治疗癫痫的方法和组合物与流程

治疗癫痫的方法和组合物
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求于2019年5月29日提交的美国临时申请第62/853,971号的优先权，将该申请出于所有目的通过引用整体并入本文。
3.就联邦资助的研究和开发中的发明权利的声明
4.本发明是在国立卫生研究院授予的合同第r01 ns096976号的政府支持下完成的。政府享有本发明中的某些权利。


背景技术：

5.drave综合征(ds)是一种灾难性小儿癫痫，伴有严重的智力障碍、社会发展受损和持续的耐药性癫痫发作。其主要原因之一是电压门控钠通道nav1.1(scn1a)的突变。ds和其他癫痫症患者经历的癫痫发作无法使用现有的抗癫痫药物(aed)进行充分管理，患ds的儿童不适合进行神经外科切除术。因此，本领域需要癫痫治疗选择，尤其是对于ds和相关灾难性小儿癫痫的那些。本文提供对本领域中的这些问题和其它问题的解决方案。


技术实现要素：

6.本文提供用于治疗癫痫的方法和组合物。一方面，本文提供选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括将测试化合物与5-羟色胺-2b受体(5-ht
2b
)接触，并测量测试化合物的5-ht
2b
激动活性。
7.另一方面，本文提供选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括将测试化合物与5-ht
2b
受体接触，并测量测试化合物的5-ht
2b
激动活性。该方法进一步包括将测试化合物施用于癫痫动物模型并测量所述癫痫动物模型中的行为活动。
8.另一方面，本文提供一种在有需要的受试者中治疗癫痫的方法。该方法包括向所述受试者施用有效量的5-ht
2b
特异性受体激动剂。
附图说明
9.图1(a-b)：克立咪唑类似物的表型筛选。筛选了二十八种克立咪唑类似物在抑制scn1lab突变斑马鱼中观察到的高速癫痫发作样游泳行为的功效。这些图显示了在(图1a)100μm或(图1b)250μm时筛选的5dpf幼虫的平均游泳速度的变化。抑制癫痫发作活动的阈值(阳性命中-标记的数据点)被确定为平均游泳速度的降低≥40％(虚线)。除标记点外的虚线下方的数据点代表暴露90分钟后被归类为有毒的化合物。热图显示了第一次试验(1-6)中六只个体幼虫的速度的％变化。试验1和2显示了六条鱼的平均速度变化。克立咪唑类似物25(*)未能以250μm进入溶液，因此不考虑用于进一步测试。
10.图2(a-i)：评估减少scn1lab突变斑马鱼癫痫发作样游泳行为的克立咪唑类似物。从体内筛选中鉴定为阳性的克立咪唑类似物是新鲜合成的，并重新测试其抑制5dpf scn1lab突变斑马鱼的癫痫发作样行为的功效。这些图显示了(图2a)化合物4、(图2b)化合物6和(图2c)化合物20四种浓度的平均速度变化。每个条形代表来自三个独立实验的速度
平均变化
±
sem(每个实验六个个体幼虫)。毒性由虚条形指示。速度下降的阈值≥40％(虚线)。在暴露30分钟(黑色条)和90分钟(灰色条)后，记录幼虫的运动10分钟。对于六个个体scn1lab斑马鱼的单个实验，显示了代表性原始10分钟跟踪图。显示了每个克立咪唑类似物的化学结构(图2d-2f)。(图2g)化合物4、(图2h)化合物6和(图2i)化合物20的体外放射性配体结合分析揭示了5-ht
2b
r相对于5-ht2r亚型的特异性。化合物sb206553用作5-ht
2b
r结合的阳性对照。
11.图3(a-h)：5ht
2b
r激动剂在scn1lab突变斑马鱼中的剂量反应评估。测试了5ht
2b
r激动剂在减少5dpf scn1lab突变斑马鱼的高速癫痫发作样行为方面的功效。这些图表显示了三种浓度的(图3a)甲基麦角新碱、(图3b)6-apb、(图3c)去乙芬氟拉明、(图3d)bw-723c86、(图3e)ro-60-0175、(图3f)tl-99、(图3g)m-cpp和(图3h)cp-809，101的平均速度。在暴露30分钟(黑色条)和90分钟(灰色条)后，记录幼虫的运动10分钟。每个条形代表来自三个独立实验的速度平均变化
±
sem(每个实验六个个体幼虫)。速度下降的阈值≥40％(虚线)。显示了六只个体5dpf scn1lab斑马鱼在基线时以及在暴露于100μm的每种化合物30分钟和90分钟后的10分钟记录的代表性跟踪图。
12.图4(a-c)：电生理检测，以鉴定拯救scn1lab突变癫痫表型的药物。(图4a)使用放置在5dpf琼脂固定化scn1lab幼虫的前脑中的电极获得电生理记录，该幼虫先前在运动测定中表现出抑制的癫痫发作样行为。(图4b)条形图显示了暴露于克立咪唑类似物4(n＝15)、6(n＝12)、20(n＝9)、6-apb(n＝6)、去乙芬氟拉明(norfa)(n＝8)或甲基麦角新碱(meergo)(n＝7)或scn1lab突变体(n＝15)的scn1lab幼虫在10分钟记录时期内癫痫样事件的频率。该图显示了平均值
±
sem，并显示了各个数据点。(图4c)显示了克立咪唑类似物4、6、20、甲基麦角新碱(meergo)和6-apb的代表性场电极记录时期(10分钟)。与未经处理的scn1lab突变斑马鱼(上图)相比，这些化合物显示出事件频率的显著变化。
13.图5(a-d)：重新合成的克立咪唑类似物5和14的行为筛选。克立咪唑类似物(图5a)5和(图5b)14被鉴定为对5ht
2b
r具有特异性结合。随后，它们被独立合成和测试。行为测试证实了之前的筛选结果，并且对5dpf scn1lab突变斑马鱼的高速癫痫发作样行为没有显著影响。这些图表显示了用每种克立咪唑类似物(clemalog)处理的六条鱼的平均速度变化(图5c和图5d)。速度下降的阈值≥40％(虚线)。在暴露30分钟(黑色条)和90分钟(灰色条)后，记录幼虫的运动10分钟。显示基线、暴露于100μm30分钟和90分钟的原始10分钟跟踪图。
14.图6(a-d)：5ht
2b
r激动剂在scn1lab突变斑马鱼中的剂量反应评估。测试了5ht
2b
r激动剂在减少5dpf scn1lab突变斑马鱼的高速癫痫发作样行为方面的功效。这些图表显示了三种浓度的(图6a)卡麦角林、(图6b)溴隐亭、(图6c)阿扑吗啡和(图6d)吡贝地尔的平均速度变化。在暴露30分钟(黑色条)和90分钟(灰色条)后，记录幼虫的运动10分钟。每个条形代表来自三个独立实验的速度平均变化
±
sem(每个实验六个个体幼虫)。速度下降的阈值≥40％(虚线)。毒性由虚条形指示。显示了六只个体5dpf scn1lab斑马鱼在基线时以及在暴露于100μm的每种化合物30分钟和90分钟后的10分钟记录的代表性跟踪图。
具体实施方式
15.i.定义
[0016]“5ht受体体”或“5-羟色胺受体”是指一组g蛋白偶联受体(gpcr)和配体门控离子
通道(lgic)，它”、“5-ht受们位于中枢(cns)和外周神经系统(pns)，通常属于血清素受体组。5ht受体可分为7个受体家族，包括：5ht1(例如gi/g
0-蛋白偶联受体)、5ht2(例如gq/g
11-蛋白偶联受体)、5ht3(例如配体-门控na

和k

阳离子通道)、5ht4(例如，g
s-蛋白偶联受体)、5ht5(例如，gi/g
0-蛋白偶联受体)、5ht6(例如，g
s-蛋白偶联受体)和5ht7(例如，g
s-蛋白偶联受体)。此外，七个5ht受体家族可以进一步细分为多个亚家族。例如，5ht1家族还包括以下亚家族：5ht
1a
(例如，已知其在血管和cns中起作用并且可能涉及成瘾、攻击、焦虑、食欲、自身受体、血压、心血管功能、呕吐、心率、冲动、记忆、情绪、恶心、伤害感受、阴茎勃起、瞳孔扩张、呼吸、性行为、睡眠、社交性、体温调节和血管收缩)、5ht
1b
(例如，已知其在血管和cns中起作用并且可能涉及成瘾、攻击、焦虑、自身受体、学习、运动、记忆、情绪、阴茎勃起、性行为和血管收缩)、5ht
1d
(例如，已知其在血管和cns中起作用并且可能涉及焦虑、自身受体、运动和血管收缩)、5ht
1e
(例如，已知其在血管和cns中起作用并且可能涉及偏头痛)。作为另一个例子，5ht2家族可分为以下亚家族：5ht
2a
(例如，已知其在血管、cns、胃肠道、血小板、pns和平滑肌中起作用，并且可能涉及成瘾、焦虑、食欲、认知、想象力、学习、记忆、情绪、知觉、性行为、睡眠、体温调节和血管收缩)、5ht
2b
(例如，已知其在血管、cns、胃肠道、血小板、pns和平滑肌中起作用，并且可能涉及焦虑、食欲、心血管功能、胃肠蠕动、睡眠和血管收缩)和5ht
2c
(例如，已知其在血管、cns、胃肠道、血小板、pns和平滑肌中起作用，并且可能涉及成瘾、焦虑、食欲、胃肠蠕动、运动、情绪、阴茎勃起、性行为、睡眠、体温调节和血管收缩)。此外，5ht5家族可进一步分为以下亚家族：5ht
5a
(例如，其可在cns中起作用，并在运动和睡眠中发挥作用，以及作为自身受体起作用)和5ht
5b
(例如，其可在啮齿动物中起作用并且在人类中似乎是假基因)。
[0017]“5ht受体激动剂”或“5-ht受体激动剂”是指相对于不存在5ht受体激动剂或以类似于血清素的方式激活5ht受体的任何药剂。示例性5ht受体激动剂包括但不限于以下任何一种或多种：acp-104、acp-106、ar-116081、ar-116082、athx-105、颠茄与酒石酸麦角胺的组合、bw 723c86、西沙必利、ciza-mps、cizap、cizap-mps、csc-500系列、doi或其盐、酒石酸麦角胺和咖啡因、esorid mps、氟班色林、ikaran l.p.、manotac plus、migril、米氮平利马法、米氮平、那拉曲坦、nelotanserin、去乙芬氟拉明、normagut tab、盐酸奈法唑酮、osu-6162、pridofin、sensiflu、prx-00933、rp-5063、使5-ht
2a
激动以用于炎性疾病的小分子、使5-ht
2c
激动以用于精神分裂症和肥胖的小分子、使5-ht
2c
激动以用于肥胖的小分子、靶向5-ht
2c
和5-ht6受体以用于精神分裂症的小分子、调节5ht2以用于cns和代谢障碍的小分子、tgba-01ad、盐酸曲唑酮、盐酸替马格雷、盐酸戊卡色林、virdex、vr-1065、盐酸齐拉西酮和ziprasidon-sigilata。在本公开的范围内进一步考虑，在一些实施方案中，5ht受体激动剂不包括以下中的一种或多种或全部：乙酰唑胺、苯二氮类(地西泮；氯巴占)、大麻二酚、卡马西平、克立咪唑、乙琥胺、非氨酯、芬氟拉明、氟西汀、加巴喷丁、加奈索酮、拉考沙胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、硝西泮、奥卡西平、吡仑培酮、苯妥英、苯巴比妥、吡拉西坦、溴化钾、普瑞巴林、扑米酮、瑞替加滨、卢非酰胺、司替戊醇、替加宾、托吡酯、丙戊酸、维拉帕米、氨己烯酸和唑尼沙胺。
[0018]“5-ht
2b
特异性受体激动剂”指的是相比于5-ht
2a
受体能够更大程度激动5-ht
2b
受体的任何试剂。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂是对5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体具有低结合活性或不表现出可测量的5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体结合活性的试剂。在实施方案中，
5-ht
2b
特异性受体激动剂是其对5-ht
2b
受体的激动活性相对于5-ht
2a
受体大10、100、1000、10000或100000倍的试剂。大的活性倍数可以是从10到100、100到1000、1000到10000或10000到100000范围选择的值。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂是一种药剂，其中所述药剂以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合ht
2b
受体。kd可以是100pm至500pm、500pm至1nm、1nm至10nm或10nm至100nm范围内的特定值。可以从所述范围内的任何1pm增量中选择特定值。kd可选自任何上述kd范围内的子范围。子范围的低端点可以是该范围的低端或从高于该范围低端1pm增量直到低于该范围高端1pm中选择的任何值。子范围的高端可以是该范围的高端或从低于该范围高端1pm到高于该范围低端1pm的任何值。
[0019]“类似物(analog或analogue)”是根据其在化学和生物学内的普通一般含义使用的，并且是指例如在一个原子被不同元素的原子替换中，或在特定官能团存在的情况下，或一个官能团被另一个官能团替换中，或参考化合物的一个或多个手性中心的绝对立体化学中，与另一化合物(即，所谓的“参考”化合物)在结构上类似但在组成上不同的化合物。因此，类似物是与参考化合物在功能和外观上类似或相当，但在结构或来源上不类似或不相当的化合物。
[0020]“克立咪唑(clemizole)”是指具有下式的化合物：
[0021][0022]
在实施方案中，克立咪唑组合物可包含如本文所述的克立咪唑的药学上可接受的盐(例如“克立咪唑盐”)。示例性的克立咪唑盐包括但不限于克立咪唑-hcl、克立咪唑青霉素、克立咪唑硫酸盐或克立咪唑十一烷酸盐。在实施方案中，克立咪唑组合物不包括具有药学活性成分的克立咪唑盐。在实施方案中，如果克立咪唑组合物包含盐，则克立咪唑盐不是克立咪唑托吡盐。在实施方案中，克立咪唑组合物可包括克立咪唑配制物。
[0023]
如本文所述的“克立咪唑类似物”是指具有相似结构的化合物。此类化合物包括例如pct/us2008/076804和美国专利4,011,322中列出的那些化合物，其全部内容以引用方式并入本文。其他示例性克立咪唑类似物在例如：us 2012/0232062；pct公开2009/038248；us 2010/107739；us 2010/107742、wo 2002/089731、wo 2005/032329、wo 2009/039248、wo 2010/039195、wo 2010/107739和wo 2010/107742中提出，将它们各自通过引用整体并入本文。本文所述的克立咪唑类似物(包括上述参考文献中所述的化合物)可以在如下式(i)中所示的1或2位被取代(框y和z)(即被修饰)。克立咪唑类似物可在式(i)中框x所示的4、5、6或7位被取代(即被修饰)。
[0024]
[0025]“氟班色林(flibanserin)”是指具有下式(ii)的化合物：
[0026][0027]
在实施方案中，氟班色林组合物可包含氟班色林的药学上可接受的盐(例如“氟班色林盐”)。在实施方案中，氟班色林组合物可包括氟班色林配制物。
[0028]“去乙芬氟拉明(norfenfluramine)”是指具有下式(iii)的化合物：
[0029][0030]
在实施方案中，去乙芬氟拉明组合物可包括去乙芬氟拉明的药学上可接受的盐(例如“去乙芬氟拉明盐”)。在实施方案中，去乙芬氟拉明组合物可包括去乙芬氟拉明的配制物。
[0031]“doi”是指2，5-二甲氧基-4-碘苯丙胺。在实施方案中，doi组合物可包括doi的药学上可接受的盐。示例性的doi盐包括但不限于具有下式(iv)的2，5-二甲氧基-4-碘苯丙胺单盐酸盐(doi hcl)：
[0032][0033]
在实施方案中，doi组合物可包括doi的配制物。
[0034]“bw 723c86”是指作为5ht
2b
受体激动剂的色胺衍生物药物，具有下式(v)：
[0035][0036]
在实施方案中，bw 723c86组合物可包含bw 723c86的药学上可接受的盐(例如“bw 723c86盐”)。在实施方案中，bw 723c85组合物可包括bw 723c85的配制物。
[0037]
术语“药学上可接受的盐”意指包括根据在本文所述的化合物上发现的特定取代基用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当5-ht
2b
激动剂含有相对酸性的官能团时，碱加成盐可以通过将这些化合物的中性形式与足够量的所需碱(可以是纯的或在惰性溶剂
中)接触来获得。药学上可接受的碱加成盐的实例包含钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、有机胺盐或镁盐或类似盐。当5-ht
2b
激动剂含有相对碱性的官能团时，酸加成盐可以通过将这些化合物的中性形式与足够量的所需酸(可以是纯的或在惰性溶剂中)接触来获得。药学上可接受的酸加成盐的实例包含衍生自选自以下的无机酸的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等；以及衍生自选自以下的相对无毒的有机酸的盐：乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、乳酸、杏仁酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、草酸、甲磺酸等。还包含氨基酸(例如包括但不限于精氨酸盐等)的盐，以及有机酸(例如包括但不限于葡糖醛酸或半乳糖醛酸等)的盐(参见，例如，berge等人，“药用盐(pharmaceutical salts)”，《药物科学杂志(journal of pharmaceutical science)》，1977，66，1-19)。5-ht
2b
激动剂可同时包含碱性和酸性官能团，它们允许转化为碱或酸加成盐。
[0038]
5-ht
2b
激动剂可以盐的形式存在，例如与药学上可接受的酸的盐。此类盐的非限制性示例包含盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、甲烷磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、丙酸盐、酒石酸盐(例如但不限于，( )-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或它们的包含外消旋混合物的混合物)、丁二酸盐、苯甲酸盐和与氨基酸(诸如谷氨酸)的盐和季铵盐(例如但不限于，碘甲烷、碘乙烷等)。这些盐可以通过本领域的技术人员已知的方法制备。5-ht
2b
激动剂的中性形式优选地通过使盐与碱或酸接触并且以常规方式分离母体化合物而再生。化合物的母体形式可以在某些物理性质上不同于各种盐形式，如在极性溶剂中的溶解度。除了盐的形式，5-ht
2b
激动剂还可以以前药形式提供。前药是那些在生理条件下发生化学变化以提供5-ht
2b
激动剂的化合物。5-ht
2b
激动剂的前药可以在施用后在体内转化。此外，5-ht
2b
激动剂的前药可在离体环境中通过化学或生物化学方法(例如但不限于，当与合适的酶或化学试剂接触时)转化为活性化合物。
[0039]
5-ht
2b
激动剂可以以未溶出形式和溶剂化形式存在，包含水合形式。一般来讲，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且被涵盖在本发明的范围内。5-ht
2b
激动剂可以多种结晶或无定形形式存在。一般来讲，所有物理形式对于由本发明所设想的用途是等效的并且旨在处于本发明的范围内。
[0040]“有效量”是相对于不存在5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)时足以使5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)实现所陈述目的(例如，实现其施用效果、治疗疾病、降低蛋白质/酶活性、增加蛋白质/酶活性、降低信号传导路径或者减少疾病或病症的一种或多种症状)的量。“有效量”的实例是足以促成治疗、预防或减少疾病的一种或多种症状的5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的量，所述量也可以被称为“治疗有效量”。一种或多种症状(和此短语的语法等同物)的“减少”意指降低(一种或多种)症状的严重程度或频率，或消除(一种或多种)症状(癫痫发作)。药物的“预防有效量”是当施用于受试者时，将具有预期的预防效果的药物的量，例如预防或延迟损伤、疾病、病理或病状的发作(或复发)或降低损伤、疾病、病理或病状或其症状(癫痫发作)发作(或复发)的可能性。完全预防效果不一定通过施用一次剂量发生，并且可以在仅施用一系列剂量之后发生。因此，预防有效量可以按一次或多次施用形式施用。确切量将取决于治疗的目的，并且将可由本领域的技术人员使用已知的技术确定(参见例如，lieberman，pharmaceutical dosage forms(vols.1-3，1992)；lloyd，the art，science and technology of pharmaceutical compounding
(1999)；pickar，dosage calculations(1999)；和remington：the science and practice of pharmacy，20th edition，2003，gennaro，ed.，lippincott，williams&wilkins)。
[0041]
5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的治疗有效量可以从细胞培养测定中初步确定。目标浓度将是能够实现本文所描述的方法的，如使用本文所描述或本领域已知的方法测量的一种或多种活性化合物的浓度。
[0042]
如本领域所熟知的，用于人的治疗有效量也可以根据动物模型确定。例如，可以调配针对人的剂量以实现已发现对动物有效的浓度。人体内的剂量可以通过监测化合物有效性以及上调或下调如上文所描述的剂量来调整。基于以上所描述的方法和其它方法调整剂量以实现在人中的最大功效完全处于普通技术人员的能力内。
[0043]
剂量可以根据患者的需要和所采用的化合物而变化。在本发明的上下文中，向患者施用的剂量应足以随时间推移而在患者体内产生有益治疗反应。剂量的大小也将通过任何不良副作用的存在、性质和程度决定。针对具体情况来确定适当的剂量是在执业者的技能之内的。通常，治疗开始于比化合物的最优剂量小的较小剂量。此后，以小的增量来增加剂量，直到在多个情况下达到最佳效果。
[0044]
剂量和间隔可以单独调整以提供所施用化合物的对所治疗的特定临床适应症有效的水平。这将提供与个体疾病状态的严重程度相称的治疗方案。
[0045]
利用本文提供的教导，可以计划有效的预防性或治疗性治疗方案，该方案不会引起实质性毒性，而是可以有效地治疗特定患者显示出的临床症状。这个计划应涉及通过考虑如化合物效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的存在和严重程度、施用的优选模式和所选择药剂的毒性谱等因素来谨慎选择活性化合物。
[0046]“对照”或“对照实验”根据其一般含义使用，是指其中如在平行实验中对实验的受试者或试剂进行处理的实验，不同之处在于省略了实验的程序、试剂或变量。在一些情况下，对照在评价实验效果时被用作比较的标准。在一些实施方案中，对照是在不存在5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的情况下蛋白质的活性的度量。
[0047]
如本文所用，“测试化合物”是指用于筛选过程以鉴定特定生物靶标或途径例如5-ht
2b
受体的活性、非活性或其他调节的实验化合物。
[0048]
术语“调节(modulation)”、“调节(modulate)”或“调节剂(modulator)”根据其普通一般含义使用，并且是指改变或更改一个或多个性质的动作。“调节剂”是指增加或降低目标分子的水平或目标分子的功能或分子的目标的物理状态的组合物。“调节(modulation)”是指改变或变化一个或多个特性的过程。例如，当应用于调节剂对生物学靶标的效果时，调节意思指通过增加或降低生物学靶标的特性或功能或者生物学靶标(例如5-ht受体)的量来进行改变。
[0049]
如本文所定义，关于蛋白质-抑制剂相互作用，术语“抑制(inhibition/inhibit/inhibiting)”和其类似术语意指，相对于在不存在抑制剂下蛋白质的活性或功能，负面影响(例如，降低)蛋白质活性或功能。在一些实施方案中，抑制是指疾病或疾病的症状减少。在一些实施方案中，抑制是指特定蛋白质或核酸靶标的活性降低。因此，抑制至少部分地包含部分或完全阻断刺激、降低、预防或延迟激活、脱敏或下调信号转导或蛋白质/酶活性或蛋白质的量。如本文所用，抑制可指电压门控钠通道的抑制。
[0050]
术语“活化”或“激活”等是指相对于不存在活化剂化合物的蛋白质的活性或功能，
积极影响(例如增加)蛋白质的活性或功能的蛋白质-化合物相互作用。活化可以指特定蛋白质靶标的增强的活性。活化可以指突变蛋白质靶标的功能丧失的恢复。如本文所用，活化可指一种或多种5-ht受体的活化。
[0051]“接触”按照其简单的普通含义使用，并且是指允许至少两种不同的物质(例如但不限于，化学化合物、生物分子或细胞)变得足够近以发生反应、相互作用或物理接触的过程。然而，应理解，所产生的反应产物可以由所添加的试剂之间的反应或由来自一种或多种所添加的试剂的中间物直接产生，所述中间物可以在反应混合物中产生。
[0052]
术语“接触”可以包含允许两个物种反应、相互作用或物理触摸，其中所述两个物种可以是如本文所述的化合物和蛋白质或酶。在一些实施方案中，接触包括允许本文所述的化合物与受体例如5-ht
2b
受体相互作用。
[0053]
在与疾病相关的物质或物质的活性或功能的上下文中，术语“相关”或“与...相关”意指所述疾病(全部或部分)由所述物质或物质的活动或功能引起，或所述疾病的症状(全部或部分)由所述物质或物质的活动或功能引起。
[0054]“患者”或“有需要的受试者”是指遭受或易于遭受可以通过施用如本文所提供的药物组合物治疗的疾病或病状的活生物体。非限制性实例包含人、其它哺乳动物、牛科动物、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、牛、鹿、斑马鱼和其它非哺乳动物。患者可以是人类。
[0055]“疾病”或“病状”是指能够用本文所提供的化合物或方法治疗的患者或受试者所处的状态或健康状况。
[0056]
本文中的术语“癫痫疾病”、“癫痫病症”、“癫痫发作症”或“癫痫”是指最常以存在无端癫痫发作为特征的一系列慢性神经系统病症。参见例如noebels et.al.，jasper’s basic mechanisms of the epilepsies，第4版，bethesda(md)：national center for biotechnology information(us)；2012。如本文所用，癫痫可指脑损伤(例如来自外伤、中风或癌症)或基因突变。癫痫症的症状可能是由大脑神经元之间的异常电化学信号传导引起的。经历两次或更多次无端癫痫发作的患者可能被认为患有癫痫症。
[0057]
癫痫的类型包括例如良性罗兰癫痫、额叶癫痫、婴儿痉挛、青少年肌阵挛癫痫(jme)、青少年失神癫痫、儿童失神癫痫(例如脑瘫)、热性惊厥、lafora进行性肌阵挛性癫痫、lennox-gastaut综合征、landau-kleffner综合征、dravet综合征(ds)、全身性癫痫伴热性惊厥(gefs )、婴儿严重肌阵挛性癫痫(smei)、良性新生儿家族性惊厥(bfnc)、west综合征、ohtahara综合征、早期肌阵挛性脑病、迁移性部分性癫痫、婴儿癫痫性脑病、结节性硬化症(tsc)、局灶性皮质发育不良、i型平脑症、miller-dieker综合征、angelman综合征、脆性x综合征、自闭症谱系障碍中的癫痫、皮层下带异位症、walker-warburg综合征、阿尔茨海默氏症疾病、创伤后癫痫、进行性肌阵挛性癫痫、反射性癫痫、rasmussen综合征、颞叶癫痫、精神错乱、边缘叶癫痫、癫痫持续状态、腹部癫痫、大量双侧肌阵挛、月经性癫痫、jacksonian癫痫发作症、unverricht-lundborg病或光敏性癫痫。
[0058]“药学上可接受的赋形剂”和“药学上可接受的载体”或“载体部分”是指有助于向受试者给予5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)并被其吸收的物质，并且可以包括在组合物中而不会引起对受试者的明显不良毒理作用。药学上可接受的赋形剂的非限制性实例包含水、nacl、生理盐水溶液、乳酸化林格氏(ringer
′
s)液、普通蔗糖、普通葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣、甜味剂、调味剂、盐溶液(如林格氏溶液)、醇、油、明胶、碳
水化合物(例如但不限于乳糖、直链淀粉或淀粉)、脂肪酸酯、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和颜料等。这类制剂可以进行灭菌，且必要时，与不与本文化合物有害地反应的助剂混合，所述助剂如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲液、着色物质和/或芳香物质等。本领域技术人员将认识到其他药学上可接受的赋形剂可用于本发明。
[0059]
术语“制剂”旨在包括具有包封材料作为载体的5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的配制物，该包封物质提供胶囊，其中具有或不具有其他载体的活性成分被因此与其缔合的载体包围。类似地，包含了扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂以及锭剂可以用作适用于口服施用的固体剂型。
[0060]
如本文所用，术语“给药”意指向受试者经口给药，作为栓剂、局部接触、静脉内、腹膜内、肌内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下给药的形式给药，或缓释装置的植入，例如微型渗透泵的植入。通过任何途径进行施用，包含肠胃外和经粘膜(例如，颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)。肠胃外给药包括例如静脉内、肌内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内。其他递送方式包括但不限于脂质体配制物的使用、静脉内输注、透皮贴剂等。
[0061]
5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)及其药物组合物可通过局部途径经皮递送，配制成涂抹棒、溶液、悬浮液、乳液、凝胶、霜剂、软膏、糊剂、凝胶剂、油漆、粉末和气溶胶。口服制剂包含适合于患者摄入的片剂、丸剂、粉末、糖衣丸、胶囊、液体、锭剂、扁囊剂、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等。固体形式制剂包含粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂、以及可分散颗粒。液体形式制剂包含溶液、悬浮液、以及乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)可另外包括提供持续释放和/或舒适性的组分。此类组分包含高分子量、阴离子类粘液状聚合物、胶凝多糖、和精细分散的药物载体底物。这些组分在美国专利第4,911,920号、第5,403,841号、第5,212,162号、和第4,861,760号中更详细地讨论。这些专利的全部内容出于所有目以其全文通过引用并入本文中。5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)也可以作为微球体递送以在体内缓慢释放。例如，可以通过皮内注射含药物的微球来施用微球，所述含药物的微球在皮下缓慢释放(参见rao，《生物材料科学杂志聚合物版(j.biomater sci.polym.)》编者7：623-645，(1995)；以可生物降解和可注射凝胶配制物的形式(参加例如，gao《药学研究(pharm.res.)》12：857-863，1995)；或以微球的形式以供口服施用(参见例如，eyles，《药学和药理学杂志(j.pharm.pharmacol.)》49：669-674，1997)。5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的组合物的配制物可以通过使用与细胞膜融合或被内吞的脂质体，即，通过采用与脂质体结合的受体配体来递送，所述脂质体与表面膜蛋白受体结合而导致内吞作用。通过使用脂质体，特别是在脂质体表面携带对靶细胞具有特异性或以其它方式优先针对特定器官的受体配体的情况下，可以关注于5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的组合物在体内递送到靶细胞中。(参见例如，a1-muhammed，《微包封期刊(j.microencapsul.)》13：293-306，(1996)；chonn，《生物技术当前述评(curr.opin.biotechnol.)》6：698-708，1995；ostro，《美国医院药学杂志(am.j.hosp.pharm.)》46：1576-1587，1989)。组合物也可以作为纳米颗粒递送。
[0062]“共施用”意思指，在施用一种或多种另外的疗法的同时、恰好之前或恰好之后，来施用本文所描述的组合物。5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)可以单独施用或可以共同施用给患者。共施用意指包含单独或组合地同时或依序投与化合物(多于一种化合
物)。因此，当需要时，制剂还可以与其它活性物质结合(例如以减少代谢降解)。5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)可通过局部途径经皮递送，或配制成涂抹棒、溶液、悬浮液、乳液、凝胶、霜剂、软膏、糊剂、凝胶剂、油漆、粉末和气溶胶。
[0063]
术语“附加疗法”、“附加性疗法”、“辅助疗法”和“辅助性疗法”在本文中可互换使用，是指将5-ht
2b
激动剂或其药学上可接受的盐与另一种抗惊厥药组合以治疗癫痫。
[0064]“抗癫痫发作药”、“抗癫痫药”、“aed”或“抗惊厥药”在本文中可互换使用并根据它们的一般和普通含义使用，包括用于减轻或消除癫痫发作的组合物。抗惊厥药包括但不限于乙酰唑胺、苯二氮类、大麻二酚、卡马西平、氯巴占、氯硝西泮、醋酸艾司利卡西平、乙琥胺、乙妥英、非氨酯、芬氟拉明、磷苯妥英、加巴喷丁、加奈哌啶酮、石杉碱甲、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、硝基安定、奥卡西平、吡仑帕奈、吡拉西坦、苯巴比妥、苯妥英、溴化钾、普瑞巴林、扑米酮、瑞替加滨、卢非酰胺、丙戊酸钠、司替戊醇、噻加宾、托吡酯、氨己烯酸或唑尼沙胺。
[0065]
如本文所用，术语“抗性”是指药剂或药物的有效性降低。例如，对用血清素再摄取抑制剂(例如芬氟拉明)治疗“有抗性”的受试者显示出相对于该受试者首次用血清素再摄取抑制剂治疗时观察到的反应降低的反应。
[0066]
i.治疗方法
[0067]
本文提供用于治疗癫痫的方法和组合物等等。一方面，本文提供选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括将测试化合物与5-羟色胺-2b受体(5-ht
2b
)接触，并测量测试化合物的5-ht
2b
激动活性。该方法可以包括选择表现出5-ht
2b
激动活性的测试化合物作为化合物。所选择的化合物可对5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体具有低结合活性，或者所选择的化合物可不表现出可测量的5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体结合活性。治疗癫痫的方法可以包括将选择的化合物给予有需要的患者或受试者。
[0068]
另一方面，本文提供选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括将测试化合物与5-ht
2b
受体接触，并测量测试化合物的5-ht
2b
激动活性。该方法进一步包括将测试化合物施用于癫痫动物模型并测量所述癫痫动物模型中的行为活动。动物模型可以是scn1lab突变斑马鱼。测试化合物的激动活性可以通过以下一种或多种测量：scn1lab突变斑马鱼中的痉挛性高速游泳行为或自发性电图癫痫发作，或测试化合物的5-ht
2b
结合活性。
[0069]
另一方面，本文提供一种在有需要的受试者中治疗癫痫的方法。该方法包括向所述受试者施用有效量的5-ht
2b
特异性受体激动剂。所述5-ht
2b
特异性受体激动剂的激动活性可以是其5-ht
2a
受体激动活性的10、100、1000、10000或100000倍。大的活性倍数可以是从10到100、100到1000、1000到10000或10000到100000范围选择的值。5-ht
2b
特异性受体激动剂可以以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht
2b
受体。kd可以是100pm至500pm、500pm至1nm、1nm至10nm或10nm至100nm范围内的特定值。可以从所选范围内的任何1pm增量中选择特定值。kd可选自任何上述kd范围内的子范围。子范围的低端点可以是该范围的低端或从高于该范围低端1pm增量直到低于该范围高端1pm中选择的任何值。子范围的高端可以是该范围的高端或从低于该范围高端1pm到高于该范围低端1pm的任何值。5-ht2b特异性受体激动剂可以是通过进行本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法而选择的化合物。
[0070]
癫痫可以是良性罗兰癫痫、额叶癫痫、婴儿痉挛、青少年肌阵挛癫痫(jme)、青少年
失神癫痫、儿童失神癫痫(例如脑瘫)、热性惊厥、lafora进行性肌阵挛性癫痫、lennox-gastaut综合征、landau-kleffner综合征、dravet综合征(ds)、全身性癫痫伴热性惊厥(gefs )、婴儿严重肌阵挛性癫痫(smei)、良性新生儿家族性惊厥(bfnc)、west综合征、ohtahara综合征、早期肌阵挛性脑病、迁移性部分性癫痫、婴儿癫痫性脑病、结节性硬化症(tsc)、局灶性皮质发育不良、i型平脑症、miller-dieker综合征、angelman综合征、脆性x综合征、自闭症谱系障碍中的癫痫、皮层下带异位症、walker-warburg综合征、阿尔茨海默氏症疾病、创伤后癫痫、进行性肌阵挛性癫痫、反射性癫痫、rasmussen综合征、颞叶癫痫、精神错乱、边缘叶癫痫、癫痫持续状态、腹部癫痫、大量双侧肌阵挛、月经性癫痫、jacksonian癫痫发作症、unverricht-lundborg病或光敏性癫痫。癫痫可包括全身性癫痫发作或部分(即局灶性)癫痫发作。癫痫可以是dravet综合征。
[0071]
癫痫可以是神经系统疾病或损伤的结果，例如脑炎、大脑炎、脓肿、中风、肿瘤、外伤、遗传性、结节性硬化症、脑发育不全或缺氧缺血性脑病。癫痫可能与神经变性疾病有关，例如阿尔茨海默病或帕金森病。癫痫可能与自闭症有关。癫痫可能与单个基因突变有关。癫痫可能与强迫行为或电图癫痫发作有关。
[0072]
测试化合物的施用可抑制强迫行为或电图癫痫发作。抑制作用可以通过测量癫痫动物模型中的行为活动来测量。
[0073]
与不存在测试化合物相比，测试化合物的施用可降低癫痫动物模型中无端癫痫发作的发生率(例如发生次数)。因此，与施用本文所述化合物之前的时间(例如对照或对照时间)相比，可以逐渐监测癫痫动物模型对施用测试化合物的反应。
[0074]
与不存在测试化合物相比，在癫痫动物模型中施用测试化合物可减少或预防肌阵挛性癫痫发作或癫痫持续状态。与不存在测试化合物相比，在癫痫动物模型中施用测试化合物可减少或预防肌阵挛性癫痫发作。与不存在测试化合物相比，在癫痫动物模型中施用测试化合物可减少或预防癫痫持续状态。与施用本文所述化合物之前的时间(例如对照或对照时间)相比，可以逐渐监测癫痫动物模型对施用测试化合物的反应。
[0075]
癫痫动物模型可以是dravet综合征(ds)动物模型。ds动物模型可以是斑马鱼(danio rerio)。斑马鱼(danio rerio)可能是scn1lab突变体或scn1laa突变体。斑马鱼(danio rerio)可能是scn1lab突变体。斑马鱼(danio rerio)可能是scn1laa突变体。
[0076]
ds动物模型可能是对抗癫痫药物(aed)具有抗性的斑马鱼(danio rerio)。斑马鱼(danio rerio)可能是对aed有抗性的scn1lab突变体或scn1laa突变体。斑马鱼(danio rerio)可能是对aed有抗性的scn1lab突变体。斑马鱼(danio rerio)可能是对aed有抗性的scn1laa突变体。
[0077]
aed可以是乙酰唑胺、苯二氮类、大麻二酚、卡马西平、氯巴占、氯硝西泮、醋酸艾司利卡西平、乙琥胺、乙妥英、非氨酯、芬氟拉明、磷苯妥英、加巴喷丁、加奈索酮、石杉碱甲、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、硝基安定、奥卡西平、吡仑帕奈、吡拉西坦、苯巴比妥、苯妥英、溴化钾、普瑞巴林、扑米酮、瑞替加滨、卢非酰胺、丙戊酸、丙戊酸钠、司替戊醇、噻加宾、托吡酯、氨己烯酸或唑尼沙胺。aed可以是丙戊酸、丙戊酸钠、氯硝西泮、乙琥胺、非氨酯、加巴喷丁、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、左乙拉西坦、苯二氮类、苯巴比妥、普瑞巴林、扑米酮、噻加宾、托吡酯、溴化钾、苯妥英、司替戊醇、氨己烯酸或唑尼沙胺。aed可以是丙戊酸、丙戊酸钠、加巴喷丁、托吡酯、卡马西平、奥卡西平或氨己烯酸。
[0078]
aed可以是乙酰唑胺。aed可以是苯二氮类。aed可以是大麻二酚。aed可以是卡马西平。aed可以是氯巴占。aed可以是氯硝西泮。aed可以是醋酸艾司利卡西平。aed可以是乙琥胺。aed可以是乙妥英。aed可以是非氨酯。aed可以是芬氟拉明。aed可以是磷苯妥英。aed可以是加巴喷丁。aed可以是加奈索酮。aed可以是石杉碱甲。aed可以是拉科酰胺。aed可以是拉莫三嗪。aed可以是左乙拉西坦。aed可以是硝西泮。aed可以是奥卡西平。aed可以是吡仑帕奈。aed可以是吡拉西坦。aed可以是苯巴比妥。aed可以是苯妥英。aed可以是溴化钾。aed可以是普瑞巴林。aed可以是扑米酮。aed可以是瑞替加滨。aed可以是卢非酰胺。aed可以是丙戊酸。aed可以是丙戊酸钠。aed可以是司替戊醇。aed可以是噻加宾。aed可以是托吡酯。aed可以是氨己烯酸。aed可以是唑尼沙胺。克立咪唑或克立咪唑类似物(包括其药学上可接受的盐)或克立咪唑或克立咪唑类似物的药物组合物可作为对本文所述的一种或多种aed的辅助疗法施用。
[0079]
在本文所述的方法中，测试化合物可以与抗癫痫药(aed)共同施用。aed可以是乙酰唑胺、苯二氮类、大麻二酚、卡马西平、氯巴占、氯硝西泮、醋酸艾司利卡西平、乙琥胺、乙妥英、非氨酯、芬氟拉明、磷苯妥英、加巴喷丁、加奈索酮、石杉碱甲、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、硝基安定、奥卡西平、吡仑帕奈、吡拉西坦、苯巴比妥、苯妥英、溴化钾、普瑞巴林、扑米酮、瑞替加滨、卢非酰胺、丙戊酸、丙戊酸钠、司替戊醇、噻加宾、托吡酯、氨己烯酸或唑尼沙胺。aed可以是丙戊酸、丙戊酸钠、氯硝西泮、乙琥胺、非氨酯、加巴喷丁、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、左乙拉西坦、苯二氮类、苯巴比妥、普瑞巴林、扑米酮、噻加宾、托吡酯、溴化钾、苯妥英、司替戊醇、氨己烯酸或唑尼沙胺。aed可以是丙戊酸、丙戊酸钠、加巴喷丁、托吡酯、卡马西平、奥卡西平或氨己烯酸。
[0080]
aed可以是乙酰唑胺。aed可以是苯二氮类。aed可以是大麻二酚。aed可以是卡马西平。aed可以是氯巴占。aed可以是氯硝西泮。aed可以是醋酸艾司利卡西平。aed可以是乙琥胺。aed可以是乙妥英。aed可以是非氨酯。aed可以是芬氟拉明。aed可以是磷苯妥英。aed可以是加巴喷丁。aed可以是加奈索酮。aed可以是石杉碱甲。aed可以是拉科酰胺。aed可以是拉莫三嗪。aed可以是左乙拉西坦。aed可以是硝西泮。aed可以是奥卡西平。aed可以是吡仑帕奈。aed可以是吡拉西坦。aed可以是苯巴比妥。aed可以是苯妥英。aed可以是溴化钾。aed可以是普瑞巴林。aed可以是扑米酮。aed可以是瑞替加滨。aed可以是卢非酰胺。aed可以是丙戊酸。aed可以是丙戊酸钠。aed可以是司替戊醇。aed可以是噻加宾。aed可以是托吡酯。aed可以是氨己烯酸。aed可以是唑尼沙胺。克立咪唑或克立咪唑类似物(包括其药学上可接受的盐)或克立咪唑或克立咪唑类似物的药物组合物可作为对本文所述的一种或多种aed的辅助疗法施用。
[0081]
因此，测试化合物可以作为附加的(例如与其组合)aed药物施用，用于治疗癫痫发作，包括与本文所述的癫痫症相关的癫痫发作。因此，测试化合物可以作为辅助疗法(例如与其组合)aed药物施用，用于治疗癫痫发作，包括与本文所述的癫痫症相关的癫痫发作。
[0082]
癫痫的特征可能是部分性癫痫发作或全身性癫痫发作。癫痫的特征可能是部分性癫痫发作。癫痫的特征可能是全身性癫痫发作。部分性癫痫发作可以是简单局灶性癫痫发作、复杂局灶性癫痫发作或具有继发性全身性的部分局灶性癫痫发作。全身性癫痫发作可以是全身性强直-阵挛性癫痫发作、失神癫痫发作(即小发作)、肌阵挛性癫痫发作、阵挛性癫痫发作、强直性癫痫发作或失张力癫痫发作。
[0083]
当与本文所述的aed共同施用时，测试化合物和aed可以同时施用。当同时施用时，测试化合物可以与aed一起配制(即在单一剂量单位中)。测试化合物可以配制成与aed分开施用但同时施用。当与本文所述的aed共同施用时，测试化合物可以在aed施用之后(例如之前或之后)依次施用。如本文所述，本领域技术人员可以容易地确定施用顺序。
[0084]
本文提供向癫痫动物模型施用测试化合物并获得动物模型的电生理记录以检测动物模型中自发性电图癫痫发作的存在、强度或不存在的方法。癫痫动物模型的行为活动可以是惊厥行为、痉挛性高速游泳行为或自发性电图癫痫发作。在实施方案中，癫痫动物模型的行为活动可以是惊厥行为。在实施方案中，癫痫动物模型的行为活动可以是痉挛性高速游泳行为。在实施方案中，癫痫动物模型的行为活动可以是自发性电图癫痫发作。
[0085]
癫痫动物模型的痉挛性高速游泳行为可以通过动物模型的电生理记录来检测。可以通过动物模型的电生理记录来检测所述癫痫动物模型中自发性电图癫痫发作的存在、强度或不存在。
[0086]
在实施方案中，测量测试化合物的激动活性可以包括测量测试化合物的受体结合活性。在实施方案中，受体可以是5-ht
2b
受体。在实施方案中，被选为用于治疗癫痫的化合物的测试化合物对5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体具有低结合活性或不表现出可测量的5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体结合活性。在实施方案中，所选择的测试化合物对5-ht
2a
受体具有低结合活性或不表现出可测量的5-ht
2a
受体结合活性。在实施方案中，所选择的测试化合物对5-ht
2c
受体具有低结合活性或不表现出可测量的5-ht
2c
受体结合活性。在实施方案中，所选择的测试化合物对5-ht
2a
受体具有低结合活性。在实施方案中，测试化合物没有表现出可测量的5-ht
2a
受体结合活性。在实施方案中，测试化合物对5-ht
2c
受体具有低结合活性。在实施方案中，测试化合物没有表现出可测量的5-ht
2c
受体结合活性。
[0087]
在实施方案中，被选为用于治疗癫痫的化合物的测试化合物以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于100nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于10ne的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于1nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于500pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于100pm的kd结合5-ht
2b
受体。
[0088]
在实施方案中，被选为治疗癫痫的化合物的测试化合物以小于50nm、25nm、15nm、7.5nm、5nm、2nm、800pm、600pm、400pm、200pm、150pm或50pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于50nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于25nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于15nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于7.5nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于5nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于2nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于800pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于600pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于400pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于200pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于1500pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选择的测试化合物以小于50pm的kd结合5-ht
2b
受体。
[0089]
在实施方案中，被选为治疗癫痫的化合物的测试化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大10、100、1000、10000或100000倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大10倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大100倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大1000倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大10000倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大100000倍。
[0090]
在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大50倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大500倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大2500倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大5000倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大25000倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大50000倍。在实施方案中，所选化合物对5-ht
2b
受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体的激动活性大1000000倍。
[0091]
在实施方案中，通过进行本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法选择的化合物是具有以下至少一项的测试化合物：(1)5-ht
2b
激动活性，(2)在癫痫动物模型中在将测试化合物给予癫痫动物模型后降低癫痫行为活动，(3)在将测试化合物给予癫痫动物模型后，癫痫动物模型中痉挛性高速游泳行为减少，(4)在将测试化合物给予癫痫动物模型后，在癫痫动物模型中检测到低强度或不存在自发性电图癫痫发作，(5)以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht
2b
受体，或(6)对5-ht
2b
的激动活性相对于所述化合物对5-ht
2a
受体激动活性大10、100、1000、10000或100000倍。
[0092]
在实施方案中，通过本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法选择的化合物是具有5-ht
2b
激动活性的测试化合物。在实施方案中，所述ht-5
2b
激动活性是ht-5
2b
受体结合活性。在实施方案中，所述化合物对5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体具有低结合活性或不表现出可测量的5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体结合活性。在实施方案中，所选化合物的ht-5
2b
激动活性相对于所述化合物的5-ht
2a
受体激动活性大10、100、1000、10000或100000倍。在实施方案中，所选化合物的ht-5
2b
激动活性相对于所述化合物的5-ht
2a
受体激动活性大10倍。在实施方案中，所选化合物的ht-5
2b
激动活性相对于所述化合物的5-ht
2a
受体激动活性大100倍。在实施方案中，所选化合物的ht-5
2b
激动活性相对于所述化合物的5-ht
2a
受体激动活性大1000倍。在实施方案中，所选化合物的ht-5
2b
激动活性相对于所述化合物的5-ht
2a
受体激动活性大10000倍。在实施方案中，所选化合物的ht-5
2b
激动活性相对于所述化合物的5-ht
2a
受体激动活性大100000倍。
[0093]
在实施方案中，通过本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法选择的化合物选择是在将测试化合物施用于癫痫动物模型后导致癫痫动物模型中癫痫行为活动降低的测试化合物。在实施方案中，癫痫行为活动是痉挛性高速游泳行为或自发性电图癫痫发作。在实施方案中，癫痫行为活动是痉挛性高速游泳行为。在实施方案中，癫痫行为活动是自发性电图
癫痫发作。
[0094]
在实施方案中，通过选择本文用于治疗癫痫的化合物的方法选择的化合物是在将测试化合物施用于癫痫动物模型后导致癫痫动物模型中痉挛性高速游泳行为降低的测试化合物。
[0095]
在实施方案中，通过本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法选择的化合物是在将测试化合物施用于癫痫动物模型后，通过检测癫痫动物模型中自发性电图癫痫发作的低强度或不存在而发现的测试化合物。在实施方案中，测试化合物的选择基于在向癫痫动物模型施用测试化合物后检测癫痫动物模型中自发性电图癫痫发作的低强度。在实施方案中，测试化合物的选择基于在向癫痫动物模型施用测试化合物后在癫痫动物模型中不存在自发性电图癫痫发作。
[0096]
在实施方案中，通过选择本文用于治疗癫痫的化合物的方法选择的化合物是以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht
2b
受体的测试化合物.在实施方案中，所选化合物以小于100nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选化合物以小于10nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选化合物以小于1nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选化合物以小于500pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，所选化合物以小于100pm的kd结合5-ht
2b
受体。
[0097]
本文提供选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括将测试化合物与5-ht
2b
受体接触，测量测试化合物的5-ht
2b
激动活性，将测试化合物施用于癫痫动物模型，并测量在所述癫痫动物模型中的行为活动。在实施方案中，癫痫动物模型可以是scn1lab突变斑马鱼。在实施方案中，测试化合物的激动活性由以下一种或多种测量：scn1lab突变斑马鱼的痉挛性高速游泳行为、scn1lab突变体斑马鱼的自发电图癫痫发作、或测试化合物的5-ht
2b
结合活性。在实施方案中，测试化合物的激动活性通过scn1lab突变体斑马鱼中的痉挛性高速游泳行为测量。在实施方案中，测试化合物的激动活性通过scn1lab突变斑马鱼中的自发性电图癫痫发作测量。在实施方案中，测试化合物的激动活性通过其5-ht
2b
结合活性测量。
[0098]
本文提供治疗癫痫的方法。一方面，该方法是通过向有需要的受试者施用有效量的5-ht
2b
特异性受体激动剂来治疗癫痫的方法。
[0099]
在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂是克立咪唑、克立咪唑类似物或其药学上可接受的盐。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂不是克立咪唑、克立咪唑类似物或其药学上可接受的盐。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂是甲基麦角新碱、6-apb、去乙芬氟拉明、ro60-0175、bw-723c86、卡麦角林、溴隐亭或吡贝地尔。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂是通过本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法选择为用于治疗癫痫的化合物的化合物。
[0100]
克立咪唑的类似物可以包括本文所述的式(i)的化合物并且可以包括如在例如pct/us2008/076804、wo10107739、wo2009039248或美国专利4,011,322中阐述的类似结构的化合物，将这些文献通过引用并入本文。
[0101]
在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大10、100、1000、10000或100000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大10倍。
在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大100倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大1000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大10000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大100000倍。大的活性倍数可以是从10到100、100到1000、1000到10000或10000到100000范围选择的值。
[0102]
在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大50、500、2500、5000、25000、50000或1000000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大50倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大500倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大2500倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大5000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大25000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大50000倍。在实施方案中，5-ht
2b
受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht
2b
受体特异性激动剂的5-ht
2a
受体活性大1000000倍。大的活性倍数可以是从50至500、500至2500、2500至5000、5000至25000、25000至50000或50000至100000范围选择的值。
[0103]
在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于100nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于10nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于1nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于500pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于100pm的kd结合5-ht
2b
受体。kd可以是100pm至500pm、500pm至1nm、1nm至10nm或10nm至100nm范围内的特定值。可以从所述范围内的任何1pm增量中选择特定值。kd可选自任何上述kd范围内的子范围。子范围的低端点可以是该范围的低端或从高于该范围低端1pm增量直到低于该范围高端1pm中选择的任何值。子范围的高端可以是该范围的高端或从低于该范围高端1pm到高于该范围低端1pm的任何值。
[0104]
在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于50nm、25nm、15nm、7.5nm、5nm、2nm、800pm、600pm、400pm、200pm、150pm或50pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于50nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于25nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于15nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于7.5nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于5nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于2nm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于800pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于600pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于400pm的kd结合
5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于200pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于1500pm的kd结合5-ht
2b
受体。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂以小于50pm的kd结合5-ht
2b
受体。kd可以是50pm至150pm、150pm至200pm、200pm至400pm、400pm至600pm、600pm至800pm、800pm至2nm、2nm至5nm、5nm至7.5nm、7.5nm至15nm、15nm至25nm或25nm至50nm范围内的具体值。可以从所述范围内的任何1pm增量中选择特定值。kd可选自任何上述kd范围内的子范围。子范围的低端点可以是该范围的低端或从高于该范围低端1pm增量直到低于该范围高端1pm中选择的任何值。子范围的高端可以是该范围的高端或从低于该范围高端1pm到高于该范围低端1pm的任何值。
[0105]
ii.药物组合物
[0106]
本文提供用于治疗上述疾病和病症的包含5-ht
2b
受体激动剂或其药学上可接受的盐的药物组合物。在实施方案中，5-ht
2b
特异性受体激动剂是通过本文选择用于治疗癫痫的化合物的方法选择为用于治疗癫痫的化合物的化合物。药物组合物可配制成如本文所述的片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂或锭剂。药物组合物可以配制成用于口服施用的片剂、胶囊、丸剂、扁囊剂或锭剂。可以配制药物组合物以溶解到溶液中以通过诸如静脉内施用的技术施用。药物组合物可以配制用于如本文所述的口服施用、栓剂施用、局部施用、静脉内施用、腹膜内施用、肌肉内施用、病灶内施用、鞘内施用、鼻内施用、皮下施用、植入、经皮施用或经粘膜施用。
[0107]
当作为药物组合物施用时，药物组合物可包含5-ht
2b
受体激动剂的旋光异构体、非对映异构体、对映异构体、同种型、多晶型物、水合物、溶剂化物或产物或药学上可接受的盐。包含在药物组合物中的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)可以共价连接至载体部分，如上所述。在实施方案中，包含在药物组合物中的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)未与载体部分共价连接。共价连接和非共价连接的5-ht
2b
受体激动剂的组合可存在于本文的药物组合物中。
[0108]
5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)可以单独施用或与本文所述的aed共同施用至有需要的受试者。共同施用意在包括如本文所述的单独或组合地同时或顺序施用5-ht
2b
受体激动剂(例如多于一种化合物——例如本文所述的aed)。制剂还可以在需要时与其它活性物质组合(例如，以预防癫痫发作)。
[0109]
1.配制物
[0110]
本文所述的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或药物组合物可以以多种口服、肠胃外和局部剂型制备和施用。因此，本文所述的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或药物组合物可以是注射用配制物，并且可以通过注射(例如静脉内、肌肉内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内)施用。此外，本文所述的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或药物组合物可以在用于吸入的配制物中，并且可以通过吸入施用。吸入可以是鼻内的。此外，5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或药物组合物可以在用于经皮递送的配制物中，并且可以经皮施用。还设想多种施用途径(例如，肌内、口服、经皮)可用于施用5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或包含其的药物组合物。本文所述的药物组合物可包含药学上可接受的载体或赋形剂以及一种或多种5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)。本文所述的药物组合物可包含药学上可接受的载体或赋形剂、一种或多种5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)和一种或多种本文所述的aed。
[0111]
制剂可包括药学上可接受的载体。药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式制剂包含粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂、以及可分散颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，所述物质还可以充当稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂、或封装材料。
[0112]
在粉末中，载体可以是与细碎活性成分混合的细碎固体。在片剂中，活性组分与具有所需的结合特性的载体以适合的比例混合并以期望的形状和尺寸压实。
[0113]
粉末和片剂优选地含有5％到70％的活性化合物。适合的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包括活性化合物与作为载剂的包封材料的配制物，该包封材料提供其中具有或不具有其他载剂的活性组分被载剂包围(该载剂因此与其缔合)的胶囊。类似地，包含了扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂以及锭剂可以用作适用于口服施用的固体剂型。
[0114]
合适的固体赋形剂包括但不限于碳酸镁；硬脂酸镁；滑石；果胶；糊精；淀粉；黄芪；低熔点蜡；可可脂；碳水化合物；糖类，包括但不限于乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，来自玉米、小麦、大米、马铃薯或其他植物的淀粉；纤维素，例如甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素钠；和树胶，包括阿拉伯树胶和黄蓍胶；以及蛋白质，包括但不限于明胶和胶原蛋白。如果需要，可以加入崩解剂或增溶剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。
[0115]
糖衣丸芯具有合适的包衣，例如浓糖溶液，其还可包含阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或色素加入片剂或糖衣丸包衣中以用于产品鉴定或表征5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或药物组合物的量(即剂量)。还可以使用例如由明胶制成的推入式胶囊以及由明胶和涂层例如甘油或山梨糖醇制成的软密封胶囊来口服使用本文所述的药物制剂。
[0116]
为了制备栓剂，首先将低熔点蜡，例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物熔化，然后通过搅拌将活性成分均匀分散在其中。然后将熔融的均匀混合物倒入合适尺寸的模具中，使其冷却，从而固化。
[0117]
液体形式制剂包含溶液、悬浮液、以及乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可以被调配在聚乙二醇水溶液中的溶液中。
[0118]
当需要或希望肠胃外施用时，用于5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)或包含其的药物组合物的特别适合的混合物是可注射的无菌溶液、优选地油性或水性溶液、以及悬浮液、乳液、或包含栓剂的植入物。具体地，用于肠胃外施用的载体包含右旋糖的水性溶液、生理盐水、纯水、乙醇、甘油、丙二醇、花生油、芝麻油、聚氧乙烯-嵌段聚合物等。安瓿是方便的单位剂量。5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或包含其的药物组合物也可掺入脂质体或通过透皮泵或贴剂施用。适合于在本文中使用的药物混合物包含例如《药物科学(pharmaceutical sciences)》(第17版，麦克出版公司(mack pub.co.)，宾夕法尼亚州伊斯顿市)和wo 96/05309中所描述的那些药物混合物，所述两个文献的教导通过引用特此并入。
[0119]
适合于口服使用的水性溶液可以通过将活性组分溶解在水中并且按照期望添加
适合的着色剂、调味剂、稳定剂、以及增稠剂来制备。适合口服使用的水性悬浮剂可以通过将细碎的活性成分分散在具有粘性物质和分散剂或润湿剂的水中制备，粘性物质例如天然或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶，分散剂或润湿剂例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七乙烯氧基鲸腊醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、阿斯巴甜或糖精。可以调整配制物的渗透压。
[0120]
本文还包括固体形式制剂，所述固体形式制剂旨在使用之前不久被转化成液体形式制剂以用于口服施用。此类液体组合物包含溶液剂、混悬剂和乳剂。除了活性组分外，这些制剂还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
[0121]
油悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以添加甜味剂以提供可口的口服制剂，例如甘油、山梨糖醇或蔗糖。这些配制物可以通过添加抗氧化剂如抗坏血酸来保存。作为可注射油载体的实例，参见minto，j.pharmacol.exp.ther.281：93-102，1997。本文所述的药物配制物也可以是水包油乳液的形式。油相可以是上述的植物油或矿物油，或它们的混合物。合适的乳化剂包括天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶和黄蓍胶，天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂，衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，以及这些偏酯与环氧乙烷的的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可以包含甜味剂和调味剂，如在糖浆和酏剂的配制物中。此类配制物还可包含缓和剂、防腐剂或着色剂。
[0122]
所述药物制剂优选地呈单位剂型。以这种形式，将制剂细分为包含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装制剂，所述包装件含有离散量的制剂，比如，小瓶或安瓿中的包装片剂、胶囊和粉末。同样，单位剂型本身可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂，或者其可以是包装形式的适当数量的任何这些剂型。
[0123]
根据活性组分的具体施用和效能，活性组分在单位剂量制剂中的量可以从0.1mg到10000mg变化或调节。如果需要，所述组合物还可以含有其它相容的治疗剂。
[0124]
配制物可以在组合物中包括表面活性剂或其他合适的共溶剂。此类助溶剂包含：聚山梨醇酯20、60和80；pluronic f-68、f-84、和p-103；环糊精；和聚氧乙烯35蓖麻油。此类助溶剂典型地在按重量计约0.01％与约2％之间的水平下使用。大于单纯的水溶液的粘度的粘度可以是令人期望的，用来减小在调配这些配制物方面的变化性，用来减小配制物的悬浮液或乳液的组分的物理分离和/或以另外的方式用来改进所述配制物。此类粘度构建剂包含例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、硫酸软骨素及其盐、透明质酸及其盐、前述的组合。此类药剂通常在按重量计约0.01％与约2％之间的水平下使用。
[0125]
大于单纯的水溶液的粘度的粘度可以是令人期望的，用来减小在调配这些配制物方面的变化性，用来减小配制物的悬浮液或乳液的组分的物理分离和/或以另外的方式用
来改进所述配制物。此类粘度构建剂包含例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、硫酸软骨素及其盐、透明质酸及其盐、前述的组合以及本领域技术人员已知的其他试剂。此类药剂通常在按重量计约0.01％与约2％之间的水平下使用。本领域技术人员容易确定任何上述佐剂的可接受量。
[0126]
药物组合物还可包括提供持续释放和/或舒适感的成分。此类组分包含高分子量、阴离子类粘液状聚合物、胶凝多糖、和精细分散的药物载体底物。这些组分在美国专利第4,911,920号、第5,403,841号、第5,212,162号、和第4,861,760号中更详细地讨论。这些专利的全部内容出于所有目以其全文通过引用并入本文中。
[0127]
药物组合物可用于静脉内使用。药学上可接受的赋形剂可包括缓冲剂以将ph调节至静脉内使用的所需范围。包括无机酸盐如磷酸盐、硼酸盐和硫酸盐的许多缓冲剂是已知的。
[0128]
5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物可以经皮递送，用于治疗本文所述的癫痫症，通过局部途径，配制成涂抹棒、溶液、悬浮液、乳液、凝胶、霜剂、软膏、糊剂、凝胶剂、油漆、粉末和气溶胶。
[0129]
5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)可以作为盐提供在本文描述的药物组合物中并且可以与许多酸形成，包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐往往更易溶于水或其他质子溶剂，这些溶剂是相应的游离碱形式。
[0130]
用于治疗本文所述的癫痫症的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物可以通过肠胃外施用方式施用，例如静脉内(iv)施用或施用至器官的体腔或内腔。用于施用的配制物通常包含溶解在药学上可接受的载体中的本发明组合物的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂包括水和林格氏溶液，即等渗氯化钠。此外，无菌的不挥发油通常可以用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸也可用于制备注射剂。这些溶液是无菌的并且通常不含不合需要的物质。这些配制物可以通过常规的众所周知的灭菌技术灭菌。配制物可以视需要含有药学上可接受的助剂物质以接近生理条件，如ph值调节剂和缓冲剂、毒性调节剂，例如乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些配制物中的本发明组合物的浓度可以广泛变化，并且将根据所选择的具体施用模式和患者需求而主要基于流体体积、粘度、体重等选择。对于iv施用，配制物可以是无菌可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。该悬浮液可以根据已知技术使用那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇的溶液。
[0131]
用于治疗癫痫症的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)的药物配制物可以通过使用与细胞膜融合或被内吞的脂质体来递送，即通过使用连接到脂质体上的配体，或直接连接到寡核苷酸的配体，其与细胞的表面膜蛋白受体结合，导致内吞作用。通过使用脂质体，特别是在脂质体表面携带对靶细胞具有特异性或以其它方式优先针对特定器官的配体的情况下，可以关注于本发明的组合物在体内递送到靶细胞中。(参见例如，al-muhammed，《微包封期刊(j.microencapsul.)》13：293-306，(1996)；chonn，《生物技术当前述评(curr.opin.biotechnol.)》6：698-708，1995；ostro，《美国医院药学杂志(am.j.hosp.pharm.)》46：1576-1587，1989)。
[0132]
共同施用包括在第二种活性剂(抗惊厥药)的0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20或24小时内施用一种活性剂(例如克立咪唑或克立咪唑类似物(包括其药学上可接受的盐))。共同施用可包括在第二种活性剂的0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20或24小时内施用一种活性剂。共同施用可包含同时、近似同时(例如，在彼此的约1、5、10、15、20或30分钟内)或以任何顺序依次施用两种活性剂。可以通过共同配制来完成共同施用，即制备包括两种活性剂的单一药物组合物。在其它实施方案中，活性剂可以分开配制。活性剂和/或辅助剂可以彼此连接或缀合。
[0133]
共同施用还包括与癫痫症的治疗组合，例如饮食要求或饮食改变。因此，可以将5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物施用于特定饮食的受试者，包括但不限于生酮饮食(例如高脂肪、充足蛋白质、低碳水化合物饮食)。
[0134]
2.有效剂量
[0135]
药物组合物可以包含治疗有效量的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)，即，以有效实现其预期目的的量。针对特定应用有效的实际量尤其取决于所治疗的病症。例如，当在治疗癫痫症(例如dravet综合征)的方法中施用时，此类组合物将包含有效实现期望结果(例如抑制癫痫发作，这可包括降低癫痫发作的严重程度或消除癫痫发作)的量的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物。
[0136]
施用的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物的剂量和频率(单剂量或多剂量)可以根据多种因素而变化，包含施用途径；接受者的大小、年龄、性别、健康、体重、体重指数和饮食；所治疗疾病的性质以及症状程度；存在其它疾病或其它与健康有关的问题；并行治疗的种类；和来自任何疾病或治疗方案的并发症。其它治疗方案或药剂可以与本文所述的方法结合使用。
[0137]
用于治疗本文所述的癫痫病的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物的治疗有效量可以最初从细胞培养测定中确定。目标浓度将是能够抑制或以其他方式减少患者经历的癫痫发作的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物的那些浓度。
[0138]
用于人类的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物的治疗有效量可从动物模型确定。例如，可以配制针对人的剂量以实现已发现对动物有效的浓度。如上所述，可以通过监测患者对治疗的反应并向上或向下调节剂量来调节人的剂量。
[0139]
剂量可以根据患者的需要和所采用的化合物而变化。在本文提供的药物组合物的上下文中，向受试者施用的剂量应足以随时间推移而在受试者体内产生有益治疗反应。剂量的大小也将由任何不良副作用的存在、性质和程度决定。总体而言，以小于化合物的最佳剂量的较小的剂量开始治疗。此后，以小的增量来增加剂量，直到在多个情况下达到最佳效果。
[0140]
可以单独调整剂量和间隔以提供对所治疗的特定癫痫症有效的施用的5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物的水平。这将提供与个体疾病状态的严重程度相称的治疗方案。
[0141]
使用本文所提供的教导，可以计划不会引起大量毒性且通过特定患者证实仍完全有效治疗临床症状的有效预防性或治疗性治疗方案。这个计划应涉及通过考虑如效力、相对生物利用度、患者体重、不良副作用的存在和严重程度、施用的优选模式和所选择药剂的
毒性谱等因素来谨慎选择5-ht
2b
受体激动剂(包括其药学上可接受的盐)或其药物组合物。
[0142]
3.毒性
[0143]
特定化合物的毒性与治疗效果之间的比率是其治疗指数并且可以表达为ld
50
(致死群体的50％的化合物的量)与ed
50
(对群体的50％有效的化合物的量)之间的比率。表现出高治疗指数的化合物是优选的。从细胞培养测定和/或动物研究获得的治疗指数数据可以用于调配用于在人类中使用的一系列剂量。此类化合物的剂量优选地处于包含ed
50
的具有很小毒性或没有毒性的血浆浓度范围内。剂量可以根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在这个范围内变化。参见例如，fingl等人，在以下文献中：《治疗学的药理学基础(the pharmacological basis of therapeutics)》，第1章，第1页，1975。精确的配制、施用途径和剂量可以由个体医师根据患者的病状和使用化合物的特定方法来选择。
[0144]
当需要或希望肠胃外施用时，药物组合物中包括的5-ht
2b
激动剂(包括其药学上可接受的盐)的特别适合的混合物可以是可注射的无菌溶液、优选地油性或水性溶液、以及悬浮液、乳液、或包含栓剂的植入物。用于肠胃外施用的载体的非限制性实例包含右旋糖的水性溶液、生理盐水、纯水、乙醇、甘油、丙二醇、花生油、芝麻油、聚氧乙烯-嵌段聚合物等。安瓿是方便的单位剂量。适合于在本文提供的药物组合物中使用的药物混合物包含例如《药物科学(pharmaceutical sciences)》(第17版，麦克出版公司(mack pub.co.)，宾夕法尼亚州伊斯顿市)和wo 96/05309中所描述的那些药物混合物，所述两个文献的教导通过引用特此并入。
[0145]
实施方案
[0146]
实施方案1.一种选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括：
[0147]
使测试化合物与5-羟色胺-2b受体(5-ht2b)接触；和
[0148]
测量所述测试化合物的5-ht2b激动活性。
[0149]
实施方案2.根据实施方案1所述的方法，其进一步包括癫痫动物模型。
[0150]
实施方案3.根据实施方案1或2所述的方法，进一步包括将所述测试化合物施用于所述癫痫动物模型并测量所述癫痫动物模型中的行为活动。
[0151]
实施方案4.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述癫痫动物模型是dravet综合征(ds)动物模型。
[0152]
实施方案5.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述ds动物模型是对抗癫痫药物(aed)具有抗性的斑马鱼(danio rerio)。
[0153]
实施方案6.根据实施方案1-5中任一项所述的方法，其中所述斑马鱼(danio rerio)是scn1lab突变体或scn1laa突变体。
[0154]
实施方案7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述行为活动是痉挛性高速游泳行为。
[0155]
实施方案8.根据实施方案2-7中任一项所述的方法，进一步包括向所述癫痫动物模型施用所述测试化合物并获得所述动物模型的电生理记录以检测所述癫痫动物模型中自发性电图癫痫发作的存在、强度或不存在。
[0156]
实施方案9.根据实施方案1-8中任一项所述的方法，其中所述癫痫动物模型是ds动物模型。
[0157]
实施方案10.根据实施方案1-9中任一项所述的方法，其中所述ds动物模型是
scn1lab突变斑马鱼。
[0158]
实施方案11.根据实施方案1-10中任一项所述的方法，其中所述测量包括确定所述测试化合物的5-ht2b受体结合活性。
[0159]
实施方案12.根据实施方案1-11中任一项所述的方法，其中所述化合物对5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体具有低结合活性或不表现出可测量的5-ht
2a
受体或5-ht
2c
受体结合活性。
[0160]
实施方案13.根据实施方案1-12中任一项所述的方法，其中所述化合物以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht2b受体。
[0161]
实施方案14.根据实施方案1-13中任一项所述的方法，其中所述化合物对5-ht2b受体的激动活性相对于所述化合物对5-ht2a受体的激动活性大10、100、1000、10000或100000倍。
[0162]
实施方案15.根据实施方案1-14中任一项所述的方法，进一步包括基于以下中至少一项选择所述测试化合物为所述化合物：(1)所述测试化合物的5-ht2b激动活性，(2)在所述癫痫动物模型中在将所述测试化合物给予所述癫痫动物模型后降低癫痫行为活动，(3)在将所述测试化合物给予所述癫痫动物模型后，所述癫痫动物模型中痉挛性高速游泳行为减少，(4)在将所述测试化合物给予所述癫痫动物模型后，在所述癫痫动物模型中检测到低强度或不存在自发性电图癫痫发作，(5)所述测试化合物以小于100nm、10nm、1nm、500pm或100pm的kd结合5-ht2b受体，或(6)所述测试化合物的激动活性相对于所述化合物对5-ht2a受体激动活性大10、100、1000、10000或100000倍。
[0163]
实施方案16.一种选择用于治疗癫痫的化合物的方法，所述方法包括：
[0164]
使测试化合物与5-ht2b受体接触；
[0165]
测量所述测试化合物的5-ht2b激动活性；
[0166]
将所述测试化合物施用于癫痫动物模型；和
[0167]
测量所述癫痫动物模型中的行为活动。
[0168]
实施方案17.根据实施方案16所述的方法，其中所述癫痫动物模型是scn1lab突变斑马鱼并且所述测试化合物的激动活性通过以下中的一种或多种测量：
[0169]
scn1lab突变斑马鱼的痉挛性高速游泳行为；
[0170]
scn1lab突变斑马鱼的自发性电图癫痫发作；或者
[0171]
所述测试化合物的5-ht2b结合活性。
[0172]
实施方案18.一种在有需要的受试者中治疗癫痫的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的5-ht2b特异性受体激动剂。
[0173]
实施方案19.根据实施方案18所述的方法，其中所述5-ht2b受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht2b特异性受体激动剂的5-ht2a受体激动活性大10倍。
[0174]
实施方案20.根据实施方案18所述的方法，其中所述5-ht2b受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht2b特异性受体激动剂的5-ht2a受体激动活性大100倍。
[0175]
实施方案21.根据实施方案18所述的方法，其中所述5-ht2b受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht2b特异性受体激动剂的5-ht2a受体激动活性大1000倍。
[0176]
实施方案22.根据实施方案21所述的方法，其中所述5-ht2b受体特异性激动剂的激动活性相对于所述5-ht2b特异性受体激动剂的5-ht2a受体激动活性大10000倍。
[0177]
实施方案23.根据实施方案22所述的方法，其中所述5-ht2b受体特异性激动剂的
激动活性相对于所述5-ht2b特异性受体激动剂的5-ht2a受体激动活性大100000倍。
[0178]
实施方案24.根据实施方案18至23中任一项所述的方法，其中所述5-ht2b特异性受体激动剂以小于100nm的kd结合5-ht2b受体。
[0179]
实施方案25.根据实施方案18至23中任一项所述的方法，其中所述5-ht2b特异性受体激动剂以小于10nm的kd结合5-ht2b受体。
[0180]
实施方案26.根据实施方案18至23中任一项所述的方法，其中所述5-ht2b特异性受体激动剂以小于1nm的kd结合5-ht2b受体。
[0181]
实施方案27.根据实施方案18至23中任一项所述的方法，其中所述5-ht2b特异性受体激动剂以小于500pm的kd结合5-ht2b受体。
[0182]
实施方案28.根据实施方案18至23中任一项所述的方法，其中所述5-ht2b特异性受体激动剂以小于100pm的kd结合5-ht2b受体。
[0183]
实施例
[0184]
克立咪唑类似物的化学合成
[0185]
所用缩写的定义：ppa＝多磷酸；ph＝苯基；k2co3＝碳酸钾；etoh＝乙醇；nah＝氢化钠；thf＝四氢呋喃；tbai＝四丁基碘化铵；lioh＝氢氧化锂；meoh＝甲醇；hatu＝1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐，n-[(二甲氨基)-1h-1，2，3-三唑并-[4，5-b]吡啶-1-基亚甲基]-n-六氟磷酸甲基甲铵n-氧化物；diea＝n，n-二异丙基乙胺；dmf＝二甲基甲酰胺；na(oac)3bh＝三乙酰氧基硼氢化钠；hcl＝盐酸；rt＝室温；
□
w＝微波处理。
[0186]
克立咪唑类似物1-28的一般合成
[0187][0188]
(a)环戊基乙酸，ppa，μw，80℃，20％；(b)clch2(4-clph)，k2co3，dmf，60℃，67％；(c)4-c1-3-氧代丁酸乙酯，sncl2，etoh，80℃；(d)吡咯烷，etoh，95℃；两步83％(e)br-ch2r，nah，thf，0℃至rt，15-60％或br-ch2r，nah，tbai，thf，0℃至rt，13-54％或丙基碘，nah，thf，0℃至rt，47％；(f)p-c1-苄基氯，nah，dmf，rt，54％；(g)(i)lioh，meoh/水，rt，(ii)吡咯烷，hatu，diea，dmf，rt，2步43％；(h)p-c1-苄基氯，k2co3，ch3cn，45℃，85％或环己基甲基溴，k2co3，tbai，ch3cn，55℃，30％；(i)吡咯烷，na(oac)3bh，ch2cl2；30-46％；(j)clch2ar，k2co3，ch3cn，45℃，44％；(k)吡咯烷，na(oac)3bh，ch2cl2，rt，65％；(l)hnr2，na(oac)3bh，ch2cl2，rt，47-85％；(m)h2，pd/c，meoh，rt，55％；(n)二噁烷中4m hcl，rt。
[0189]
除非另有说明，否则所有使用的化学试剂和溶剂都是可商购的。使用来自商业供应商的无水溶剂，在氩气气氛下在烘箱干燥的玻璃器皿中进行对空气和/或湿气敏感的反
应。将空气和/或湿气敏感试剂通过注射器或套管转移，并通过橡胶隔片引入反应容器中。使用旋转蒸发器在大约10-50托下完成溶剂去除。1h nmr光谱在varian inova-400 400mhz光谱仪上记录。化学位移以δ单位(ppm)报告。nmr谱参考了残留的nmr溶剂峰。偶联常数(j)以赫兹(hz)为单位报告。微波反应在cem discover微波反应器中进行。使用来自silicycle的isolera four快速色谱系统和siliasep硅胶柱进行柱色谱。lc/ms数据在配备waters 2795分离模块、waters 2424蒸发光散射检测器和waters 2996光电二极管阵列检测器的waters micromass zq质谱仪上采集。使用ms c18，5μm，4.6x50mm色谱柱，在环境温度(未调节)下，使用含有恒定0.1％甲酸的水-甲醇流动相，进行分离。
[0190]
化合物购自millipore sigma(马来酸甲基麦角新碱、bw-723c86、1-(3-氯苯基)哌嗪盐酸盐(m-cpp)、( )-去乙芬氟拉明盐酸盐)，cayman chemicals(卡麦角林、甲磺酸溴隐亭、(-)-阿扑吗啡盐酸盐)，apexbio(ro 60-0175富马酸盐)，tocris bioscience(cp-809，101盐酸盐)，ak scientific，inc(吡贝地尔)和axon medchem(tl 99氢溴酸盐)。在dmso中制备10mm化合物储备溶液，然后在胚胎培养基中稀释，以用于测定。
[0191]
实施例1：1-[(4-氯苯基)甲基]-2-(环戊基甲基)-1h-苯并咪唑(1)
[0192]
步骤1：将邻苯二胺(0.25g，2.3mmol)、环戊基乙酸(0.29ml，2.3mmol)和多磷酸(1.0ml)的混合物在微波反应器中在80℃加热30分钟。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到浅棕色固体状的2-(环戊基甲基)-1h-苯并咪唑(93mg，20％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.57(dd，j＝6.1，3.2hz，2h)，7.29-7.19(m，2h)，2.95(d，j＝7.5hz，2h)，2.48-2.38(m，1h)，1.96-1.78(m，2h)，1.72-1.50(m，4h)，1.36-1.23(m，2h)；c
13h17n2
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值201.13，实测值200.99。
[0193]
步骤2：将4-氯苄基氯(0.04g，0.2mmol)加入2-(环戊基甲基)-1h-苯并咪唑(0.05g，0.2mmol)和碳酸钾(0.069g，0.5mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物中。在60℃下搅拌下3小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(25％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到为白色固体的1-[(4-氯苯基)甲基]-2-(环戊基甲基)-1h-苯并咪唑(1)(55mg，67％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.79(d，j＝7.8hz，1h)，7.33-7.15(m，5h)，6.98(d，j＝8.3hz，2h)，5.35(s，2h)，2.85(d，j＝7.5hz，2h)，2.51-2.39(m，1h)，1.85(td，j＝11.5，6.9hz，2h)，1.73-1.53(m，4h)，1.35-1.22(m，2h)；lc-ms(m/z)c
20h22
c1n
2
[m h]

：计算值325.14，实测值324.98。
[0194]
实施例2：1-[(4-氯苯基)甲基]-2-(吡咯烷-1-羰基)-1h-苯并咪唑(2)
[0195]
步骤1：将1h-苯并咪唑-2-羧酸乙酯(0.1g，0.5mmol)和吡咯烷(0.216ml，2.6mmol)的混合物在微波反应器中加热至130℃，持续30分钟。将反应混合物浓缩并与甲苯共沸干燥，得到约115mg 2-(吡咯烷-1-羰基)-1h-苯并咪唑，为棕色固体，无需进一步纯化即可使用。
[0196]
步骤2：将4-氯苄基氯(0.03g，0.2mmol)加入氢化钠，60％(0.005g，0.2mmol)和2-(吡咯烷-1-羰基)-1h-苯并咪唑(0.04g，0.2mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(1ml)中的混合物中。在室温下搅拌3小时后，将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到1-[(4-氯苯基)甲基]-2-(吡咯烷-1-羰基)-1h-苯并咪唑(2)，为澄清
油状物(29mg，46％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.89-7.82(m，1h)，7.37-7.24(m，7h)，5.71(s，2h)，3.90(br t，j＝6.0hz，2h)，3.67(br t，j＝6.3hz，2h)，2.01-1.90(m，4h)；c
19h19
cln3o

的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值340.12，实测值340.21。
[0197]
实施例3：1-(环己基甲基)-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(4)
[0198]
步骤1：将二水合氯化锡(ii)(0.209g，0.9mmol)加入邻苯二胺(1.0g，9.2mmol)和4-氯-3-氧代丁酸乙酯(1.25ml，9.2mmol)在乙醇(20ml)中的混合物中并加热至80℃，持续2小时。将反应混合物浓缩以除去乙醇，用己烷洗涤并干燥，得到约1.7g为黄色固体的2-(氯甲基)-1h-苯并咪唑粗品，其无需进一步纯化即可使用。
[0199]
步骤2：将2-(氯甲基)-1h-苯并咪唑(1.5g，9.0mmol)和吡咯烷(14.8ml，180.1mmol)在乙醇(20ml)中的混合物加热至95℃，持续2小时，并在室温下持续72小时。将反应混合物浓缩并通过快速柱色谱法(0-10％甲醇/二氯甲烷和10％7n氨的甲醇溶液)纯化，得到2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑，为微红色-棕色固体(1.5g，83％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.65-7.53(m，2h)，7.31-7.20(m，2h)，4.17(s，2h)，3.50(s，2h)，2.94-2.83(m，4h)，1.93(br s，4h)；c
12h16n3
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值202.13，实测值202.07。
[0200]
步骤3：将环己基甲基溴(0.038ml，0.3mmol)和四丁基碘化铵(0.009g，0.025mmol)加入到冷却(0℃)的2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(0.05g，0.25mmol)和氢化钠，60％(0.007g，0.3mmol)在四氢呋喃(1ml)中的混合物中。将反应混合物加热至50℃，2小时，然后用乙酸乙酯稀释，用10％氢氧化铵水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱(5％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到为红棕色油的1-(环己基甲基)-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(4)(39mg，52％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.85-7.68(m，1h)，7.38-7.20(m，3h)，4.17(d，j＝7.3hz，2h)，3.95(s，2h)，2.66-2.54(m，4h)，1.96-1.63(m，10h)，1.30-1.03(m，5h)；c
19h28n3
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值298.22，实测值298.06。
[0201]
实施例4：2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}-1h-苯并咪唑(6)
[0202]
将4-(三氟甲基)苄基溴(0.038ml，0.2mmol)加入到2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(0.05g，0.2mmol)和氢化钠，60％(0.007g，0.3mmol)在四氢呋喃(1ml)中的冷却(0℃)混合物中。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后用乙酸乙酯稀释，用10％氢氧化铵水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱(5％甲醇/二氯甲烷)和(50％丙酮/二氯甲烷)纯化，得到2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1-{[4-(三氟甲基)苯基]甲基}-1h-苯并咪唑(6)，为淡黄色油(25mg，28％产率)，其静置固化。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.81(d，j＝7.3hz，1h)，7.57(d，j＝8.3hz，2h)，7.34-7.18(m，5h)，5.67(s，2h)，3.90(s，2h)，2.61-2.49(m，4h)，1.77-1.61(m，4h)；c
20h21
f3n
3
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值360.16，实测值360.05。
[0203]
实施例5：1-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-咪唑(9)
[0204]
步骤1：将1h-咪唑-2-甲醛(0.25g，2.6mmol)、4-氯苄基氯(0.5g，3.1mmol)与碳酸钾(0.72g，5.2mmol)在乙腈(20ml)在45℃下搅拌18小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到淡绿色油状的1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-咪唑-2-甲醛(0.49g，85％产率)。1h nmr
(400mhz，cdcl3)δ9.82(s，1h)，7.32-7.26(m，3h)，7.16-7.10(m，3h)，5.56(s，2h)；c
11h10
cln2o

的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值221.04，实测值220.83。
[0205]
步骤2：将三乙酰氧基硼氢化钠(0.053g，0.2mmol)加入到1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-咪唑-2-甲醛(0.05g，0.2mmol)和吡咯烷(0.019ml，0.2mmol)的在二氯甲烷(2ml)中搅拌的混合物中。在室温下搅拌18小时后，将反应混合物用10％氢氧化铵水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(0-10％甲醇/二氯甲烷/10％7n氨的甲醇溶液)纯化，得到为黄色固体的1-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-咪唑(9)(19mg，30％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.36-7.26(m，2h)，7.08(d，j＝8.3hz，2h)，6.99(d，j＝1.2hz，1h)，6.86(d，j＝1.2hz，1h)，5.27(s，2h)，3.67(s，2h)，2.55-2.46(m，4h)，1.85-1.67(m，4h)；c
15h19
cln
3
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值276.12，实测值276.01。
[0206]
实施例6：1-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-吲哚(11)
[0207]
步骤1：将4-氯苄基氯(0.133g，0.8mmol)添加到1h-吲哚-2-甲醛(0.1g，0.7mmol)和碳酸钾(0.19g，1.4mmol)在乙腈(5ml)中的混合物中。在45℃下搅拌18小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(25％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到为橙色固体的1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-吲哚-2-甲醛(81mg，43％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ9.92(s，1h)，7.80(d，j＝7.8hz，1h)，7.45-7.35(m，3h)，7.30-7.19(m，3h)，7.05(d，j＝8.5hz，2h)，5.82(s，2h)；c
16h13
clno

的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值270.06，实测值269.96。
[0208]
步骤2：将三乙酰氧基硼钠(0.043g，0.2mmol)加入到1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-吲哚-2-甲醛(0.05g，0.2mmol)和吡咯烷(0.015ml，0.2mmol)在二氯甲烷中的冷却(0℃)混合物中。在室温下搅拌18小时后，将反应混合物用10％氢氧化铵水溶液、水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到1-[(4-氯苯基)甲基]-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-吲哚(11)，为淡黄色油状物(39mg，65％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.70-7.51(m，1h)，7.32-7.09(m，5h)，6.96(d，j＝8.3hz，2h)，6.46(s，1h)，5.53(s，2h)，3.68(s，2h)，2.58-2.41(m，4h)，1.80-1.66(m，4h)；c
20h22
cln
2
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值325.14，实测值325.02。
[0209]
实施例7：1-(环戊基甲基)-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(20)
[0210]
将溴甲基环戊烷(0.092ml，0.7mmol)和四丁基碘化铵(0.009g，0.02mmol)添加到2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(0.05g，0.2mmol)和氢化物，60％(0.009g，0.4mmol)在n，n-二甲基甲酰胺(1ml)中的混合物中。在55℃下搅拌下18小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱(0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到1-(环戊基甲基)-2-[(吡咯烷-1-基)甲基]-1h-苯并咪唑(20)，呈红棕色油(35mg，50％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.85-7.66(m，1h)，7.41-7.22(m，3h)，4.28(d，j＝7.8hz，2h)，3.96(s，2h)，2.64-2.44(m，5h)，1.83-1.54(m，10h)，1.42-1.24(m，2h)；c
18h26n3
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值284.21，实测值284.01。
[0211]
实施例8：({1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-1，3-苯并二唑-2-基}甲基)二乙胺(24)
[0212]
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.043g，0.2mmol)添加到1-(4-氯苄基)-1h-苯并咪唑-2-甲醛(0.05g，0.18mmol)和二乙胺(0.019ml，0.18mmol)在二氯甲烷(2ml)中的混合物中。在室温搅拌18小时后，将反应混合物用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快
速柱色谱(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到({1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-1，3-苯并二唑-2-基}甲基)二乙胺(24)，呈红棕色油状(50mg，82％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.80(d，j＝7.6hz，1h)，7.33-7.17(m，5h)，7.02(d，j＝8.8hz，2h)，5.64(s，2h)，3.84(s，2h)，2.57(q，j＝7.1hz，4h)，1.00(t，j＝7.2hz，6h)；c
19h23
cln
3
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值328.15，实测值327.98。
[0213]
实施例9：4-({1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-苯并咪唑-2-基}甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25)
[0214]
将三乙酰氧基硼氢化钠(0.043g，0.2mmol)添加到1-(4-氯苄基)-1h-苯并咪唑-2-甲醛(0.05g，0.18mmol)和1-哌嗪羧酸叔丁酯(0.034g，0.18mmol)在二氯甲烷(2ml)中的混合物中。在室温搅拌18小时后，将反应混合物用水和盐水洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到4-({1-[(4-氯苯基)甲基]-1h-苯并咪唑-2-基}甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25)，为泡沫状淡黄色油(59mg，72％产率)。1h nmr(400mhz，cdcl3)δ7.79(d，j＝7.4hz，1h)，7.34-7.19(m，6h)，7.03(d，j＝8.3hz，2h)，5.55(s，2h)，3.77(s，2h)，3.33(br s，4h)，2.45(br s，4h)，1.46(s，9h)；c
24h30
cln4o
2
的lc-ms(m/z)[m h]

：计算值441.20，实测值441.08。
[0215]
克立咪唑类似物的表型筛选。筛选了表1a二十八种克立咪唑类似物在抑制scn1lab突变斑马鱼中观察到的高速癫痫发作样游泳行为的功效。
[0216]
表1a：克立咪唑类似物库
[0217]
[0218]
[0219][0220]
实施例10：
[0221]
癫痫可以由大脑损伤或基因突变引起。在遗传性癫痫中，已在scn1a基因中鉴定出超过650种变体(harkin，l.a.et al.the spectrum of scn1a-related infantile epileptic encephalopathies.brain 130，843-852(2007)；mulley j.c.，et al.，scn1a mutations and epilepsy.hum.mutat.25，535-542(2005))。该基因的错义或移码突变与全身性癫痫加热性惊厥(gefs )(ceulemans，b.p.，et al.，clinical correlations of mutations in the scn1a gene：from febrile seizures to severe myoclonic epilepsy in infancy.pediatric neurol.30，236-243(2004))以及称为dravet综合征的更严重病症相关。ds患儿最初发育正常，但通常在出生后的第一年内经历热性惊厥发作，最终发展为严重的自发性反复发作、智力障碍、共济失调和精神运动功能障碍。使用可用的抗癫痫药物(aed)无法充分控制癫痫发作，这些儿童不适合进行神经外科切除术(bender，a.c.，et al.，scn1a mutations in dravet syndrome：impact of interneuron dysfunction on neural networks and cognitive outcome.epilepsy beh.23，177-186(2012))。
[0222]
在哺乳动物大脑中，电压门控钠通道α亚基有四种主要亚型：nav1.1、nav1.2、nav1.3和nav1.6，分别由基因scn1a、scn2a、scn3a和scn8a编码。这些通道的开放产生钠电导和细胞膜快速去极化，例如，动作电位启动不可或缺的特征(catterall，w.a.，et al.，nav1.1channels and epilepsy.j.physiol.588，1849-1859(2010))。在小鼠中，nav1.1在中枢神经系统中广泛表达，包括小清蛋白阳性海马中间神经元的轴突起始段和兴奋性主细胞
(kim，d.y.，et al.，reduced sodium channel nav1.1levels in bace1-null mice.j.biol.chem.286，8106-8116(2011)；chen，c.，et al.，mice lacking sodium channel beta1 subunits display defects in neuronal excitability，sodium channel expression，and nodal architecture.j.neurosci.24，4030-4042(2004))。在小鼠中nav1.1杂合缺失导致急性分离的快速尖峰中间神经元的放电能力降低(yu，f.h.，et al.，reduced sodium current in gabaergic intemeurons in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy.nat.neurosci.9，1142-1149(2006))。具有nav1.1的整体或中间神经元特异性杂合缺失的小鼠表现出温度诱导的和自发性的癫痫发作、轻度共济失调、自闭症样行为和过早死亡(yu，f.h.，et al.，reduced sodium current in gabaergic interneurons in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy.nat.neurosci.9，1142-1149(2006)；oakley，j.c.，et al.，temperature-and age-dependent seizures in a mouse model of severe myoclonic epilepsy in infancy.proc.natl.acad.sci.usa 106，3994-3999(2009)；cheah，c.s.，et al.，specific deletion of nav1.1sodium channels in inhibitory interneurons causes seizures and premature death in a mouse model of dravet syndrome.proc.natl.acad.sci.usa 109，14646-14651(2012))。在nav1.1通道的第iii域中携带过早终止密码子的敲入小鼠在延长的中间神经元放电期间也表现出尖峰幅度的减小和对温度诱发的癫痫发作的敏感性增加(ogiwara，i.，et al.，nav1.1localizes to axons of parvalbumin-positive inhibitory interneurons：a circuit basis for epileptic seizures in mice carrying an scnla gene mutation.j.neurosci.27，5903-5914(2007))。
[0223]
有效动物模型的生成和表征对于了解ds的病理生理学和帮助识别新疗法至关重要。虽然相当多的注意力集中在模拟小鼠的scn1a突变上，但这些动物已被证明难以繁殖，并且癫痫表型受到背景菌株遗传学的强烈影响。诱导性多能干细胞可以从ds患者中产生，但单个神经元不能重现体内癫痫发作所需的网络环境。danio rerio(斑马鱼)是一种简单的脊椎动物物种，它为基因操作、成本有效的繁殖和体内药物发现提供一种具有显著优势的替代模型系统(lessman，c.a.，the developing zebrafish(danio rerio)：a vertebrate model for high-throughput screening of chemical libraries.birth defects res.c.embryo today 93，268-280(2011)；delvecchio，c.，et al.，the zebrafish：a powerful platform for in vivo，hts drug discovery.assay drug dev.technol.9，354-361(2011)；rinkwitz，s.，et al.，zebrafish：an integrative system for neurogenomics and neurosciences.prog.neurobiol.93，231-243(2011))。理想情况下，动物模型应基于已知的疾病遗传原因(scn1a突变)，准确概括疾病的关键特征(癫痫)，并对疾病患者常用的治疗有反应或无反应(药理学验证)。如果成功，这样的模型可以提供对疾病过程的理解并促进对新疗法的探索。
[0224]
在斑马鱼中，电压门控钠通道家族由四组重复基因组成：scn1laa&scn1lab、scn4aa&scn4ab、scn5laa&scn5lab和scn8aa&scn8ab(novak，a.e.，et al.，embryonic and larval expression of zebrafish voltage-gated sodium channel alpha-subunit genes.dev.dyn.235，1962-1973(2006))。斑马鱼scn1lab基因与人类scn1a具有77％的同一
性，并在中枢神经系统中表达。该基因的纯合斑马鱼突变体(最初称为didys552)是在化学诱变筛选中使用光动力响应作为测定法发现的(schoonheim，p.j.，arrenberg，a.b.，del bene，f.，&baier h.，optogenetic localization and genetic perturbation of saccade-generating neurons in zebrafish.j.neurosci.30，7111-7120(2010))。这些类型的筛选基于使用烷化剂n-乙基-n-亚硝基脲(enu)诱导随机点突变，产生的突变通常是功能丧失和隐性的。虽然这是一个纯合突变，但鉴于斑马鱼的基因组重复和额外nav1.1同源物(scn1laa)的存在，scn1lab斑马鱼突变体与常染色体显性人类dravet综合征相关。scnllab突变体在分子和行为水平上进行了表征，证明突变体表现出自发的耐药性癫痫发作，然后将它们用于新的高通量筛选程序，以鉴定可改善癫痫表型的化合物。一项基于表型的筛选将克立咪唑(一种fda批准的化合物)鉴定为这些突变体中自发性惊厥行为和电图癫痫发作的有效抑制剂。然后合成克立咪唑类似物以测试它们在改善癫痫方面的有效性。
[0225]
斑马鱼抚养。根据《动物护理和使用指南》(ebrary inc.，2011)中概述的要求，在标准实验室条件下饲养斑马鱼，并且实验得到机构动物护理和使用委员会的批准(协议#an108659-03)。胚胎是通过与tl品系异交的scn1lab(didy
s552
)杂合动物自然产卵获得的。纯合子scn1lab突变体(n＝2500)具有分散的黑素体，与wt幼虫相比，明显变暗3dpf。
[0226]
癫痫发作监测。在5dpf时，将个体斑马鱼幼虫放入含有胚胎培养基的透明平底96孔微孔板的单孔中。幼虫是随机选择的，因为在这个发育阶段不可能确定性别。所有药物筛选实验均由对测试化合物和所有编码用于事后分析的文件不知情的研究人员以不偏向的方式进行。将微孔板置于daniovision内并在室温下适应20分钟。使用ethovision xt软件(daniovision，noldus information technology)在10分钟的记录时期获得每个孔的运动图。使用以下针对戊四唑诱发的癫痫发作建立的三阶段量表进行癫痫评分：阶段0，没有或很少游泳活动；阶段i，增加短暂的游泳活动；阶段ii，快速的“漩涡状”盘旋游泳行为；和阶段iii，阵发性全身阵挛样抽搐和短暂的姿势丧失。wt鱼通常在阶段0或阶段i评分。分析图的行进距离(以毫米为单位)和平均速度(以毫米/秒为单位)。药物暴露90分钟后，检查幼虫的毒副作用。减少或停止幼虫心跳或减少或消除接触时的逃逸反应的化合物被认为是有毒的。
[0227]
对于电生理学研究，将斑马鱼幼虫冷麻醉并固定在1.2％的琼脂糖中；如前所述(baraban，s.c.et al.，neuroscience，131，759-768，2005)，使用单电极方法从前脑或视神经顶盖结构获得局部场电位(lfp)记录。在1khz下获得10分钟的琼脂糖包埋的lfp记录期。癫痫样事件是事后确定的，定义为多尖峰或聚集尖峰向上或向下膜偏转大于3倍基线噪声水平和150-250毫秒的持续时间(类似间歇期)或大于5倍基线噪声、多尖峰和＞500毫秒的持续时间(类似发作期)；使用clampfit(molecular devices；sunnyvale，ca)中的阈值检测设置对这两个事件进行计数。在电生理学实验期间，使用axiocam数码相机以视频帧速率连续监测幼虫的血流量和心率。
[0228]
受体结合测定。体外结合测定和ki数据由美国国家心理健康研究所精神药物筛选计划(nimh pdsp)进行。针对重组、稳定表达的人5-ht
2a
r、5-ht
2b
r、5-ht
2c
r和h1筛选药物。对于特异性结合测定，请参阅详细程序https：//pdspdb.unc.edu/pdspweb/(besnard，j.et al.，nature，492，215-220，2012)。
[0229]
统计数据。除非另有说明，否则数据表示为平均值
±
平均值的标准误差(sem)。对
于行为分析，平均游泳速度变化的阈值≥40％(＞1.5xsd的250个对照处理scn1lab)被认为是显著的。为了在两个以上的组之间进行比较，使用了单向anova分析。当方差不具有正态分布时，使用非参数kruskal-wallis检验，然后使用dunns多重比较检验。被认为具有统计学意义的差异用星号表示(*p＜0.05；**p＜0.01)。
[0230]
评估减少scn1lab突变斑马鱼癫痫发作样游泳行为的克立咪唑类似物。这些图显示了在(图1a)100μm或(图2b)250μm时筛选的5dpf幼虫的平均游泳速度的变化(每种药物处理六条鱼)。抑制癫痫发作活动的阈值(阳性命中-标记的数据点)被确定为平均游泳速度的降低≥40％(虚线)。红色数据点代表暴露90分钟后被归类为有毒的化合物。热图显示了第一次试验(1-6)中六只个体幼虫的速度的％变化。试验1和2显示了六条鱼的平均速度变化。
[0231]
克立咪唑类似物的筛选显示，五种化合物(17.9％)在100μm时有毒，在250μm时增加到12种化合物(42.9％)。克立咪唑类似物4、6、9和20分别在100μm和250μm有效抑制scn1lab突变惊厥样行为。克立咪唑类似物25(*)未能以250μm进入溶液，因此不考虑用于进一步测试。
[0232]
为了确认对5dpf scn1lab突变体的惊厥行为的抗癫痫作用，使用与本文所述相同的方法独立合成了克立咪唑类似物4、6、9和20(由oxygen healthcare research pvt.ltd.提供)。新合成的化合物在10、50、100和250μm下重新测试，以确认浓度依赖性响应。克立咪唑类似物4、6和20减少了在scn1lab突变斑马鱼幼虫中观察到的高速癫痫样游泳行为，证实了在ucsf合成的类似物的初步筛选结果(图2a-c)。速度下降的阈值≥40％(虚线)。在暴露30分钟(黑色条)和90分钟(灰色条)后，记录幼虫的运动10分钟。对于六个个体scn1lab斑马鱼的单个实验，显示了代表性原始10分钟跟踪图。(图2g)化合物4、(图2h)化合物6和(图2i)化合物20的体外放射性配体结合分析揭示了5-ht
2b
r相对于其他5-ht2r亚型的特异性。化合物sb206553用作5-ht
2b
r结合的阳性对照。其他克立咪唑类似物的结合亲和力在表1b和表2中给出。重新合成的化合物9在250μm时有毒。这证实了原始化合物的第二次测试的结果，并表明在试验1期间观察到的游泳行为的减少可能是假阳性结果。
[0233]
表1b：在scn1lab突变斑马鱼中有效抑制自发癫痫活动的化合物的受体特异性和结合亲和力(ki)。
[0234][0235]
具有抗癫痫活性的克立咪唑类似物选择性地结合5-ht
2b
r。5-ht2r对21种克立咪唑类似物的结合亲和力是使用nimh精神药物筛选程序进行的放射性配体结合测定确定的(besnard，j.et al.，nature，492，215-220，2012)。表现出对5dpf scn1lab突变体的惊厥行为的抗惊厥作用的三种化合物4、6和20显著偏爱5-ht
2b
r，ki值分别为612nm、285nm和772nm(图2g-i；表2)。此外，这些克立咪唑类似物与5-ht
2a
r或5-ht
2c
r没有显著结合(ki＞10,000nm)。化合物5、14和23还示出了5-ht
2b
r的选择性，ki值为219nm、606nm和515nm。在最初的库筛选中，化合物5和14对游泳行为没有显著影响，化合物23被确定为有毒。独立合成化合物的额外测试证实化合物5和14对scn1lab斑马鱼的游泳行为没有显著影响(图5)。21个克立咪唑类似物的四个(化合物10、15、17和21)显示没有显著结合任何人5-ht2r。
[0236]
表2：克立咪唑类似物对人5-ht2受体和h1受体的结合亲和力(ki)
[0237][0238]
5-ht
2b
r激动剂在scn1lab斑马鱼模型中抑制癫痫活动。一系列可商购的化合物，已知其结合5-ht
2b
r(roth，b.l.et al.，the neuroscientist，6，252-262，2000)，因为它们能够减少scn1lab斑马鱼幼虫的癫痫样游泳行为(表3)。三种5-ht
2b
r激动剂，甲基麦角新碱、6-apb和去乙芬氟拉明，以浓度依赖性方式抑制惊厥游泳行为(图3a-c)。此外，用5-ht
2b
r激动剂bw-723c86(图3d)处理的scn1lab突变体幼虫表现出癫痫样游泳行为的减少，但也未能达到我们需要进一步测试的显著性阈值。类似地，5-ht
2b
r/5-ht
2c
r激动剂ro60-0175持续降低平均速度，并且在药物暴露90分钟后有效(图3e)。与曲唑酮的活性代谢物m-cpp一样，cp-809，101处理产生了双相反应(分别为图3h和图3g)。对5-ht2r的亲和力最低的tl-99未能在scn1lab突变体幼虫中引起任何行为影响(图3f)。
[0239]
还测试了具有报道5-ht2r的多巴胺受体激动剂减少癫痫样游泳行为的能力(图6a-d)。卡麦角林是一种多巴胺激动剂，具有公认的激活5-ht
2b
r的高亲和力(ki＝1.2nm)，在250μm显著降低了惊厥游泳行为(图6a)，然而，由于缺乏浓度响应，它没有经过进一步的测试。溴隐亭在10μm显著降低了癫痫样游泳行为(图6b)，然而，在更高浓度下观察到毒性。吡贝地尔是一种多巴胺2受体激动剂(ki＝1.3nm)，在100和250μm时也表现出毒性(图6d)，以及非选择性多巴胺激动剂阿扑吗啡显著增加了scn1lab突变体幼虫的平均游泳速度(图
6c)。
[0240]
监测脑电图活动以确认癫痫抑制是消除行为测试中假阳性的必要测定(griffin，a.et al.，frontiers in pharmacology，9，2018)。通过将微电极放入琼脂固定的斑马鱼幼虫的视觉识别大脑区域，可以监测稳定的局部场电位(lfp)记录数小时(baraban，s.c.et al.，nat commun，4，2410，2013)。在5dpf时，scn1lab斑马鱼幼虫的lfp记录显示在10分钟的记录时期内平均有250次异常电图癫痫发作事件。scn1lab突变体的lfp记录确认暴露于100μm克立咪唑类似物4、6和20后电图发作活动的显著抑制。图4b和图4c显示了代表性的lfp记录期，仅具有偶尔的异常电图事件。类似地，250μm甲基麦角新碱(n＝7；p＜0.001)或250μm 6-apb(n＝6；p＝.0238)以类似于5-ht
2b
r选择性克立咪唑类似物4、6和20的方式显著抑制电图癫痫发作事件的频率(图4b和图4c)。甲基麦角新碱、6-apb和阳性识别的克立咪唑类似物4、6和20的放射性配体结合数据表明所有五种化合物分享对5-ht
2b
r的结合亲和力(表3)。
[0241]
表3：测试5-ht
2b
r结合化合物的抗癫痫活性。
[0242][0243]
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