含托法替尼药学上可接受的盐的药物组合物、制剂及应用的制作方法

1.本发明属于药物组合物研发技术领域，具体是涉及一种含托法替尼药学上可接受的盐的药物组合物、制剂及应用。


背景技术：

2.托法替尼(tofacitinib)，化学名为3-{(3r,4r)-4-甲基-3-[甲基(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]哌啶-1-基}-3-氧代丙腈：
[0003]
托法替尼是一种jak抑制剂，可用于器官移植，异种移植，狼疮，多发性硬化症，类风湿性关节炎，牛皮癣，银屑病关节炎，1型糖尿病以及其他类型糖尿病，癌症，哮喘，特应性皮炎(atopic dermatitis，又称特异性皮炎)，自身免疫性甲状腺疾病，溃疡性结肠炎，克罗恩氏病，阿尔茨海默氏病，白血病和其他需要免疫抑制的适应症的疗法的免疫抑制剂。
[0004]
目前枸橼酸托法替尼已经在美国获批。以片剂形式销售，每片含8mg枸橼酸托法替尼，每日两次，用以治疗类风湿关节炎等。目前研究证明，口服枸橼酸托法替尼有较多副作用。例如上呼吸道感染、感冒、头痛等症状。目前学界已有提出使用局部制剂来避免口服所造成的副作用。例如专利文献cn103459394b公开了游离态托法替尼制作的油膏用于治疗牛皮癣。专利文献tw201940174a公开了枸橼酸托法替尼制作的局部配方用于治疗白癜风与特应性皮炎。专利文献cn103459394b中提出以游离态托法替尼制作油膏，在实施例15中，游离态托法替尼的稳定性较差，在40℃储存4周，纯度仅为97.3％。
[0005]
专利文献tw201940174a中，以二甲基亚砜作为其原料药的溶剂使用，使用量在45％，用量较大。二甲基亚砜作为一种常见的万能溶剂，有局部毒性作用和低的全身毒性。二甲基亚砜主要刺激皮肤，产生红肿、灼烧、瘙痒、结垢、引起荨麻疹等(r.c.罗，p.j.舍斯基，p.j.韦勒.药物辅料手册[m].北京：化学工业出版社，2005：256)。
[0006]
考虑专利文献cn103459394b与tw201940174a的局限性，在本领域中需要具有更高保留率、低刺激性、高稳定性的托法替尼外用制剂以治疗自身免疫性疾病。


技术实现要素：

[0007]
本发明提供了一种含托法替尼药学上可接受的盐的药物组合物，，该组合物稳定性高，安全性好，溶解性佳，且具有显著的抗炎效果。一种药物组合物，包括托法替尼药学上可接受的盐和一种或多种促渗剂，所述促渗剂包含二乙二醇单乙基醚、聚甘油脂肪酸酯、月桂氮酮、油酸、油醇、聚乙二醇中的一种或多种或者多种。
[0008]
作为优选，所述药物组合物中不含二甲基亚砜。
[0009]
作为一种实施方案，在所述组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量为1％至80％。作为优选，药物组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量低于40％。作为进一步优选，药物组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量为1～39％；作为更进一步优选，药物组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量为1～35％；作为更为具体的实施方案，药物组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量为5～30％；作为最优的技术方案，药物组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量为5～20％；作为具体的优选方案，药物组合物中，所述促渗剂的重量百分比含量为5～15％。
[0010]
作为一种实施方案，所述促渗剂为二乙二醇单乙基醚(transcutol)。即作为优选，所述的药物组合物包括托法替尼药学上可接受的盐和二乙二醇单乙基醚。
[0011]
作为另一种实施方案，所述促渗剂为二乙二醇单乙基醚与月桂氮酮、聚甘油脂肪酸酯、油酸、油醇、聚乙二醇中一种或多种的组合。即所述组合物包括托法替尼药学上可接受的盐以及二乙二醇单乙基醚和其他促渗剂(即月桂氮酮、聚甘油脂肪酸酯、油酸、油醇、聚乙二醇中的一种或多种)的组合。
[0012]
作为一种实施方案，所述托法替尼药学上可接受的盐选自酒石酸盐托法替尼、硫酸托法替尼、磷酸托法替尼。
[0013]
作为一种实施方案，包括托法替尼药学上可接受的盐为酒石酸盐托法替尼。作为优选，所述的药物组合物包括酒石酸托法替尼和二乙二醇单乙基醚；或者包括酒石酸托法替尼以及二乙二醇单乙基醚和其他促渗剂(即月桂氮酮、聚甘油脂肪酸酯、油酸、油醇、聚乙二醇中的一种或多种)的组合。
[0014]
作为优选，在所述组合物中，所述托法替尼药学上可接受的盐的重量百分比含量为0.1％～10％。作为优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.1％～10％的托法替尼药学上可接受的盐和1％～80％的二乙二醇单乙基醚。
[0015]
作为优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.1％～10％的托法替尼药学上可接受的盐和1％～35％的二乙二醇单乙基醚。
[0016]
作为进一步优选，在所述组合物中，所述托法替尼药学上可接受的盐的重量百分比含量为0.5％～5％。作为优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.5％～5％酒石酸托法替尼和1％～80％二乙二醇单乙基醚。作为优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.5％～5％的酒石酸托法替尼和1％～35％的二乙二醇单乙基醚。作为进一步优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.5％～5％的酒石酸托法替尼和5％～30％的二乙二醇单乙基醚。
[0017]
作为进一步优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.5％～5％的酒石酸托法替尼和5％～20％的二乙二醇单乙基醚。
[0018]
作为更进一步优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括，0.5％～3％酒石酸托法替尼和5％～15％的二乙二醇单乙基醚。
[0019]
作为优选，所述的药物组合物还包括赋形剂。
[0020]
作为优选，在所述药物组合物中，所述赋形剂的重量百分比含量为70％～98.5％；所述赋形剂至少包括防腐剂和乳化剂。
[0021]
作为优选，所述的药物组合物中，所述防腐剂的重量百分比含量为0.1～5％；所述乳化剂的重量百分比含量为0.5～20％。所述乳化剂进一步优选为5～15％。
[0022]
作为优选，所述的药物组合物由如下重量百分比的组份组成：
[0023]
托法替尼药学上可接受的盐
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0.1％～10％
[0024]
促渗剂
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1％～39％
[0025]
其余为赋形剂。
[0026]
作为优选，药物组合物中，所述赋形剂的重量百分比为50～98.9％；进一步优选为55～98.9％；更进一步优选为60～98.9％；或者优选为70～98.9％；或者优选为75～98.5％。
[0027]
作为优选，所述赋形剂包括溶剂、稀释剂、抗氧化剂、螯合剂、乳化剂、防腐剂、抗菌剂、遮光剂、着色剂、凝胶剂、调味剂、ph调节剂以及其他适用的油性物质、水性物质中的一种或多种。作为优选，所述抗氧化剂选自2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯(bht，2,6-二叔丁基对甲苯酚)、抗坏血酸(维生素c)、抗坏血酸衍生物、多酚、生育酚、生育酚衍生物、维生素a、叶黄素、番茄红素、次亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、没食子酸丙酯、硫辛酸、亚硫酸盐中的一种或多种。作为进一步优选，在所述组合物中，所述抗氧化剂质量百分比含量为0.05％至5％。
[0028]
作为优选，所述的药物组合物，按照重量百分比计，包括：
[0029]
0.5～5％
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托法替尼药学上可接受的盐
[0030]
5～20％
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二乙二醇单乙基醚
[0031]
0.1～5％
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稳定剂
[0032]
余量赋形剂。
[0033]
作为优选，所述稳定剂为包含抗氧化剂的稳定剂或者其他形式的稳定剂。
[0034]
作为优选，按照重量百分比计，所述的药物组合物包括：
[0035][0036]
在一些实施例中，本发明所述的组合物包括：(a)治疗有效量的托法替尼托法替尼药学上可接受的盐；(b)二乙二醇单乙基醚；(c)任选地，其它促渗剂；(d)任选地，乳化剂；(e)任选地，防腐剂；(f)任选地，抗氧化剂；(g)任选地，一种或多种其他药学上可接受的赋形剂。
[0037]
所述稳定剂包括但不限于抗菌剂、防腐剂或者其他抗氧化剂等。
[0038]
在一些实施例中，本发明所述的组合物包括：(a)有效治疗量的托法替尼药学上可接受的盐；(b)二乙二醇单乙基醚；(c)纯化水；(d)二甲基硅油、聚乙二醇-7硬脂酸酯、十六醇、液体石蜡、聚甘油脂肪酸酯；(e)可选的，一种多种抗氧化剂；(f)可选的，一种或多种防腐剂。
[0039]
作为一种实施方案，按照重量百分比计，所述组合物包括：
[0040]
0.5～5％
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酒石酸托法替尼
[0041]
1％～80％
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促渗剂
[0042]
余量赋形剂。
[0043]
作为进一步优选，按照重量百分比计，所述组合物包括：
[0044]
0.5～5％
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酒石酸托法替尼
[0045]
5％～20％
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二乙二醇单乙基醚
[0046]
0.1～10％
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包括抗氧化剂在内的稳定剂或者其他稳定剂
[0047]
其余为赋形剂。
[0048]
作为一种实施方案，按照重量百分比计，所述组合物包括：
[0049]
0.5～5％
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酒石酸托法替尼
[0050]
5～20％
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二乙二醇单乙基醚
[0051]
31～80％
ꢀꢀ
纯化水
[0052]
9～50％
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二甲基硅油、聚乙二醇-7硬脂酸酯、十六醇、甘油、丙二醇、十八醇、凡士林、十二烷基硫酸钠、液体石蜡、聚甘油脂肪酸酯、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三乙醇胺、硬脂酸、羊毛脂、凡士林中的一种或多种中的一种或多种。
[0053]
可选的，包括0.01～1％的丁基羟基茴香醚和丁基羟基甲苯组合物。
[0054]
可选的，包括0.1～2％的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯与对羟基苯甲酸乙酯的一种或多种。
[0055]
作为进一步优选，所述组合物包括：
[0056][0057]
本发明的还提供了一种制剂，由上述药物组合物制备而来。
[0058]
作为优选，所述制剂优选为乳膏、洗剂、溶液(例如，液体喷雾剂)、凝胶、糊剂、硬膏剂、涂剂。
[0059]
作为优选，所述制剂为外用制剂。进一步优选为局部制剂，可以采取适于局部施用至身体表面的组合物的形式使用。
[0060]
作为进一步优选，该外用制剂为乳膏剂。
[0061]
本发明还提供了一种上述乳膏制剂的制备方法，包括：
[0062]
油相：将制剂配方中的油溶性物质混合溶解；
[0063]
水相：将制剂配方中的水溶性物质溶解；
[0064]
外相：所述外相为托法替尼药学上可接受的盐、促渗剂(比如二乙二醇单乙基醚)或者两者的组合溶液；
[0065]
(1)在60～90℃下，在搅拌状态下将水相、油相和外相混合。
[0066]
(2)降温到50～60℃将混合溶液置于剪切机中，保持剪切状态下，保持剪切状态(可以是5～30min)，得到乳膏。
[0067]
在某些情况下，根据托法替尼药学上可接受的盐的溶解性不同；所述外相和水相的组成可能会进行调整；比如当所述托法替尼药学上可接受的盐为磷酸盐或者硫酸盐时，其更容易溶于水，此时，可以作为水相的一部分进行加入。当所述托法替尼药学上可接受的盐为酒石酸盐时，可以直接溶于促渗剂中，此时所述托法替尼药学上可接受的盐作为外相进行制备。
[0068]
本发明还提供了本发明所述的组合物在制备治疗和/或预防自身免疫性疾病药物中的应用。
[0069]
本发明还提供了一种本发明所述的组合物在治疗和/或预防自身免疫性疾病中的应用。
[0070]
所述的自身免疫性疾病包括白癜风、斑秃、特应性皮炎、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化、炎性肠炎、克罗恩氏病、结肠炎、自身免疫性溶血性贫血、强直性脊柱炎、天疱疮、荨麻疹、哮喘、视神经炎、银屑病、慢性阻塞性气道疾病、皮炎症、硬皮症。
[0071]
所述自身免疫性疾病优选为白癜风、特应性皮炎、斑秃、银屑病、皮炎症、硬皮症。
[0072]
本发明使用的术语“托法替尼”是指托法替尼游离碱或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
[0073]
本发明中，所述酒石酸可以是l-酒石酸，d-酒石酸，或者外消旋体，或者l-酒石酸和d-酒石酸任意比例的混合物。
[0074]
本发明所述托法替尼药学上可接受的盐，可以由托法替尼与对应的酸反应得到。
[0075]
本发明所使用的术语“有效治疗量”是指减轻一种或多种疾病症状的用量。
[0076]
本发明所使用的术语“降解产物”是指在药品生产或者运输储存过程中的会影响药品功效的有害化学物质或者杂质。它会由于温度、ph、湿度、光照、赋形剂等因素影响而改变。
[0077]
所述赋形剂实际使用时，可能具有单独一种赋形剂的功能，也可能同时兼做其他赋形剂的功能，比如对于某一个乳化剂，它可能只有乳化的功能，也可能既具有乳化的功能，也同时具有溶解的作用或者同时兼具稀释剂的作用，甚至可能具有抗氧化剂或者抗菌剂的作用。
[0078]
本发明的促渗剂也可以兼做赋形剂的功能，比如具有溶剂的功能等。
[0079]
本发明配方所使用的药学上可接受的赋形剂可以有多种方式。例如，水性物质也可以用作为稳定剂、而促渗剂也可以作为溶剂或者稀释剂等。其中水性物质优选为二乙二醇单乙基醚、丙二醇、甘油、聚乙二醇、异丙醇、甲醇、吡咯烷酮羧酸钠、2-羟丙基-γ-环糊精、丙酮、纯净水、乙醇、丙醇、丁二醇或上述化合物中的两种或两种以上组合。当然实际加工时，其他赋形剂也可以同时起到溶剂试剂的作用。
[0080]
其中螯合剂优选为四乙酸二氨基乙烷、丁二酸、曲恩碱、次氮基三乙酸、反式-二氨基环己烷四乙酸(dcta)、二亚乙基三胺五乙酸、双(氨基乙酰基)乙二醇醚-n，n，n'，n'-四乙酸、亚氨基二乙酸、枸橼酸、酒石酸、富马酸中的一种或者多种。
[0081]
其中乳化剂优选为十二烷基硫酸钠、聚乙二醇-7-硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、双
硬脂酸甘油酯、三乙醇胺、聚甘油脂肪酸酯的一种或者多种。所述乳化剂的加入量根据乳化剂种类的不同可以进行调整，一般加入量为0.5～20％之间。
[0082]
其中抗菌剂优选为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、环氧乙烷、苯酚、苯甲酸。其中油性基质优选为凡士林、羊毛脂、脂肪醇、矿物油、甘油三酯和硅油。
[0083]
其中稀释剂优选为甘油、丙二醇、纯化水、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、十二烷基硫酸钠、十六醇、十八醇、白凡士林、液体石蜡、羊毛酯、蜂蜡、醇蜡、硬脂酸、二甲基硅油、聚山梨酯、脂肪酸、油醇、聚乙二醇-7硬脂酸酯、水等。占配方总重量的50％w/w～85％w/w。上述氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠也可以同时兼做ph调节剂。
[0084]
其中防腐剂优选为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、环氧乙烷、苯酚、苯甲酸。优选的对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸乙酯的组合。防腐剂浓度优选为0.5％w/w至5％w/w，根据配方总重量，优选为0.1％w/w至1.0％w/w。
[0085]
其中抗氧化剂优选为丁基羟基茴香醚(叔丁基-4-羟基茴香醚，bha(包括3-bha或2-bha))和丁基羟基甲苯(bht)以及维生素e衍生物(比如维生素e醋酸酯)以及维生素c衍生物(如维生素c钠)。根据配方总重量，优选为0.1％w/w至5.0％w/w。
[0086]
其中所述ph调节剂优选为药物中常用的ph调节剂，包括无机酸或者无机碱，比如氢氧化钠、氢氧化钾，碳酸氢钠、碳酸钠等。所述ph调节剂加入量为保持组合物的ph优选为6～8。
[0087]
其他赋形剂成分的具体组份和加入量均可根据需要，同时参考现有技术进行选择。
[0088]
研究已证明，口服枸橼酸托法替尼可能带来上呼吸道感染、感冒、头痛等副作用；而游离态托法替尼的外用制剂稳定性较差(cn103459394b)；枸橼酸托法替尼乳膏(tw201940174a)采用了二甲基亚砜作为溶剂，具有较高刺激性。因此，在本领域中需要具有更高保留率、低刺激性、高稳定性的托法替尼外用制剂以治疗自身免疫性疾病保证药物的安全性和良好的药效。
[0089]
本发明选用的托法替尼的盐型，具有更好的溶解性，简化了制剂加工难度，增加了其在皮肤中的渗透性；本发明通过筛选不同托法替尼盐型和溶剂，保证其完全溶解性的前提下，发现离子态的形式相对于游离态托法替尼具有更高的稳定性，保证了药物的安全性和良好的药效；本发明筛选出二乙二醇单乙基醚作为溶剂、促渗剂，对皮肤也无刺激性；同时由本发明所述的药物组合物制备的制剂在透皮实验中表现出更佳的皮肤内药物暴露，且不增加透皮扩散池内药物浓度，表明药物进入循环系统的风险较低；且由该制剂在二硝基氟苯诱导的迟发型超敏反应模型中，具有抗炎效果，本发明的制剂还能减少白癜风患者的白斑面积，可用于治疗和预防包括白癜风、斑秃、硬皮病、银屑病、特应性皮炎等自身免疫性疾病。
附图说明：
[0090]
附图1：小鼠耳厚度差；
[0091]
附图2：家兔刺激性试验给药侧皮肤照片；
[0092]
附图3：脖颈有白癜风女性患者a以本发明的酒石酸托法替尼局部配方治疗4周、8周、12周相较基线白斑消失面积百分比；
[0093]
附图4：额部有白癜风男性患者b以本发明的酒石酸托法替尼局部配方治疗5个月相较基线白斑消失面积百分比；
[0094]
附图5：脸部有白癜风男性患者c以本发明的酒石酸托法替尼局部配方治疗5个月相较基线白斑消失面积百分比；
[0095]
附图6：患有特应性皮炎的男性患者d以本发明的酒石酸托法替尼局部配方治疗12天后基本治愈。
具体实施方式
[0096]
在以下内容段落中描述了用于本发明的详细技术和优选实施例，目的是使本领域技术人员更好地理解了所要求保护的技术方案。本发明将在以下示例中进一步说明。然而，这些例子只是为了说明目的。不是以任何方式限制本发明的范围。
[0097]
实施例1：托法替尼盐型的合成
[0098]
酒石酸托法替尼的合成(1)
[0099]
将500mg(1.6mmol)游离态托法替尼与288mg(1.9mmol)酒石酸加入25ml烧瓶，加入7.5ml丙酮，搅拌并加热至40℃反应2h，冷却至室温，过滤并收集固体，常温减压干燥的产物717mg，收率96.9％。
[0100]
酒石酸托法替尼的放大合成(2)
[0101]
称量游离态托法替尼45.0g于1l单口反应瓶中，25℃
±
5℃加入21.6g l-酒石酸及225ml甲醇，加热至回流，至固体溶清后趁热过滤，回收母液，浓缩至近干，然后加入450ml正己烷于25℃
±
5℃搅拌打浆1h，抽滤得到固体，在鼓风烘箱中70
±
5℃干燥48h，得到酒石酸托法替尼，收率95.0％。
[0102]
硫酸托法替尼的合成
[0103]
将500mg(1.6mmol)游离态托法替尼与50μl(0.9mmol)硫酸加入25ml烧瓶，加入7.5ml丙酮，搅拌并加热至40℃反应2h，冷却至室温，过滤并收集固体，常温减压干燥的产物561mg，收率97.0％。
[0104]
磷酸托法替尼的合成
[0105]
将500mg(1.6mmol)游离态托法替尼与127μl(1.9mmol)磷酸加入25ml烧瓶，加入7.5ml丙酮，搅拌并加热至40℃反应2h，冷却至室温，过滤并收集固体，常温减压干燥的产物598mg，收率91.0％。
[0106]
实施例2：不同外用制剂的制备
[0107]
表1-1酒石酸托法替尼的乳膏配方
[0108]
[0109][0110]
说明：表1-1中，水相和油相和外相中各组份的百分比是以油相和水相的总量为基准计算得到。
[0111]
表1-2酒石酸托法替尼的乳膏配方
[0112][0113]
说明：表1-2中，b6～b11中水相和油相和外相中各组份的百分比是以油相和水相的总量为基准计算得到。
[0114]
表1-3酒石酸托法替尼的乳膏配方
[0115][0116]
说明：表1-3中各组份的百分比是以油相、水相和外相的总量为基准计算得到。
[0117]
表1-4酒石酸托法替尼的乳膏配方
[0118][0119]
说明：表1-4中各组份的百分比是以油相和水相的总量为基准计算得到。
[0120]
表1-5酒石酸托法替尼的乳膏配方
[0121][0122]
说明：表1-5中各组份的百分比是以油相和水相和外相的总量为基准计算得到
[0123]
表2磷酸托法替尼与硫酸托法替尼的乳膏配方
[0124][0125]
说明：表2中各组份的百分比是以油相和水相的总量为基准计算得到。
[0126]
表3托法替尼和枸橼酸托法替尼油膏配方
[0127][0128]
说明：表3中各组份的百分比是以油相和外相的总量为基准计算得到。
[0129]
以总投料量为100g计算，按照表1-1至表1-5和表2所示物料比：
[0130]
1、取处方量油相置于100ml烧杯中，80℃搅拌加热溶解。
[0131]
2、取处方量水相置于100ml烧杯中，60℃搅拌，溶解至澄清。
[0132]
3、取处方量外相置于100ml烧杯中，55℃搅拌，溶解至澄清。
[0133]
4、在55℃搅拌状态下，将水相、油相、外相混合均匀，并置于剪切机下，保持剪切状态5-30min。
[0134]
5、将剪切完后的乳膏冷却搅拌至室温后，灌装至10ml铝管中。
[0135]
以总投料量为100g计算，按照表3物料比：
[0136]
1、取处方量油相置于100ml烧杯中，80℃搅拌加热溶解。
[0137]
3、取处方量外相置于100ml烧杯中，60℃搅拌，溶解至澄清。
[0138]
4、在80℃搅拌状态下，将油相、外相混合均匀，并置于剪切机下，保持剪切状态5-30min。
[0139]
5、将剪切完后的油膏冷却搅拌至室温后，称取10g，灌装至10ml铝管中。
[0140]
实施例3:不同盐型的托法替尼溶解性质测试
[0141]
为提高局部制剂的药品透皮能力以及药品的稳定性，药物在辅料中的溶解性非常关键，所以，原料药的溶解性是衡量药物的一个重要指标。故在处方的开发过程中进行了平衡溶解度研究：取过量原料(枸橼酸托法替尼、酒石酸托法替尼、硫酸盐托法替尼、磷酸盐托法替尼)置于2ml pe管中，加入不同的溶剂1ml，在室温进行溶解，震荡24h后用高效液相色谱法计算溶解度。
[0142]
表4：不同盐型在不同溶剂中的溶解度
[0143]
[0144][0145]
表中：“﹥”表示“大于”，“《”表示“小于”。
[0146]
本次试验，我们意外地发现：在促渗剂二乙二醇单乙基醚中，与枸橼酸托法替尼相比，酒石酸托法替尼的溶解度显著提升，提示我们，在制剂中，二乙二醇单乙基醚可以作为酒石酸托法替尼的配伍溶剂。在水溶液中，磷酸托法替尼、硫酸托法替尼的溶解度显著提升，提示我们，在制剂中，水溶液可以作为磷酸托法替尼、硫酸托法替尼的配伍溶剂。
[0147]
实施例4：托法替尼乳膏与油膏的性状考察
[0148]
选取具有代表性的乳膏，考察所制得乳膏与油膏的性状，选取性状细腻、均匀、水润、易涂抹、稳定的乳膏或油膏。
[0149]
表5-1不同托法替尼乳膏与油膏的性状
[0150][0151]
表5-2不同托法替尼乳膏与油膏的性状
[0152][0153]
实施例5：托法替尼乳膏在皮肤内渗透数据
[0154]
选用小香猪皮作为透皮实验皮肤，用以测试不同处方的托法替尼在皮肤中的渗透情况。具体而言，渗透池选用垂直扩散池，渗透池体积6.5cm，池口面积2.2cm2，受体溶液为pbs缓冲溶液(ph＝7.4)，皮肤为8月龄小香猪的背部皮肤，去毛后取厚度1400μm皮肤进行实验。取乳膏约0.2g置于小香猪皮肤上，取样点为1、2、4、6小时，6h后取下皮肤剪碎用有机溶剂超声1h提取，样品过滤后用液相色谱法测定含量。
[0155]
表6-1不同处方托法替尼乳膏在皮肤内渗透数据对比
[0156]
[0157][0158]
表6-2不同处方托法替尼乳膏在皮肤内渗透数据对比
[0159][0160]
注：其中“皮肤内潴留量(μg/g)”由“皮肤内潴留量(μg/cm2)”转化而来，我们采用的小香猪皮其每平方厘米的皮肤为0.196g。
[0161]
根据透皮实验数据，b1、b3、b13、b16、c1、c2、c3、c5处方在皮肤内潴留量明显高于枸橼酸托法替尼处方(b4)，说明在促渗剂二乙二醇单乙基醚的作用下，对酒石酸托法替尼透过皮肤有明显的促进作用。而与游离态托法替尼的处方e1相比，b1、b3、b13、c1、c3处方在扩散池内药物浓度很低(皮肤内潴留量/透过量比值为50倍以上，e1仅为1.5倍)，说明采用二乙二醇单乙基醚作为促渗剂时，离子态托法替尼过度吸收至循环系统的风险显著降低，增加了药物使用过程中的安全性。同样的，相比于e1处方，硫酸托法替尼(处方d1)和磷酸托法替尼(处方d2)的皮肤内潴留量/透过量也大幅度提高，其安全性较e1也明显提高。
[0162]
实施例6：酒石酸托法替尼的稳定性
[0163]
按照本发明实施例1(2)中的方法制得三批酒石酸托法替尼，分别放置于加速条件(温度：40℃，湿度：75％)、长期条件(温度：25℃，湿度：65％)，测定其稳定性。
[0164]
表7-1酒石酸托法替尼稳定性-2020111901批
[0165][0166]
表7-2酒石酸托法替尼稳定性-2020111902批
[0167]
[0168][0169]
表7-3酒石酸托法替尼稳定性-2020111903批
[0170][0171]
本发明所制得的托法替尼酒石酸盐，在加速条件下，1个月后平均降解0.5％，在长期条件下，1个月平均降解0.1％，说明其稳定性良好。
[0172]
实施例7：处方制作过程稳定性研究
[0173]
根据表4溶解度数据，故制作样品(“游离态托法替尼聚乙二醇400溶液”、“酒石酸托法替尼二乙二醇单乙基醚溶液”、“硫酸托法替尼溶液”以及“磷酸托法替尼溶液”)配置：取原料药(托法替尼、酒石酸托法替尼)各0.2g，置于10ml容量瓶中，加入10ml对应的溶解介质(酒石酸托法替尼对应于二乙二醇单乙基醚、托法替尼对应于peg400、磷酸托法替尼与硫酸托法替尼对应纯化水)，在60℃下加热溶解。在15min、30min、60min、120min取样约1.0ml，置于20ml容量瓶中，加稀释液(乙腈：水＝50：50(体积比))稀释至刻度，摇匀，进样测定纯度(测定方法：高校液相法(中国药典2015版四部通则0512)测定)。
[0174]
未破坏溶液(“磷酸托法替尼”、“硫酸托法替尼”、“游离态托法替尼”及“酒石酸托法替尼”)：精密称取磷酸托法替尼、硫酸托法替尼、游离态托法替尼与酒石酸盐托法替尼样品各约50mg，置50ml量瓶，加稀释剂(乙腈：水＝50：50)溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，结果如下：
[0175]
表8不同盐型托法替尼60℃稳定性
[0176][0177]
如表8所示，游离态托法替尼在制备过程中，极易降解，在60℃，2小时降解量大于6.0％。酒石酸托法替尼溶解在二乙二醇单乙基醚中、磷酸托法替尼、硫酸托法替尼溶解在水中，在60℃，均未发生明显降解，纯度在99％以上。故制备温度设定为60℃及以下温度，能保证各类盐型原料的稳定性。
[0178]
实施例8：酒石酸托法替尼外用制剂稳定性研究
[0179]
选择cn 103459394 b专利文献中的实施例15数据作为对比例，比较本发明乳膏样品b3、b4、b5、b13、d1、d2、e2(参见实施例2)与对比例在40℃，75％条件下放置2周与4周后，处方纯度降低的百分比。
[0180]
表9 40℃条件存放30天处方稳定性研究
[0181][0182]
本发明的托法替尼药学上可接受的盐稳定性明显高于游离态，在优选实施例中，托法替尼药学上可接受的盐所制得的处方在40℃条件放置1个月，稳定性高，未发生明显降解，纯度均在99.2％以上。相较之下，游离体托法替尼乳膏(处方b5)的纯度仅为95.4％，专利cn103459394b中的对比例也仅为97.3％。(参考cn103459394b实施例)。
[0183]
实施例9：酒石酸托法替尼乳膏放大批稳定性研究
[0184]
选择实施例5所制得的酒石酸托法替尼，依照c1处方，按照批量1kg，制得乳膏。取
成品乳膏分别放置于长期条件(25℃，65％)，测定其稳定性。
[0185]
表10酒石酸托法替尼乳膏稳定性-c1批
[0186][0187]
实施例10：二硝基氟苯诱导的迟发型超敏反应模型
[0188]
1、15只6-8周雌性balb/c小鼠，分为a、b、c三组，每组5只。其中a组为对照组，b组为给药组，c组为造模阳性组
[0189]
2、对小鼠腹部剃毛，用胶带粘贴数次使致敏部位充分暴露。b组和c组在1cm
×
1cm范围内均匀涂布20μl 5g/l的dnfb(2,4二硝基氟苯)溶液(溶剂为体积比4:1的丙酮-橄榄油)10μl，每天一次，连续2天，a组只涂抹丙酮-橄榄油。其中b组从第一次dnfb致敏开始，每天进行局部酒石酸托法替尼乳膏(实施例2处方b3)干预。
[0190]
3、所有组别在第二次致敏后5天，进行激发反应。即在所有组别小鼠左耳背面均匀涂抹10μl 2g/l的dnfb溶液。
[0191]
4、24小时后，剪下双耳计算耳厚度差，如图1所示，结果表明给药组b组的耳厚度与c组(造模阳性组)相比，显著减少，可有效的抑制炎症。
[0192]
实施例11：家兔皮肤刺激性试验
[0193]
取健康的新西兰兔4只，雌雄各半，采用同体左右侧自身对比，供试品给药侧(兔背部左侧皮肤)给予酒石酸托法替尼乳膏(处方b3)，对照品给药侧(兔背部右侧皮肤)给予空白辅料。首次给药前1天(d0)，剃除各组动物背部左、右侧拟贴敷区被毛。将供试品均匀涂敷于备皮拟给药区，每次涂敷0.5ml，用二层纱布和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布固定贴敷4h。每天连续在同一部位给药，连续给药7天。每次贴敷前，以及去除供试品或对照品后1h观察皮肤反应，并进行评分。第7天(d7)去除供试品或对照品后1h、24h、48h和72h对贴敷部位进行观察、评分并拍照。统计评分记录为表11，72h结果拍照记录为图2。
[0194]
表11皮肤刺激反应评分总分差值均值
[0195]
[0196][0197]
注：表11中d1～7表示给药第1～7天。
[0198]
如表11所示，各观察点各给药侧积分均值为0，各观察点总分差值的均值为0，判断无刺激性。由图2可知，酒石酸托法替尼乳膏未对皮肤造成红肿、充血、渗出、变性或坏死等局部刺激反应。综上所述，酒石酸托法替尼乳膏对皮肤没有明显的刺激作用。
[0199]
实施例12：酒石酸托法替尼局部配方治疗白癜风的临床试验
[0200]
开展了一项随机、双盲、安慰剂对照的临床试验以明确白癜风患者局部实施本发明所述的酒石酸托法替尼局部配方8周后的疗效。该试验招募了20名患者，随机分组后分别给与安慰剂(不含酒石酸托法替尼空白乳膏)与本发明的处方b3，用量约为3mg/cm2，每日两次。所有患者在基线及每月一次进行临床改善评估，并拍照。
[0201]
图3显示了一女性患者a在脖颈处涂抹本发明乳膏4周、8周、12周的疗效，相较于基准，8周时白斑消失面积占原白斑面积的80％，12周时，白斑基本消失。
[0202]
图4显示了一男性患者b在额部涂抹本发明乳膏，5个月后的疗效，相较于基准，白斑消失面积占原白斑面积的90％。
[0203]
图5显示了一男性患者c在脸部下颚处涂抹本发明乳膏4周、8周后的疗效，相较于基准，8周后白斑完全消失。
[0204]
综上所述，说明本技术的处方能够有效治疗白癜风患者。
[0205]
实施例13：酒石酸托法替尼局部配方治疗特应性皮炎的临床试验
[0206]
开展了一项临床试验以明确特应性皮炎患者局部实施本发明所述的酒石酸托法替尼局部配方的疗效。该试验招募了6名患者，给与本发明的处方b3，用量约为3mg/cm2，每日两次。所有患者在基线及每2周一次进行临床改善评估。
[0207]
图6显示了一男性特应性皮炎患者d，全身皮疹伴瘙痒有皮损，病程3个多月，逐渐加重。在涂抹本发明所述的酒石酸托法替尼局部配方乳膏2周后，皮损褪去，全面开始结痂，痊愈。