中。
[0174]
在用于治疗或预防传染病的实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以用作用于治疗或预防炭疽、龋齿、美洲锥虫病、登革热、白喉、埃立克体病、甲型或乙型肝炎、疱疹、季节性流感、日本脑炎、麻风病、莱姆病、疟疾、麻疹、腮腺炎、包括脑膜炎和败血病的脑膜炎球菌病、盘尾丝虫河盲症、疫咳(百日咳)、肺炎球菌病、小儿麻痹症、狂犬病、风疹、血吸虫病、严重急性呼吸综合征(sars)、带状疱疹、天花、梅毒、破伤风、肺结核、兔热病、蜱传脑炎病毒、伤寒热、锥虫病、黄热病、和内脏利什曼病的疫苗组合物的佐剂。
[0175]
在用于治疗或预防传染病的实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以用作用于治疗或预防由以下引起的疾病或障碍的疫苗组合物的佐剂：腺病毒、乙型柯萨奇病毒、巨细胞病毒、东部马脑炎病毒、埃博拉病毒、肠病毒71、eb病毒、乙型流感嗜血杆菌(hib)、丙型肝炎病毒(hcv)、疱疹病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、人乳头瘤病毒(hpv)、钩虫、马尔堡病毒、诺如病毒、呼吸道合胞病毒(rsv)、轮状病毒、伤寒沙门氏菌(salmonella typhi)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、化脓链球菌(streptococcus pyogenes)、水痘、西尼罗病毒、鼠疫耶尔森杆菌(yersinia pestis)、和寨卡病毒的感染原的抗原。
[0176]
根据任何前述实施方案，所述方法可以包括施用包含本文所述式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的疫苗组合物或佐剂。
[0177]
在实施方案中，本公开文本提供了治疗可通过激活受试者细胞中的nfkb、p38、和jnk细胞信号传导通路的治疗而改善的疾病或障碍的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物。在实施方案中，所述疾病或障碍是由细菌感染、病毒感染或寄生生物感染引起的，如下文更详细描述，并且包括例如由丙型肝炎病毒(hcv)、乙型肝炎病毒(hbv)和人免疫缺陷病毒(hiv)引起的疾病和障碍。在实施方案中，所述疾病或障碍选自肺结核、脑膜炎、肺炎、溃疡、和脓毒症。在实施方案中，所述疾病或障碍选自鼻炎、哮喘、过敏、copd、炎性肠病、关节炎、肥胖症、辐射诱导的炎症、银屑病、特应性皮炎、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、阿尔茨海默氏病、系统性红斑狼疮(sle)、自身免疫性甲状腺炎(格雷夫病)、多发性硬化症、强直性脊柱炎和大疱性疾病。在实施方案中，所述疾病或障碍选自光化性角化病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、和斑秃。
[0178]
在实施方案中，本公开文本提供了治疗或预防有需要的受试者的细菌、病毒或寄生生物感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。
[0179]
在实施方案中，所述方法是治疗或预防细菌感染的方法。在实施方案中，所述细菌感染是由革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌引起的。在实施方案中，所述细菌是选自以下的革兰氏阴性细菌：鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumanii)、伴放线杆菌(aggregatobacteractinomycetemcomitans)、杆菌状巴尔通体(bartonella bacilliformis)、汉氏巴尔通体(bartonella.henselae)、五日热巴尔通体(bartonella quintana)、双歧杆菌疏螺旋体(bifidobacterium borrelia)、百日咳博德特氏菌(bortadella pertussis)、布鲁氏菌属物种(brucella sp)、洋葱伯克霍尔德菌(burkholderiacepacis)、类鼻疽伯克霍尔德菌(burkholderiapsedomallei)、空肠弯曲杆菌(campylobacter jejuni)、人心杆菌(cardiobacterium hominis)、胎儿弯曲杆菌(campylobacter fetus)、肺炎衣原体(chlamydia pneumonia)、沙眼衣原体(chlymydiatrahomatis)、艰难梭菌(clostridium difficile)、蓝藻细菌(cyanobacteria)、侵蚀艾肯菌(eikennellacorrodens)、肠杆菌(enterobacter)、粪肠球菌(enterococcus faccium)、大肠杆菌(escherichia coli)、大肠杆菌0157、土拉弗朗西斯菌(franceillatularensis)、具核梭杆菌(fusobacterium nucleatum)、流感嗜血杆菌(haemophilus influenza)、嗜沫嗜血杆菌(haemophilusaphrophilus)、杜克雷嗜血杆菌(haemophilusducreyi)、副流感嗜血杆菌(haemophilusparainfluenzae)、幽门螺杆菌(helicobacter pylori)、金格杆菌(kingellakingae)、肺炎克雷伯杆菌(klebsiella pneumonia)、军团杆菌(legionella bacteria)、嗜肺军团菌血清1型(legionella pneumophila serogroup 1)、钩端螺旋体属(leptospria)、摩氏摩根菌(morganella morganii)、淋病奈瑟氏菌(neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟氏菌(neisseria meningitidis)、奇异变形杆菌(proteus mirabilis)、普通变形杆菌(proteus vulgaris)、粘化变形杆菌(proteus myxofaciens)、雷氏普罗威登斯菌(providencia rettgeri)、产碱普罗威登斯菌(providencia alcalifaciens)、斯氏普罗威登斯菌(providencia stuartii)、绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、少动假单胞菌(pseudomonas paucimobilis)、恶臭假单胞菌(pseudomonas putida)、荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)、食酸假单胞菌(pseudomonas acidovorans)、立克次体属(rickettsiae)、肠道沙门氏菌(salmonella enterica)、伤寒沙门氏菌(salmonella typhi)、甲型副伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌(salmonella.dublin)、亚利桑那沙门氏菌(salmonella arizonae)、猪霍乱沙门氏菌(salmonella choleraesuis)、粘质沙雷氏菌(serratia marcescens)、痢疾志贺氏菌(schigelladysenteriae)、福氏志贺氏菌(schigellaflexneri)、鲍氏志贺氏菌(schigella boydii)、宋内志贺氏菌(schigellasonnei)、密螺旋体属(treponema)、嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)、霍乱弧菌(vibrio cholerae)、拟态弧菌(vibrio mimicus)、溶藻弧菌(vibrio alginolyticus)、霍氏弧菌(vibrio hollisae)、副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)、创伤弧菌(vibrio vulnificus)和鼠疫耶尔森杆菌(yersinia pestitis)。
[0180]
在实施方案中，所述细菌是选自以下的革兰氏阳性细菌：放线菌属(actinomycetes)、炭疽杆菌(bacillus anthracis)、枯草杆菌(bacillus subtilis)、破伤风梭菌(clostridium tetani)、产气荚膜梭菌(clostridium.perfingens)、肉毒梭菌(clostridium botulinum)、破伤风梭菌(clostridium tetani)、白喉棒状杆菌
virus)、马雅罗病毒(mayaro virus)、mers冠状病毒、麻疹病毒(measles virus)、门戈脑心肌炎病毒(mengo encephalomycarditis virus)、梅克尔细胞多瘤病毒、接触传染性软疣(mlluscum contagiosum)、细小病毒(parvovirus)b19、莫科拉病毒(mokola virus)、腮腺炎病毒(mumps virus)、墨累山谷脑炎蚊传病毒(murray valley encephalitis virus)、纽约病毒(new york virus)、尼帕病毒(nipha virus)、诺瓦克病毒(norwalk virus)、阿尼昂尼昂病毒(o’nyong-hyong virus)、口疮病毒(orf virus)、奥罗普切病毒(oropouche virus)、正粘病毒(orthomyxovirus)、副流感病毒(parainfluenza virus)、副粘病毒(paramyxovaris)、细小病毒(parvovirus)、phchinde virus、小核糖核酸病毒(picomavirus)、脊髓灰质炎病毒(poliovirus)、多瘤病毒、痘病毒(poxvirus)、庞塔托鲁白蛉热病毒(punta toro phleboviris)、普马拉病毒(puumala virus)、弹状病毒(rabdovirus)、狂犬病病毒(rabies virus)、呼吸道肠道病毒(reovirus)、鼻病毒(rhinovirus)、呼吸道合胞体病毒(respiratory syncytial virus)、裂谷热病毒(rift valley fever virus)、rosavirus a、罗斯河病毒(ross river virus)、轮状病毒a(rotavirus a)、轮状病毒b(rotavirus b)、轮状病毒c(rotavirus c)、风疹病毒(rubella virus)、鹭山病毒(sagiyama virus)、salivirus a、白蛉热西西里病毒(sandfly fever sicillian virus)、扎幌病毒(sapporo virus)、塞姆利基森林病毒(semliki forest virus)、汉城病毒(seoul virus)、猿猴泡沫病毒(simian foamy virus)、猿猴病毒(simian virus)5、辛德毕斯病毒(sindbis virus)、南安普敦病毒(southampton virus)、圣路易斯脑炎病毒(st.louis encephalitis virus)、蜱传波瓦森病毒(tick-borne powassan virus)、囊膜病毒(togavirus)、细环病毒(torque virus)、托斯卡纳病毒(toscana virus)、尤库尼米病毒(uukuniemi virus)、逗苗病毒(vaccina virus)、水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus)、天花病毒(variola virus)、委内瑞拉马脑炎病毒(venezuelan equine encephalitis virus)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitits virus)、西方马脑炎病毒(western equine encephalitis virus)、uu多瘤病毒、西尼罗病毒(west nile virus)、雅巴猴肿瘤病毒(yaba monkey tumor virus)、雅巴样病病毒(yaba-like disease virus)、黄热病病毒(yellow fever virus)和寨卡病毒(zika virus)。
[0182]
在实施方案中，所述方法是治疗或预防寄生生物感染的方法。在实施方案中，所述寄生生物感染是由选自以下的寄生生物引起的：棘阿米巴属物种(acanthamoeba spp)、美洲锥虫病(american tryppanosomiasis)、狒狒巴拉姆希阿米巴(balamuthia mandnillanis)、分歧巴贝虫(babesia divergenes)、双芽巴贝虫(babesia bigemina)、马巴贝西虫(babesia equi)、微小巴贝西虫(babesia microfti)、邓肯巴贝西虫(babesia duncani)、结肠小袋绦虫(balantidium coli)、芽囊原虫属物种(blastocystis spp)、隐孢子虫属物种(cryptosporidium spp)、环孢子虫(cyclospora cayetanensis)、脆弱双核阿米巴(dientamoeba fragilis)、阔节裂头绦虫(diphyllobothrium latum)、亚马逊利什曼原虫(leishmania amazonesis)、福氏纳格里阿米巴原虫(naegleria fowderi)、恶性疟原虫(plasmodium falciparum)、间日疟原虫(plasmodium vivax)、卵形疟原虫柯氏亚种(plasmodium ovalecurtisi)、三日疟原虫(plasmodium malariae)、西伯氏鼻孢子虫(rhinosporidiumseeberi)、牛-人肉孢子虫(sarcocystisbovihominis)、猪人肉孢子虫
(sarcocystisssuihominis)、刚地弓形虫(toxoplasma gondii)、阴道滴虫(trichmonas vaginalis)、布氏锥虫(trypanosoma brucei)、克氏锥虫(trypanosoma cruzi)、和多头绦虫(taenia multiceps)。
[0183]
在实施方案中，本公开文本提供了治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的组合物。在实施方案中，所述癌症选自软组织肉瘤、乳腺癌、头颈癌、黑色素瘤、宫颈癌、膀胱癌、血液系统恶性肿瘤、胶质母细胞瘤、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、肺癌、梅克尔细胞癌、小肠癌、甲状腺癌、急性骨髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、胃癌、胃肠道间质瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、肝癌、白血病、淋巴瘤、t细胞淋巴瘤。
[0184]
在本文所述的任何方法的实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以与一种或多种另外的治疗剂或免疫调节剂(包括例如与疫苗或疫苗佐剂)组合施用。在实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂是免疫检查点分子的抑制剂或拮抗剂或疫苗，所述免疫检查点分子包括例如程序化细胞死亡1(pd-1)受体(cd279)、pd-1(例如，pd-l1)的配体、细胞毒性t-淋巴细胞相关蛋白4(ctla4)、肿瘤坏死因子受体超家族成员9(可替代地，tnfrsf9、4-1bb)和4-1bb配体、肿瘤坏死因子受体超家族成员4(可替代地，tnfrsf4、ox40)和ox40配体、糖皮质激素诱导的tnfr相关蛋白(gitr)、肿瘤坏死因子受体超家族成员7(可替代地，tnfrsf7、分化簇27、cd27)、tnfrsf25和tnf样配体1a(tl1a)、tnf受体超家族成员5(可替代地，tnfrsf5、cd40)和cd40配体、疱疹病毒进入介体(hvem)-肿瘤坏死因子配体超家族成员14(可替代地，tnfsf14、light)-淋巴毒素α(lta)、疱疹病毒进入介体-(hvem)-b-和t-淋巴细胞弱化因子(btla)-cd160(可替代地，tnfsf14)、淋巴细胞激活基因3(lag3)、t细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域分子-3(tim3)、唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(siglec)、诱导t细胞共刺激因子(icos)和icos配体、b7-h3(b7家族，可替代地cd276)、含有v-set结构域的t细胞激活抑制因子1(vtcn1，可替代地b7-h4)、含有v型免疫球蛋白结构域的t细胞激活抑制因子(vista)、人内源性逆转录病毒-h长末端重复关联蛋白2(hhla2)-跨膜和免疫球蛋白结构域2(tmigd2)、嗜乳脂蛋白、自然杀伤细胞受体2b4(可替代地，nkr2b4、cd244)和b细胞膜蛋白(cd48)、具有免疫球蛋白(ig)和免疫受体酪氨酸基抑制基序结构域(tigit)的t细胞免疫受体及脊髓灰质炎病毒受体(pvr)家族成员、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(kir)、免疫球蛋白样转录物(ilt)和白细胞免疫球蛋白样受体(lir)、自然杀伤细胞2族蛋白成员d(nkg2d)和自然杀伤细胞2族蛋白成员a(nkg2a)、主要组织相容性复合体(mhc)i类多肽相关序列a(mica)和mhc i类多肽相关序列b(micb)、自然杀伤细胞受体2b4(cd244)、集落刺激因子1受体(csf1r)、吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)、转化生长因子β(tgfβ)、腺苷-外核苷酸酶三磷酸二磷酸水解酶1(cd39)-5'-核苷酸酶(cd73)、c-x-c基序趋化因子受体4(cxcr4)和c-x-c基序趋化因子配体12(cxcl12)、磷脂酰丝氨酸、信号调节蛋白α(sirpa)和整合素相关蛋白(cd47)、血管内皮生长因子(vegf)、和神经菌毛素。
[0185]
在本文所述的任何方法的实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以与检查点抑制剂或免疫共刺激分子的激动剂(诸如抗ox40(cd134)激动剂抗体)组合施用。在实施方案中，所述检查点抑制剂是pd-1/pd-l1抑制剂，诸如抗pd1抗体或抗pd-l1抗体，并且所述alpk1激动剂选自h1b-adp-6l和h1b-adp及其前药、类似物或衍生物。
[0186]
在实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以与一种或多种免疫调节剂组合施用。在实施方案中，所述免疫调节剂可以是疫苗。在实施方案中，所述疫苗是如上所述的针对感染原的疫苗。在实施方案中，所述疫苗是癌症疫苗。在实施方案中，所述癌症疫苗靶向肿瘤抗原，所述肿瘤抗原选自糖蛋白100(gp100)、粘蛋白1(muc1)、和黑色素瘤相关抗原3(magea3)。
[0187]
在实施方案中，所述一种或多种免疫调节剂可以是重组蛋白，例如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)、白介素7(il-7)、il-12、il-15、il-18、或il-21。
[0188]
在癌症的治疗的实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以与t细胞疗法(诸如嵌合抗原受体(car)t细胞疗法)组合施用，
[0189]
在用于治疗癌症的方法的实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物可以与pd-1/pd-l1抑制剂或免疫共刺激分子的激动剂(诸如抗ox40(cd134)激动剂抗体)组合施用。在实施方案中，所述癌症选自晚期黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾细胞癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、头颈癌、甲状腺癌、脑癌、急性骨髓性白血病(aml)、梅克尔细胞癌、多发性骨髓瘤、宫颈癌、和肉瘤，并且所述方法进一步包括向受试者施用pd-1/pd-l1抑制剂或免疫共刺激分子的激动剂。
[0190]
在用于调节免疫反应或用于治疗或预防细菌感染、病毒感染或寄生生物感染的方法的实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂可以是免疫调节剂，例如免疫检查点分子的抑制剂或拮抗剂。此类分子通常充当免疫系统的关键调节因子，例如作为免疫反应的共刺激因子。
[0191]
在实施方案中，本公开文本还提供了一种疫苗组合物或疫苗佐剂，其包含本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物。本文所述的疫苗组合物可以进一步包含一种或多种佐剂。
[0192]
在实施方案中，本公开文本还提供了一种药物组合物，其包含本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物。
[0193]
在本文所述的方法的上下文中，术语“治疗”可以指减轻或稳定与所治疗的疾病、障碍或症状相关的一种或多种症状。术语“治疗”还可以涵盖疾病、障碍或病症的管理，是指受试者从疗法中获得的有益效果，但所述疗法不导致潜在疾病、障碍或病症的治愈。在本公开文本的上下文中，术语“预防”是指预防疾病、障碍或病症的一种或多种症状的复发、发展、进展或发作。
[0194]
在其中将治疗有效量的化合物或组合物施用受试者的实施方案中，所述治疗有效量是足以实现所希望的治疗结局(例如，所治疗的疾病、障碍或病症的一种或多种症状的减轻或稳定)的量或者在预防的上下文中足以实现所述疾病、障碍或病症的一种或多种症状的复发、发展、进展或发作的预防的量。
[0195]
在实施方案中，治疗有效量是与标准疗法相比实现至少等效治疗作用所需的量。标准疗法的一个例子是fda批准的指示用于治疗相同疾病、障碍或病症的药物。
[0196]
在本文所述的任何方法的上下文中，受试者优选是人类，但可以是非人类脊椎动物。在其他实施方案中，非人类脊椎动物可以是例如狗、猫、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、兔)、马、牛、绵羊、山羊、鸡、鸭或任何其他非人类脊椎动物。
[0197]
在实施方案中，人类受试者选自成年人类、儿科人类或老年人类，如医学从业者所
理解的那些术语，例如如u.s.food and drug administration所定义的。
[0198]
在实施方案中，本公开文本提供了一种包含alpk1激动剂的组合物，或一种包含编码alpk1的多核苷酸的组合物，或一种包含alpk1蛋白和一种或多种赋形剂或载体、优选药学上可接受的赋形剂或载体的组合物。如本文所用，短语“药学上可接受”是指在合理的医学判断的范围内适用于与人类和动物的组织接触而无过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。用于制备药物组合物的赋形剂通常是已知在施用人体或动物体时是安全且无毒的赋形剂。药学上可接受的赋形剂的例子包括但不限于无菌液体、水、缓冲盐水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、油、清洁剂、悬浮剂、碳水化合物(例如，葡萄糖、乳糖、蔗糖或右旋糖酐)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸或谷胱甘肽)、螯合剂、低分子量蛋白质、以及任何前述的合适混合物。组合物中使用的特定赋形剂将取决于各种因素，包括所配制的化合物的化学稳定性和溶解度以及预期的施用途径。
[0199]
药物组合物可以以散装或单位剂型提供。为了易于施用和剂量的均匀性，以单位剂型配制药物组合物是尤其有利的。术语“单位剂型”是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单位含有经计算与所需药物载体联合产生所希望的治疗作用的预定量的活性化合物。单位剂型可以是安瓿、小瓶、栓剂、糖衣丸、片剂、胶囊、iv袋、或气雾剂吸入器上的单个泵。
[0200]
在治疗应用中，剂量可以变化，取决于活性化合物的化学和物理特性以及受试者的临床特征(包括例如年龄、体重和副发病变)。通常，剂量应为治疗有效量。药物组合物的有效量是提供了客观可鉴定的改善的量，如临床医师或其他合格的观察者所指出的。例如，缓解障碍、疾病或病症的症状。
[0201]
药物组合物可以采取用于通过任何所希望的途径(例如，肺、吸入、鼻内、口服、经颊、舌下、肠胃外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、胸膜内、鞘内、透皮、透粘膜、直肠等)施用的任何合适的形式(例如，液体、气雾剂、溶液、吸入剂、雾剂、喷雾剂；或固体、粉末、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、贴剂等)。在实施方案中，药物组合物呈口服可接受的剂型形式，包括但不限于胶囊，片剂，颊形式，糖锭剂，锭剂，和呈乳液、水性混悬剂、分散体或溶液形式的口服液。胶囊可以含有赋形剂，诸如惰性填充剂和/或稀释剂，包括淀粉(例如，玉米、马铃薯或木薯淀粉)、糖、人工甜味剂、粉末状纤维素(诸如结晶和微晶纤维素)、粉、明胶、树胶等。在用于口服的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。还可以添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。
[0202]
在实施方案中，药物组合物呈片剂的形式。片剂可以包含单位剂量的本文所述的化合物以及惰性稀释剂或载体，诸如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露醇。片剂可以进一步包含非糖衍生的稀释剂，诸如碳酸钠，磷酸钙，碳酸钙，或纤维素或其衍生物，诸如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素，以及淀粉，诸如玉米淀粉。片剂可以进一步包含粘合剂和制粒剂，诸如聚乙烯吡咯烷酮、崩解剂(例如，可溶胀的交联聚合物，诸如交联的羧甲基纤维素)、润滑剂(例如硬脂酸酯)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯)、抗氧化剂(例如丁基化羟基甲苯)、缓冲剂(例如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂)、和泡腾剂(诸如柠檬酸盐/碳酸氢盐混合物)。片剂可以是包衣片剂。包衣可以是保护膜包衣(例如蜡或清漆)或设计用于控制活性化合物的释放(例如延迟释放(在摄入后的预定滞后时间后释放活性物)或在胃肠道的
特定位置处释放)的包衣。后者可以例如使用肠溶膜包衣(诸如以商标名出售的那些)来实现。
[0203]
片剂配制品可以通过常规压缩、湿法制粒或干法制粒方法制造，并且利用药学上可接受的稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面改性剂(包括表面活性剂)、悬浮剂或稳定剂，包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、月桂基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、藻酸、阿拉伯胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露醇、氯化钠、滑石、干淀粉和糖粉。优选的表面改性剂包括非离子表面改性剂和阴离子表面改性剂。表面改性剂的代表性例子包括但不限于泊洛沙姆188、苯扎氯铵、硬脂酸钙、鲸蜡硬脂醇、聚西托醇(cetomacrogol)乳化蜡、脱水山梨醇酯、胶体二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸铝镁、和三乙醇胺。
[0204]
在实施方案中，药物组合物呈硬或软明胶胶囊的形式。根据此配制品，本发明的化合物可以呈固体、半固体或液体形式。
[0205]
在实施方案中，药物组合物呈适用于肠胃外施用的无菌水溶液或分散体的形式。如本文所用的术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、以及颅内注射或输注技术。
[0206]
在实施方案中，药物组合物呈适用于通过直接注射或通过添加至用于静脉内输注的无菌输注液中施用的无菌水溶液或分散体的形式，并且包含溶剂或分散介质，其含有水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其合适的混合物、或一种或多种植物油。溶液或悬浮液可以借助助溶剂或表面活性剂在水中制备。合适的表面活性剂的例子包括聚乙二醇(peg)-脂肪酸和peg-脂肪酸单酯和二酯、peg甘油酯、醇-油酯交换产物、聚甘油脂肪酸、丙二醇脂肪酸酯、固醇和固醇衍生物、聚乙二醇脱水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇烷基醚、糖及其衍生物、聚乙二醇烷基酚、聚氧乙烯-聚氧丙烯(poe-pop)嵌段共聚物、脱水山梨醇脂肪酸酯、离子表面活性剂、脂溶性维生素及其盐、水溶性维生素及其两亲性衍生物、氨基酸及其盐、以及有机酸及其酯和酸酐。分散体也可以例如在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备。
[0207]
在实施方案中，本文所述的化合物或组合物可以作为单一疗法或辅助疗法来施用。在实施方案中，本文所述的化合物或组合物可以单独施用或与一种或多种另外的治疗剂(即，另外的api)或疗法(例如作为包括例如饮食和运动方面)的治疗方案的一部分组合来施用。在实施方案中，本文所述的方法包括施用本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物，作为主要疗法。在其他实施方案中，本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物的施用是辅助疗法。在任何一种情况下，本发明的方法考虑将本文所述的式i的化合物及其前药、类似物和衍生物与一种或多种另外的治疗剂和/或疗法组合施用以治疗或预防如本文所述的疾病、障碍或病症。术语“一种疗法”和“多种疗法”是指可用于预防、治疗、管理或减轻疾病障碍、或病症或者其一种或多种症状的任何方法、方案和/或药剂。
[0208]
本公开文本还提供了用于本文所述的方法的包含药物组合物的包装和试剂盒。所述试剂盒可以包含一个或多个选自瓶、小瓶、安瓿、泡罩包装和注射器的容器。所述试剂盒可以进一步包含一个或多个使用说明书、一个或多个注射器、一个或多个施用器、或适用于重构本文所述的化合物或组合物的无菌溶液。式i的化合物和示例性化合物的制备
[0209]
其中l1是o(化合物vi)的式i的化合物可以通过如方案1所展示的通用合成方法制造。化合物ii(“pg”是指保护基团)可以通过化合物i(当m是oh时)在碱性条件下与受保护的氯磷酸酯或在光延(mitsunobu)反应条件下与适当的受保护的磷酸酯来获得。化合物ii可以作为α异构体和β异构体的混合物获得，所述混合物可以在硅胶色谱法上分离。在1-4atm的h2下通过pd/c或pto2催化将化合物ii的β异构体脱保护以得到化合物iii。化合物iv与吗啉或另一种合适的碱通过dcc在适当的溶液诸如t-buoh/h2o中偶联得到化合物v。化合物iii和化合物v在适当的溶剂诸如吡啶中与适当的催化剂诸如四唑在室温下偶联24-72h提供化合物vi。
[0210]
方案i
[0211]
可以如方案ii所展示合成其中z2是s(l1是o，化合物xi)的式i的化合物。可以通过在合适的溶剂(如二氯甲烷)中并且在从-10℃至25℃范围内的温度下使化合物vii与受保护的二烷基亚磷酰胺反应获得化合物viii(“pg”是指保护基团)。可以在合适的溶剂(如dmf)中在惰性气体系统中在低于25℃的温度下完成viii与iii的偶联以得到化合物ix，将其用硫原位氧化以提供化合物x。化合物x的脱保护得到最终化合物xi。
[0212]
方案ii
[0213]
可以通过可替代地如方案iii中所展示的方法来合成其中z2是s(l1是o，化合物xv)的式i的化合物。可以通过在10℃至40℃下在合适的溶剂(如dmf)中在惰性气体系统下形成咪唑盐将化合物iii活化。将化合物vii通过与苯氧基膦酰氧基苯反应而引入磷酸酯。在0℃-10℃下用硫氧化后，可以获得化合物xiv。化合物xii和xiv在温和条件下(如0℃-40℃)在合适的溶剂(如dmf)中在惰性气体系统中用路易斯酸的催化剂进行化合物xii与xiv的偶联提供最终化合物xv。
[0214]
方案iii
[0215]
其中l1是ch2(化合物xviii)的式i的化合物可以通过如方案iv所展示的通用合成方法制造。化合物i(当m是oh时)与受保护的二磷酸甲酯在30℃-50℃下进行光延反应2-4h提供化合物xvi(“pg”是指保护基团)。在类似条件下，化合物xvi经受与化合物vi的第二光延反应给出化合物xvii。化合物x的脱保护反应提供最终化合物xviii。
[0216]
方案iv
[0217]
其中l1是cf2(化合物xxv)的式i的化合物可以通过如方案v所展示的通用合成方法制造。通过使用n-氟苯磺酰亚胺(nfsi)在碱性nah条件下在合适的溶剂中从-20℃至0℃的低反应温度开始将化合物xix(“pg”是指保护基团)转化为受保护的二磷酸二氟甲酯化合物xx。选择性除去化合物xx中的保护基团之一产生化合物xxi。通过将羟基转化为离去基团，诸如ot、om或卤素，将化合物vii转化为化合物xxii。化合物i(当m是oh时)与化合物xxi在30℃-50℃下进行光延反应2-4h产生化合物xxiii。将化合物xxiii脱保护产生化合物xxiv。在诸如ch3cn的合适溶剂中用碱bu4n将化合物xxiv与化合物xxii偶联产生最终化合物xxv。方案v
[0218]
其中a1是s(化合物xxxii)的式ic的化合物可以通过如方案vi所展示的通用合成方法制造。化合物xxvi与类似于苯甲酸2-氧代乙酯的受保护的2-羟基乙醛在合适的溶剂中反应产生呈两种异构体的混合物的化合物xxvii(“pg”是指保护基团)。可替代地，在有机碱
(例如，三乙胺)、乙酸苯酯、经表面活性剂处理的枯草杆菌蛋白酶(sts)和carlsberg的存在下在合适的溶剂(诸如thf)中使化合物xxvi与苯甲酸2-氧代乙酯反应产生呈r构型的化合物xxvii。使用cal b代替sts可以产生呈s构型的化合物xxvii(参考：hu,l等人chem.commun.,2013,49,10376-10378)。在合适的溶剂溶液中使化合物xxvii与sncl4反应产生化合物xxviii。将化合物xxviii脱保护产生化合物xxix。可以通过在合适的溶剂中使化合物xxix与pocl3和吡啶反应来完成其磷酸化以产生化合物xxx。将化合物xxx转化为最终化合物xxxii的剩余反应可以通过与如方案i中所述的相同反应程序进行。方案vi
[0219]
其中l1是o(化合物xxxvii)的式i的化合物可以通过如方案vii所展示的通用合成方法制造。通过将化合物xxxiii与相应酸在缩合试剂如edci下缩合获得化合物xxxiv(当m是oh时)。化合物ii(“pg”是指保护基团)可以通过化合物xxxiv在碱性条件下与受保护的氯磷酸酯或在光延(mitsunobu)反应条件下与适当的受保护的磷酸酯来获得。化合物xxxv可以作为α异构体和β异构体的混合物获得，所述混合物可以在硅胶色谱法上分离。在1-4atm的h2下通过pd/c或pto2催化将化合物xxxv的β异构体脱保护以得到化合物xxxvi。化合物iv与吗啉或另一种合适的碱通过dcc在适当的溶液诸如t-buoh/h2o中偶联得到化合物v。化合物v和化合物xxxvii在适当的溶剂诸如吡啶中与适当的催化剂诸如四唑在室温下偶联24-72h提供化合物xxxviii。方案vii
[0220]
表1列出了根据如本文所述的程序制备的示例性化合物。表1：示例性化合物
代表性的式(i)的化合物的合成：
[0221]
所有水分敏感性反应均在ar下使用注射器-隔膜帽技术进行。在硅胶60f 254板(qindao，0.25mm厚度)上进行分析型薄层色谱法(tlc)。使用varian-400光谱仪记录1h-nmr光谱，并且将化学位移报告为相对于内部四甲基硅烷或氘代溶剂的残余质子的(ppm)值。使用varian-400光谱仪记录
13
c-nmr光谱，并且将化学位移报告为相对于内部四甲基硅烷或氘代溶剂的残余质子的δ(ppm)值。使用varian-400光谱仪记录
31
p-nmr光谱，并且将化学位移报告为相对于外部85％磷酸的δ(ppm)值。1h-nmr光谱列表如下：化学位移、多重性(br＝宽，s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰)、质子数目、和一个或多个耦合常数。化合物a1
[0222]
步骤1.化合物1-((2r,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-2-基)-2-(三苯甲氧基)乙-1-醇的制备。
[0223]
向化合物1-((2r,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-2-基)乙-1,2-二醇(17.4g，35.2mmol；tiehai li等人,(2014)bioorg.med.chem.22:1139-1147；shinsukeinuki等人,org.lett.(2017),19:3079-3082)、tea(7.1g，70.4mmol，9.8ml)和dmap(2.2g，17.6mmol)在dcm(200ml)中的溶液中添加trtcl(19.6g，70.4mmol)。将混合物在50℃下搅拌20h。将反应混合物通过h2o(100ml)淬灭并且然后分离。将水(aq.)层用dcm(60ml x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(150ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并且浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至1:1)。获得呈浅黄色油状物的所希望的化合物(24.6g，产率：95％，93％纯度)。ms(esi)m/z(m h)

:782.4。
[0224]
步骤2.化合物1-((2s,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-2-基)-2-(三苯甲氧基)乙-1-酮的制备。
[0225]
将从以上步骤1获得的产物(24.6g，33.4mmol)、nmo(19.6g，166.9mmol，17.6ml)和4a分子筛(24g，33.4mmol)在dcm(250ml)中的混合物在25℃下搅拌0.5h。然后在0℃下添加tpap(1.17g，3.34mmol)。将混合物在25℃下搅拌4h。将混合物过滤并且用dcm(50ml x 3)洗涤。将滤液在真空下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至4:1)。获得呈淡黄色油状物的所希望的产物(21.7g，产率：85.6％)。ms(esi)m/z(m h)

:757.3。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.45-7.25(m,30h),4.72-4.52(m,6h),4.20-4.07(m,4h),3.99(s,2h),3.68-3.67(m,1h),3.22(s,3h)。
[0226]
步骤3.(r)-1-((2r,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-2-基)-2-(三苯甲氧基)乙-1-醇的制备。
[0227]
在0℃下向从以上步骤2获得的产物(21.7g，29.5mmol)在thf(200ml)中的溶液中逐滴添加zn(bh4)2(0.5m，66.7ml)持续0.5h。将反应小心地用h2o(50ml)淬灭。将有机层用乙酸乙酯(150ml x 3)萃取。将有机层经na2so4干燥并且在真空下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至7:1)。获得呈无色油状物所希望的化合物(19.5g，产率：88.27％，98.5％纯度)。ms(esi)m/z(m h)

:759.3。
[0228]
步骤4.化合物(2s,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-2-((s)-1-氟-2-(三苯甲氧基)乙基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃的制备。
[0229]
在0℃下向以上步骤3的产物化合物(9.5g，12.9mmol)在dcm(100ml)中的混合物中添加dast(10.4g，64.5mmol，8.5ml)和吡啶(10.2g，128.9mmol，10.4ml)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应小心地用饱和nahco3(100ml)淬灭。将混合物用dcm(100ml x 3)萃取。将合并的有机层用2nhcl(150ml)洗涤，经na2so4干燥并且在真空下浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至12:1)。获得呈淡黄色油状物的所希望的化合物(4.2g，产率：44.1％)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.38-7.18(m,30h),4.92-4.61(m,2h),4.53-4.51(m,6h),4.06-4.02(m,1h),3.77-3.75(m,1h),3.65-3.51(m,3h),3.14-3.06(m,1h),2.96(s,3h)。
[0230]
步骤5.硬脂酸(s)-2-氟-2-((2s,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四
氢-2h-吡喃-2-基)乙酯的制备。
[0231]
向(s)-2-氟-2-((2s,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三(苄氧基)-6-甲氧基四氢-2h-吡喃-2-基)乙-1-醇(1.5g，3.02mmol)和硬脂酸(2.58g，9.06mmol)在dcm(20ml)中的溶液中添加edci(1.74g，9.06mmol)、dmap(369mg，3.02mmol)。将混合物在20℃下搅拌1h。在真空中除去溶剂。将残余物用h2o(20ml)洗涤，用etoac(30ml x 2)萃取。收集有机物并且将其浓缩。将残余物通过柱纯化(pe:ea＝10:1)以得到呈无色油状物的所希望的化合物(1.49g，产率：65％)。
[0232]
步骤6.硬脂酸(s)-2-((2s,3s,4s,5s)-6-乙酰氧基-3,4,5-三(苄氧基)四氢-2h-吡喃-2-基)-2-氟乙酯的制备。
[0233]
向从以上步骤5获得的化合物(1.49g，1.95mmol)在acoh(4.5ml)和ac2o(4.5ml)中的溶液中添加h2so4(0.44ml，8.28mmol)。将混合物在20℃下搅拌1h。将反应用meoh(5ml)淬灭。在真空中除去溶剂。将残余物用饱和nahco3(20ml)洗涤，用etoac(20ml x 2)萃取。收集有机物并且将其浓缩以得到呈无色油状物的所希望的化合物(1.5g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0234]
步骤7.化合物硬脂酸(s)-2-((2s,3s,4s,5s)-6-乙酰氧基-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-基)-2-氟乙酯的制备。
[0235]
向从以上步骤6获得的化合物(1.5g，1.90mmol)在meoh(20ml)、acoh(0.5ml)、thf(10ml)和h2o(2ml)中的溶液中添加pd(oh)2/c(450mg，640.87μmol，20％纯度)。将混合物在h2下在45psi下在25℃下搅拌12h。滤出催化剂。收集滤液并且将其浓缩以得到呈黄色油状物的粗产物(1.2g，粗品)，将其重新溶解在meoh(20ml)、thf(10ml)、h2o(5ml)和acoh(2ml)中。添加pd(oh)2/c(470mg，669.35μmol，20％纯度)。将混合物在25℃下在h2下在45psi下搅拌12h。滤出催化剂。收集滤液并且将其浓缩以得到呈无色油状物的所希望的化合物(1.2g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0236]
步骤8.化合物四乙酸(3s,4s,5s,6s)-6-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-2,3,4,5-四基酯的制备。
[0237]
向从步骤7获得的化合物(1.2g，2.30mmol)在吡啶(10ml)中的溶液中添加ac2o(1.1ml，11.52mmol)、dmap(140mg，1.15mmol)。将混合物在25℃下搅拌30min。将反应用meoh(10ml)淬灭。在真空中除去溶剂。将残余物用1n hcl(20ml x 2)洗涤，用etoac(30ml)萃取。收集有机物并且将其浓缩。将残余物通过柱纯化(pe:ea＝1:0至2.5:1)以得到呈无色油状物的所希望的化合物(0.95g，产率：47％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ6.10-6.05(m,1h),5.52(t,j＝10.4hz,1h),5.36-5.29(m,1h),5.25-5.21(m,1h),4.72-4.66(m,0.5h),4.60-4.54(m,0.5h),4.41-4.20(m,2h),4.14-4.06(m,1h),3.97-3.93(m,0.5h),3.92-3.87(m,0.5h),2.31(t,j＝7.2hz,2h),2.17(s,3h),2.15(s,3h),2.05(s,3h),1.99(s,3h),1.64-1.58(m,2h),1.28-1.22(m,28h),0.88-0.83(m,3h)。
[0238]
步骤9.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s)-2-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)-6-羟基四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0239]
向从以上步骤8获得的化合物(950mg，1.47mmol)在dmf(5ml)中的溶液中添加乙酸肼(203mg，2.20mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物用h2o(30ml)洗涤，用etoac(40ml)萃取。收集有机物并且将其浓缩。将残余物通过柱纯化(pe:ea＝1:0至1:1)以得到呈无色油状物的所希望的化合物(800mg，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0240]
步骤10.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((二苯氧基磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0241]
将在dcm(30ml)中的化合物氯磷酸二苯酯(1.07g，3.97mmol)经2h的时间段逐滴添加到从以上步骤9获得的化合物(800mg，1.32mmol)和dmap(808mg，6.61mmol)在dcm(30ml)中的溶液中。将混合物在25℃下搅拌48h。将混合物用饱和nahco3(30ml)洗涤。收集有机物并且将其浓缩。将残余物通过柱纯化(pe:ea＝1:0至1:1)以得到呈无色油状物的所希望的化合物(690mg，产率：57％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.38-7.29(m,4h),7.28-7.25(m,2h),7.23-7.11(m,4h),5.56-5.52(m,1h),5.51-5.44(m,2h),5.07-5.02(m,1h),4.72-4.66(m,0.5h),4.60-4.54(m,0.5h),4.28-4.19(m,2h),3.73-3.62(m,1h),2.34-2.28(m,2h),2.09(s,3h),2.04(s,3h),1.97(s,3h),1.63-1.58(m,2h),1.28-1.23(m,28h),0.89-0.83(m,3h)。
[0242]
步骤11.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)-6-(膦酰氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0243]
向从以上步骤10获得的化合物(690mg，824.46μmol)在etoh(20ml)和etoac(20ml)中的溶液中添加pto2(180mg，792.68μmol)。将混合物在20℃下在h2下在15psi下搅拌24h。滤出催化剂。收集滤液并且将其在真空中浓缩以得到呈白色固体的所希望的化合物(554mg，产率：98％)。
[0244]
步骤12.磷酸(2s,3s,4s,5s,6s)-3,4,5-三乙酰氧基-6-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-2-基酯的三乙胺盐的制备。
[0245]
向从以上步骤11获得的化合物(554mg，809.09μmol)在meoh(10ml)中的溶液中添加tea(0.24ml，1.62mmol)。将混合物在20℃下搅拌30min。在真空中除去溶剂以得到呈白色固体的所希望的化合物(595mg，粗品，2tea)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0246]1h nmr(400mhz,d2o)δ5.35-5.13(m,4h),4.51-4.15(m,2h),3.95-3.67(m,1h),3.10-2.90(m,5h),2.28-2.00(m,2h),2.04(s,3h),1.91-1.77(m,6h),1.50-1.34(m,2h),1.22-1.00(m,37h),0.73-0.63(m,3h)。
[0247]
步骤13.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)-6-((羟基(1h-咪唑-1-基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0248]
将cdi(735mg，4.53mmol)添加到从以上步骤12获得的化合物(300mg，438.13μmol)在dmf(5ml)中的溶液中。将混合物在20℃下搅拌4h。根据参考，搅拌4h后反应完成。添加meoh(0.2ml)以淬灭反应。将混合物在减压下浓缩以得到呈无色油状物的所希望的化合物(1g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0249]
步骤14.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(6-(三苯甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0250]
将zncl2(740mg，5.43mmol)添加到从以上步骤13获得的化合物(1g，1.36mmol)和o-(((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(6-(三苯甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)硫代磷酸酯的三甲胺盐(750mg，1.16mmol)在dmf(5ml)中的溶液中。将混合物在20℃下搅拌12h。在真空中除去溶剂。将残余物通过柱纯化(dcm:(meoh:tea＝50:1)＝10:1)以得到呈无色油状物的所希望的化合物(900mg，粗品)，将
其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。ms(esi)m/z(m h)

:1312.6。
[0251]
步骤15.三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((2r,3s,4r,5r)-5-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(硬脂酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0252]
向在以上步骤14中获得的化合物(170mg，129.54umol)在dcm(1.5ml)中的溶液中添加tfa(0.45ml，6.08mmol)。将混合物在25℃下搅拌2.5h。将溶液用tea淬灭至ph＝7。在真空中除去溶剂。将残余物通过制备型hplc(neu)纯化(柱：waters xbridge 150*25 5u；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：42％-72％，10min)以得到呈白色固体的所希望的化合物(36mg，产率：26.74％)。ms(esi)m/z(m h)

:1030.5。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.78(s,0.3h),8.71(s,0.6h),8.27-8.19(m,1h),6.10-6.04(m,1h),5.74-5.68(m,1h),5.67-5.59(m,1h),5.39-5.31(m,1h),5.25-5.17(m,1h),4.76-4.71(m,1h),4.64-4.43(m,4h),4.42-4.23(m,3h),3.95-3.82(m,1h),2.33-2.25(m,2h),2.16-2.10(m,3h),2.02(s,3h),1.94-1.89(m,3h),1.60-1.49(m,2h),1.31-1.25(m,28h),0.91-0.85(m,3h)。化合物a2
[0253]
三乙酸2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((2r,3s,4r,5r)-5-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-2-(十二酰氧基)-1-氟乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0254]
向化合物三乙酸2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(6-(三苯甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-2-(十二酰氧基)-1-氟乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(760mg，618.8umol，用与化合物a1中所述相同的方法合成)在h2o(0.5ml)中的混合物中添加tfa(1.16g，10.1mmol，0.8ml)。将混合物在10℃下搅拌1h。将反应用et3n(约0.3ml)淬灭至ph＝6。将混合物溶解在h2o(1ml)和甲醇(3ml)中。将残余物通过制备型hplc纯化(柱：waters xbridge 150*25 5u；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：32％-52％，10min)两次。获得呈白色固体的所希望的化合物(13.39mg，13.9umol，产率：2.2％)。
ms(esi)m/z(m h)

:946.2。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.78-8.71(m,0.7h),8.61(s,0.3h),8.23-8.22(m,1h),6.09-6.06(m,1h),5.72-5.56(m,2h),5.38-5.33(m,1h),5.23-5.18(m,1h),4.75-4.27(m,4h),3.93-3.79(m,1h),2.31-2.26(m,2h),2.12(s,3h),2.02(s,3h),1.91(s,3h),1.55-1.52(m,2h),1.26(s,20h),0.88(t,j＝6.8hz,3h)。化合物a3
[0255]
化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((2r,3s,4r,5r)-5-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(十四酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0256]
将化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(6-(三苯甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(十四酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(630mg，501.49umol，用与化合物a1中所述相同的方法合成)和tfa(0.9ml，12.16mmol)在dcm(3ml)中的混合物在25℃下搅拌3h。将反应用et3n调节至ph＝6-7。然后在减压下除去溶剂以得到粗品。将粗品溶解在h2o(10ml)中，用etoac(10ml)萃取，然后将有机相浓缩以得到粗产物，将其通过制备型hplc纯化(waters xbridge 150*25 5u，水(10mm nh4hco3)-acn，30％-60％)。获得呈白色固体的所希望的化合物(34mg，产率：6.8％)。ms(esi)m/z(m h)

:974.1。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.79(s,0.4h),8.70(s,0.5h),8.20(s,1h),6.13(dd,j＝2.5,5.8hz,1h),5.74(dd,j＝3.1,9.9hz,1h),5.69(d,j＝3.0hz,0.55h),5.64(d,j＝3.0hz,0.35h),5.42-5.34(m,1h),5.26-5.20(m,1h),4.71-4.61(m,2h),4.58-4.43(m,3h),4.31-4.22(m,3h),3.95-3.84(m,1h),2.38-2.26(m,2h),2.16(s,3h),2.05(s,3h),1.95(s,3h),1.64-1.51(m,2h),1.29(s,20h),0.94-0.88(m,3h)。化合物a4
[0257]
三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((2r,3s,4r,5r)-5-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(壬酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0258]
向化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-(((((((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(6-(三苯甲基氨基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧
基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)-6-((s)-1-氟-2-(壬酰氧基)乙基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(310mg，155.24umol，用与化合物a1中所述相同的方法合成)在h2o(1ml)中的溶液中添加tfa(1.5ml，20.26mmol)。将混合物在25℃下搅拌1.5h。将溶液用nh3.h2o调节至ph＝7。将溶液通过制备型hplc(neu)纯化(柱：waters xbridge 150*25 5u；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：16％-46％,10min)以得到呈白色固体的所希望的化合物(25mg，产率：18％)。ms(esi)m/z(m h)

:904.6。1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.76(s,0.4h),8.66(s,0.6h),8.18-8.16(m,1h),6.11-6.08(m,1h),5.74-5.68(m,1h),5.67-5.59(m,1h),5.39-5.31(m,1h),5.25-5.17(m,1h),4.76-4.71(m,1h),4.64-4.43(m,4h),4.42-4.23(m,3h),3.95-3.82(m,1h),2.33-2.25(m,2h),2.16-2.10(m,3h),2.02(s,3h),1.94-1.89(m,3h),1.60-1.49(m,2h),1.31-1.25(m,10h),0.91-0.85(m,3h)。化合物a18
[0259]
步骤1.化合物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(6-(苄基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲醇的制备。
[0260]
向化合物(2r,3r,4s,5r)-2-(6-(苄基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(5g，14.0mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(14.5g，140.0mmol)在丙酮(200ml)中的溶液中添加p-tsoh(4.8g，28.0mmol)。将混合物在25℃下搅拌24h。反应完成后，将混合物冷却至0℃并且用饱和nahco3(300ml)淬灭。将反应混合物用ea(200ml x3)萃取，将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并且浓缩以得到残余物，将其通过硅胶柱纯化(pe:ea＝5:1至1:2)以得到呈白色固体的所希望的化合物(4.2g，产率：75％)。ms(esi)m/z(m h)

:398。
[0261]
步骤2.化合物硫代磷酸o-(((3ar,4r,6r,6ar)-6-(6-(苄基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)o,o-二-叔丁酯的制备。
[0262]
将从以上步骤1获得的化合物(2.1g，5.29mmol)和四唑(1.3g，18.5mmol)在dcm(50ml)中的混合物在25℃下搅拌5min。然后添加二-叔丁基二异丙基亚磷酰胺(4.4g，15.9mmol)。将混合物在25℃下在n2下搅拌1h。向以上混合物中添加硫(1.7g，52.9mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌42h。反应完成后，将混合物直接在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(pe:ea＝1:0至2:1)以得到呈黄色油状物的所希望的化合物(2.95g，产率92％)。ms(esi)m/z(m h)

:606
[0263]
步骤3.化合物o-(((2r,3s,4r,5r)-5-(6-(苄基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)o,o-二氢硫代磷酸酯的制备。
[0264]
在0℃下向从以上步骤2获得的化合物(2.65g，4.38mmol)和et3sih(10.16g，87.6mmol)在h2o(12ml)和dcm(3ml)中的混合物中逐滴添加tfa(18ml)。然后将混合物在0℃下在n2下搅拌1h。反应完成后，将反应混合物用dcm(60ml x 2)萃取。将水相浓缩以得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)以得到呈黄色胶的所希望的化合物(1.04g，产率52％)。ms(esi)m/z(m h)

:454。
[0265]
步骤4.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((2r,3s,4r,5r)-5-(6-(苄基氨基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
4.59(m,1h)。
[0269]
步骤2化合物二苯甲酸(2r,3r,4r,5r)-2-((苯甲酰氧基)甲基)-5-(4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二基酯的制备。
[0270]
向从以上步骤1获得的化合物(16.68g，28.78mmol)在dmf(100ml)中的溶液中添加agno3(9.78g，57.56mmol)、2,6-二甲基吡啶(6.17g，57.56mmol，6.70ml)和trtcl(16.05g，57.56mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物用ea(100ml)稀释，过滤并且将滤饼用h2o(60ml)洗涤，分离滤液，将水层用ea(60ml x 2)萃取，将合并的有机层用hcl(1n，60ml)、盐水(200ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并且浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至1:1)。获得呈淡黄色油状物的所希望的化合物(18.40g，产率：77.79％)。ms(esi)m/z(m h)

:822.2。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.22(br s,1h),7.94-8.06(m,7h),7.89(br d,j＝7.78hz,3h),7.45-7.58(m,5h),7.29-7.41(m,9h),7.25(s,5h),6.77(s,2h),6.27(br s,3h),4.46-4.81(m,4h)。
[0271]
步骤3.化合物(2r,3s,4r,5r)-2-(羟基甲基)-5-(4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃-3,4-二醇的制备。
[0272]
向从以上步骤2获得的化合物(18.40g，22.39mmol)在meoh(100ml)中的溶液中添加naome(3g，55.53mmol)直到ph达到11。将混合物在60℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩，然后添加dcm(100ml)，并且过滤，将滤液浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至0:1，dcm:meoh＝1:0至5:1)。获得呈白色固体的所希望的化合物(9.85g，产率：85.96％)。ms(esi)m/z(m h)

:510.1。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(br s,1h),8.56(br s,1h),7.88(s,1h),7.14-7.40(m,15h),6.05(d,j＝4.77hz,1h),5.33(d,j＝5.77hz,1h),5.12(d,j＝5.52hz,1h),4.81(t,j＝5.77hz,1h),4.62(q,j＝5.27hz,1h),4.19(q,j＝4.94hz,1h),3.88(q,j＝4.68hz,1h),3.50-3.59(m,1h),3.40(dt,j＝11.86,5.99hz,1h)。
[0273]
步骤4.化合物((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲醇的制备。
[0274]
向从以上步骤3获得的化合物(5.85g，11.48mmol)和2,2-二甲氧基丙烷(11.96g，114.81mmol，14.07ml)在丙酮(100ml)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸；水合物(2.62g，13.78mmol)。将混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物用饱和nahco3(200ml)淬灭。将反应混合物用ea(100ml x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并且浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至0:1，dcm:meoh＝1:0至10:1)。获得呈白色固体的化合物5(3.90g，产率：59.08％)。ms(esi)m/z(m h)

:550.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.11(s,1h),8.60(br s,1h),7.91(s,1h),7.16-7.36(m,15h),6.27(s,1h),5.30(dd,j＝6.02,1.51hz,1h),4.85-5.01(m,2h),4.12(q,j＝5.27hz,2h),3.45-3.57(m,1h),1.50(s,3h),1.32(s,3h)。
[0275]
步骤5.化合物膦酸((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲酯三甲胺盐的制备。
[0276]
向从以上步骤4获得的化合物(3.90g，7.10mmol)在py(30ml)中的溶液中添加苯氧基膦酰氧基苯(4.99g，21.29mmol，4.09ml)，将混合物在25℃下搅拌2h。然后添加et3n(3.59g，35.48mmol，4.94ml)和h2o(1.28g，70.96mmol，1.28ml)，将混合物在25℃下搅拌0.5h。将反应混合物浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(dcm:meoh＝1:0至5:1，添加0.5％et3n)。获得呈黄色浆液的所希望的化合物(5.91g，粗品，et3n盐)。ms(esi)m/z(m h)

:614.2。
[0277]
步骤6.化合物o-(((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)硫代磷酸酯的制备。
[0278]
在氮气气氛下向从以上步骤5获得的化合物(5.91g，8.27mmol，et3n)在py(20ml)和et3n(20ml)中的溶液中经15min逐滴添加tmscl(6.16g，56.73mmol，7.20ml)。将混合物在0℃下搅拌1h，并且然后添加s(2.27g，70.79mmol)。将混合物在0℃下搅拌另外45min。添加h2o(25.00g，1.39mol，25.00ml)并且将混合物在0℃下搅拌5min。将反应混合物过滤并且浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。所希望的化合物(14.41g，产率：90.78％，et3n)获得呈白色固体的。ms(esi)m/z(m h)

:646.1。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.30(br s,1h),8.72-8.76(m,1h),8.08(s,1h),7.26-7.59(m,15h),6.87-6.98(m,1h),6.45(s,1h),5.43-5.55(m,1h),5.17(dd,j＝6.02,1.76hz,1h),4.42(br t,j＝6.40hz,1h),3.75-3.86(m,1h),3.15(q,j＝7.28hz,60h),1.66(s,3h),1.49(s,3h)。
[0279]
步骤7.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((3ar,4r,6r,6ar)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0280]
向咪唑-1-基-[(2s,3r,5s)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(1s)-2-乙酰氧基-1-氟-乙基]四氢吡喃-2-基]氧基-次膦酸(410mg，803.35μmol)和从以上步骤6获得的化合物(1.15g，803.35μmol，45％纯度)在dmf(5ml)中的溶液中添加zncl2(1.31g，9.64mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(dcm/meoh＝20/1，10/1，添加0.5％)。获得呈黄色浆液的所希望的物质(1.29g，产率：75.27％)。ms(esi)m/z(m h)

:1088.8。
[0281]
步骤8.三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((2r,3s,4r,5r)-5-(4-氨基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(26a)的制备。
[0282]
向从以上步骤7获得的化合物(120mg，110.30μmol)在dcm(1.5ml)中的溶液中添加tfa(770.00mg，6.75mmol，500ul)。然后将反应在25℃下搅拌2h。将混合物在25℃下搅拌4h。将反应用tea淬灭直到ph＝7。将粗产物通过制备型hplc纯化(柱：phenomenex gemini-nx 80*30mm*3um；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：0％-30％，9min)。获得呈白色固体的
所希望的化合物(10mg，产率：11.24％)。ms(esi)(m h)

:806.01h nmr(甲醇-d4,400mhz):δ＝8.22(s,1h),8.17(s,1h),6.31(d,j＝4.0hz,1h),5.71(d,j＝10.0hz,1h),5.62-5.68(m,1h),5.35-5.42(m,1h),5.24(dd,j＝10.3,3.0hz,1h),4.75-4.85(m,1h),4.61-4.70(m,2h),4.07-4.57(m,5h),3.86-3.98(m,1h),2.17(d,j＝1.5hz,3h),2.03-2.10(m,6h),1.96ppm(s,3h)。化合物a27
[0283]
步骤1.化合物(n-(9-((3ar,4r,6r,6ar)-6-(羟基甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9h-嘌呤-6-基)苯甲酰胺)的制备。
[0284]
向化合物n-(9-((2r,3r,4s,5r)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-9h-嘌呤-6-基)苯甲酰胺(5.00g，13.48mmol)在丙酮(150ml)中的溶液中添加p-tsoh(4.64g，26.96mmol)。将混合物在25℃下搅拌16h。反应完成后，将混合物冷却至0℃并且用饱和nahco3(300ml)淬灭。将反应混合物用ea(200ml x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并且浓缩以得到残余物，将其通过硅胶柱纯化(dcm:meoh＝20:1至10:1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(4.00g，产率：72％)。ms(esi)m/z(m h)

:412。
[0285]
步骤2.化合物(硫代磷酸o-(((3ar,4r,6r,6ar)-6-(6-苯甲酰胺基-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)o,o-二-叔丁基酯)的制备。
[0286]
将四唑(1.51g，21.55mmol)添加到从以上步骤1获得的化合物(2.53g，6.156mmol)在dcm(50ml)中的溶液中。将所得混合物在25℃下搅拌5min。然后添加化合物二-叔丁基二异丙基亚磷酰胺(5.12g，18.47mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌1h。反应完成后，添加硫
(1.97g，61.56mmol)，并且将混合物在25℃下搅拌过夜。反应完成后，将混合物直接在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(pe:ea＝5:1至1:1)以得到所希望的化合物(3.7g，产率：97％)。ms(esi)m/z(m h)

:620。
[0287]
步骤3.化合物(o-(((2r,3s,4r,5r)-5-(6-苯甲酰胺基-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)o,o-二氢硫代磷酸酯)的制备。
[0288]
将从以上步骤2获得的化合物(1.00g，1.616mmol)在tfa(6ml)、h2o(4ml)和dcm(1ml)中的溶液在室温下搅拌4h。反应完成后，将混合物在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(dcm:meoh＝3:1至1:1，添加0.5％et3n)以得到呈淡黄色固体的所希望的化合物(400mg，产率53％)。ms(esi)m/z(m-h)

:466。
[0289]
步骤4.化合物(三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-((羟基(1h-咪唑-1-基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯)的制备。
[0290]
向化合物(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(膦酰氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯三乙胺盐(100mg，0.217mmol，et3n)在dcm(4ml)中的混合物中添加cdi(88mg，0.542mmol)。将混合物在25℃下搅拌5h。反应完成后，添加meoh(1ml)以将反应淬灭，并且将混合物在减压下浓缩以得到所希望的粗产物(111mg，粗品)，将其直接用于下一步骤。
[0291]
步骤5.化合物(三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((2r，3s，4r，,5r)-5-(6-苯甲酰胺基-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯)的制备。
[0292]
在n2气氛下将mg(clo4)2(97mg，0.434mmol)添加到从以上步骤4获得的化合物(111mg，粗品)和从以上步骤3获得的化合物(101mg，0.217mmol)在无水dmf(4ml)中的溶液中。将所得混合物在45℃下搅拌16h。反应完成后，向混合物中添加mtbe(20ml)，然后将溶液在25℃下搅拌0.5h。关掉搅拌并且静置10min。滤出过滤残余物，将其通过制备型hplc纯化(柱：waters xbridge 150*25 5u；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：0％-30％，10min)以得到呈白色固体的所希望的化合物(5mg，产率：0.02％)。ms(esi)m/z(m h)

:910。1h nmr(meod,400mhz):δ＝9.09-9.14d,j＝21hz,1h),8.72(s,1h),8.10(d,j＝7.6hz,2h),7.63-7.67(m,1h),7.64-7.58(m,2h),6.27(t,j＝2.4hz,1h),5.68-5.71(m,2h),5.33-5.59(m,1h),5.17-5.20(m,1h),4.30-4.75(m,9h),3.89(m,1h),2.16-2.13(m,3h),2.04-2.00(m,6h),1.94(s,3h)。化合物a28
[0293]
步骤1.化合物(3ar,6r,6ar)-6-(羟基甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-醇的制备。
[0294]
向(3r,4s,5r)-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2,3,4-三醇(10g，66.6mmol)在丙酮(100ml)中的溶液中添加h2so4(3.55ml，66.6mmol)。然后将反应在25℃下搅拌2h。将反应用nahco3固体淬灭直到ph＝7。将混合物过滤并且将过滤的液体在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，1/1)以得到呈无色油状物的所希望的化合物(10g，产率：78.9％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ6.49(d,j＝5.0hz,1h),5.16(d,j＝4.8hz,1h),4.93(t,j＝5.6hz,1h),4.68(d,j＝5.8hz,1h),4.43(d,j＝6.0hz,1h),3.99(dd,j＝6.9,5.1hz,1h),1.37(s,3h),1.24(s,3h)。
[0295]
步骤2.化合物(3ar,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-醇的制备
[0296]
向从以上步骤1获得的化合物(10g，52.5mmol)在dcm(100ml)中的溶液中添加tea(14.6ml，105.1mmol)、tbdpscl(15.9g，57.84mmol)、dmap(642.3mg，5.2mmol)。然后将反应在25℃下搅拌3h。将反应用h2o(30ml)淬灭并且将有机层分离。将有机层用hcl(50ml)、盐水(50ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，1/1)以得到呈无色浆液的所希望的化合物(20g，产率：88.75％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.56-7.71(m,4h),7.38-7.54(m,6h),6.45(d,j＝4.0hz,1h),5.09-5.21(m,1h),4.71(d,j＝6.0hz,1h),4.42(d,j＝6.0hz,1h),3.97-4.11(m,1h),3.54-3.74(m,2h),1.37(s,2h),1.25(s,3h),1.01(s,7h),0.96-1.08(m,1h)。
[0297]
步骤3.化合物2-((3as,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)乙腈的制备。
[0298]
在0℃下向2-二乙氧基磷酰基乙腈(4g，22.5mmol)在dme(40ml)中的溶液中添加nah(903.1mg，22.5mmol，60％纯度)并且将反应在0℃下搅拌0.5h。将从以上步骤2获得的化合物(10.65g，24.8mmol)在dme(100ml)中的溶液添加到反应中并且将反应在25℃下搅拌2h。将h2o(80ml)添加到反应中并且将混合物用ea(100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，10/1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(9.35g，产率：91.68％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.59-7.73(m,4h),7.41-7.53(m,6h),4.81(d,j＝6.0hz,1h),4.65-4.75(m,1h),4.23-4.54(m,1h),4.06-4.15(m,1h),3.62-3.81(m,2h),2.64-2.99(m,2h),1.39-1.48(m,3h),1.29(s,3h),1.01(d,j＝2.3hz,9h)。
[0299]
步骤4.化合物2-((3as,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-3-(二甲基氨基)丙烯腈的制备。
[0300]
向从以上步骤3获得的化合物(10g，22.1mmol)在dmf(100ml)中的溶液中添加化合物1-叔丁氧基-n,n,n',n'-四甲基甲烷二胺(30.87g，177.1mmol)。然后将反应在25℃下搅拌16h。将反应用h2o(100ml)稀释并且用ea(100ml)萃取。将有机层用h2o(100ml x 2)、盐水(100ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩以得到呈黄色浆液的所希望的化合物(11.2g，产率：99.83％)，将其直接用于下一步骤。
[0301]
步骤5.化合物2-((3as,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-3-羟基丙烯腈的制备。
[0302]
向从以上步骤4获得的化合物(11g，21.7mmol)在chcl3(200ml)中的溶液中添加tfa(5.63ml，75.98mmol)在h2o(250ml)中的溶液。将反应在25℃下搅拌16h。将反应用ea(200ml)稀释并且将h2o(200ml)添加到混合物中。将有机层分离并且将有机层用h2o(200ml x 2)、盐水(200ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩以得到呈黄色浆液的所希望的化合物(10.41g，粗品)，将其直接用于下一步骤。
[0303]
步骤6.化合物2-((3as,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-3-(氰基甲氧基)丙烯腈的制备。
[0304]
向从以上步骤5获得的化合物(10.4g，21.7mmol)在dmf(100ml)中的溶液中添加cs2co3(8.49g，26.0mmol)和2-溴乙腈(3.12g，26.0mmol)。然后将反应在25℃下搅拌2h。将反应用h2o(50ml)稀释并且将混合物用ea(100ml x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，5/1)以得到呈黄色浆液的所希望的化合物(9.5g，产率：76.0％)。
[0305]
步骤7.化合物3-氨基-4-((3as,4s,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)呋喃-2-甲腈的制备。
[0306]
在-70℃下向从以上步骤6获得的化合物(10g，19.28mmol)在thf(150ml)中的溶液中添加lda(2m，19.28ml)并且将反应在-70℃下搅拌1h。将反应用h2o(30ml)淬灭并且将混合物在减压下浓缩。将水层用ea(30ml x 3)萃取，将合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，10/1)以得到呈黄色浆液的所希望的化合物(2.6g，产率：26.0％)。ms(esi)(m na

):541.1。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.66(s,1h),7.61(br d,j＝6.6hz,3h),7.36-7.50(m,6h),5.74(br s,2h),4.71-4.86(m,3h),4.07(br d,j＝3.1hz,1h),3.72(br d,j＝4.4hz,2h),3.55-3.65(m,1h),1.50(s,3h),1.30(s,3h),0.98(s,9h)。
[0307]
步骤8.化合物7-((3as,4s,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)呋喃并[3,2-d]嘧啶-4-胺的制备。
[0308]
向从以上步骤7获得的化合物(4.00g，7.7mmol)在etoh(300ml)中的溶液中添加乙酸；甲脒(16.0g，154.2mmol)，并且将反应在100℃下搅拌48h。将反应在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，1/1)以得到呈黄色浆液的所希望的化合物(2g，产率：47.6％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.19(d,j＝4.5hz,2h),7.58(t,j＝6.8hz,4h),7.40-7.47(m,2h),7.31-7.39(m,6h),5.14(dd,j＝6.4,3.6hz,1h),5.06(d,j＝3.8hz,1h),4.84(dd,j＝6.3,3.5hz,1h),4.08-4.16(m,1h),3.74(qd,j＝10.7,5.5hz,2h),1.90(s,1h),1.51(s,3h),1.30(s,3h),0.95(s,9h)。
[0309]
步骤9.化合物7-((3as,4s,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-n-三苯甲基呋喃并[3,2-d]嘧啶-4-胺的制备。
[0310]
向从以上步骤8获得的化合物(1.2g，2.2mmol)在dmf(10ml)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(512.2ul，4.4mmol)和trtcl(1.23g，4.4mmol)、agno3(747.1mg，4.4mmol)。然后将反应在25℃下搅拌2h。将反应用ea稀释并且将混合物过滤。将过滤的液体在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，1/1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(1.7g，产率：98.1％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32(s,1h),8.22(s,1h),7.92(s,1h),7.51-7.62(m,4h),7.29-7.43(m,12h),7.26(t,j＝7.5hz,5h),7.15-7.21(m,3h),5.76(s,1h),5.07-5.12(m,1h),5.03-5.06(m,1h),4.79(dd,j＝6.3,3.8hz,1h),4.06-4.13(m,1h),3.66-3.80(m,2h),1.49(s,3h),1.27(s,3h),0.93(s,9h)。
[0311]
步骤10.化合物((3ar,4r,6s,6as)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)呋喃并[3,2-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲醇的制备。
[0312]
向从以上步骤9获得的化合物(1.7g，2.16mmol)在thf(20ml)中的溶液中添加tbaf(1m，3.24ml)。然后将反应在25℃下搅拌1h。将反应用h2o(20ml)稀释并且将混合物用ea(20ml)萃取。将有机层用盐水(20ml x 2)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，2/1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(1.1g，产率：92.77％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.37(s,1h),8.31(s,1h),7.96(s,1h),7.32-7.39(m,6h),7.26(t,j＝7.7hz,6h),7.16-7.22(m,3h),5.26(dd,j＝6.8,5.3hz,1h),4.94-5.00(m,2h),4.70-4.79(m,1h),4.04-4.08(m,1h),3.44-3.55(m,2h),1.50(s,3h),1.27(s,3h)。
[0313]
步骤11.化合物氢膦酸((3ar,4r,6s,6as)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)呋喃并[3,2-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基酯的制备。
[0314]
在25℃下在2h内向从以上步骤10获得的化合物(1g，1.82mmol)在py(5ml)中的溶液中添加亚磷酸二苯酯(1.28g，5.46mmol)。将tea(1.27ml，9.10mmol)和h2o(327.78ul，18.19mmol)添加到反应中并且将反应在25℃下搅拌0.5h。将反应在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，10/1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(1.1g，产率98.5％)。
[0315]
步骤12化合物o-(((3ar,4r,6s,6as)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)呋喃并[3,2-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)o,o-二氢硫代磷酸酯的制备。
[0316]
在0℃下在15min内向从以上步骤11获得的化合物(1.1g，1.79mmol)在py(10ml)和tea(10ml)中的溶液中添加tmscl(1.82ml，14.3mmol)。将反应在0℃下搅拌1h并且然后将s
(574.83mg，17.93mmol)添加到反应中。将反应在0℃下搅拌45min。将反应用h2o(1ml)淬灭，并且将反应过滤。将滤饼用meoh(5ml x 3)洗涤。将过滤的液体在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(dcm/meoh＝20/1，10/1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(2.5g，产率：93.36％50％纯度，et3n)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33(d,j＝7.0hz,2h),7.99(s,1h),7.34-7.40(m,6h),7.27(t,j＝7.5hz,6h),7.15-7.23(m,4h),5.09(dd,j＝6.3,4.0hz,1h),5.02(d,j＝3.8hz,1h),4.79(dd,j＝6.3,3.3hz,1h),4.09-4.17(m,2h),3.79(br t,j＝6.7hz,2h),2.93(q,j＝7.1hz,33h),1.49(s,3h),1.23-1.33(m,3h),1.14(t,j＝7.2hz,50h)。
[0317]
步骤13.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((3ar,4r,6s,6as)-2,2-二甲基-6-(4-(三苯甲基氨基)呋喃并[3,2-d]嘧啶-7-基)四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0318]
向从以上步骤12获得的化合物(443mg，868.umol)在dmf(10ml)中的溶液中添加化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-((羟基(1h-咪唑-1-基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.12g，868.01umol，50％纯度)和zncl2(1.42g，10.42mmol)。然后将反应在25℃下搅拌16h。将反应在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(dcm/meoh＝20/1，10/1)以得到呈白色固体的所希望的化合物(2g，粗品)。
[0319]
步骤14.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基呋喃并[3,2-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备
[0320]
将从以上步骤13获得的化合物(200mg，183.83umol)添加tfa(1.5ml20.26mmol)在dcm(5ml)中的溶液中并且将反应在25℃下搅拌7h。将反应用tea处理直到ph＝6。将混合物在减压下浓缩。将粗产物通过制备型hplc纯化(水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：1％-25％，10min)以得到呈白色固体的最终的化合物(30.0mg，产率：20.2％)。ms(esi)(m h)

:806.0。1h nmr(meod,400mhz):δ＝8.20-8.34(m,2h),7.71(s,1h),7.06(s,1h),5.69-5.78(m,1h),5.58-5.68(m,1h),5.32-5.45(m,1h),5.22(dd,j＝10.0,2.8hz,1h),5.11(d,j＝3.5hz,1h),4.60-4.79(m,1h),4.34-4.58(m,2h),4.13-4.34(m,5h),3.80-3.97(m,1h),
3.12(q,j＝7.3hz,1h),2.13(s,3h),2.01-2.08(m,6h),1.94(s,3h),1.10ppm(t,j＝7.2hz,1h)。化合物a30
[0321]
步骤1.化合物甲磺酸2-((3as,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-2-氰基乙烯酯的制备。
[0322]
在0℃下向2-((3as,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-3-羟基丙烯腈(1g，2.08mmol)在dcm(16ml)中的溶液中添加et3n(316.45mg，3.13mmol，435.29μl)，并且然后经10min的时间段逐滴添加在dcm(8ml)中的mscl(358.24mg，3.13mmol，242.06μl)。将混合物在0℃下搅拌1h。将反应混合物用dcm(10ml)稀释并且然后用水(20ml x 3)洗涤。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并且浓缩以得到残余物。获得呈棕色油状物的所希望的化合物(1.34g，粗品)，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。
[0323]
步骤2.化合物3-氨基-4-((3as,4s,6r,6ar)-6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)噻吩-2-甲酰胺的制备。
[0324]
向从以上步骤1获得的化合物(1.34g，2.40mmol)在etoh(20ml)中的溶液中添加2-硫烷基乙酰胺(437.91mg，4.81mmol)和na2co3(509.30mg，4.81mmol)。将混合物在85℃下搅拌6h。将反应混合物过滤并且浓缩以得到残余物。将残余物通过快速硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至0:1)。获得呈淡黄色油状物的所希望的化合物(118mg，产率：8.18％)。ms(esi)m/z(m h)

:553.2。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.66(br d,j＝7.78hz,5h),7.36-7.51(m,7h),7.10(s,1h),5.24(br s,2h),4.86(dd,j＝6.65,3.64hz,1h),4.77(d,j＝6.02hz,1h),4.66-4.72(m,1h),4.17(q,j＝3.26hz,1h),3.92-3.98(m,1h),3.83-3.89(m,1h),1.61(s,3h),1.37(s,3h),1.07(s,9h)。
[0325]
步骤3.化合物3-氨基-4-((3as,4s,6r,6ar)-6-(羟基甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)噻吩-2-甲酰胺的制备。
[0326]
将tbaf(1m，1.87ml，1.5当量)添加到从以上步骤2获得的化合物(690mg，1.25mmol)在thf(7ml)中的溶液中并且然后在25℃下搅拌1h。将反应用etoac(50ml)稀释，用h2o(20ml x 3)和盐水(20ml)萃取。将有机相合并，并且浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至1:2)。获得呈黄色油状物的所希望的化合物(340mg，产率：86.64％)。ms(esi)m/z(m na

):337.0.1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.11(s,1h),6.16(br,s,2h),5.21(s,2h),4.83-4.73(m,2h),4.72-4.65(m,1h),4.22-4.15(m,1h),3.95-3.86(m,1h),3.83-3.74(m,1h),1.60(s,3h),1.35(s,3h)。
[0327]
步骤4.化合物氢膦酸((3ar,4r,6s,6as)-6-(4-氨基-5-氨基甲酰基噻吩-3-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲酯的制备。
[0328]
将亚磷酸二苯酯(949.84mg，4.06mmol，778.56μl，3当量)添加到从以上步骤3获得的化合物(425mg，1.35mmol在吡啶(5ml)中的溶液中并且在20℃下搅拌4h。然后添加tea(684.02mg，6.76mmol，940.88μl，5当量)和h2o(243.56mg，13.52mmol，243.56μl，10当量)并且在25℃下搅拌0.5h。在减压下除去溶剂以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法柱纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。获得呈黄色固体的所希望的化合物(700mg，产率：93.80％，1.7et3n)。ms(esi)m/z(m h)

:378.9。
[0329]
步骤5.化合物o-(((3ar,4r,6s,6as)-6-(4-氨基-5-氨基甲酰基噻吩-3-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)o,o-二氢硫代磷酸酯的制备。
[0330]
在10min内将tmscl(1.11g，10.18mmol，1.29ml)逐滴添加到从以上步骤4获得的化合物(700mg，1.27mmol，1.7et3n)在吡啶(5ml)和et3n(5ml)中的溶液中，然后将反应在0℃下搅拌1h。添加硫(407.83mg，12.72mmol，10当量)并且在0℃下搅拌50min。添加h2o(160.40mg，8.90mmol，160.40μl，7当量)以淬灭反应。将反应过滤并且用meoh(10ml x 3)洗涤以除去固体，并且将滤液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。获得呈棕色固体的所希望的化合物(660mg，产率：63.22％，50％纯度)。ms(esi)m/z(m h)

:411.0。
[0331]
步骤6.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((3ar,4r,6s,6as)-6-(4-氨基-5-氨基甲酰基噻吩-3-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0332]
向咪唑-1-基-[(2s,3r,5s)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(1s)-2-乙酰氧基-1-氟-乙基]四氢吡喃-2-基]氧基-次膦酸(491.74mg，804.09μmol，et3n)在dmf(5ml)中的溶液中添加从以上步骤5获得的化合物(660mg，804.09μmol，50％纯度)，并且然后添加zncl2(1.64g，12.06mmol，564.92μl)，并且在25℃下在n2气氛下搅拌16。将反应用dcm(20ml)稀释并且与硅胶混合并且然后通过硅胶色谱法纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。获得呈棕色固体的所希望的化合物(2.15g，粗品)。ms(esi)m/z(m h)

:853.1。
[0333]
步骤7.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((2r,3s,4r,5s)-5-(4-氨基-5-氨基甲酰基噻吩-3-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0334]
将tfa(2ml)添加到从以上步骤6获得的化合物(1g，1.17mmol)在dcm(10ml)中的溶
液中，在25℃下搅拌1h。将反应用et3n调节至ph＝6，然后在减压下除去溶剂以得到残余物。将残余物通过制备型hplc纯化(柱：phenomenex genimi nx c18150*40mm*5um；流动相：[水(0.05％nh3h2o 10mm nh4hco3)-acn]；b％：1％-30％，8min)。获得呈白色固体的所希望的化合物(30mg，产率：3.05％)。ms(esi)m/z(m h)

:813.1。1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.45(s,1h),5.76-5.6(m,2h),5.50-5.30(m,1h),5.25-5.15(m,1h),4.78-4.68(m,2h),4.65-4.35(m,3h),4.32-4.06(m,4h),3.94-3.76(m,1h),3.02(q,j＝8.0hz,14h),2.19-1.90(m,12h),1.24(t,j＝8.0hz,20h)。化合物a31
[0335]
步骤1.化合物二苯甲酸(2r,3r,4r,5r)-2-(4-氨基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-5-((苯甲酰氧基)甲基)四氢呋喃-3,4-二基酯的制备。
[0336]
将(e)-2-[(4s,6r,6as)-6-[[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基甲基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基]-3-羟基-丙-2-烯腈(6.5g，13.55mmol，1当量)、氨基硫脲(1.85g，20.33mmol，1.5当量)、acoh(2.71g，45.20mmol，2.59ml，3.34当量)、h2o(15ml)在etoh(60ml)中的溶液在80℃下搅拌2h。将反应在减压下浓缩以除去溶剂。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，5/1)。获得呈黄色浆液的所希望的物质(6g，产率：80.10％)。
[0337]
步骤2.化合物4-[(4s,6r,6as)-6-[[叔丁基(二苯基)甲硅烷基]氧基甲基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基]-5-氨基-吡唑-1-硫代甲酰胺的制备。
[0338]
向从以上步骤1获得的化合物(4g，7.24mmol)在etoh(5ml)中的溶液中添加etona(1m，7.24ml)并且将反应在25℃下搅拌0.5h。将反应用acoh(500mg)淬灭并且将混合物在减下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20/1，2/1)。获得呈黄色浆液的所希望的物质(3.5g，产率：87.50％)。ms(esi)m/z(m h)

:553.2。
[0339]
步骤3.化合物5-氨基-4-((3as,6r,6ar)-6-(羟基甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)-1h-吡唑-1-硫代甲酰胺的制备。
[0340]
将tbaf(1m，10.58ml，1.5当量)添加到从以上步骤2获得的化合物(3.9g，7.06mmol，1当量)在thf(40ml)中的溶液中并且然后在25℃下搅拌1h。将反应用etoac(60ml)稀释，用h2o(30ml x 3)和盐水(30ml)萃取。将有机相浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化(pe:ea＝1:0至1:2)。获得呈黄色油状物的所希望的化合物(840mg，产率：37.87％)。ms(esi)m/z(m na

):336.9。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(s,1h),7.31(d,j＝6.0hz,1h),6.71(s,1h),4.95-4.73(m,2h),4.72-4.53(m,1h),4.29-4.05(m,2h),4.02-3.89(m,1h),3.86-3.75(m,1h),1.65-1.50(m,3h),1.45-1.31(m,3h)。
[0341]
步骤4.化合物氢膦酸((3ar,4r,6as)-6-(5-氨基-1-硫代氨基甲酰基-1h-吡唑-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲酯的制备。
[0342]
将亚磷酸二苯酯(949.84mg，4.06mmol)添加到从以上步骤3获得的化合物(840mg，2.67mmol)在吡啶(8ml)中的溶液中并且在20℃下搅拌4h。然后添加tea(1.35g，13.36mmol，1.86ml)和h2o(481.39mg，26.72mmol，481.39μl)并且在20℃下搅拌0.5h。在减压下除去溶剂以得到粗产物。将反应用dcm(20ml)稀释并且与硅胶混合并且然后在硅胶色谱柱上纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。获得呈棕色固体的所希望的产物(1.76g，粗品，2.7et3n)。ms(esi)m/z(m na

):378.9。
[0343]
步骤5.化合物o-(((3ar,4r,6as)-6-(5-氨基-1-硫代氨基甲酰基-1h-吡唑-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲基)o,o-二氢硫代磷酸酯的制备。
[0344]
在0℃下在1h内将tmscl(2.35g，21.61mmol，2.74ml)逐滴添加到从以上步骤4获得的化合物(1.76g，2.70mmol，2.7et3n)在吡啶(8ml)和et3n(8ml)中的溶液中。将反应在0℃下搅拌1h，然后添加硫(866.16mg，27.01mmol)并且在0℃下搅拌60min。添加h2o(340.65mg，18.91mmol，340.65ul，7当量)以淬灭反应。将反应过滤并且用meoh(10ml x 3)洗涤以除去固体，并且将滤液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。获得呈黄色固体的所希望的化合物(840mg，产率：50.75％，2et3n)。ms(esi)m/z(m-60 h)

:351.8。(碎片)
[0345]
步骤6.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((3ar,4r,6as)-6-(5-氨基-1-氨基甲酰基-1h-吡唑-4-基)-2,2-二甲基四氢呋喃并[3,4-d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0346]
在n2气氛下将从以上步骤5获得的化合物(428.31mg，773.56umol，2et3n)添加到咪唑-1-基-[(2s,3r,5s)-3,4,5-三乙酰氧基-6-[(1s)-2-乙酰氧基-1-氟-乙基]四氢吡喃-2-基]氧基-次膦酸(473.07mg，773.56μmol，1当量，et3n)在dmf(5ml)中的溶液中。然后添加zncl2(1.58g，11.60mmol，543.47μl，15当量)并且在n2气氛下将反应在25℃下搅拌16h。将反应用dcm(20ml)稀释并且与硅胶混合并且然后通过硅胶色谱法纯化(dcm:meoh＝1:0至1:1，添加0.5％et3n)。获得呈棕色固体的所希望的化合物(1.5g，粗品)。ms(esi)m/z(m h)

:852.2。
[0347]
步骤7.化合物三乙酸(2s,3s,4s,5s,6s)-2-((s)-2-乙酰氧基-1-氟乙基)-6-(((((((2r,3s,4r)-5-(5-氨基-1-氨基甲酰基-1h-吡唑-4-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)硫代磷酰基)氧基)(羟基)磷酰基)氧基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯的制备。
[0348]
将tfa(3.08g，27.01mmol，2ml)添加到从以上步骤6获得的化合物(1.3g，
1.52mmol)在dcm(5ml)中的混合物中并且在25℃下搅拌1.5h。将反应用et3n调节至ph＝6，然后在减压下除去溶剂以得到残余物。将残余物通过制备型hplc纯化。ms(esi)m/z(m h)

:812.1。
[0349]
通过以下非限制性实施例进一步描述和举例说明本发明。实施例实施例1.化合物28抑制hbv基因表达和抗血清产生
[0350]
在hbv-aav小鼠模型中，化合物28的施用(0.1mg/kg，每周两次“biw”)导致hbv dna表达的下调以及hbsag和hbeag血清水平的降低。在第1天，向雄性c57bl/6小鼠静脉注射aav8-1.3hbv(1x10
11
v/g)。在第28天和第31天后，然后向每只小鼠腹膜内注射0.1mg/kg化合物28或pbs对照。在第35天，收集小鼠血清用于hbv dna qpcr分析，通过elisa进行hbsag和hbeag血清分析。第一次给药后7天，化合物28处理的小鼠显示出hbv dna表达(图2a)和hbsag(图2b)和hbeag(图2c)血清水平两者的明显降低。
[0351]
化合物28的结构在下面示出。
[0352]
实施例2.化合物28显著增加血清中针对hbsag，adw的igg产生
[0353]
在第0天将八周龄c57bl/6j小鼠(雌性)用hbsag，adw(1mg/剂量)或1mg/剂量的hbsag，adw与化合物28(1nmol/剂量)的组合进行皮内(i.d.)免疫。在第14天将小鼠用第二免疫进行加强，并且在第35天收集血清。通过elisa确定hbsag，adw特异性总igg血清滴度(od
450
)。当hbsag，adw与1nmol/剂量的化合物28组合时的抗hbsag，adw igg滴度是当单独注射hbsag，adw时的2倍(图3)。实施例3.化合物28引起导致哮喘和copd的免疫细胞的产生减少
[0354]
将八周龄雄性c57bl/6小鼠分组(n＝8/组)，并且在第-1、0和1天以0、4或20nmol/剂量腹膜内(i.p.)注射化合物28。另外，在第0天向小鼠气管内(i.tr.)施用溶解在50μl盐水中的0或30μg/剂量的猪胰弹性蛋白酶(ppe)。在第2天处死小鼠并且通过支气管肺泡灌洗(bal)收集免疫细胞。然后使细胞经受荧光团缀合的抗体染色并且通过流式细胞术进行分析。用flowjo流式细胞仪(treestar)处理数据。免疫细胞被门控为单细胞》活细胞》cd11c
高
siglecf
低
mhcii
高
(树突细胞)、cd11c
低
cd11b
高
ly-6g
高
(嗜中性粒细胞)和cd11c
低
cd11b
高
ly-6g
低
siglecf
高
(嗜酸性粒细胞)。
[0355]
在ppe施用后第2天，观察到所有三种类型的免疫细胞：嗜酸性粒细胞(图4a)、树突细胞(图4b)和嗜中性粒细胞(图4c)的产生显着增加。嗜中性粒细胞产生的快速增加是急性的弹性蛋白酶诱导的肺气肿的早期迹象。如图36所示，4nmol/剂量和20nmol/剂量的化合物28在ppe施用后均显著抑制嗜酸性粒细胞和树突细胞的产生增加。ppe施用后嗜中性粒细胞的产生增加也受到抑制，但仅在20nmol/剂量的水平下。这些结果表明，化合物28可以是针对哮喘和copd的潜在的治疗性候选物，哮喘和copd的特征分别是肺中的嗜酸性粒细胞浸润
和嗜中性粒细胞募集。实施例4.与化合物15相比，化合物28具有更长的免疫激活作用
[0356]
通过监测趋化因子rantes(ccl5)的血清水平来测试化合物15和28在体内刺激alpk1激活的能力，所述血清水平在alpk1激活后升高。简而言之，向c57/b6小鼠(n＝3只小鼠/组)皮下注射pbs(阴性对照)或10nmol化合物15或化合物28。在注射后24小时或48小时收集血清。如图5a-b所示，在此测定中，化合物28显示出更长的免疫激活持续时间，证明了氟取代的出乎意料的效果。这些结果表明，氟修饰可以为化合物提供增加的代谢抗性，从而延长其体内活性。实施例5.化合物28衍生物具有增加的细胞效力
[0357]
将hek293细胞用h1b-adp衍生物(a1、a2、a3和a4)或化合物28处理4小时，然后使用il-8酶联免疫测定(elisa)分析il-8分泌。il-8分泌指示alpk1激活。结果示出在图6和下表2a中。使用graphpad prism确定每种化合物的ec50。表2a：图6中化合物28和衍生物的活性。化合物ec50(nm)2845.0a13.1a27.1a32.0a419.2
[0358]
结果显示，与化合物28相比，衍生物的ec50值低得多，表明衍生物化合物的长链脂肪酸增强了生物活性，可能是通过促进化合物进入细胞实现的。实施例6.使用nf-kb报告系统的化合物28衍生物的激动剂活性也显示衍生物的效力增加。
[0359]
在前面的实施例(实施例5)中，il-8分泌用作激活的alpk1信号传导的指标。il-8分泌在alpk1/tifa/traf6激活nf-kb的下游，但也可以由tifa/traf6以不alpk1依赖的方式促进il-8分泌。在此实施例中，nf-kb启动子驱动的基因表达用作更直接的alpk1激活指标。在我们的研究中，用两种测定获得的ec50值相似。
[0360]
使用稳定表达nf-kb报告构建体的hek293细胞测定nf-kb激活，所述构建体包含驱动碱性磷酸酶(ap)的表达的nf-kb启动子。在此系统中，nf-kb启动子活性的激活驱动ap的表达，ap使用生色底物磷酸对硝基苯酯(pnpp)进行检测。
[0361]
为了评估测试化合物的alpk1激动剂活性，将hek293细胞接种在96孔板中并且允许贴壁过夜。然后将细胞暴露于分级浓度的化合物a1、a2、a3、a4、a18、a26、a27、a28和a30。化合物28被作为参考包括。处理后，收集细胞培养上清液并且使用pnpp测定分析碱性磷酸酶活性。结果示出在图7a-7b和下表2b-c中。使用graphpad prism确定每种化合物的ec50。化合物a18没有活性(数据未示出)。表2b：图7a中化合物28和衍生物的活性。化合物ec50(nm)2845.0a111.0
a211.9a33.9a419.1表2c：图7b中化合物28和衍生物的活性。化合物ec50(nm)2867.0a2610,096a2737.8a283.9a3042.3
[0362]
数据表明碳苷衍生物比硝基苷衍生物更有活性。这可能是由于在碳苷衍生物的情况下氢键增加，这可以用于增加alpk1激动剂活性。
[0363]
本领域的技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定如本文所述的本发明的具体实施方案的许多等效方案。此类等效方案旨在被以下权利要求涵盖。
[0364]
将本文引用的所用参考文献通过引用以其整体并且出于所有目的并入本文，其程度如同具体地或单独地指示将每个单独的出版物或专利或专利申请出于所有目的通过引用以其整体并入。
[0365]
本发明的范围不受本文所述的具体实施例的限制。确实，除了本文所述的内容以外，本发明的各种修改对于本领域技术人员而言也将从以上描述和附图中而变得显而易见。此类修改旨在落入所附权利要求的范围内。