一种羟基-α-山椒素纳米脂质体及其制备方法与流程

1.本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种羟基-α-山椒素纳米脂质体及其制备方法。


背景技术：

2.羟基-α-山椒素(hydroxy-α-sanshool，has)是一种不饱和的链状脂肪酸酰胺，是花椒产生特殊辛麻味的一个重要物质基础。此外，研究还发现羟基-α-山椒素具有良好的生物活性，如具有改善学习记忆障碍的作用，可抑制病理条件下神经细胞发生的氧化应激和细胞凋亡，还具有调节血糖等作用。因此羟基-α-山椒素可用于制备成药物，在临床应用中有很大潜力。
3.但是，羟基-α-山椒素的结构中存在有丰富的顺式共轭双键，导致其在常温下不稳定，极易受温度和紫外线等影响发生化学变化，转化为同分异构体或氧化，导致其活性减弱、丧失，甚至出现较大的毒副作用，因此要制备安全、稳定性好的羟基-α-山椒素药物十分困难。该性质限制了羟基-α-山椒素疗效的发挥及其临床应用。
4.脂质体(liposomes)是一种人工膜，在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25～1000nm不等。脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部。随着生物技术的不断发展和制备工艺逐步完善，脂质体性能不断提高，其具有优良的生物相容性，同时能提高药物的稳定性和治疗指数，降低药物毒性。因此，脂质体作为药物载体的研究愈来愈受到重视。如果将羟基-α-山椒素制备成脂质体，有利于解决其稳定性差的问题。
5.但是，脂质体目前存在的最大问题是体内不稳定和包封率低，而脂质体的不稳定性又易导致药物渗漏，从而导致药物包封率更低。如专利cn109090440a以大豆卵磷脂、胆固醇为脂质材料，三氯甲烷为溶剂，采用薄膜分散法制备得到的红曲色素单层脂质体包封率仅为50～60％；专利cn104382039a同样以大豆卵磷脂、胆固醇为脂质材料，三氯甲烷为溶剂，采用薄膜分散法制备得到的绿茶提取物的纳米脂质体包封率仅为50％。
6.包封率与原料、脂质材料的种类和用量，以及和制备方法都有很大关系。对于羟基-α-山椒素，如果将其制备成脂质体，如何提高其包封率是研究中的难点。


技术实现要素：

7.本发明的目的是提供一种包封率高的羟基-α-山椒素纳米脂质体及其制备方法。使羟基-α-山椒素具有更强的稳定性和缓释性。具体技术方案如下：
8.本发明提供了一种羟基-α-山椒素组合物，它是含如下重量配比的原辅料制备而成的制剂：
9.羟基-α-山椒素1份、脂质辅料10～30份；
10.所述脂质辅料由胆固醇与磷脂组成；所述胆固醇与磷脂的质量比为1:1～5。
11.进一步地，前述的羟基-α-山椒素组合物是由如下重量配比的原辅料制备而成的制剂：
12.羟基-α-山椒素1份、脂质辅料10～30份；
13.所述脂质辅料由胆固醇与磷脂组成；所述胆固醇与磷脂的质量比为1:1～5。
14.进一步地，前述的羟基-α-山椒素组合物是由如下重量配比的原辅料制备而成的制剂：
15.羟基-α-山椒素1份、脂质辅料20份；
16.所述胆固醇与磷脂的质量比为1:4。
17.进一步地，所述磷脂选自大豆卵磷脂或脑磷脂中一种或多种。
18.进一步地，所述磷脂选自大豆卵磷脂。
19.进一步地，所述制剂为纳米脂质体。
20.进一步地，所述纳米脂质体采用薄膜分散法制备而得。
21.进一步地，所述采用薄膜分散法制备时，水合介质与羟基-α-山椒素的体积质量比为(5～25)ml：3mg。
22.进一步地，所述水合介质与羟基-α-山椒素的体积质量比为15ml：3mg；
23.优选地，所述水合介质为水。
24.本发明还提供了前述的组合物的制备方法，所述的纳米脂质体包括如下步骤制备而成：
25.(1)将羟基-α-山椒素和脂质辅料溶于有机溶剂中，溶解后旋转蒸发除去溶剂，得到薄膜；
26.(2)在薄膜中加入水合介质，水化超声后得到混合液；
27.(3)将混合液纯化后，即得纳米脂质体；
28.优选地，
29.步骤(1)中，所述有机溶剂为三氯甲烷；
30.和/或，步骤(1)中，所述除去溶剂后真空干燥；
31.和/或，步骤(2)中，所述水化超声的条件为冰水浴；
32.和/或，步骤(2)中，所述水化超声的时间为20min；
33.和/或，步骤(3)中，所述纯化为在200nm的滤膜中过滤。
34.本发明使用薄膜分散法，以羟基-α-山椒素、胆固醇、大豆卵磷脂为原辅料制备了羟基-α-山椒素纳米脂质体，与现有技术相比，本发明的有益效果为：
35.(1)本发明使用羟基-α-山椒素作为主要原料，采用胆固醇及大豆卵磷脂作为脂质材料共同制备羟基-α-山椒素脂质体，其与原材料羟基-α-山椒素相比具有了更好的稳定性。
36.(2)本发明采用特定方法制备得到的羟基-α-山椒素纳米脂质体包封率达73％，包封率高，能有效提高脂质体的载药率。
37.(2)本发明中采用的辅料胆固醇及大豆卵磷脂对人体无害，在疾病治疗中可安全用于人体给药。
38.(3)本发明中制备的羟基-α-山椒素脂质体首次将羟基-α-山椒素制为纳米制剂，可促进药物在体内具有更好的疗效。
39.综上，本发明提供了一种羟基-α-山椒素纳米脂质体，该纳米脂质体具有很高的包封率，能有效提高脂质体的载药率。同时该脂质体粒径分散均匀、稳定性好，使得药物在同等条件下储备时间更长；并且该脂质体安全性高，具有更好的疗效。
40.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
41.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
42.图1为本发明实施例4制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体的透射电镜图。
43.图2为本发明实施例4制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体的粒径分布图。
44.图3为本发明实施例4制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体的zeta电位分布图。
45.图4为4℃避光对羟基-α-山椒素及实施例4制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体中羟基-α-山椒素稳定性影响。
具体实施方式
46.本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
47.本发明采用的分析方法：
48.羟基-α-山椒素含量：使用高效液相色谱法测定。
49.羟基-α-山椒素纳米脂质体平均粒径：使用zetasizer3000激光纳米粒度仪测定。
50.羟基-α-山椒素纳米脂质体zeta电位：使用zetasizer3000激光纳米粒度仪测定。
51.羟基-α-山椒素纳米脂质体包封率：使用高效液相色谱法测定。
52.实施例1、羟基-α-山椒素纳米脂质体的制备
53.称取3mg的has、5mg胆固醇和25mg大豆卵磷脂。在避光条件下加入10ml三氯甲烷，超声后使瓶中溶液混匀并分散均匀，旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液。将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
54.对比例1
55.称取3mg的has、5mg胆固醇和25mg大豆卵磷脂。在避光条件下加入10ml无水甲醇，超声后使瓶中溶液混匀并分散均匀。使用注射器将含有has的此溶液缓慢注入超纯水中。使用旋转蒸发仪挥去无水甲醇，加入超纯水至10ml水化、超声20分钟后，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
56.对比例2
57.称取3mg的has、5mg胆固醇和25mg大豆卵磷脂，在避光条件下加入10ml乙醚溶液，超声后使瓶中溶液混匀并分散均匀。通过注射器将含有has的此溶液缓慢注入超纯水中。旋转蒸发仪挥去乙醚，加入超纯水至10ml水化、超声20分钟后，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
58.将实施例1和对比例1-2制备得到的产品按照常规方法进行包封率和载药率检测，结果如表1所示。
59.表1.包封率和载药率结果
[0060] 包封率(％)载药率(％)实施例144.543.84对比例131.772.21对比例235.912.96
[0061]
由上表实施例和对比例的结果可以看出，本发明通过薄膜分散法制备的脂质体包封率和载药量最高，能有效提高脂质体的载药率。
[0062]
实施例2、羟基-α-山椒素纳米脂质体的制备
[0063]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为质量比4:1的大豆卵磷脂与胆固醇)，has与辅料的质量比为1∶20，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0064]
对比例3
[0065]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为质量比4:1的大豆卵磷脂与胆固醇)，has与辅料的质量比为1∶5，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0066]
对比例4
[0067]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为质量比4:1的大豆卵磷脂与胆固醇)，has与辅料的质量比为1∶10，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0068]
对比例5
[0069]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为质量比4:1的大豆卵磷脂与胆固醇)，has与辅料的质量比为1∶15，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0070]
对比例6
[0071]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为质量比4:1的大豆卵磷脂与胆固醇)，has与辅料的质量比为1∶25，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0072]
将实施例2和对比例3-6制备得到的产品按照常规方法进行包封率和载药率检测，结果如表2所示。
[0073]
表2.包封率载药率结果
[0074] 包封率(％)载药率(％)实施例260.543.37对比例342.064.44对比例449.782.85对比例553.912.04对比例653.243.37
[0075]
由上表实施例和对比例的结果可以看出，本发明通过薄膜分散法、has与辅料质量比为1∶20时制备的脂质体包封率最高，能有效提高脂质体的载药率。
[0076]
实施例3、羟基-α-山椒素纳米脂质体的制备
[0077]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为胆固醇和大豆卵磷脂，总质量为60mg，胆固醇与大豆卵磷脂质量比为1∶4)，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0078]
对比例7
[0079]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为胆固醇和大豆卵磷脂，总质量为60mg，胆固醇与大豆卵磷脂质量比为1∶1)，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0080]
对比例8
[0081]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为胆固醇和大豆卵磷脂，总质量为60mg，胆固醇与大豆卵磷脂质量比为1∶2)，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0082]
对比例9
[0083]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为胆固醇和大豆卵磷脂，总质量为60mg，胆固醇与大豆卵磷脂质量比为1∶3)，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0084]
对比例10
[0085]
避光条件下称取3mg的has和辅料脂质材料(脂质材料为胆固醇和大豆卵磷脂，总质量为60mg，使胆固醇与大豆卵磷脂质量比为1∶5)，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下
水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0086]
将实施例3和对比例7-10制备得到的产品按照常规方法进行包封率和载药率检测，结果如表3所示。
[0087]
表3.包封率和载药率结果
[0088] 包封率(％)载药率(％)实施例360.543.37对比例750.172.80对比例851.302.86对比例953.843.06对比例1056.301.61
[0089]
由上表实施例和对比例的结果可以看出，本发明将胆固醇与大豆卵磷脂质量比固定为1∶4时制备的脂质体包封率最高，能有效提高脂质体的载药率。
[0090]
实施例4、羟基-α-山椒素纳米脂质体的制备
[0091]
避光条件下称取3mg has、12mg胆固醇和48mg大豆卵磷脂，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入15ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0092]
对比例11
[0093]
避光条件下称取3mg has、12mg胆固醇和48mg大豆卵磷脂，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入5ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0094]
对比例12
[0095]
避光条件下称取3mg has、12mg胆固醇和48mg大豆卵磷脂，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入10ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0096]
对比例13
[0097]
避光条件下称取3mg has、12mg胆固醇和48mg大豆卵磷脂，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入20ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0098]
对比例14
[0099]
避光条件下称取3mg has、12mg胆固醇和48mg大豆卵磷脂，加入10ml三氯甲烷，轻
轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入25ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0100]
对比例15
[0101]
避光条件下称取3mg has、12mg胆固醇和48mg脑磷脂，加入10ml三氯甲烷，轻轻摇晃使投入的药物及辅料充分溶解；旋转蒸发仪挥去溶剂，真空干燥后加入15ml超纯水，在冰水浴条件下水化、超声20min使薄膜完全溶解至超纯水中形成均一、稳定的混合液，将制备的羟基-α-山椒素纳米脂质体溶液在200nm的滤膜中过滤三次，即可得到羟基-α-山椒素纳米脂质体。
[0102]
将实施例4和对比例11-15制备得到的产品按照常规方法进行包封率和载药率检测，结果如表4所示。
[0103]
表4.包封率和载药率结果
[0104] 包封率(％)载药率(％)实施例473.194.07对比例1161.023.45对比例1260.543.37对比例1359.353.38对比例1457.663.21对比例1567.433.89
[0105]
由上表实施例和对比例的结果可以看出，本发明将水合介质(超纯水)体积固定在15ml时制备的脂质体包封率最高，且大豆卵磷脂作为磷脂材料其包封率高于脑磷脂，能有效提高脂质体的载药率。
[0106]
综上，本发明选用大豆卵磷脂和胆固醇作为辅料脂质材料，药物与辅料质量比为1：20、胆固醇与大豆卵磷脂比例为1：4、水合介质体积15ml；并采用薄膜分散法作为羟基-α-山椒素纳米脂质体的制备方法，制备得到的羟基-α-山椒素纳米脂质体包封率最佳，能有效提高脂质体的载药率。
[0107]
经检测，本实施例4制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体的包封率为73.19％，平均粒径为162.3
±
2.3nm，多分散指数为0.211
±
0.038，zeta电位为-33.2
±
0.55mv。
[0108]
图1为本发明实施例4制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体的透射电镜图。
[0109]
图2是本发明实施例4制得的羟基-α-山椒素脂质体的粒径分布图，由图2可知本发明制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体平均粒径为162.3
±
2.3nm，多分散指数为0.211
±
0.038，粒径分散均匀。
[0110]
图3是本发明实施例4制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体的zeta电位分布图，由图3可知本发明制得的羟基-α-山椒素纳米脂质体zeta电位为-33.2
±
0.55mv，脂质体稳定。
[0111]
图4是4℃避光对羟基-α-山椒素及实施例4制备的羟基-α-山椒素脂质体中羟基-α-山椒素稳定性的影响，由图4可知，羟基-α-山椒素在4℃避光条件下12h则可降解约20.89％的羟基-α-山椒素，而36h时则降解了约44.81％；将其制为脂质体制剂后，羟基-α-山椒素纳米脂质体前12h仅降解8.05％，36h降解约15.23％，表明制备的羟基-α-山椒素纳
米脂质体提高了羟基-α-山椒素的稳定性。
[0112]
综上，本发明提供了一种羟基-α-山椒素纳米脂质体，该纳米脂质体具有很高的包封率，能有效提高脂质体的载药率。同时该脂质体粒径分散均匀、稳定性好；并且该脂质体安全性高，具有更好的疗效。