一种快速定量联检心衰三项免疫层析试剂卡的制作方法

1.本实用新型涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种快速定量联检心衰三项免疫层析试剂卡。


背景技术：

2.心力衰竭是各种心脏疾病进展至严重阶段而引起的一种复杂的临床综合征，多见于有基础性心脏疾病的患者，比如高血压、心律失常等。心衰主要由原发性心肌损害和心脏长期容量和(或)压力负荷过重，导致心肌功能由代偿发展为失代偿。根据我国随机的抽样调查表明，心衰的患病率为0.9％，全国约有心衰患者400万人，其中女性(1.0％)高于男性(0.7％)。心衰的患病率随年龄增高而增高，城市高于农村，北方地区高于南方地区，心衰是一种严重的疾病，5年存活率与恶性肿瘤相仿。
3.肌钙蛋白ⅰ(ctn1)是一种心肌调节蛋白，与肌钙蛋白t共同调控钙离子介导的肌动蛋白和肌球蛋白。肌钙蛋白ⅰ与肌钙蛋白t水平阳性的患者住院病死率高，是心衰患者入院后一年病死率或再住院率的独立预测因素，且与bnp具有相似的预后价值。与心肌酶比较，肌钙蛋白ⅰ的灵敏度以及特异性均比较高，属于一种理想的心肌坏死标志物，可作为心肌损伤诊断的金标准。而且，肌钙蛋白ⅰ水平并不会受到心肌损伤部位、性别、年龄、溶栓药物等影响，且其水平可维持15d左右。
4.b型脑钠肽(bnp)和n末端脑钠肽前体(nt-probnp)都属于利尿钠肽(np)家族,主要由心肌细胞分泌，当心肌细胞受到牵拉刺激后，首先分泌b型利钠肽原前体(pre-probnp)，随后形成b型利钠肽原(probnp)，probnp在内切酶的作用下裂解为有利钠、利尿、扩血管等生物活性的bnp和无生物活性的nt-probnp。bnp主要在大血管等部位降解，而nt-probnp主要经肾脏代谢，测定血浆中的bnp或者nt-probnp水平可以对心衰进行诊断和评估。
5.相比于bnp，nt-probnp的半衰期更长、稳定性更好，因此nt-probnp检测早期或轻度心衰的敏感性更高，血样送至实验室的时间更充分，更适用于临床应用。此外，nt-probnp水平可用于心衰的危险分层，研究显示血中nt-probnp水平与心衰严重程度呈正比，且与nyha分级(纽约心脏协会分级标准)显示出良好的相关性，能简便可靠的区分心室功能不全的患者。还有研究表明，高水平的nt-probnp与心源性猝死(scd)明显相关，可作为心源性猝死(scd)风险预测的独立指标，其不仅对充血性心力衰竭(chf)和冠心病患者，而且对有潜在风险的健康人群发生scd也有一定预测价值，成为预测scd风险的一种新指标。但nt-probnp经肾脏代谢，受到肾脏功能影响较大，acei/arb、β-受体阻滞剂、肾上腺素拮抗剂和利尿剂等均可使nt-probnp浓度降低，因此需要在进行药物治疗前测定nt-probnp的基础水平，作为诊断、预后和疗效评估的参考。
6.st2目前通用译名为“生长刺激表达基因2蛋白”，是心肌细胞受到生物机械应力后产生的一种蛋白，文献报道首次出现在2015年北京协和医学院张荣成医师撰写的一篇题为《蛋白标记物在心力衰竭患者的临床应用》的综述中。人体st2有两种存在形式：可溶性st2(soluble st2,sst2)和跨膜形式st2(st2l)，循环中所检测及目前与心衰相关研究所述及
者一般均指sst2，sst2作为诱骗受体能阻断白细胞介素33的抗心肌细胞肥大及心肌纤维化的作用，在体内发挥心脏保护作用，是心脏生物力学受损的标记物。st2的作用介于炎性标记物和机械应力之间而起双重作用。st2在心衰患者中水平升高，并能预测其预后。pride研究表明，心源性比其他原因所致的呼吸困难st2水平高很多(0.5ug/lvs 0.15ug/l)；st2＞0.2ug/l能更好预测心衰患者1年的病死率；januzzi等研究表明，虽然nt-probnp诊断急性心衰优于st2，但死亡患者体内st2水平比存活患者高(1.03ug/l vs 0.18ug/l)，与心衰预后关系密切。
7.联合检测ctn1、nt-probnp和st2能够更准确的反应不同性别、年龄、心衰患者的严重程度及预后情况。本实用新型基于侧流免疫层析技术，使用双抗体夹心法，以玻璃纤维材质的结合垫作为固定相，涂布有量子点标记的相应的抗体，以缓冲液作为流动相通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动，该方法操作简便，用时短，且特异性强。


技术实现要素：

8.为解决上述问题，本实用新型公开一种快速定量联检心衰三项免疫层析试剂卡，以供心衰患者临床诊断以及预后评估，其操作方便，效率高。
9.为达到上述目的，本实用新型采用如下技术方案：
10.一种快速定量联检心衰三项免疫层析试剂卡，包括卡壳，所述卡壳包括上卡壳和下卡壳，所述上卡壳上有检测窗口和加样孔，所述下卡壳的卡壳槽里固定有底板，所述底板上依次粘贴有吸水垫、反应垫、结合垫和样品垫，所述反应垫上设置有一条质控线和至少一条检测线，所述上卡壳和下卡壳相互卡接固定，透过所述检测窗口和加样孔可以观察到反应垫和吸水垫。
11.优选的，所述吸水垫的上端紧靠所述底板的上端，所述吸水垫的下端覆盖所述反应垫的上端2mm，所述结合垫上端覆盖所述反应垫的下端2mm，所述样品垫的上端覆盖所述结合垫的下端2mm。
12.优选的，所述结合垫上包被有与量子点偶联的ctnⅰ抗体1、nt-probnp抗体1以及st2抗体1，所述质控线上包被有经稀释的羊抗鼠igg单克隆抗体。
13.优选的，所述反应垫上设置有一条质控线。
14.优选的，所述反应垫上设置有三条检测线，三条所述检测线分别包被有与标记ctnⅰ抗体1具有不同结合位点的ctnⅰ抗体2，与标记nt-probnp抗体1具有不同结合位点的nt-probnp抗体2，以及与标记st2抗体1具有不同结合位点的st2抗体2。
15.优选的，所述卡壳采用塑料材质，所述底板采用pvc板材质，所述吸水垫采用滤纸材质，所述反应垫为硝酸纤维素膜，所述结合垫和样品垫均为使用表面活性剂缓冲液浸泡后的玻璃纤维。
16.优选的，所述结合垫上喷涂的材料为量子点、磁性微粒、纳米金属离子、乳胶颗粒、碳纳米粒子、稀土离子和荧光颗粒中的一种。
17.与现有技术相比本实用新型的有益效果在于：
18.本实用新型具有检测方便，检测速度快、检测特异性强、灵敏度高等优点，可进行定量、半定量分析。
附图说明
19.构成本技术的一部分的附图用来提供对本实用新型的进一步理解，本实用新型的示意性实施例及其说明用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的不当限定。在附图中：
20.图1为本实用新型结构示意图；
21.图2为实施例一结构示意图；
22.图3为实施例一结构示意图；
23.图4为实施例二结构示意图；
24.图5为实施例二结构示意图。
具体实施方式
25.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
26.为了使本技术领域的人员更好地理解本技术方案，下面将结合本技术实施例，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本技术保护的范围。
27.实施例一
28.如图1-3所示，一种快速定量联检心衰三项免疫层析试剂卡，包括卡壳，所述卡壳包括上卡壳1和下卡壳2，所述上卡壳1上有检测窗口3和加样孔4，所述下卡壳2的卡壳槽里固定有底板5，所述底板5上依次粘贴有吸水垫6、反应垫7、结合垫10和样品垫11，所述反应垫7上设置有一条质控线8和一条检测线9，所述上卡壳1和下卡壳2相互卡接固定，透过所述检测窗口3可以观察到反应垫7。所述一条检测线包被有与标记ctnⅰ抗体1具有不同结合位点的ctnⅰ抗体2，或是与标记nt-probnp抗体1具有不同结合位点的nt-probnp抗体2，或是与标记st2抗体1具有不同结合位点的st2抗体2；所述吸水垫6的上端紧靠所述底板5的上端，所述吸水垫6的下端覆盖所述反应垫7的上端2mm，所述结合垫10上端覆盖所述反应垫7的下端2mm，所述样品垫11的上端覆盖所述结合垫10的下端2mm。
29.所述结合垫10上包被有与量子点偶联的ctnⅰ抗体1、nt-probnp抗体1以及st2抗体1，所述质控线8上包被有有经稀释的羊抗鼠igg单克隆抗体。
30.所述卡壳采用塑料材质，所述底板5采用pvc板材质，所述吸水垫6采用滤纸材质，所述反应垫7为硝酸纤维素膜，所述结合垫10和样品垫11均为使用表面活性剂缓冲液浸泡后的玻璃纤维。
31.所述结合垫10上喷涂的材料为量子点、磁性微粒、纳米金属离子、乳胶颗粒、碳纳米粒子、稀土离子和荧光颗粒中的一种。
32.如图1、图4-5所示，一种快速定量联检心衰三项免疫层析试纸条，包括卡壳，所述卡壳包括上卡壳1和下卡壳2，所述上卡壳1上有检测窗口3和加样孔4，所述下卡壳2的卡壳槽里固定有底板5，所述底板5上依次粘贴有吸水垫6、反应垫7、结合垫10和样品垫11，所述反应垫7上设置有一条质控线8和三条检测线9，所述上卡壳1和下卡壳2相互卡接固定，透过所述检测窗口3可以观察到反应垫7。所述三条检测线9分别包被有与标记ctnⅰ抗体1具有不
同结合位点的ctnⅰ抗体2，与标记nt-probnp抗体1具有不同结合位点的nt-probnp抗体2，以及与标记st2抗体1具有不同结合位点的st2抗体2。
33.所述吸水垫6的上端紧靠所述底板5的上端，所述吸水垫6的下端覆盖所述反应垫7的上端2mm，所述结合垫10上端覆盖所述反应垫7的下端2mm，所述样品垫11的上端覆盖所述结合垫10的下端2mm。
34.所述结合垫10上包被有与量子点偶联的ctnⅰ抗体1、nt-probnp抗体1以及st2抗体1，所述质控线8上包被有有经稀释的羊抗鼠igg单克隆抗体。
35.所述卡壳采用塑料材质，所述底板5采用pvc板材质，所述吸水垫6采用滤纸材质，所述反应垫7为硝酸纤维素膜，所述结合垫10和样品垫11均为使用表面活性剂缓冲液浸泡后的玻璃纤维。
36.所述结合垫10上喷涂的材料为量子点、磁性微粒、纳米金属离子、乳胶颗粒、碳纳米粒子、稀土离子和荧光颗粒中的一种。
37.以上所述仅为本实用新型的优选实施例而已，并不用于限制本实用新型，对于本领域的技术人员来说，本实用新型可以有各种更改和变化。凡在本实用新型的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进、部件拆分或组合等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。