一种肥胖调控标志物FKBP15及其应用的制作方法

一种肥胖调控标志物fkbp15及其应用
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种肥胖调控标志物fkbp15及其应用。


背景技术：

2.肥胖是一种以白色脂肪组织在体内过多积聚为主要特征的慢性营养障碍性疾病，主要表现在代谢紊乱引起的有害健康等后果，在世界范围内以流行病的速度增加。肥胖的发生与遗传背景和生活环境有关，包括社会经济地位、生活和饮食习惯等。肥胖会导致诸多健康问题，如2型糖尿病、心血管疾病、高脂血症、高胆固醇血症、高血压和癌症等。目前治疗肥胖的策略主要以运动促进能量消耗、饮食控制以减少能量摄入为主，但因多数肥胖患者难以坚持而收效甚微；手术治疗虽可改善肥胖症状，但若非肥胖十分严重一般也不予选择。截止目前，国外批准上市治疗肥胖的药物有五种：氯卡色林、芬特明及复方芬特明/托吡酯、纳曲酮/安非他酮、奥利司他和利拉鲁肽，在我国，目前国家药品监督管理局批准上市、可用于减肥的只有奥利司他，而这些药物都会存在一些副作用，如：氯卡色林是一种可以减少食物摄入和体重，但不影响能量代谢的药物，最常见副作用有头痛、头晕、疲劳、恶心、口干和便秘等；芬特明或复方芬特明/托吡酯胶囊：芬特明产生抑制食欲的效果，托吡酯会增强饱腹感，其主要副作用有高血压、心悸、头痛、焦虑、口干、便秘等；纳曲酮/安非他酮复合缓释片，通过中枢神经系统抑制食欲，促进能量消耗，常见副作用有恶心、呕吐、便秘、腹泻、失眠等。专利cn102225078a公开了一种肥胖剂，其以鼠李糖乳杆菌的微生物为有效成分，其有效性和安全性较好。专利cn103442561a公开了calebina在抑制脂肪形成中的能力及其在肥胖管理中的应用，calebina显著的生物调节特性包括抑制瘦素的产生，增加脂连蛋白的表达和抑制由促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(tnf-α)、白介素-6(il-6)和白介素-1(il-1β)引起的局部(脂肪细胞)和全身性炎症。肥胖防治目前缺乏有效手段，这使得全球肥胖人数迅速增长、肥胖群体不减反增，已然成为一个全球性的严重公共卫生问题。因此，积极寻找有效的肥胖治疗手段已刻不容缓。
3.fkbp15基因位于人染色体chr9:113161006-113221318；mrna全长8807bp，其中5’utr长75bp，cds区3660bp，3’utr区长5072bp，编码1219个氨基酸；基因组大小size:60313，共有外显子28个，3d结构预测结果显示fkbp15蛋白由9个α螺旋、8个不规则折叠组成；在脊椎动物中，其编码区基因序列相对保守。fkbp15是fk506结合蛋白家族(fkbp)成员之一，而fkbp是高度保守的亲免蛋白家族的一部分，其成员在调控细胞分化、炎症、适应性免疫反应、癌症和发育生物学有关的信号通路中起重要作用。
4.因此，亟需提供一种新的肥胖治疗的干预靶标，为肥胖的预防和/或治疗提供新的思路。


技术实现要素：

5.发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种新的肥胖调控标志物fkbp15及其应用。本发明首次发现通过抑制fkbp家族成员fkbp15的表达能够激活ampk
磷酸化而抑制脂肪细胞的分化，从而达到降低脂滴的蓄积的目的，本发明提供了一种新的肥胖预防和/或治疗的干预靶标fkbp15，为肥胖的预防和/或治疗提供了新的思路。
6.技术方案：为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
7.一方面，本发明提供了fkbp15在制备肥胖调控产品中的应用。
8.另一方面，本发明提供了一种肥胖调控产品，所述的产品包含fkbp15的调控剂。
9.具体地，所述的产品为药物或保健品。
10.进一步具体地，所述的药物还包括药学上可接受的载体，所述的载体为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂中的任意一种或多种。
11.具体地，所述的抗肥胖药物为外用制剂、口服制剂或注射制剂中的任意一种。
12.进一步具体地，所述的外用制剂为喷雾剂或气雾剂。
13.进一步具体地，所述的口服制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂或囊泡剂中的任意一种。
14.进一步具体地，所述的注射制剂采用皮内、皮下、肌内、局部或静脉内注射作为给药方式。
15.又一方面，本发明提供了fkbp15作为肥胖调控靶点的应用。
16.又一方面，本发明提供了fkbp15在制备ampk磷酸化通路调控产品中的应用。
17.又一方面，本发明提供了一种ampk磷酸化通路调控产品，所述的产品包含fkbp15的调控剂。
18.具体地，所述的产品为药物或保健品。
19.又一方面，本发明提供了fkbp15作为ampk磷酸化通路调控靶点的应用。
20.又一方面，本发明提供了fkbp15在制备肥胖检测产品中的应用。
21.又一方面，本发明提供了一种肥胖检测产品，所述的产品包含结合fkbp15的转录或翻译产物的检测试剂。
22.具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
23.进一步具体地，所述的产品包括但不限于基因检测试剂盒或蛋白表达检测试剂盒。
24.又一方面，本发明提供了fkbp15作为肥胖检测靶点的应用。
25.有益效果：与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：
26.1)本发明首次发现了一种新的肥胖调控标志物fkbp15，通过抑制fkbp15的表达能够激活ampk磷酸化而抑制脂肪细胞的分化，从而达到降低脂滴的蓄积的目的。
27.2)本发明提供了一种新的肥胖预防和/或治疗的干预靶标fkbp15，为肥胖的预防和/或治疗提供了新的思路，有助于进一步阐明脂肪细胞分化及肥胖的调控机制。
28.3)采用本发明所述的标志物fkbp15调控肥胖，具有较好的安全性及有效性。
附图说明
29.附图1为fkbp15敲低慢病毒及过表达慢病毒感染人前体脂肪细胞荧光效果检测图，其中，a：fkbp15-rnai病毒感染人前体脂肪细胞，感染72h后gfp荧光染色，moi：10，200
×
；b：fkbp15过表达病毒感染人前体脂肪细胞，感染72h后gfp荧光染色，moi：10，200
×
。
30.附图2为fkbp15-rnai及过表达慢病毒感染人白色前体脂肪细胞内丰度表达检测
图，其中，a：fkbp15-rnai病毒感染人前体脂肪细胞后fkbp15的mrna的表达；b：fkbp15过表达病毒感染人前体脂肪细胞后fkbp15的mrna的表达。
31.附图3为fkbp15的rnai及过表达慢病毒感染对前体脂肪细胞增殖的影响检测图，其中，a：fkbp15-rnai后对白色前体脂肪细胞增殖的影响；b：fkbp15过表达对白色前体脂肪细胞增殖的影响。
32.附图4为fkbp15敲低或过表达对人源白色前体脂肪细胞成脂的影响检测图，其中，a：fkbp15-rnai感染人白色前体脂肪细胞分化成熟后的油红o染色结果(400
×
)。b：过表达fkbp15油红o染色结果(400
×
)；c：fkbp15-rnai感染人白色前体脂肪细胞分化成熟后细胞内甘油三酯含量；d：过表达fkbp15后细胞内甘油三酯含量；e：fkbp15-rnai后成脂基因(cebpα、cebpβ、pparγ)的表达。
33.附图5为fkbp15敲低后抑制脂肪细胞分化机制研究结果图，其中，a：fkbp15及其下游靶基因的功能显著性分析；b：fkbp15敲低后，p-ampkα2蛋白表达水平的变化。
具体实施方式
34.下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
35.实施例中未注明具体技术或条件者，均按照本领域内的文献所描述的技术或条件(如参考j.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。
36.本发明采取独立重复实验，均重复3次。实验数据采用spss18.0统计分析软件分析，计量资料以均数
±
标准差表示，两样本均数之间的比较，经正态性检验和方差齐性检验后，采用t或t'检验，p《0.05提示差异有统计学意义。
37.实施例1.fkbp15基因研究
38.本发明以抑制性差减杂交(suppressive subtractive hybridization,ssh)技术，筛选肥胖与正常人网膜脂肪组织中的差异表达基因(differentially expressed genes)，获得差异表达基因片断后进一步筛查人脂肪组织cdna文库，克隆到一条在肥胖者脂肪组织中表达显著上调的基因-fkbp15(genbank登录号：23307)。应用rt-pcr技术及westernblot技术验证该基因在肥胖与正常人网膜脂肪组织中的表达差异发现，该基因在肥胖与正常人之间的表达差异高达8倍，且组内差异较小。
39.实施例2.fkbp15敲低或过表达对人源白色脂肪细胞成脂的影响
40.1.fkbp15过表达慢病毒及rnai-easy慢病毒载体构建及包装
41.在哺乳动物的细胞或个体水平上，在不改变和破坏基因组序列的基础上，可以通过表达该基因，以探究其生物学功能。在细胞水平上可构建适用于细胞的过表达载体转染细胞或制备过表达病毒感染目的细胞，可达到瞬时过表达或稳定过表达细胞系。慢病毒与腺病毒相比，虽然包装病毒时产生的滴度较低，需要2-4d才可以表达，但病毒可将目的基因随机整合到细胞基因组上，构建稳定的细胞株。本发明中细胞需要多次传代，并且诱导分化需要8d时间，需要稳定的细胞系，因此选择构建慢病毒包装质粒。本发明中fkbp15过表达慢
病毒及rnai慢病毒委托上海吉凯基因医学科技股份有限公司采用本领域技术人员已知的分子生物学手段进行构建及包装。
42.2.携带fkbp15基因的慢病毒载体的鉴定
43.为了探究包装的fkbp15慢病毒浓缩液能否成功感染人前体脂肪细胞，将细胞接种到六孔板(细胞密度约1
×
106/孔)，待细胞融合度约50％时，阴性对照组lv-fkbp15、敲低实验组(lv33-kd-fkbp15)、过表达实验组(lv-oe-fkbp15)分别加入病毒20μl(1
×
108tu/ml)，空白对照组(无病毒感染，简写为ctrl组)加入pbs 20μl，感染辅助试剂polybrene终浓度为6μg/ml，moi为10，感染4h后添加再1ml含血清培养液，感染24h后更换为含血清的正常培养液，病毒感染成功后，可在细胞内表达绿色荧光。细胞在病毒感染前，无绿色荧光信号；经病毒感染后72h后，带有荧光的细胞数量增加，荧光强度增加，清晰可见。检测结果如图1所示。
44.图1结果表明，lv33-kd-fkbp15及lv-oe-fkbp15病毒均能够成功感染人前体脂肪细胞，且在感染72h后被感染的细胞荧光信号较强，继续培养荧光可维持。
45.3.fkbp15敲低及过表达慢病毒感染进入细胞内丰度表达
46.用real-time pcr实验进行验证，具体检测步骤为：
47.3.1.细胞总rna提取
48.离心机4℃预冷，65℃预热rnase-free ddh2o，实验台于操作前经75％酒精拭擦、清洁纱布拭擦、以及rnasezap喷洒等处理。
49.1)取出-80℃冻存的细胞裂解液(trizol)，待裂解液融化后置于室温裂解10min。
50.2)按比例(trizol：氯仿＝1：0.2)加入氯仿，剧烈振荡30sec后，12000rpm/min，4℃离心15min。离心结束后液体分为三层：水相(无色上层)、中间相(白色)、有机相(红色下层)。
51.3)取上层水相200-300μl转移至新的rnase-free离心管中，加入1.5倍体积无水乙醇，votex充分混匀后小离。
52.4)取700μl样品加入rnase-free吸附柱中，室温，12000rpm离心30sec，弃去管中液体。
53.5)加入去蛋白液rw1，350μl/管，室温12000rpm离心30sec后弃去管内液体；重复一次。
54.6)加入漂洗液rw，500μl/管，静置2min，室温12000rpm离心30sec后弃去管内液体；重复一次。
55.7)室温12000rpm空离2min，吸附柱转移至新的rnase-free 1.5ml离心管中，通风橱中放置8-10min晾干。
56.8)每管加入30μl预热的rnase-free ddh2o，盖紧管盖，室温12000rpm离心2min洗脱。弃去吸附柱，所得rna-80℃冻存(可暂置于冰上)。
57.9)使用nanodrop nd-1000分光光度计检测提取的rna样品浓度、od260/280以及od230/260。
58.3.2.逆转录反应(takara rr036a)
59.按下列表1组分配制rt反应液(反应液配制请在冰上进行)。
60.表1
61.试剂使用量终浓度5×
primescript rt master mix(perfect real time)8μl1
×
total rna32μl-rnase free ddh2oupto40μl-62.40μl反应体系可最大使用2000ng的total rna。
63.轻柔混匀后进行反转录反应，反应程序如下：37℃15min(反转录反应)；85℃5sec(反转录酶的失活反应)；4℃forever。
64.注意：得到的rt反应液加入到下一步的real time pcr反应体系中，其加入量不要超过real time pcr反应体积的1/10(v/v)量。
65.3.3.realtime pcr检测(appliedbiosystems,powerup
tm sybr
tm green master mix，a25743)
66.1)在使用本试剂之前，请将其充分涡旋混匀；
67.2)每个样本进行三次重复；
68.3)反应体系为10μl；
69.4)配制反应体系：
70.按照下表2配制pcr反应体系(注：配制多个反应孔时，各组分预留5个孔的余量，以免移液器的损失)。
71.表2
72.组成成分10μl体系2
×
powerup sybr green master mix5μl正向引物和反向引物
1.0.5μl/0.5μlcdna模板和ddh2o
2.1μl/3μl总体积10μl
73.1.建议正、反向引物的终浓度各为300-800nm；
2.建议每个反应孔使用1-10ng cdna或10-100ng gdna。
74.正、反向引物分别如下表3所示。
75.表3
76.geneforward sequence(5'to 3')sequencereverse(5'to3')h-ppiattcatctgcactgccaagactcgagttgtccacagtcagch-fkbp15acagctctcaccaagcaaaccgtaaggactggaacacc
77.反应体系配好后，盖上反应盖，充分涡旋混匀，离心。将反应液分装到每个反应孔中。封上贴膜，离心，避免产生气泡。
78.5)运行qpcr反应程序：将反应板放在荧光定量pcr仪上，根据需要选择快速或标准pcr反应程序，并按照以下表格设置反应参数。
79.标准模式(引物tm≥60℃，下表4)：
80.表4
[0081][0082]
设置熔解曲线模式(下表5)：
[0083]
表5
[0084]
阶段升降温速度温度时间11.6℃/秒95℃15秒21.6℃/秒60℃1分钟30.15℃/秒95℃15秒
[0085]
采用δδct法计算mrna的相对表达量(利用ppia进行标化)：mrna相对表达量＝2
(
△
ct(control)
‑△
ct(mrna))
[0086]
结果如图2中所示，fkbp15-rnai组的fkbp15的表达量较对照组比显著下调，oe-fkbp15组的fkbp15的表达量较对照组比上调近6倍，具有极显著差异。由此可以证明成功构建了可稳定rnai及过表达fkbp15的细胞。
[0087]
4.人前体脂肪细胞fkbp15-rnai及过表达fkbp15后对细胞增殖的影响
[0088]
人内脏前脂肪细胞悬液以每孔100μl约3000个细胞接种于96孔板中，以moi为10，采用fkbp15过表达慢病毒(1μl，1
×
108tu/ml)及rnai-easy慢病毒(1μl，1
×
108tu/ml)感染后采用cck8试剂盒检测细胞增殖。24h、48h、72h后，每孔加入10μl的cck8溶液，培养箱孵育1h，450nm测定吸光度(a)值。检测结果如图3所示。
[0089]
图3表明fkbp15过表达慢病毒(1μl，1
×
108tu/ml)及rnai-easy慢病毒(1μl，1
×
108tu/ml)感染后对前体脂肪细胞的增殖无显著影响。
[0090]
5.fkbp15敲低或过表达对人源白色前体脂肪细胞成脂的影响
[0091]
为了研究fkbp15对脂肪分化的影响，分别获得了fkbp15-rnai及过表达fkbp15的细胞，对细胞成脂诱导分化，通过油红o染色和甘油三酯检测等方法观察细胞内脂滴的积累变化以及qpcr技术检测成脂标记基因(cebpα、cebpβ、pparγ)表达量等变化。
[0092]
5.1.前体脂肪细胞诱导分化方案
[0093]
(1)诱导分化剂i(100ml体系)：dmem/f12培养基：97.2ml；ibmx：称取11.5mg，加入500μl 0.5n的koh助溶；胰岛素(1mg/ml)：290μl，终浓度500nm；地塞米松(0.1mm)：1ml，终浓度1μm；罗格列酮(20mm)：5μl，终浓度1μm；p/s：1ml。维持4天。
[0094]
(2)诱导分化剂ii(100ml体系)：dmem/f12培养基：98.7ml；胰岛素(1mg/ml)：290μl，终浓度100nm；p/s：1ml。维持4天。
[0095]
5.2.油红o染色
[0096]
1)分化成熟的脂肪细胞弃去培养基，pbs洗2遍，4％多聚甲醛1ml/孔固定30min；
[0097]
2)油红o染色液配置：采用油红o染色试剂盒(sciencell油红o试剂盒0843)配置工作液：储备液：ddh2o＝3:2比例配置；
[0098]
3)过滤：配置溶解好的油红，用0.22μm滤膜过滤2遍，注意轻柔操作；
[0099]
4)固定：pbs清洗细胞3遍，采用sciencell细胞固定液固定20min；
[0100]
5)染色：固定好的细胞，吸弃固定液，pbs洗两遍，加入油红工作液后置于37℃温箱，染色30min；
[0101]
6)染色完成后弃去染色液，ddh2o润洗5遍，注意不要正对着细胞冲洗；加入适量pbs，显微镜下拍照。
[0102]
5.3.甘油三脂实验检测成脂情况(普利来组织甘油三酯测定试剂盒e1013)
[0103]
1)细胞裂解：分化成熟的脂肪细胞，pbs洗涤1-2遍以去除甘油，后按比例每1
×
106个细胞加入0.1ml裂解液，移液器吸头刮下细胞混匀后室温静置10分钟；
[0104]
2)裂解液处理：吸取适量上清转移到1.5ml离心管中，余下的裂解液可用bca法蛋白定量试剂盒进行蛋白定量；细胞裂解液置于70℃，混匀加热10min；加热完成后室温2000
×
rpm离心5min，上层清液即可进行酶学检测；
[0105]
3)工作溶液配制：试剂r1与试剂r2按4：1比例混合即可，最好当天配制，变色弃去；
[0106]
4)标准品稀释：4mm甘油标准品使用蒸馏水或与缓冲液一致的液体等比稀释，一般4-6管即可，设置0浓度对照反应管；
[0107]
5)待测样品10μl/孔，工作液190μl/孔，混匀后置于37℃10min或25℃30min，反应平衡后60min内颜色均稳定；
[0108]
6)于550nm处测定各管od值。
[0109]
5.4.qpcr技术检测成脂标记基因(cebpα、cebpβ、pparγ)表达量变化
[0110]
检测方法同上述步骤3。
[0111]
其中，正、反向引物分别如下表6所示。
[0112]
表6
[0113]
geneforward sequence(5'to3')sequencereverse(5'to 3')h-ppiattcatctgcactgccaagactcgagttgtccacagtcagch-cebpαctgtgtcaccacccaaatccttattgtgtcgagaaaaggaccttgah-cebpβgacaagcacagcgacgagtaagctgctccaccttcttctgh-pparγgctgtgcaggagatcacagagggctccataaagtcaccaa
[0114]
结果如图4所示。油红o染色显示在分化的第8d，lv33-kd-fkbp15组较对照组比成脂水平受到明显抑制，而lv-oe-fkbp15组较对照组比成脂水平明显升高，对应400
×
光镜下可见。甘油三脂结果显示lv33-kd-fkbp15组细胞内蓄积的甘油三酯较对照组相比显著减少，而lv33-oe-fkbp15组较对照组相比细胞内蓄积的甘油三酯明显升高。由此可知，fkbp15敲低后可以显著影响脂肪细胞分化。对lv33-kd-fkbp15组成脂分化标记基因cebpα、cebpβ、pparγ的mrna水平的变化进行检测，结果发现fkbp15敲低后可以显著抑制cebpα、cebpβ、pparγ基因的表达。
[0115]
实施例3.fkbp15影响脂肪细胞分化的机制研究
[0116]
为了探索fkbp15影响脂肪细胞分化的机制研究，进一步利用生信分析相关网站得知：fkbp15具有负性调控磷酸酶活性的作用(见图5)。go分析表明fkbp15具有负性调控磷酸酶活性的作用，而ampk磷酸化水平受到抑制后可以显著抑制脂肪细胞的分化。因此，采用蛋白免疫印记实验进一步检测ampk磷酸化蛋白水平的变化。
[0117]
1.细胞蛋白质提取：
[0118]
培养细胞的大皿中加入4℃预冷的ripa裂解液(已加过蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂)，500μl/孔，利用移液器吸头刮下细胞收集至1.5ml ep管中，冰上静置裂解30min。裂解完成后于4℃，12000rpm离心30min，取上清即为提取蛋白质。
[0119]
2.bca法蛋白定量(碧云天，中国，cat：p0012)：
[0120]
1)工作液配制：a液：b液＝50：1；
[0121]
2)蛋白标准品按如下所示配制标准曲线：
[0122]
蛋白标准品(μl)0、1、2、4、8、12、16、20；
[0123]
pbs(或ddh2o)(μl)20、19、18、16、12、8、4、0。
[0124]
3)加样：样品(可根据经验适量稀释)/标准品20μl/孔，工作液200μl/孔，小心混匀；
[0125]
4)37℃反应30min；
[0126]
5)测562nm波长处od值。根据标准曲线计算蛋白浓度。
[0127]
3.western blot实验
[0128]
1)采用预制胶(天地人和，中国，sle009)上样：
[0129]
依据所测蛋白浓度调整上样量，一般为20-80μg/孔，上样体积一般为10-30μl；
[0130]
2)电泳：
[0131]
一般采用恒压电泳，70v 30min，待蛋白maker条带分离后调整电压为140v 60min。依据目的蛋白分子量大小切取所需范围的胶；
[0132]
3)转膜：
[0133]
依据胶的大小裁取pvdf膜，于甲醇中浸泡2-3min激活，转膜时注意去除膜与胶之间气泡，300mah，90min，注意降温，可置于冰盒中进行(转膜电流大小主要依据目的蛋白分子量大小)；
[0134]
4)封闭：
[0135]
转膜完成后将膜转移至wb抗体孵育盒中，加入适量封闭液，一般为5％的脱脂奶粉。室温摇床封闭1-2h；
[0136]
5)一抗孵育(表7)：
[0137]
根据抗体说明书利用一抗稀释液稀释抗体，置于摇床4℃孵育过夜；
[0138]
6)一抗回收：
[0139]
回收一抗，tbst(雅酶，中国，cat：ps103s)洗膜，3次，每次10min；
[0140]
7)二抗孵育(表6)：
[0141]
hrp标记小鼠或兔二抗，利用二抗稀释液1：5000稀释，室温孵育1-2h；
[0142]
8)二抗回收：
[0143]
回收二抗，tbst洗膜，3次，每次10min；
[0144]
9)显影：
[0145]
采用ecl检测方法(ecl western blotting kit，pierce，inc.)，等体积混合试剂1和试剂2，直接加在膜(含有蛋白的一面朝上)上，注意不要留有气泡，吸去多余显影液，于凝胶成像系统中曝光，扫描并定量分析条带的光密度值。
[0146]
表7
[0147]
抗体名称种属品牌货号β-actinrabbitaffinity biosciencesaf7018p-ampkα2rabbitaffinity biosciencesaf3423
[0148]
检测结果如图5所示，fkbp15敲低后成熟脂肪细胞的p-ampkα蛋白水平显著上调，证明了fkbp15可以通过负性调控ampkα2磷酸酶活性的作用影响脂肪细胞分化。
[0149]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。