一种红色零价单质纳米硒口服液及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于保健品技术领域，具体涉及一种红色零价单质纳米硒口服液及其制备方 法和应用。


背景技术：

2.现代医学研究表明，硒在维持心血管系统正常结构和功能上起着重要作用，缺硒是 导致癌症、肿瘤、心肌病、冠心病、高血压、糖尿病等高发的重要因素。补硒可有效提 升机体对上述疾病的抗性。
3.自然界中，硒的存在形式主要有无机硒和有机硒两种。
4.其中有机硒是人从自然界中摄取硒的主要来源，主要有硒代胱氨酸、硒蛋氨酸、甲 基硒半胱氨酸。生物有机硒安全性高、不易发生中毒、易被人体吸收、补硒效率高。但 是现有生物有机硒的制备方法较为复杂。
5.无机硒盐是我们生物圈中最常见的硒形式，主要有硒酸盐离子(seo
42-)和亚硒酸盐离 子(seo
33-)两种，在生物体补硒领域中，无机硒生物有效性低、毒性大，中毒量与需要量 之间范围小，在生物体补硒的发展历史中，不乏硒中毒的案例，因此硒酸盐、亚硒酸盐， 已被严格限制作为生物体补硒的来源。
6.零价纳米硒是一种不溶金属化合物，本质上虽属于无机硒，但是根据其尺寸的变化， 可显示红色、灰色等各种物理特性，化学特性也与常规无机硒(含硒盐)差异较大，有 研究表明，相比其他价态的硒，红色零价纳米硒的具有毒性更低、更有利于生物体的吸 收、利用等优点。
7.但是，现在市场上的口服类补硒剂的含硒量，仅满足日常补硒的要求，若增加含硒 量，仍有可能出现硒中毒的危险，因此无法辅助治疗癌症病人。


技术实现要素：

8.本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种 红色零价单质纳米硒口服液，通过将零价纳米硒和有机硒肽结合，并调整上述两种原料 的来源，降低了上述口服液中硒的生物毒性，提升了其生物活性，使其更有利于辅助治 疗癌症病人。
9.本发明还提出一种上述红色零价单质纳米硒口服液的制备方法。
10.本发明还提出一种上述红色零价单质纳米硒口服液在制备提升人体免疫力药物中 的应用。
11.根据本发明的一个方面，提出了一种红色零价单质纳米硒口服液，制备原料包括：
12.零价纳米硒；所述零价纳米硒，包括乳酸菌还原零价纳米硒和谷胱蛋白还原零价纳 米硒中的至少一种；
13.有机硒肽；所述有机硒肽为富硒黄芪发酵有机硒肽；
14.所述富硒黄芪，培养过程中，培养基体中包括亚硒酸钠水溶液。
约4℃的温度，以水的悬浊液形式保存。
34.在本发明的一些实施方式中，所述富硒黄芪，培养过程中，每季度浇灌一次亚硒酸 钠水溶液。
35.在本发明的一些实施方式中，所述富硒黄芪，培养过程中，按所述亚硒酸钠的质量 计，每季度所述亚硒酸钠水溶液的浇灌量为，0.4～150kg/亩。
36.在本发明的一些实施方式中，所述有机硒肽，制备方法包括以下步骤：
37.b1.将所述富硒黄芪粉碎，并添加复合酶进行发酵，得第一发酵液和发酵渣；
38.b2.在所述发酵渣中接种所述乳酸菌，发酵后，得第二发酵液；
39.b3.将所述第一发酵液和第二发酵液合并、并进行微生物细胞破碎、除去杂质后，得 所述有机硒肽。
40.在本发明的一些实施方式中，步骤b1中，所述富硒黄芪可以为干燥富硒黄芪也可 以为新鲜富硒黄芪；其中新鲜富硒黄芪中的黄芪多糖含量更高。
41.在本发明的一些实施方式中，步骤b1中，所述复合酶，为纤维素酶和果胶酶以1:1 的比例混合所得。
42.在本发明的一些实施方式中，步骤b2中，所述乳酸菌，接种量为 1.0
×
105～1.0
×
108cfu/ml。
43.在本发明的一些实施方式中，步骤b2中，所述第二发酵液，发酵条件为温度：30～35℃； 通气量为0.01～20％；压力为0.03～0.04mpa。
44.在本发明的一些实施方式中，所述红色零价单质纳米硒口服液中，还可以包括口味 调节剂，所述口味调节剂包括食用盐、枸杞糖、蜂蜜和琼脂中的至少一种。
45.所述枸杞糖，也具有提升人体免疫力的作用。
46.在本发明的一些实施方式中，所述红色零价单质纳米硒口服液中，还可以包括药食 同源药材。
47.所述药食同源药材选自覆盆子提取物和沙棘提取物中的至少一种。
48.所述覆盆子提取物的制备方法，包括将覆盆子粉末按照10～30ml/g料液比与50～90wt％ 乙醇混合，并于40～60℃提取10～60min后，于-30～-60℃下冻干所得提取液。
49.所述沙棘提取物的制备方法，包括将沙棘果的粉和50～95wt％的乙醇，按5～20ml/g 的比例混合后，常温提取0.5～3h后，于-30～-60℃下冻干所得提取液。
50.根据本发明的再一个方面，提出了所述红色零价单质纳米硒口服液的制备方法，包 括以下步骤：
51.s1.将所述零价纳米硒和有机硒肽混合后，进行蒸汽加压灭菌；
52.s2.将步骤s1所得液体进行无菌灌装后，即得所述红色零价单质纳米硒口服液。
53.在本发明的一些实施方式中，步骤s1中，所述蒸汽加压灭菌，温度为105～115℃。
54.在本发明的一些实施方式中，步骤s1中，所述蒸汽加压灭菌，时间为15～30min。
55.在本发明的一些实施方式中，步骤s1中，所述蒸汽加压灭菌，压力为55～65kpa。
56.由于本发明提供的红色零价单质纳米硒口服液中包含黄芪多糖、有机硒肽(一种结 合了硒的肽链)等易失活材料，因此选用上述条件进行蒸汽加压灭菌，能保证菌类的灭 活，进而延长所述红色零价单质纳米硒口服液的保质期，同时也能保证黄芪多糖等生物 活性营养物质不致失活。
57.根据本发明的再一个方面，提出了所述红色零价单质纳米硒口服液在制备提升人体 免疫力药物中的应用。
58.若无特殊说明，本发明所用乳酸菌，购自生物资源保存与研究中心。
具体实施方式
59.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充 分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施 例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动 的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
60.实施例1
61.本实施例制备了一种红色零价单质纳米硒口服液，具体过程为：
62.d1.在含有亚硒酸钠的乳酸菌液体培养基中，接种1.0
×
105cfu/ml的乳酸菌，并于35℃ 温度下培养48h，培养过程中压力约为0.04mpa；其中液体培养基的成分为：17g葡萄 糖、17g蛋白胨、9g牛肉膏、4g氯化钠以及2g亚硒酸钠，ph约为7；
63.d2.向步骤d1所得体系中，加入2g半胱氨酸和2g牛清蛋白，继续保温2h；
64.d3.收集步骤d2所得培养液，离心(转速8000rpm，5min)后，得包含有乳酸菌的 沉淀物；
65.d4.收集步骤d3所得沉淀物，破碎(沉淀物分散至生理盐水中后，冷冻、研磨)、 分离除去乳酸菌细胞碎片(离心取沉淀物)、并洗涤(透析至透析液中亚硒酸根的检测 限低于icp-aes的检测限)后，将上述透析体系离心，并将所得固体重新分散保存至约 4℃的水中，得零价纳米硒悬浮液；
66.d5.将富硒黄芪粉碎，并添加纤维素酶和果胶酶(1:1质量比)进行发酵，以溶解富 硒黄芩中的细胞壁和果胶，以使其中的营养物质更好的溶出，得第一发酵液和发酵渣；
67.d6.在发酵渣中接种乳酸菌，接种量为1.0
×
107cfu/ml，发酵条件为温度：30℃；通气 量为5％；压力为0.03mpa；发酵48h后，固液分离(离心或过滤，本实施例采用过滤)， 得第二发酵液；
68.d7.将第一发酵液和第二发酵液合并、并进行微生物细胞破碎(破壁机)、除去杂质 后(过滤，去除大颗粒)，得有机硒肽；
69.d8.按照60μg/ml零价纳米硒、40μg/ml有机硒肽的比例，将步骤d4所得零价纳米 硒悬浮液、步骤d7所得有机硒肽和水混合；
70.d9.将步骤d8所得体系于105℃、55kpa的压力下，灭菌20min，灌装后即得纳米硒 口服液。
71.本实施例所有步骤均在无菌条件下操作进行，所用试剂，包括水，均进行了灭菌处 理。
72.实施例2
73.本实施例制备了一种红色零价单质纳米硒口服液，具体过程为：
74.d1.在含有亚硒酸钠的乳酸菌液体培养基中，接种1.0
×
105cfu/ml的乳酸菌，并于35℃ 温度下培养48h，培养过程中压力约为0.04mpa；其中液体培养基的成分为：17g葡萄 糖、17g蛋白胨、9g牛肉膏、4g氯化钠以及2g亚硒酸钠，ph约为7；
均匀；实施例1～2以及对比例1～2所得红色零价单质纳米硒口服液中金属元素含量相当， 具体如表1所示：
96.表1实施例2所得红色零价单质纳米硒口服液中主要元素含量(单位mg/l)
[0097][0098][0099]
从表1结果可知，本发明提供的红色零价单质纳米硒口服液，硒含量与设计含量相 当，同时富含人体所需微量元素，而对人体有毒有害的元素，则几乎不包含，因此在具 有高营养的基础上，降低了毒性。
[0100]
本试验例测试了实施例和对比例制备的红色零价单质纳米硒口服液对h22肝细胞增 殖的抑制性能。其中具体过程为：
[0101]
取40只健康小鼠(20～25g)，取4只作为对照组，另外36均分为12组，分别命名 为实施例1一组、实施例1二组、实施例1三组、实施例1四组、对比例1一～四组， 以及对比例2一～四组；
[0102]
对40只小鼠分别腹腔接种106个h22肝癌细胞(购自上海斯莱克实验动物中心)；
[0103]
紧接着喂食对照组小鼠生理盐水；喂食实验组不同剂量的红色零价单质纳米硒口服 液(按零价纳米硒和有机硒肽质量和与小鼠体重之比计，每组每日摄入量分别为 0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、0.7mg/kg)；具体硒喂养量如表2所示；
[0104]
表2实验组小鼠红色零价单质纳米硒口服液喂养情况表
[0105][0106][0107]
连续喂养7天，其中对照组和实验组除摄入红色零价单质纳米硒口服液量不同外， 采用相同的喂食；
[0108]
将实验组和对照组小鼠处死，收集腹水，细胞计数。
[0109]
结果显示：
[0110]
本测试例采用的40只小鼠，在喂养过程中均未出现中毒现象，说明本发明制备的零 价纳米硒、有机硒肽或者上述两种形式硒混合形成的红色零价单质纳米硒口服液，均具 有较低的生物毒性；
[0111]
与对照组小鼠相比，实验组小鼠(包括实施例1一～四组、对比例1一～四组、对比 例2一～四组)，腹腔内细胞外gpx、gr和gst总活力均有一定降低，说明实施例和对 比例所得红色零价单质纳米硒口服液均可抑制h22细胞的增殖；
[0112]
与对比例1～2共8组实验组相比，本发明实施例1的四组实验组中，小鼠腹腔内细 胞外gpx、gr和gst总活力更低，说明本发明中有机硒肽和零价纳米硒发生了协同作 用，对h22肝癌细胞的抑制更为明显。
[0113]
上面对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领 域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变 化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。