用靶向tlr-4的适体治疗tlr-4介导的疾病和病状
技术领域：
：1.本公开提供了用于治疗tlr-4介导的疾病和病状的方法，所述方法包括施用特异性靶向tlr-4的胞外结构域的核酸适体。
背景技术：
：：2.toll样受体(tlr)是最初针对其在先天免疫的活化中的也可以控制适应性免疫应答的活化的作用而被鉴定的模式识别受体家族。tlr-4是第一个在哺乳动物中表征的tlr。最重要的内源性tlr-4配体是响应组织或细胞损伤而释放的分子。因此，tlr-4涉及与细胞损伤组织相关的多种非常普遍的病理，如中风。3.先天免疫，并且具体是tlr涉及多种病理，激发了对开发这些受体的激动剂和拮抗剂作为药理学目标的兴趣。然而，能够调节tlr-4的药物很少；此外，通常，目前正在开发的能够调节tlr-4并且治疗或预防tlr-4介导的药物适用于治疗特定病状或有限数量的病状。因此，本领域需要具有特异性结合并抑制tlr-4的能力并且可用作治疗与tlr-4的过表达或过度活化相关的广泛疾病和病状的治疗剂的广谱分子。技术实现要素：4.本公开提供了一种用于减轻或改善急性心肌梗塞的至少一种症状或后遗症的适体，其中(a)所述适体的长度介于40与100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4(或表1的任何适体序列或其组合)组成的组，其中5.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且6.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者7.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)具有至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力；并且其中8.在所述急性心肌梗塞期间、之前或之后立即施用所述适体。9.在一个实施例中，与对照病状相比，所述适体的所述施用使梗塞面积减少，并且特别是梗塞面积减少至少25％。10.在另一个实施例中，所述适体的所述施用使由所述急性心肌梗塞引起的纤维化和/或坏死减少。11.在另一个实施例中，所述适体的所述施用12.(i)使心脏功能改善；13.(ii)使胞外基质降解减少；14.(iii)使心脏重塑改善；15.(iv)使心室解剖保存；16.(v)使梗塞进展减少；或者17.(vi)其任何组合。18.本公开还提供了如上定义的适体，用于减轻或改善神经肌肉或神经退行性疾病或病状的至少一种症状或后遗症，其中在所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状发作期间、之前或之后施用所述适体。19.在一个实施例中，所述适体的所述施用20.(i)使脱髓鞘减少；21.(ii)使轴突损伤减少；或者22.(iii)其组合。23.在另一个实施例中，与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使脱髓鞘抑制至少20-80％。24.在另一个实施例中，与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使轴突损伤减少(即，预防轴突损伤)至少10-30％。25.在一些实施例中，所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状选自由以下组成的组：肌萎缩性侧索硬化症(als)、帕金森氏病(parkinson'sdisease)、亨廷顿氏病(huntington'sdisease)、阿尔茨海默氏病(alzheimer'sdisease)和血管性痴呆病。26.在一些实施例中，治疗中使用的适体是aptoll。在其它实施例中，所述适体以介于约0.5mg/剂量与约14mg/剂量之间的剂量范围施用。在一些实施例中，所述适体以介于每剂量约0.007mg/kg与每剂量约0.2mg/kg之间的剂量范围施用。在一些实施例中，所述适体在ph7.4的pbs(氯化钠、氯化钾、脱水磷酸氢二钠和磷酸二氢钾)中调配，所述pbs包括六水合氯化镁，并且任选地包括a-海藻糖二水合物。在一个实施例中，所述适体通过输注静脉内施用。27.本公开还提供了治疗有需要的受试者的tlr-4介导的疾病和病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)中风的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个剂量的长度为40到80个核碱基的核酸适体，其中所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化。在一些方面，所述适体与所述表位的结合减少tlr-4活化。在一些方面，所述适体与所述表位的结合抑制tlr-4活化。28.在一些方面，所述方法进一步包括施用另外的治疗或其组合。在一些方面，所述另外的治疗是第二tlr-4拮抗剂。在一些方面，所述另外的治疗是外科手术干预。在一些方面，所述另外的治疗包括施用抗炎剂、核酸、肽或其组合。在一些方面，所述肽包括抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述核酸包括反义寡核苷酸、抗mir、sirna或shrna。29.在一些方面，所述核酸适体包括与seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)或其组合至少70％相同的序列。在一些方面，所述核酸适体进一步包括与所述适体共价或非共价连接的生物活性分子。在一些方面，所述核酸适体与和seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或组合)的核酸适体相同的tlr-4表位交叉竞争或与所述表位结合。在一些方面，所述核酸适体与和由seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)的核酸适体识别的tlr-4表位重叠的表位交叉竞争或与所述表位结合。30.在一些方面，所述核酸适体以包括多个剂量的剂量方案施用。在一些方面，同时、连续或其组合地施用多剂量。在一些方面，所述多剂量包括两个、三个、或四个、或五个剂量。在一些方面，每个剂量包括介于0.007与0.2mg/kg之间的核酸适体。31.在一些方面，所述核酸适体通过静脉内、动脉内或腹膜内施用。在一些方面，所述tlr-4介导的疾病或病状是缺血性疾病或病状。在一些方面，所述缺血性病状是心肌梗塞或缺血性中风。在一些方面，所述tlr-4介导的疾病或病状是出血性病状。在一些方面，所述出血性病状是出血性中风或出血性转化。在一些方面，所述tlr-4介导的疾病或病状是神经肌肉疾病或病状。在一些方面，所述神经肌肉疾病或病状是神经退行性疾病或病状。在一些方面，所述神经退行性疾病或病状是多发性硬化症。附图说明32.图1示出了本公开的适体(aptoll；seqidno:1)的一级、二级和三级序列。33.图2示出了适体aptlr#1r和aptlr#4f在体外的拮抗作用。在将适体(0.2-200nm)添加到温育培养基之前，将表达htlr-4的与活化报告基因系统seap偶联的hek-blue细胞与选择性tlr-4激动剂lps(200ng/ml)一起温育一小时。htlr-4活化被定量，示出在存在lps的情况下两种适体的浓度依赖性拮抗作用。34.图3示出了适体aptlr#1r和aptlr#4f的序列优化。示意性图示示出了不涉及3d结构获取的适体aptlr#1r和aptlr#4f的序列的部分的消除，从而导致对应的截短形式aptlr#1rt和aptlr#4ft。35.图4示出了对截短的适体aptlr#1rt和aptlr#4ft的htlr-4结合能力的维持的证实。a)流式细胞仪图，描述了与对照hek293细胞相比，aptlr#1rt(红线)和aptlr#4ft(蓝线)对293-htlra细胞中表达的htlr-4的定量；b)流式细胞仪图，示出了在用lps刺激293-htlra细胞之后，截短的适体与htlr-4结合的轻微变化。36.图5示出了对截短的适体aptlr#1rt和aptlr#4ft在表达htlr-4的hek-blue细胞中的拮抗作用的证实。a)与亲本适体aptlr#1r和aptlr#4f相比，示出了由报告基因系统seap定量的htlr-4活化。b)由seap定量的h-tlr-4活化的时间窗口。37.图6示出了对由内源性配体(damp)活化的htlr-4的抑制。htlr-4活性测定示出了aptlr#1r、aptlr#4f和对应的截短形式(0.2-200nm)对由内源性tlr-4激动剂介导的活化的抑制作用。38.图7示出了aptoll对下游tlr-4细胞效应子的抑制作用。a)示意图示出了用于nox检测的格利斯(griess)测定的化学基础；b)对用tlr-4激动剂lps活化并在一小时后与aptoll(20和200nm)一起温育的腹膜鼠巨噬细胞培养基中nox浓度的定量。39.图8示出了aptoll对tlr-4的体外结合亲和力。对向食蟹猴单核细胞(a)和人单核细胞(b)施用不同浓度的aptoll之后受体饱和度％的定量。40.图9示出了aptoll在其它tlr中的激动作用。人tlr2-3-4-5-7-8-和9表达细胞系中的tlr活性测定。与aptoll(20和200nm)一起温育之后未检测到激动作用。41.图10示出了分别用htlr2和htlr5激动剂pam3和flat-st活化的hek-blue-htlr2和hek-blue-htlr5细胞中的htlr2和htlr5活性测定。与aptoll(20和200nm)一起温育对先前被适当激动剂活化的htlr2和htlr5的活化没有示出抑制作用。42.图11示出了aptoll在小鼠实验性中风之后的急性保护作用。a)对aptoll剂量应答研究中的梗塞体积的定量示出了对pmcao之后10分钟腹膜内(i.p.)给予0.45mg/kg和0.9mg/kg的保护；b)对tlr4敲除小鼠的梗塞体积的定量示出了aptoll没有作用。c)对通过静脉施用aptoll时野生型动物的梗塞体积的定量；(*)单向方差分析p《0.05对媒剂。43.图12示出了电凝小鼠模型在永久性大脑中动脉闭塞中由aptoll介导的保护。对当在闭塞之后10分钟施用0.91mg/kgofaptoll时，缺血之后24小时梗塞体积的定量。(*)t-学生p《0.05对媒剂。44.图13示出了在通过电凝进行永久性大脑中动脉闭塞之后在大鼠中施用两个剂量和三个剂量(缺血之后10分钟、2小时和6小时)的aptoll。a)对aptoll多剂量研究中的梗塞体积的定量示出了，当在缺血之后10分钟、10分钟和2小时以及10分钟-2小时和6小时施用0.45mg/kg的适体时的保护。(*)单向方差分析p《0.05对媒剂。45.图14示出了大鼠缺血再灌注之后由aptoll介导的保护。a)定量示出了在威斯塔(wistar)大鼠中的tmcao之后24小时梗塞大小减小。b)对sd大鼠的aptoll或媒剂治疗之后的梗塞体积的定量。(*)t-学生p《0.05对媒剂。46.图15示出了小鼠中风之后aptoll保护的治疗窗口的设计方案。对在pmcao之后10分钟、2小时或6小时被给予aptoll的小鼠永久性缺血之后24小时的梗塞面积的定量，示出了在所有测试时间处类似的保护程度。(*)单向方差分析p《0.05对媒剂。47.图16示出了经aptoll/赋形剂治疗的动物的缺血之后细胞因子确定。对pmcao之后24小时血浆中细胞因子水平的定量。结果示出，在aptoll治疗之后，动物血浆中的一些促炎细胞因子显著减少。(*)t-学生p《0.05对媒剂。48.图17示出了在小鼠中由急性aptoll施用(闭塞之后10分钟)诱导的长期解剖和功能保护。a)中风之后24、48和72小时处t2w-mri对脑水肿的定量示出了对用aptoll治疗的小鼠的持续保护；b)中风之后21天在尼氏染色的切片上对梗塞面积的定量，示出了由急性aptoll施用介导的长期保护；c-d)对中风之后21天步幅长度的定量示出了在用aptoll急性治疗的动物中没有神经缺陷；e)照片示出了足迹测试中的染色路径以及可能因中风而改变的不同距离。(*)学生t测试p《0.05对媒剂(a，b)或双向方差分析p《0.05对假手术(sham)(c，d)；(#)双向方差分析p《0.05对mcao媒剂。49.图18示出了由在大鼠中急性施用aptoll(闭塞之后10分钟)诱导的长期运动保护。在pmcao之后至多21天通过运动评分测试评估神经功能，示出了在由aptoll诱导的中风之后2天和7天时的显著保护(n＝8)。数据表示平均值±sem。2向方差分析，然后是邦费罗尼测试(bonferronitest)(*p《0.05对媒剂)。50.图19示出了aptoll(0.91mg/kg，lps注射之后10分钟)在败血症小鼠模型中的抗内毒素血症作用。a)腹膜内lps注射(20mg/kg)之后8小时和24小时小鼠体重减轻的％；b)腹膜内注射(20mg/kg)之后8小时和24小时小鼠温度损失的％；c)小鼠24小时的累积败血症评分，示出了用aptoll注射的动物显著降低；d)lps注射(20mg/kg)之后至多72小时的存活曲线，示出了用aptoll注射的动物的存活率增加。51.图20示出了impaptoll药物产品的制造过程的流程图。imp是在完全gmp条件下制造的。52.图21示出了aptoll的静脉内施用对生理参数的影响。当与媒剂的静脉内施用相比时，没有观察到适体的施用对血液中测量的一系列生理参数的相关影响。53.图22示出了用化合物治疗的人混合皮质神经元、皮质谷氨酸能神经元和皮质gaba能神经元。a)细胞活力(应注意，0.01μm实际上是无治疗对照病状(0μm)；仅用于对数绘图目的)。b)治疗10天之后培养物的显微照片。54.图23示出了单次静脉内施用aptoll对大鼠呼吸功能的影响。a)呼吸速率。b)潮气量。c)分钟通气量。55.图24示出了适体与血浆蛋白的结合。洗脱图示出了与人(a)、大鼠(b)和nhp(c)血浆蛋白结合和未结合的部分中的荧光aptoll。灰色阴影区域对应于未结合的适体峰。所述图分别示出了三个独立样品的数据。56.图25示出了对外周细胞和中央细胞中的aptoll的检测。a)对alexafluor488标记的aptoll(4ft-488；0.91mg/kg)在wt和tlr4-ko小鼠中的流式细胞术外周分析。b)在wt小鼠中施用适体之后5分钟，alexafluor488标记的aptoll处于粒细胞区域中。c)静脉注射之后24小时，alexafluor488标记的aptoll在脑梗塞区域内的分布。适体在缺血核心(绿色)内的分布模式，通过用与cy3缀合的抗alexa-488抗体(c；红色)进行探测来证实。d)未缀合的aptoll用作阴性对照。57.图26示出了aptoll在37℃下对λ-核酸外切酶a)、dna酶ib)和大鼠、猴和人血浆c)降解的抗性。示出了来自3个实验的代表性凝胶。58.图27示出了aptoll的直方图。与aptoll(20nm)一起温育示出了对所选的任何靶标(无论是gpcr、离子通道、激酶、核受体、转运蛋白还是其它非激酶酶)的活化没有抑制作用。a)摄取结果。b)结合测定。59.图28示出了体外吸收。与aptoll(20nm)一起温育示出了对所选转运蛋白没有抑制作用。60.图29示出了aptoll的直方图。施用aptoll(20nm)之后对照值的抑制％。结果示出了对所评估的cyp酶的任何抑制没有显著影响。61.图30示出了cyp酶的诱导。施用aptoll(2-20-200nm)之后媒剂活性的倍数诱导。使用10种已知cyp诱导剂和5种已知cyp非诱导剂预先确定截止值。结果示出了对所评估的任何cyp酶的诱导没有显著影响。62.图31示出了aptoll的体外细胞毒性测定。细胞活力测定a)mtt活性和b)ldh确定，对hepg2和hl60细胞系与aptoll(2-2000nm)一起温育24和48小时的效果进行定量，示出了在生物活性浓度(2-20nm)下没有细胞毒性作用。(*)学生t测试p《0.05对对照细胞。63.图32示出了涉及gj96nd研究(斯普拉格道利(spraguedawley)大鼠药代动力学研究)的组的设计。64.图33示出了在mc47kc研究(食蟹猴毒性研究)中获得的tmax、cmax和auct值的总结。65.图34示出了体外细菌细胞毒性测定aptoll。细胞毒性的结果表示为对照生长(od650)的百分比。66.图35示出了除图34中存在的那些外的体外细菌细胞毒性测定aptoll。细胞毒性的结果表示为对照生长(od650)的百分比。67.图36示出了aptoll的体外ames测试。弱阳性，如果p《0.05，表示为“ ”；强阳性，如果p《0.01，表示为“ ”；非常强的阳性，如果p《0.001，表示为“ ”；在可能时，评分显著低于背景的化合物被标记。这可能表明生长测定无法检测到低水平的细胞毒性。如下文所描述地标记化合物。如果p《0.05，标记为“《”，如果p《0.01，标记为“《《”，如果p《0.001，标记为“《《《”，连字符(-)表示阴性结果。68.图37示出了除图36中呈现的那些结果外aptoll的体外ames测试结果。69.图38示出了aptoll的体外微核测定。不同浓度的aptoll处理之后的微核细胞％。' 'p《0.05通过t测试和微核细胞％至少比背景水平高3倍。' /-'p《0.05通过t测试和微核细胞％至少比背景水平高2倍。'-'p》0.05通过t测试和微核细胞％比背景水平高小于2倍。cyto：高细胞毒性导致可评分细胞数量不足(》80％细胞毒性)。70.图39示出了a)大鼠的时间窗口研究的设计方案。当在再灌注之前30分钟(b.r.)和再灌注之后10分钟-2小时-6小时-9小时-12小时或24小时施用aptoll时，对大鼠短暂缺血之后72小时的梗塞体积(b)和水肿(c)的定量，证实对tmcao大鼠的保护，将治疗窗口延长至多12小时，并且在再灌注之前施用aptoll时进行保护。71.图40示出了aptoll在心脏肌肉收缩性中的作用。左心室超声心动图参数a)射血分数(％)和b)缩短分数(％)在缺血-再灌注心肌梗塞(ir)之前(基础)和之后72小时从每只大鼠中进行记录。再灌注之后10分钟通过静脉注射媒剂(含mgcl2的pbs，n＝7)或单剂量的aptoll(0.45mg/kg，n＝11)施用治疗。(*)示出的数据表示平均值±sem。t学生**p《0.01对媒剂。72.图41示出了多发性硬化症的临床前研究结果。eae模型期间的临床评分：在症状发作时，用媒剂(n＝7)或0.91mg/kg的aptoll(n＝12)静脉内注射的小鼠的疾病进展。(*)示出的数据表示平均值±sem。t学生*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001对媒剂。73.图42示出了aptoll在来自7天大的大鼠的opc中的作用。a)通过mtt测定确定的细胞存活率被描述为对照(n＝3)的％。h2o2用作死亡对照。b)增殖通过免疫细胞化学进行定量，并且描绘为细胞brdu /olig2 相对于olig2 (n＝6)的％。c)分化通过免疫细胞化学进行定量，并且描绘为细胞mbp /olig2 相对于olig2 (n＝5)的％。t3(甲状腺激素)用作分化对照。(*)示出的数据表示平均值±sem。t学生*p《0.05对媒剂。74.图43示出了对在通过电凝进行永久性大脑中动脉闭塞之后大鼠的aptoll多剂量研究中梗塞体积的定量。在脑缺血之后，施用一个(10分钟)、二个(10分钟和2小时)、三个(10分钟、2小时和6小时)、四个(10分钟、2小时、6小时和24小时)或五个(10分钟、2小时、6小时、24小时和48小时)0.45mg/kg剂量的适体。在所有测试剂量下均观察到保护。将所有组与其相应的媒剂组进行比较(1、2、3和4剂量与其在48小时处安乐死的媒剂组进行比较，并且第5组和其媒剂对照组在72小时处被安乐死)。(*)t测试学生p《0.05对媒剂。75.图44示出了当在症状发作之后24小时施用aptoll(静脉内，0.91mg/kg)时在实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)小鼠模型中的临床评分。76.图45示出了aptoll在ms的小鼠eae模型中的结果。在独立测定中静脉内施用不同剂量的aptoll之后临床评分的演变。用于每个剂量的动物数量是：0.45mg/kg剂量：6eae-aptoll、15eae-veh和5假手术；0.91mg/kg剂量：13eae-aptoll、6eae-veh和20假手术；剂量1.82mg/kg：8eae-aptoll、7eae-veh和8假手术并且对于剂量3.6mg/kg：5eae-aptoll、15eae-veh和5假手术。eae-aptoll＝用aptoll治疗的eae模型小鼠。eae-veh＝用媒剂治疗的eae模型小鼠。77.图46示出了在ms的eae模型中研究的四种剂量的aptoll(静脉内，0.45mg/kg、0.91mg/kg、1.82mg/kg和3.6mg/kg)的比较。数据示出了与媒剂组相比，用每个剂量的aptoll治疗的动物的临床过程的随访。78.图47示出了在用不同剂量的aptoll或媒剂治疗的动物的脊髓切片中通过铬-花青染色测量的髓鞘损失的研究结果。表示了对相对于每个实验组中白质面积的脱髓鞘百分比的定量。aptoll在研究的所有剂量下均诱导脱髓鞘面积减少。79.图48示出了通过eae-aptoll(0.91和1.82mg/kg)和eae-veh小鼠进行比较的髓鞘再生、轴突损伤和炎症的组织学研究结果。图形表示髓鞘面积(对mbp标志物的定量)。轴突损伤面积的图形表示(对nfh标志物的定量)。对小胶质细胞相对于总细胞的百分比(iba1标志物)的定量。80.图49示出了对在施用eae-aptoll(0.91和1.82mg/kg)和eae-veh之后，少突胶质细胞谱系olig2 细胞、成熟细胞(cc1 )和少突胶质细胞前体细胞(pdgfrα)的定量。81.图50示出了在猪的局部缺血/再灌注心肌梗塞模型中再灌注后8小时和24小时血浆中的心肌肌钙蛋白i(ctni)水平。值表示为平均值±sd*p《0.002aptoll24小时(n＝10)对媒剂24小时(n＝10)。82.图51示出了再灌注之后7天猪的心脏功能，表示为ef(射血分数)和fs(缩短分数)。n＝9aptoll(适体，静脉内，0.078mg/kg)/8安慰剂(对照)。数据表示为平均值±sd。ef：*p《0.0006适体对对照。fs：*p《0.003适体对对照。83.图52示出了在用aptoll(静脉内，0.078mg/kg)或媒剂治疗7天之后进行双导管插入术之后梗塞面积的减少。a)在0.5cm心脏切片中进行ttc/evansblue双染色，示出了健康面积(用h标记)、危险面积(r)和坏死(梗塞)面积(白色)。b)对梗塞面积的定量表示为风险面积的百分比。值表示为平均值±sd。*p《0.002安慰剂(媒剂)对aptoll。84.图53示出了(a)中央面板：再灌注和h&e染色之后7天的0.5μm心脏切片的明场显微术显微照片(20x)。外部面板：中央面板的放大倍数(60x)。n＝5aptoll/4安慰剂。(b)再灌注和用马松三色(massontrichrome)染色之后7天的0.5μm心脏切片的明场显微术显微照片。n＝5aptoll/4安慰剂。85.图54示出了再灌注7天之后，用aptoll或安慰剂mmp-9治疗的猪的心脏切片中基质金属肽酶9(mmp-9)的共聚焦显微术检测。细胞核用荧光探针4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)染色。n＝5aptoll/4安慰剂。值表示为平均值±sd。*p《0.001安慰剂对aptoll。86.图55示出了通过以下通过qpcr确定的aptoll的组织分布：(a)对心、肺、肾、脾、肝、小肠、胰腺、胸腺和室管膜脂肪中aptoll的定量。(b)对脾、肾和肝中的aptoll的定量。(c)aptoll在缺血(同侧和对侧半球)和原初大鼠的大脑中的分布。具体实施方式87.本公开内容涉及治疗tlr-4介导的疾病和病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症)的方法，所述方法包括单独或与至少另一种通常用于治疗疾病或病状的疗法例如心肌梗塞中的药物和/或机械溶栓(例如，血栓切除术)组合而向有需要的患者施用至少一种治疗有效剂量的本公开的至少一种核酸适体(例如，aptoll)。还提供了核酸适体；经化学修饰的核酸适体；包括适体的药物组合物和调配物；用于实施本公开的方法的剂量和剂量方案；试剂盒和制品；以及制造和调配方法。88.本文公开的疾病和病状表示影响不同组织和器官、具有不同原因并且具有多种症状和后遗症的tlr-4介导的疾病和病状的广泛样品，这证明本公开的核酸适体是通过调节tlr-4介导的细胞信号传导，可以成功应用于多种疾病、病状以及其症状和后遗症的广谱药物。89.所述tlr-4介导的疾病和病状包括例如急性疾病和病状，如小肠结肠炎、流感、缺血性中风、败血症、肾缺血-再灌注、肝缺血-再灌注、脑内出血或心肌缺血；亚急性疾病和病状，如多发性硬化症、戒瘾症、子宫腺肌病、角膜炎或肺部炎症；慢性疾病和病状，如类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、哮喘、狼疮、骨质疏松症、移植排斥、皮炎、牛皮癣、肥胖、ii型糖尿病、神经性疼痛、高血压、rla、主动脉瘤、结肠癌、弥漫性轴索损伤或慢性疼痛。所述tlr-4介导的疾病和病状还包括例如乳腺癌、肺癌、胰腺癌、皮肤癌、胃肠癌、肝癌、膀胱癌、头颈癌、食道癌、胃癌、结肠直肠癌、卵巢癌、宫颈癌或前列腺癌。参见例如，mai等人(2013)《肿瘤靶标与疗法(oncotargetsandtherapy)》6:1573-87，所述文献通过引用整体并入本文。通过抑制tlr-4可以减少癌症中的细胞迁移和侵袭；因此，可以通过抑制tlr-4来减少癌症转移。tlr-4抑制还可以减少肝脂肪变性。因此，本文公开的方法和组合物可以应用于治疗本文公开的tlr-4介导的疾病和病状中的任何疾病和病状，单独或与通常用于治疗此类tlr-4介导的疾病和病状的治疗干预(例如，药理学和/或外科手术)组合。此外，本文公开的方法和组合物可以用于治疗与本文公开的任何tlr-4介导的疾病和病状以及本领域已知的其它tlr-4介导的疾病和病状相关的本领域已知的症状和/或后遗症。例如，关于使用本文公开的方法治疗如癌症等病状，所公开的方法和组合物可以例如减少或预防肿瘤生长、减缓进展、抑制或减少血管生成、抑制或减少肿瘤侵袭、抑制或减少转移、提高生存率、提高生活质量、改善预后等。90.tlr-4过表达可能导致对化学疗法的抗性，例如，卵巢癌对紫杉醇的抗性和前列腺癌对sirna疗法的抗性。tlr-4信号传导也与肝癌对化学疗法的抗性有关。因此，本文公开的方法和组合物可以用于降低、预防或逆转癌症患者对化学疗法的抗性。91.肿瘤微环境中免疫和炎症细胞中的tlr-4信号传导导致炎症细胞因子的产生，这可能导致肿瘤相关巨噬细胞的进一步极化、成纤维细胞转化为肿瘤启动子癌症相关的成纤维细胞、树突细胞转化为肿瘤相关的dc，以及使未成熟髓样细胞的促肿瘤发生功能活化。因此，在一些方面，本公开的方法和组合物可以用于：(i)抑制或减少炎性细胞因子的产生；(ii)减少或抑制肿瘤相关巨噬细胞的极化；(iii)减少或抑制成纤维细胞转化为肿瘤启动子癌症相关的成纤维细胞；(iv)减少或抑制树突细胞转化为肿瘤相关dc；(v)减少或抑制未成熟髓细胞的促肿瘤发生功能的活化；或者(vi)其任何组合。92.增加的tlr-4活化与胰岛素抗性有关。因此，对于肥胖症或糖尿病，本文公开的方法和组合物可以用于降低或预防胰岛素抗性。93.宫内感染中tlr-4的活化导致子宫平滑肌收缩。因此，本文公开的方法和组合物可以用于预防或抑制子宫平滑肌收缩。94.tlr-4的活化也与若干种自身免疫性炎性疾病有关，例如人类系统性硬化症(ssc)、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征(sjogren'ssyndrome)、银屑病、多发性硬化症或自身免疫性糖尿病，并且已被特别观察到，tlr-4的抑制减少纤维化，例如皮肤或肺纤维化。因此，本文公开的方法和组合物可以用于治疗或减轻与tlr-4表达和/或活化增加相关的自身免疫性炎性疾病的症状，如人类系统性硬化症(ssc)、类风湿性关节炎、oxforddictionaryofbiochemistryandmolecularbiology)》,修订版,2000,牛津大学出版社(oxforduniversitypress)。105.用国际单位制(si)接受的形式表示单位、前缀和符号。数值范围包含定义所述范围的数字。在详述值的范围的情况下，应当理解，还具体公开了所述范围的所述上限与下限之间的每个中间整数值和其每个分数，以及此类值之间的每个子范围。任何范围的上限和下限可以独立地包含在所述范围内或排除在所述范围之外，并且包含任一限值、不包含两个限值或包含两个限值的每个范围也涵盖在本公开内。因此，本文所述的范围应被理解为所述范围内的所有值的简写，包含所述的端点。例如，1到10的范围应被理解为包含来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组的任何数字、数字组合或子范围。106.在明确详述值的情况下，应当理解，与所述数值大致相同数量或量的值也在本公开的范围内。在公开组合的情况下，所述组合的要素的每个子组合也被具体公开并且处于本公开的范围内。相反，在单独公开不同元素或元素组的情况下，也公开了其组合。在公开内容的任何要素被公开为具有多个替代方案的情况下，也特此公开其中每个替代方案被单独排除或以与其它替代方案的任何组合形式被排除的所述公开的实例；公开内容的不止一个元素可以具有此类排除，并且具有此类排除的元素的所有组合特此被公开。107.核苷酸以其普遍接受的单字母代码表示。除非另有说明，核苷酸序列以5'到3'方向从左向右书写。核苷酸在本文中通过iupac-iub生物化学命名委员会(iupac-iubbiochemicalnomenclaturecommission)推荐的通常已知的单字母符号来表示。因此，“a”表示腺嘌呤，“c”表示胞嘧啶，“g”表示鸟嘌呤，“t”表示胸腺嘧啶，“u”表示尿嘧啶。108.氨基酸序列以氨基到羧基方向从左向右书写。本文通过其通常已知的三字母符号或由iupac-iub生物化学命名委员会推荐的单字母符号来表示氨基酸。109.约：本文中使用术语“约”意指大约、大致、左右或在其区域中。当结合数值范围使用术语“约”时，所述术语通过扩展所阐述的数值以上和以下的界限来修改所述范围。通常，术语“约”可以按向上或向下(更高或更低)例如10％的变化来修饰所述值以上和以下的数值。如本文所用，术语“约”或“至少约”当应用于一系列值或范围时，同样适用于列表中的所有成员。因此，“至少约1、2、3、4……”可与“至少约1、至少约2、至少约3、至少约4……”互换。110.施用：术语“施用(administration)”、“施用(administering)”以及其语法变体是指通过药学上可接受的途径将组合物，如本公开的适体(例如，aptoll)引入到受试者中。可以通过任何合适的途径将组合物例如本公开的适体引入到受试者中，所述途径包含口服、经肺、鼻内、肠胃外(静脉内、动脉内、肌肉内、腹膜内或皮下)、直肠、淋巴管内、鞘内，眼周或局部。施用包含自我施用和由他人施用。111.合适的施用途径允许组合物或适体(例如，aptoll)执行其预期功能。例如，如果合适的途径是静脉内或动脉内，则通过将组合物或药剂引入到受试者的静脉或动脉中来施用组合物。112.拮抗剂：如本文所用，术语“拮抗剂”是指阻断或抑制激动剂介导的应答而不是在与受体结合时本身激发生物应答的分子。许多拮抗剂通过在受体上的结构定义的结合位点处与内源性配体或底物竞争来实现其效力。拮抗剂可以是竞争性、非竞争性或无竞争性拮抗剂。在本公开的一些方面，拮抗剂是tlr-4拮抗剂，例如本公开的适体，如aptoll。113.抗体：如本文所用，术语“抗体”涵盖天然或部分或全部合成产生的免疫球蛋白和其片段。所述术语还涵盖具有与免疫球蛋白结合结构域同源的结合结构域的任何蛋白质。“抗体”是指进一步包含包括来自免疫球蛋白基因或其片段的框架区的特异性结合抗原并识别抗原的多肽。术语抗体的用途意指包含完整抗体、多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体、其片段，并且进一步包含单链抗体、人源化抗体、鼠抗体、嵌合抗体、小鼠-人抗体、小鼠-灵长类动物抗体、灵长类动物-人单克隆抗体、抗独特型抗体、抗体片段，例如scfv、(scfv)2、fab、fab'和f(ab')2、f(ab1)2、fv、dab和fd片段、双功能抗体以及抗体相关多肽。抗体包含双特异性抗体和多特异性抗体，只要其表现出期望的生物活性或功能即可。在本公开的一些方面，生物活性分子是抗体或包括其抗原结合片段的分子。114.大约：如本文所用，术语“大约”，当应用于所关注的一个或多个值时，是指与所规定的参考值相似的值。在某些方面中，除非另有规定或另外从上下文显而易见(除了此些数字将会超过可能值的100％的情况)，否则术语“大约”是指在规定的参考值的在任一方向(大于或小于)的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小的值的范围。115.适体：如本文所用，术语“适体”是指采用特定三级结构的单链核酸链，所述结构允许其通过常规沃森-克里克(watson-crick)碱基配对以外的相互作用以与单克隆抗体相当的高特异性和亲和力与分子靶标结合。通常，适体是通过指数富集(selex)技术通过配体系统进化从组合文库中选择的。selex用于鉴定dna和rna适体，所述适体以高特异性和纳摩尔亲和力鉴定并选择性地结合胞外和胞内靶分子。一旦在生理条件下折叠，适体基于其核苷酸序列获取独特的三维结构，所述三维结构是适体的赋予其靶标选择性和亲和力的三级结构。116.适体结合位点：术语“适体结合位点”是指tlr-4的胞外区域中的包括互补适体特异性结合的连续或不连续位点(即表位)的区域。因此，适体结合位点可以含有tlr-4序列中的另外的区域，所述另外的区域超出表位并且可以确定如结合亲和力和/或稳定性等性质，或影响如抗原酶活性或二聚化等性质。因此，即使两个适体与tlr-4的胞外区域内的相同表位结合，如果适体与表位外的氨基酸建立不同的分子间接触，则认为此类适体与不同的适体结合位点结合。117.本公开的适体：术语“本公开的适体”和其语法变体是指可以与定位于tlr-4的胞外结构域上的表位结合并且可以调节tlr-4介导的信号传导，例如充当tlr-4拮抗剂的适体。在一些方面，本公开的适体阻止或减少nf-κb胞内信号传导通路的活化和/或炎性细胞因子的产生。在一些方面，本公开的适体阻断本文公开的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)发作之后释放的炎症应答。在一些方面，本公开的适体是seqidno:1-4的适体，或其变体(例如，与seqidno:1-4的适体具有一定百分比的序列同一性的适体)或衍生物(例如，seqidno:1-4的适体或其包括至少一个与适体共价或非共价连接的生物活性分子的变体)。118.在其它方面，本公开的适体是与seqidno:1-4的适体竞争结合tlr-4胞外结构域的适体。在又另一方面，本公开的适体是与tlr-4胞外结构域表位结合的适体，所述表位与seqidno:1-4的适体结合的表位部分或完全重叠。在其它方面，本公开的适体是表1中公开的适体或其变体或衍生物。119.结合：术语“结合”是指至少两个实体，例如适体与其靶表位、适体和靶蛋白、或适体和靶细胞之间的物理相互作用。120.结合亲和力：“结合亲和力”通常是指分子(例如，本公开的适体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，tlr-4)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指示，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，适体与tlr-4)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子x对其配偶体y的亲和力通常可以通过其ka(缔合常数)或其解离常数(kd)表示，所述解离常数是缔合常数的倒数。亲和力可以通过本领域已知的常见方法来测量，包含本文所描述的那些方法。低亲和力结合分子，例如低亲和力适体，通常与靶表位结合缓慢并倾向于容易地解离，而高亲和力分子，例如高亲和力适体，通常与靶表位结合得更快并且倾向于保持结合得更久。多种测量结合亲和力的方法是本领域已知的，其中任何一种都可以用于本公开的目的。121.本公开的适体(例如，aptoll)与tlr-4特异性结合的能力可以例如通过体外结合测定来确定，如酶联寡核苷酸测定(elona)、酶联适体吸附测定(elasa)、沉淀和定量pcr(qpcr)，或通过荧光技术，如适体组织化学、适体细胞化学、荧光显微术或流式细胞术。同样地，与tlr-4特异性结合的能力和适体对tlr-4的亲和力都可以通过本领域技术人员熟知的技术来确定，如凝胶迁移率变动测定、表面等离子体共振(spr)、动力学毛细管电泳和荧光结合测定。简言之，荧光结合测定由以下组成：将涂覆有tlr-4的磁球与不同浓度(例如，从0到100nm)的本发明标记(例如，用羧基荧光素，fam)的适体一起温育，以及随后洗脱和检测结合的适体；解离常数(kd)通过非线性拟合分析计算。122.结合特异性：术语“特异性”或“结合特异性”是指结合分子例如本公开的适体优先与表位而不是不同表位结合的能力，并且不一定意味着高亲和力。术语“结合特异性”和“特异性”可互换使用并且可以指(i)结合分子(例如，适体)的特异性部分，和(ii)结合分子与特定表位特异性结合的能力。当适体与其靶表位之间存在特异性相互作用时，结合分子，例如适体，“特异性结合”。术语“特异性结合”意指已产生适体以与其靶表位结合。术语“非特异性结合”意指尚未产生适体以与靶表位特异性结合，但确实通过非特异性方式以某种方式与表位结合。123.生物活性分子：如本文所用，术语“生物活性分子”是指可以与本公开的适体(例如，aptoll)共价或非共价连接的任何分子，其中所述分子可以在有需要的受试者中具有治疗或预防作用，或用于诊断目的。因此，通过实例的方式，术语生物活性分子包含蛋白质(例如，抗体、蛋白质、多肽以及其衍生物、片段和变体)、脂质以及其衍生物、碳水化合物(例如，糖蛋白中的聚糖部分)或小分子。在一些方面，生物活性分子是放射性同位素。在一些方面，生物活性分子是可检测部分，例如放射性核素、荧光分子或造影剂。在一些方面，生物活性分子可以与本公开的适体共价连接。在一些方面，生物活性分子直接与适体连接。在其它方面，生物活性分子通过接头与适体连接。124.保守的：如本文所用，术语“保守的”分别是指多核苷酸序列或多肽序列的核苷酸或氨基酸残基，所述核苷酸或氨基酸残基是在被比较的两个或更多个序列的相同位置中未改变的那些。相对保守的核苷酸或氨基酸是在比序列中其它地方出现的核苷酸或氨基酸更相关的序列中保守的核苷酸或氨基酸。125.在一些方面，如果两个或更多个序列彼此100％相同，则其被视为“完全保守的”或“相同的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此至少70％相同、至少80％相同、至少90％相同或至少95％相同，则其被视为“高度保守的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此具有约70％相同、约80％相同、约90％相同、约95％、约98％或约99％相同，则其被视为“高度保守的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此至少30％相同、至少40％相同、至少50％相同、至少60％相同、至少70％相同、至少80％相同，至少90％相同，或至少95％相同，则其被视为“保守的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此约30％相同、约40％相同、约50％相同、约60％相同、约70％相同、约80％相同、约90％相同、约95％相同、约98％相同或约99％相同，则其被视为“保守的”。序列的保守性可以适用于多核苷酸或多肽的整个长度或可以适用于其部分、区域或特征。126.交叉竞争：术语“竞争”或“交叉竞争”，如本文所用的关于结合分子，例如本公开的适体，意指第一结合分子，例如第一适体，以与结合第二结合分子(例如第二适体)足够类似的方式与表位结合，使得与在不存在第二结合分子的情况下结合第一结合分子相比，在存在第二结合分子的情况下第一结合分子与其同源表位的结合结果可检测地降低。127.替代方案，其中第二结合分子与其表位的结合在存在第一结合分子的情况下也可检测地降低，可以但不一定是这种情况。也就是说，第一结合分子可以抑制第二结合分子与其表位的结合，而所述第二分子不抑制第一结合分子与其相应表位的结合。然而，在每个结合分子可检测地抑制另一个结合分子与其同源表位(或双特异性结合分子情况下的表位)的结合的情况下，无论是在相同、更大还是更小程度上，结合分子都被视为彼此“交叉竞争”以结合其相应的表位。本公开涵盖竞争性结合分子和交叉竞争性结合分子两者。128.如果适体交叉竞争使得仅一个适体可以在给定的时间点处与表位结合，即一个结合分子阻止另一个结合分子的结合或调节作用，则适体被视为“与相同的表位结合”或“包括相同的结合位点”或具有“基本上相同的结合”特征。129.本文中的竞争意指比至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％或约100％更大的相对抑制，如例如通过竞争elona或elasa分析或本领域已知的任何合适的方法确定的。可以期望的是，设置更高的相对抑制阈值作为在特定情况下合适的竞争水平的标准。因此，例如，可能的是在适体被认为具有足够的竞争力之前，设置竞争性结合的标准，其中检测到至少约40％的相对抑制，或至少约45％、或至少约50％、或至少约55％、或在至少约60％、或至少约65％、或至少约70％、或至少约75％、或至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约95％或甚至约100％。130.衍生自：如本文所用，术语“衍生自”、“衍生物”(例如，“核酸衍生物”或“适体衍生物”)或其任何语法变体是指从指定分子(例如，本公开的核酸适体)分离或使用指定分子制成的组分。例如，衍生自第一核酸序列(例如，亲本适体)的核酸序列(例如，适体)可以包含与第一核酸序列的核苷酸序列相同或基本上类似的核苷酸序列。在核苷酸的情况下，衍生的物种可以通过例如天然诱变、人工定向诱变或人工随机诱变获得。用于衍生核苷酸的诱变可以是有意定向的或有意随机的，或每个的混合物。核苷酸的诱变以产生衍生自第一个的不同核苷酸可以是随机事件(例如，由聚合酶不忠引起)并且可以通过适当的筛选方法对衍生的核苷酸进行鉴定。131.在一些方面，本公开的衍生的核苷酸序列可以例如通过以下产生：使用组合化学、化学修饰特定位置的核苷酸单元、用核苷酸类似物取代特定位置处的核苷酸单元、修饰骨架化学键、将核苷酸序列与生物活性分子融合或缀合，或其任何组合。132.在一些方面，衍生的核酸序列可以例如通过以下产生：133.(i)与另一种治疗剂(例如，另一种tlr拮抗剂)缀合；134.(ii)与促进靶向的部分(例如，配体、结合部分或将适体引导到特定细胞或组织的部分)缀合；135.(iii)与调节，即增加或减少血浆半衰期的部分缀合(例如，通过调节对核酸酶的抗性或改变肾脏或肝脏清除率)；136.(iv)与递送部分(例如，将促进跨血脑屏障的运输的生物聚合物，如peg或脂质、肽或碳水化合物)缀合；或者137.(v)其任何组合。138.在一些方面，衍生自第一核苷酸序列(例如，亲本适体)的核苷酸序列(例如，适体)分别与第一核苷酸序列具有至少约50％、至少约51％、至少约52％、至少约53％、至少约54％、至少约55％、至少约56％、至少约57％、至少约58％、至少约59％、至少约60％、在至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、在至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性，其中所述第一核苷酸序列保留第二核苷酸序列的生物活性(在本公开的适体的情况下，例如与其tlr-4表位特异性结合并抑制tlr-4的能力)。139.互补：术语“互补的”和“互补性”是指通过沃森-克里克碱基配对规则彼此相关的两个或更多个寡聚体(即，各自包括核酸序列)，或在寡聚体与靶基因之间。例如，核酸序列“t-g-a(5'→3')”与核酸序列“a-c-t(3'→5')”互补。互补性可以是“部分的”，其中第一核酸序列的少于所有核碱基根据碱基配对规则与第二核酸序列的其它核碱基匹配。例如，在一些方面，给定核酸序列与其它核酸序列之间的互补性可以是约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。或者，在给定的核酸序列与其它核酸序列之间可以存在“完全”或“完美”(100％)互补性以继续所述实例。核酸序列之间的互补性的程度对序列之间杂交的效率和强度有显著影响。140.有效量：如本文所用，试剂例如本公开的适体(例如，aptoll)的术语“有效量”是足以产生有益或期望的结果例如临床结果的量，并且因此，“有效量”取决于其施加的环境。例如，在施用治疗tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)或减轻或预防(例如，遏制、抑制或延迟)与tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)相关的后遗症和/或症状的药剂的上下文中，药剂例如本公开的适体的有效量是例如与未施用药剂时获得的应答相比，足以减少或降低例如组织损伤、组织炎症、生理、身体或行为症状或后遗症或其任何组合的量。141.术语“有效量”可以与“有效剂量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”可互换地使用。在具体方面，所述术语是指可以例如治疗、预防、减少或减轻tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)的症状或后遗症的本公开的适体(例如，aptoll)的量。142.在特定方面，所述术语是指实现以下所需的本公开的适体(例如，aptoll)的量：(i)使受损组织减少；(ii)使炎症减少；(iii)使神经系统结果改善；(iv)使促炎生物标志物(例如，干扰素-γ、白介素-12p70、tnfα、il-6或其任何组合)的水平降低；(iv)使运动和/或行为评分(例如，改善活动能力或对刺激的应答)改善；(v)使存活率增加；(vi)使生活质量提高；(vii)与未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者群体获得的参考值相比，使有需要的受试者的疼痛或不适减少；或者(viii)其任何组合。143.表位：如本文所用，术语“表位”是指能够与结合分子例如本公开的适体例如aptoll结合的蛋白质决定簇(例如，tlr-4的氨基酸子序列)。表位通常由如氨基酸或糖侧链等分子的化学活性表面基团组成并且通常具有特异性三维结构特征以及特异性电荷特性。识别表位的适体的部分被称为互补位。表位基于其结构和与互补位的相互作用分为两类，构象表位和线性表位。构象表位由靶蛋白(例如，tlr-4)氨基酸序列的不连续区段构成。这些表位基于靶蛋白(例如，tlr-4)的3-d表面特征和形状或三级结构与适体互补位相互作用。相比之下，线性表位基于其一级结构与互补位相互作用。线性表位由来自靶蛋白(例如，tlr-4)的连续氨基酸序列形成。144.赋形剂：术语“赋形剂”和“载体”可互换使用，并且是指添加到药物组合物以进一步促进化合物，例如本公开的核酸适体(例如，aptoll)的施用的惰性物质。145.同源性：如本文所用，术语“同源性”是指聚合物分子之间例如核酸分子(例如，dna分子和/或rna分子)之间的整体关联性。通常，术语“同源性”意味着两个分子之间的进化关系。因此，同源的两个分子将具有共同的进化祖先。在本公开的上下文中，术语同源性涵盖同一性和相似性。146.在一些方面，如果分子中至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的单体相同(完全相同的单体)或类似(保守取代)，则聚合物分子被认为彼此“同源”。术语“同源”必然是指至少两个序列(例如，多核苷酸序列)之间的比较。147.同一性：如本文所用，术语“同一性”是指聚合物分子之间例如多核苷酸分子(例如，dna分子和/或rna分子)之间的整体单体保守性。没有任何另外的限定词的术语“相同”，例如，核酸a与核酸b相同，意味着序列100％相同(100％序列同一性)。将两个序列描述为例如“70％相同”等同于将其描述为具有例如“70％序列同一性”。148.两个聚合物分子(例如，多核苷酸序列)的同一性百分比的计算可以例如通过出于最佳比较目的比对两个序列来进行(例如，可以在第一多核苷酸序列与第二多核苷酸序列之一或两者中引入缺口以进行最佳比对，并且出于比较目的可以忽略不相同的序列)。在某些方面，出于比较目的比对的序列的长度为参考序列的长度的至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。在多核苷酸的情况下，然后比较对应碱基位置处的碱基。149.当第一序列中的位置被与第二序列中的对应位置相同的碱基占据时，那么分子在所述位置处是相同的。两个序列之间的同一性百分比是由所述序列共享的相同位置的数量的函数，考虑了空位的数量和每个空位的长度，需要引入所述函数以进行两个序列的最佳比对。序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成。150.可以从各种来源获得合适的软件程序，用于蛋白质序列和核苷酸序列两者的比对。一种用于确定序列同一性百分比的合适程序是bl2seq，其是可从美国政府的国家生物技术信息中心blast网站(blast.ncbi.nlm.nih.gov)获得的blast程序套件的一部分。bl2seq使用blastn或blastp算法在两个序列之间进行比较。blastn用于比较核酸序列，而blastp用于比较氨基酸序列。其它合适的程序是例如needle、stretcher、water或matcher，其是生物信息学程序emboss套件的一部分，并且也可从欧洲生物信息学研究所(ebi)获得，网址为www.ebi.ac.uk/tools/psa。151.可以使用本领域已知的方法如mafft、clustal(clustalw、clustalx或clustalω)、muscle等进行序列比对。152.与多核苷酸或多肽参考序列比对的单个多核苷酸或多肽靶序列内的不同区域可以各自具有其自己的序列同一性百分比。应注意，序列同一性百分比值取整为最接近的十分之一。例如，80.11、80.12、80.13和80.14向下取整为80.1，而80.15、80.16、80.17、80.18和80.19向上取整为80.2。还应注意，长度值将始终是整数。153.在某些方面，第一氨基酸序列或核酸序列与第二氨基酸序列或核酸序列的同一性百分比(％id)计算为％id＝100x(y/z)，其中y是在第一序列与第二序列的比对中被评分为相同匹配的氨基酸残基或核碱基的数量(例如，通过目视检查或特定序列比对程序比对)并且z是第二序列中的残基总数。如果第一序列的长度长于第二序列，则第一序列与第二序列的同一性百分比将高于第二序列与第一序列的同一性百分比。154.本领域技术人员应当理解，用于计算序列同一性百分比的序列比对的产生不限于完全由一级序列数据驱动的二元序列-序列比较。还应当理解，序列比对可以通过将序列数据与来自异质来源的数据，如结构数据(例如，晶体蛋白质结构)、功能数据(例如，突变的定位)或系统发育数据整合来产生。整合异构数据以产生多序列比对的合适程序是t-coffee，可在www.tcoffee.org上获得，并且可替代地例如可从ebi获得。还应当理解，用于计算序列同一性百分比的最终比对可以自动或手动策划。155.抑制tlr-4：术语“抑制tlr-4”、“抑制tlr-4”、“tlr-4抑制”以及其语法变体是指阻断和/或降低tlr-4的活化和/或活性，例如，tlr-4介导的信号的转导。在本公开的上下文中，如果与存在天然激动剂，例如脂多糖(lps)的情况下tlr-4的活性相比，tlr-4的信号传导活性降低了至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％，则认为tlr-4被本公开的适体(例如，aptoll)抑制。脂多糖，也被称为内毒素，是革兰氏阴性细菌的外细胞壁的主要糖脂成分。lps分子通常由被称为o抗原的菌株特异性远侧多糖侧链、亲水性核心寡糖和被称为脂质a的疏水性结构域组成。156.在一些方面，术语抑制tlr-4是指，例如，通过本公开的适体(i)阻断或完全抑制tlr-4活化，(ii)减少或部分抑制tlr-4活化，(iii)阻断或完全抑制tlr-4信号传导活性，(iv)降低或部分抑制tlr-4信号传导活性，或者(v)其任何组合。157.本公开的适体(例如，aptoll)抑制tlr-4的能力可以通过本领域可用的一系列测定来确定。在一些方面，本公开的适体抑制tlr-4的能力是用细胞表达重组tlr-4和报告基因通过体外测定的方式确定的，所述报告基因的表达与重组tlr-4的活化相关。本领域技术人员将认识到此方法有多种变体，这取决于所使用的细胞和重组基因。此测定的实例包含在例如美国专利第10,196,642号中，所述美国专利通过引用整体并入本文。其它可用的技术包含确定由表达tlr-4的细胞释放的炎性细胞因子如il-1、il-8、tnf-α和il-12的水平。158.分离的：如本文所用，术语“分离的”、“纯化的”、“提取的”以及其语法变体可互换使用并且是指经过一个或多个纯化工艺的本公开的期望的组合物(例如，本公开的适体)的制剂的状态。在一些方面，如本文所用，分离或纯化是从含有污染物的样品中去除、部分去除(例如，一部分)本公开的组合物的工艺。在一些方面，分离的组合物没有可检测的不期望的活性，或者可替代地，不期望的活性的水平或量处于或低于可接受的水平或量。在其它方面，分离的组合物具有处于或高于可接受的量和/或浓度和/或活性处的本公开的期望组合物的量和/或浓度。在其它方面，与从中获得组合物的起始材料相比，分离的组合物是富集的。与起始材料相比，这种富集可以是至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.9％、至少约99.99％、至少约99.999％、至少约99.9999％或大于99.9999％。159.在一些方面，分离的制剂基本上不含残留的生物产物。在一些方面，分离的制剂是100％不含、至少约99％不含、至少约98％不含、至少约97％不含、至少约96％不含、至少约95％不含、至少约94％不含、至少约93％不含、至少约92％不含、至少约91％不含或至少约90％不含任何污染性生物物质。残留的生物产物可以包含非生物材料(包含化学品)或不需要的核酸、蛋白质、脂质或代谢物。160.连接的：如本文所用，术语“连接的”是指第一氨基酸序列或多核苷酸序列(例如，本公开的适体)分别与第二氨基酸序列或多核苷酸序列共价或非共价连接或连接。第一氨基酸或多核苷酸序列(例如，本公开的适体)可以与第二氨基酸或多核苷酸序列直接连接或并列，或者可替代地插入序列可以将第一序列与第二序列共价连接。术语“连接的”不仅意指第一多核苷酸序列在5'端或3'端处与第二多核苷酸序列的融合，还包含整个第一多核苷酸序列(或第二多核苷酸序列)插入到第二多核苷酸序列(或分别为第一多核苷酸序列)中的任何两个核苷酸中。第一多核苷酸序列可以通过磷酸二酯键或接头连接到第二多核苷酸序列。接头可以是例如多核苷酸。161.错配：术语“错配(mismatch)”或“错配(mismatches)”是指第一核酸序列(例如，本公开的适体)中的一个或多个核碱基(无论是连续的还是分开的)根据碱基配对规则与第二核酸序列(例如，本公开的适体的变体或衍生物)不匹配。尽管通常期望完美的互补性，但某些方面可以包含适体变体相对于亲本适体之间的一个或多个但优选地20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个错配。包含适体内的任何位置处的变异。在某些方面，本公开的适体包含末端附近、内部的核碱基序列中的变体，并且如果存在的话通常在5'和/或3'末端的约20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个亚基内。在某些方面，可以去除20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个核碱基并且仍然提供中靶结合。162.调节：如本文所用，术语“调节”、“修饰”以及其语法变体通常指当应用于特定浓度、水平、表达、功能或行为时，通过增加或降低例如直接或间接促进/刺激/上调或干扰/抑制/下调特定浓度、水平、表达、功能或行为而改变，例如充当拮抗剂或激动剂的能力。在一些情况下，调节剂可以相对于对照或相对于通常预期的平均活性水平或相对于对照活性水平增加和/或降低特定浓度、水平、活性或功能。163.核酸：“核酸”、“核酸分子”、“核苷酸序列”、“多核苷酸”以及其语法变体可互换使用，并且是呈单链形式或双链螺旋形式的指核糖核苷(腺苷、鸟苷、尿苷或胞苷；“rna分子”)或脱氧核糖核苷(脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷或脱氧胞苷；“dna分子”)或其任何磷酸酯类似物(如硫代磷酸酯和硫酯)的磷酸酯聚合物形式。164.单链核酸序列是指单链dna(ssdna)或单链rna(ssrna)。双链dna-dna、dna-rna和rna-rna螺旋是可能的。术语核酸分子，并且具体是dna或rna分子，仅指分子的一级和二级结构，并且不将其限制为任何特定的三级形式。因此，此术语包含尤其在线性或环状dna分子(例如，限制性片段)、质粒、超螺旋dna和染色体中发现的双链dna。在讨论特定双链dna分子的结构时，本文中可以根据通常仅给出沿非转录dna链(即，具有与mrna同源的序列的链)的5'到3'方向上的序列的常规约定来描述序列。“重组dna分子”是经过分子生物学操作的dna分子。dna包含但不限于cdna、基因组dna、质粒dna、合成dna和半合成dna。本公开的“核酸组合物”可以包括如本文所描述的一种或多种核酸(例如，核酸适体)。165.术语核酸还涵盖变体，如肽核酸(pna)、锁核酸(lna)以及其组合、其修饰，包含经修饰的核苷酸等。核酸可以从天然来源纯化，使用重组表达系统产生以及任选地纯化的、化学合成的等。当适当时，例如，在化学合成分子的情况下，核酸可以包括核苷类似物，如具有经化学修饰的碱基或糖、骨架修饰等的类似物。166.肠胃外施用：如本文所用的短语“肠胃外施用(parenteraladministration和administeredparenterally)”意指除了肠内施用和局部施用以外的通常通过注射进行的施用方式，并且包含但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊髓内以及胸骨内注射和输注。在一些方面，肠胃外施用是静脉内或动脉内。在一些方面，静脉内或动脉内施用是通过团注，例如通过缓慢团注施用包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物施用。167.药学上可接受的载体.术语“药学上可接受的载体”、“药学上可接受的赋形剂”以及其语法变体涵盖美国联邦政府监管机构批准的或美国药典中列出的用于动物(包含人类)的任何药剂，以及任何载体或稀释剂，所述载体或稀释剂在禁止向受试者施用组合物并且不会消除所施用化合物的生物活性和性质的程度上不会导致产生不期望的生理效应。包含用于制备药物组合物并且通常是安全、无毒和期望的赋形剂和载体。168.药物组合物：如本文所用，术语“药物组合物”是指本文所描述的与一种或多种其它化学组分(如药学上可接受的载体和赋形剂)混合或掺杂，或悬浮在一种或多种其它化学组分中的化合物中的一种或多种化合物，例如本公开的适体，如aptoll。药物组合物的一个目的是促进向受试者施用适体制剂。169.多核苷酸：术语“多核苷酸”与“核酸”可互换使用，并且是指任何长度的核苷酸的聚合物，包含核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、其类似物或其混合物。在一些方面，此术语是指分子的一级结构。因此，所述术语包含三链、双链和单链脱氧核糖核酸(“dna”)，以及三链、双链和单链核糖核酸(“rna”)。所述术语还包含经修饰的，例如通过烷基化和/或通过加帽，以及未经修饰形式的多核苷酸。170.在一些方面，术语“多核苷酸”包含聚脱氧核糖核苷酸(含有2-脱氧-d-核糖)、聚核糖核苷酸(含有d-核糖)，包含例如双链dna(dsdna)、单链dna(ssdna)、单链rna(ssrna)或双链rna(dsrna)，无论是剪接的还是未剪接的，作为嘌呤或嘧啶碱基的n-或c-糖苷的任何其它类型的多核苷酸，以及其它含有正常核苷酸骨架的聚合物，例如，聚酰胺(例如，肽核酸“pna”)和聚吗啉代聚合物，以及其它合成序列特异性核酸聚合物，前提是聚合物含有处于允许碱基配对和碱基堆积的构型下的核碱基，如在dna和rna中发现的。171.在一些方面，多核苷酸可以是，例如，本公开的核酸适体(例如，aptoll)。在一些方面，多核苷酸是dna。在一些方面，dna是合成dna，例如合成ssdna。在一些方面，合成dna包括至少一种非天然核碱基。在一些方面，某一类的所有核碱基都已用非天然核碱基替代(例如，本文公开的多核苷酸中的所有尿苷都可以用非天然核碱基，例如5-甲氧基尿苷替代)。172.多肽：术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以包括经修饰的氨基酸。所述术语还涵盖已天然或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰，如与标记组分缀合。定义内还包含例如含有一个或多个氨基酸类似物(包含例如非天然氨基酸，如同型半胱氨酸、鸟氨酸、对乙酰苯丙氨酸、d-氨基酸和肌酸)以及本领域已知的其它修饰的多肽。如本文所用，术语“多肽”是指任何大小、结构或功能的蛋白质、多肽和肽。多肽包含基因产物、天然存在的多肽、合成多肽、同源物、直系同源物、旁系同源物、片段和上述的其它等效物、变体和类似物。多肽可以是单一多肽或可以是多分子复合物，如二聚体、三聚体或四聚体。所述多肽还可以包括单链或多链多肽。最常见的二硫键存在于多链多肽中。术语多肽还可以适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学类似物。在一些方面，“肽”的长度可以小于或等于50个氨基酸，例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸的长度。在一些方面，多肽可以与本公开的适体共价或非共价连接。173.预防：如本文所用，术语“预防”、“抑制”、“遏制”以及其变体适用于本文公开的疾病或病状，或其症状或后遗症，是指例如174.(i)部分或完全延迟疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作；175.(ii)部分或完全延迟特定疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的一种或多种症状、特征或临床表现的发作；176.(iii)部分或完全延迟特定疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的一种或多种症状、特征或表现的发作；177.(iv)部分或完全延迟特定疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的进展；和/或178.(v)降低发生与疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)相关联的病理的风险。179.在一些方面，预防、抑制或遏制结果是通过预防性治疗例如通过施用本公开的适体来实现的。180.预防性的：如本文所用，“预防性的”是指用于预防、抑制、遏制疾病或病状例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作，或用于预防、抑制、遏制或延迟与疾病或病状例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)相关的症状的治疗或作用过程。181.在一些方面，可以通过将本公开的适体例如aptoll施用于处于本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的风险中，或在任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作之后处于某种症状或后遗症的风险中的受试者来实现预防作用。182.预防：如本文所用，“预防”是指为维持健康和预防、抑制、遏制或延迟本文公开的tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作，或预防、抑制、遏制或延迟与本文公开的tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发生相关联的症状而采取的措施。在一些方面，本公开的适体可以用于预防本文公开的tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风。183.相似性：如本文所用，术语“相似性”是指在聚合物分子例如多核苷酸分子(例如，dna分子和/或rna分子)之间和/或在多肽分子之间的整体关联性。聚合物分子彼此之间的相似性百分比的计算可以以与同一性百分比的计算相同的方式进行，除了相似性百分比的计算考虑了本领域所理解的保守取代。应当理解，相似性百分比取决于所使用的比较尺度，即是否比较氨基酸，例如根据其进化接近度、电荷、体积、柔性、极性、疏水性、芳香性、等电点、抗原性或其组合。184.受试者：术语“受试者”、“患者”、“个体”和“宿主”以及其变体在本文中可互换使用，并且是指任何哺乳动物受试者，包含但不限于需要诊断、治疗或疗法的人、家养动物(例如，狗、猫等)、农场动物(例如，牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)，具体地人。本文所描述的方法适用于人类疗法和兽医应用两者。185.应当理解，在本公开全文中提及“tlr-4”是指关于人受试者的人tlr-4，以及当受试者不是人受试者时指相应的直系同源物，即，本文公开的用于例如马、猫或狗受试者的方法的兽医应用需要通过能够与马、猫或狗tlr-4的胞外结构域特异性结合的本公开的适体抑制马、猫或狗tlr-4。186.有需要的受试者：如本文所用，短语“有需要的受试者”包含将受益于施用本公开的适体例如aptoll以改善止血的受试者，如哺乳动物受试者。187.易患：“易患”疾病、病症和/或病状或其症状或后遗症或“处于风险”中的受试者尚未被诊断出和/或不表现出疾病、病症和/或病状的症状，但有发展疾病或其症状的倾向。188.在一些方面，易患疾病、病症和/或病状(例如，缺血性中风)或处于其危险中的受试者可以通过以下中的一种或多种来表征：(1)与疾病、病症和/或病状的发展相关联的基因突变；(2)与疾病、病症和/或病状的发展相关联的基因多态性；(3)与疾病、病症和/或病状相关联的蛋白质和/或核酸的表达和/或活性增加和/或降低；(4)与疾病、病症和/或病状的发展相关联的习惯和/或生活方式；(5)疾病、病症和/或病状的家族史；以及(6)暴露于和/或感染有与疾病、病症和/或病状的发展相关联的微生物。189.在一些方面，易患疾病、病症和/或病状或处于其风险的受试者将发展所述疾病、病症和/或病状。在一些方面，易患疾病、病症和/或病状或处于其风险的受试者不会发展所述疾病、病症和/或病状。190.全身施用：如本文所用，短语“全身施用(systemicadministration或administeredsystemically)”和“外周施用(peripheraladministration或administeredperipherally)”意指除直接到中枢神经系统中的施用之外的化合物、药物或其它材料的施用，使得所述化合物、药物或其它材料进入患者的系统，并且因此经历代谢和其它类似过程，例如静脉内或动脉内施用。191.靶细胞：如本文所用，术语“靶细胞”是指表达tlr-4的特定细胞，尤其包含骨髓谱系细胞，如单核细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、粒细胞和未成熟树突细胞，以及其它谱系的细胞，如神经元等。在特定方面，所述靶细胞是单核细胞或巨噬细胞。在一些方面，所述靶细胞是小胶质细胞。在一些方面，所述靶细胞是粒细胞。在一些方面，所述靶细胞是未成熟树突细胞。在一些方面，所述靶细胞是神经元。在一些方面，本公开的适体与在本文公开的靶细胞的表面上表达的tlr-4结合。192.治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”是足以对有需要的受试者产生期望的治疗效果、药理学和/或生理学效果的包括本公开的适体(例如，aptoll)的组合物的量。治疗有效量可以是“预防有效量”，因为预防可以被认为是疗法。193.术语“治疗有效量”还意指要递送的包括本公开的适体(例如，aptoll)的组合物的量足以194.(i)治疗tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；195.(ii)改善tlr-4介导的疾病或病状的症状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；196.(iii)改善tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；197.(iv)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；198.(v)延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；199.(vi)延迟tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；200.(vii)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的发作，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；201.(viii)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的复发，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者202.(ix)当施用于受试者时，其任何组合(或下文在术语“治疗”的定义中公开的任何作用)203.(a)患有tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；204.(b)易患或有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；205.(c)易患tlr-4介导的疾病或病状或有所述疾病或病状复发或恶化的风险，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者206.(d)有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如由于例如潜在感染、疾病、病症、病状、生活方式引起的心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者207.(e)其任何组合。208.治疗有效结果：如本文所用，术语“治疗有效结果”意指在以下这样的受试者中足以产生以下结果的治疗(例如，施用至少一个剂量的本公开的适体，例如aptoll)的结果：209.(i)患有tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；210.(ii)易患或有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；211.(iii)易患tlr-4介导的疾病或病状或有所述疾病或病状复发或恶化的例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；212.(iv)有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如由于潜在感染、疾病、病症、病状、生活方式引起的心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者213.(v)其任何组合，214.以尤其有效地：215.(a)治疗tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；216.(b)改善tlr-4介导的疾病或病状的症状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；217.(c)改善tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；218.(d)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；219.(e)延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；220.(f)延迟tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；221.(g)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的发作，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；222.(h)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的复发，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者223.(i)其任何组合(或下文在术语“治疗”的定义中公开的任何作用)。224.tlr-4：如本文所用，术语“tlr-4”是指膜受体toll样受体4。tlr-4的活化产生信号传导级联，例如导致炎性细胞因子如il-1、il-8、tnf-α、il-6和il-12的释放，从而引起炎症和细胞损伤。受体tlr-4也可以被称为armd10、cd284、tlr-4或htoll。在人中，受体tlr-4于2014年5月27日在登录号000206.2下在genbank注册，并且其由tlr4基因编码。tlr-4有若干种同种型。用于描述tlr-4中不同结构化结构域的定位的氨基酸编号是指839个氨基酸长的同种型(同种型1；uniprot：o00206-1)。氨基酸残基1-23构成信号序列，残基24-631构成胞外结构域，残基632-652构成跨膜结构域，并且残基653-839构成胞质结构域。tlr-4同种型2(uniprot：o00206-2)缺少标准同种型1序列的氨基酸1-40。因此，同种型2的胞外结构域包括同种型1的氨基酸41-631。tlr-4同种型3(uniprot：o00206-3)缺少标准同种型1序列的氨基酸1-200。因此，同种型3的胞外结构域包括同种型1的氨基酸201-631。225.术语tlr-4还涵盖多态性和天然变体，例如等位基因tlr-4*b(gly-299、ile-399)，其与吸入lps的迟钝应答相关联，或具有以下天然存在的取代中的一种或多种取代的天然变体：t175a、q188r、c246s、e287d、d299g、c306w、v310g、n329s、f342y、l385f、t399i、s400n、f443l、e474k、q510h、k694r、r763h或q834h。226.在特定方面，本公开的适体与定位于tlr-4同种型1的胞外结构域(即，tlr-4同种型1的氨基酸24-631)上的表位特异性结合。227.在非人受试者中，术语tlr-4是指其相应的tlr-4、同种型、多态性形式和天然变体。228.治疗：如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”、“疗法(therapy)”是指，例如，降低tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风)的严重性；减轻或消除与疾病或病状相关联的一种或多种症状或后遗症；或者提供对患有疾病或病状的受试者的有益效果，但不一定治愈所述疾病或病状。所述术语还包含预防或预防(例如，遏制、抑制或延迟)疾病或病状或其症状或后遗症。229.在一些方面，所述术语是指用于产生以下结果的临床干预：预防(例如，遏制或抑制)疾病或病状；治愈疾病或病状；延迟疾病或病状的发作；降低疾病或病状的严重性；改善一种或多种症状；改善一种或多种后遗症；预防(例如，遏制、抑制或延迟)一种或多种症状；预防(例如，遏制、抑制或延迟)一种或多种后遗症；延迟一种或多种症状；延迟一种或多种后遗症；减轻一种或多种症状；减轻一种或多种后遗症；缩短一种或多种症状的持续时间；缩短一种或多种后遗症的持续时间；减少一种或多种症状的频率；减少一种或多种后遗症的频率；减少一种或多种症状的严重性；减少一种或多种后遗症的严重性；提高生活质量；增加存活率；预防(例如，遏制、抑制或延迟)疾病或病状的复发；延迟疾病或病状的复发；或其任何组合，例如，关于在没有用本公开的至少一种适体治疗的情况下预期的情况。在一些方面，疾病或病状是通过tlr-4表达增加和/或tlr-4活化增加表征的病理学。230.ii.用tlr-4结合适体治疗tlr-4介导的疾病231.本公开提供治疗有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效剂量的长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。在一方面，tlr-4介导的疾病或病状是缺血性中风或其症状或后遗症。在另一方面，tlr-4介导的疾病或病状是心肌梗塞或其症状或后遗症。在又另一方面，tlr-4介导的疾病或病状是出血性中风或其症状或后遗症。在一些方面，tlr-4介导的疾病或病状是出血性转化或其症状或后遗症。在另一方面，tlr-4介导的疾病或病状是多发性硬化症或其症状或后遗症。232.应当理解，本文公开的所有方法可替代地被调配为长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，如上所述，用于治疗tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风。可替代地，还提供了核酸适体在制备用于治疗所述tlr-4介导的疾病或病状的药物中的用途。233.还提供了用于预防(例如，遏制、抑制或延迟)有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效剂量的长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。234.本公开还提供用于减轻有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风的至少一种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效剂量的长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。235.如本文所用，术语“缺血性中风”是指通过由脑血流量以异常突然的方式显著减少引起的神经功能缺损表征的一种类型的中风(也被称为脑血管疾病、脑梗塞或中风)。在缺血性中风中，由于任何灌注脑块的动脉闭塞，导致血流突然和立即中断，从而导致血液灌注丢失，从而产生梗塞区域。动脉闭塞通常是由于动脉粥样硬化或起源于另一个定位(通常是心脏或其它动脉)的栓子(脑栓塞)。缺血性中风是通过tlr-4表达增加和/或tlr-4活化增加表征的病理。鉴于tlr-4的活化产生信号传导级联，导致炎性细胞因子如il-1、il-8、tnf-α、il-6和il-12的释放，从而引起炎症和细胞损伤，通过tlr-4表达的增加和/或tlr-4活化的增加表征的病理可以进一步通过具有炎性组分表征。236.在一些方面，缺血性中风可以是血栓形成、栓塞或由于灌注不足。在一些方面，缺血性中风可以由例如动脉粥样硬化、血管炎、椎动脉和颈动脉夹层、红细胞增多症、高凝状态、感染、瓣膜赘生物、壁血栓、来自近侧来源的动脉-动脉栓塞、脂肪栓塞、脓毒性栓塞、心脏衰竭引起，从而导致全身性低血压、镰状细胞性贫血、血管受压、室性心动过速、血凝块、心肺骤停、中风或先天性心脏缺陷。因此，本公开提供了用于治疗有需要的受试者(例如，患有缺血性中风、处于缺血性中风风险中或处于缺血性中风复发风险中的受试者)的这些疾病或病状中的任何疾病或病状的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。237.缺血性中风的症状和后遗症包括例如无意识、失明、强直性凝视偏差、全面性失语、书写困难、阅读障碍、计算障碍、定向障碍、空间忽视、视觉忽视、感觉和/或运动症状以及面部、感觉和/或四肢(上肢、下肢或两者)运动症状缺陷、尿失禁、运动障碍性缄默症、经皮层运动性失语症、意识模糊、运动偏侧偏瘫、偏瘫、面部麻痹、感觉丧失、构音障碍、注意力不集中、同侧偏盲、cn缺陷、头晕、眩晕、共济失调、复视、吞咽困难、一过性aloc、跌倒发作、头晕、四肢麻痹、昏迷、闭锁综合征、死亡、密拉-古布勒综合征(millard-gublersyndrome)、垂直眼球运动不受影响、一个半综合征、桥脑内侧下综合征、眼球震颤、共济失调、本体感觉减退、桥脑内侧综合征、对侧麻痹、咽/声带/面部肌阵挛、桥脑外侧综合征、霍纳氏综合征(horner'ssyndrome)、共轭凝视轻瘫、面部/四肢/躯干疼痛或温度消失、单侧头痛、视野缺损、视觉失认、中脑外侧综合征、对侧偏瘫、震颤、运动过度、中脑内侧综合征、桥脑外侧综合征、面瘫、角膜反射丧失、听力丧失、四肢和步态共济失调、沃伦伯格综合征、声音嘶哑、笨拙手综合征、内侧延髓综合征、舌偏或脊髓前动脉综合征。238.因此，本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的缺血性中风的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。239.如本文所用，术语“出血性中风”是指发生脑血管破裂，剥夺依赖于所述血液动脉的脑区域的病状。另外，流出的血液会压迫包含其它血管的大脑结构，从而增加被继发于脑内出血的缺血影响的区域。出血性中风的症状可以包含完全或有限的意识丧失、恶心、呕吐、突然和严重的头痛、身体一侧的面部、腿部或手臂无力或麻木、癫痫发作、头晕、失去平衡、言语或吞咽问题、混乱或迷失方向。最常见的原因是动脉瘤。更罕见的原因是动静脉畸形(avm)。出血性中风有两种类型：脑内出血和蛛网膜下腔出血。通常，由出血性中风引起的缺血性事件可能导致上文描述的缺血性中风的后遗症。240.因此，本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的出血性中风(脑内出血或蛛网膜下腔出血)的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。241.如本文所用，术语“出血性转化”是指单纯梗塞，例如缺血性中风的结果，转化为血性梗塞。因此，所述术语是指发生在死亡或垂死组织中的出血，例如因缺血性中风而失去其通常血液供应的脑组织。出血性转化的幅度从轻微的点状出血(出血性梗塞)到大量的主要大量产生出血(实质血肿)的范围。通常，例如由缺血性中风引起的出血性转化可能引起上文描述的缺血性中风的后遗症。242.本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的出血性转化(例如，出血性梗塞或实质血肿)的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。243.如本文所用，术语“心肌梗塞”(也被称为“梗塞”或“心脏病发作”)是指通过由冠状动脉之一的阻塞引起的心脏区域中的血液供应不足伴随组织损伤表征的病理学。由此类阻塞导致的心肌缺血或供氧不足会导致心绞痛，如果足够快地重新插管，则不会导致心脏组织死亡，而如果这种缺氧持续下去，则心肌会受到损伤和坏死，即梗塞，最终发生。心肌梗塞的原因通常是动脉粥样硬化。其它可能的原因是冠状动脉痉挛。心肌梗塞可能导致心力衰竭、心律不齐、心源性休克或心脏骤停。风险因素包含高血压、吸烟、糖尿病、缺乏运动、肥胖、高血脂、不良饮食和过量饮酒等。受损的血液流入心肌可能触发缺血性级联。心肌梗塞会造成组织损伤(主要是坏死)，从而导致胶原疤痕形成。组织死亡和心肌疤痕形成改变心脏的正常传导通路并削弱受影响的区域。因此，心肌梗塞可能导致后遗症，如异常心脏节律(心律失常)、心脏传导阻滞、心室动脉瘤、心脏炎症或心脏破裂。244.本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的心肌梗塞的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。245.在一些方面，与在未经治疗的受试者或未经治疗的受试者群体中观察到的心脏功能(如例如通过测量射血分数和/或缩短分数来确定的)相比，在心肌梗塞之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使心脏功能改善至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。246.如本文所用，术语“缩短分数”是指心脏泵功能的量度。所述缩短分数是左心室松弛时的直径与收缩时的直径之间的比率。247.如本文所用，术语“射血分数”是指每次收缩(或心跳)时从腔室(通常是心脏)射出的流体(通常是血液)的体积分数(或总量的一部分)。射血分数被广泛用作心脏泵血效率的量度，并且用于对心力衰竭类型进行分类。所述射血分数也被用作心力衰竭严重性的指标。248.如本文所用，术语“多发性硬化症”是指通过中枢神经系统的脱髓鞘、神经变性和慢性损伤的发作表征的病理。尽管已经证明了各种自身免疫性机制的参与，但其原因目前未知。在多发性硬化症患者中，淋巴细胞穿过血脑屏障以影响髓鞘，同时发生由巨噬细胞和神经胶质细胞辅助的炎性过程。249.脱髓鞘会破坏部分神经系统的通信能力，从而导致一系列体征和症状，包含生理问题、心理问题以及有时的精神问题。具体症状可以包含复视、单眼失明、肌肉无力、感觉障碍或协调障碍。多发性硬化症呈现若干种形式，其中新症状要么以孤立的发作形式出现(复发形式)，要么随时间推移逐渐累积(进展形式)。在发作之间，症状可能完全消失；然而，永久性神经问题往往仍然存在，尤其是随着疾病的进展。250.多发性硬化症可能引起多种症状，例如感觉改变(感觉减退)、肌肉无力、异常肌肉痉挛或移动困难；协调和平衡困难；言语(构音障碍)或吞咽(吞咽困难)问题、视觉问题(眼球震颤、视神经炎、幻视或复视)、共济失调、震颤、疼痛、痉挛、性功能障碍、痉挛、疲劳和急性或慢性疼痛综合征、膀胱和肠道困难、认知障碍或情绪征候学(主要是重性抑郁症)。残疾进展和症状严重性的主要临床量度是扩展残疾状态量表或edds。一些最常见的认知缺陷会影响最近的记忆力、注意力、处理速度、视觉空间能力和执行功能。251.与其它原发性脱髓鞘疾病一样，ms的主要病理生理特征是中枢神经系统中少突胶质细胞的丢失，并且因此，白质和灰质两者中的髓鞘丢失。另一方面，作为多发性硬化症病理基础的自身免疫性组分是炎症、脱髓鞘和轴突网络损伤过程的促进剂，其中tlr-4和触发其活化的促炎信号传导起着至关重要的作用。252.在作为疾病基础的病理生理过程中，中枢和外周神经系统的轴突脱髓鞘起着至关重要的作用，并且是受疾病影响的个体所呈现的症状的基础。髓鞘是一种细胞分化，其允许正确传输神经冲动，并且由少突胶质细胞(在中枢神经系统中)和细胞(在外周神经系统中)生理合成。253.本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的多发性硬化症的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。254.在一些方面，向患有多发性硬化症的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使临床评分降低，其中较高的临床评分与较高的残疾程度和症状的严重性相关，并且其中观察到的临床评分小于约90％、小于约85％、小于约80％、小于约75％、小于约70％、小于约65％、小于约60％，小于约55％、小于约50％、小于约45％、小于约40％、小于约35％或小于约30％的在未经治疗的受试者或未经治疗的受试者群体中观察到的临床评分值。255.在一些方面，向患有多发性硬化症的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致的流动性增加比用芬戈莫德(fingolimod)或甲基强的松龙(methylprednisolone)治疗受试者时观察到的流动性增加高至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。256.在一些方面，施用本公开的适体(例如，aptoll)可以使少突胶质前体细胞增殖的增加比在不存在本公开的适体(例如，aptoll)的情况下生长的少突胶质前体细胞中观察到的增殖水平高至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％。257.在一些方面，施用本公开的适体(例如，aptoll)可以使少突胶质前体细胞分化的增加比在不存在本公开的适体(例如，aptoll)的情况下生长的少突胶质前体细胞中观察到的分化水平高至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％。258.在一些方面，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可能导致例如由于急性(例如，缺血性中风、脑内出血、出血性中风或出血性转化)、亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，弥漫性轴索损伤)tlr-4介导的疾病或病状导致的受损神经元组织的再髓鞘化。在一些方面，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可能导致由于急性(例如，缺血性中风、脑出血或蛛网膜下腔出血)、亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，弥漫性轴索损伤)tlr-4介导的疾病或病状期间而受损的神经元组织中的神经元增殖和/或神经元分化。因此，本公开提供了一种用于使由于急性(例如，缺血性中风、脑内出血或蛛网膜下腔出血)、亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，弥漫性轴索损伤)tlr-4介导的疾病或病状而受损的神经元组织再髓鞘化的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的长度为40到80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与所述表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。259.在一些方面，自tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作起小于16小时就施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后小于约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、95、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、415、420、425、430、435、440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495、500、505、510、515、520、525、530、535、540、545、550、555、560、565、570、575、580、585、590、595、600、605、610、615、620、625、630、635、640、645、650、655、670、675、680、685、690、695、700、705、710、715、720、725、730、735、740、745、750、755、760、765、770、775、780、785、790、795、800、805、810、815、820、825、830、835、840、845、850、855、860、865、870、875、880、885、890、895、900、905、910、915、920、925、930、935、940、945、950、955或960分钟，施用本公开的适体(例如，aptoll)。260.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后小于约1小时、小于约2小时、小于约3小时、小于约4小时、小于约5小时、小于约6小时、小于约7小时、小于约8小时、小于约9小时、小于约10小时、小于约11小时、小于约12小时、小于约13小时、小于约14小时、小于约15小时、小于约16小时、小于约17小时、小于约18小时、小于约19小时、小于约20小时、小于约21小时、小于约22小时、小于约23小时或小于约24小时，施用本公开的适体(例如，aptoll)。261.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，施用本公开的适体(例如，aptoll)。262.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后立即施用本公开的适体(例如，aptoll)。263.在一些方面，在初始剂量之后随后施用另外剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，在初始剂量之后施用至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个另外剂量。在一些方面，在同一天期间施用若干个剂量。在一些方面，一个或多个加强剂量之后是一个或多个维持剂量。在一些方面，所有剂量都包括相同量的本公开的适体(例如，aptoll)。264.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后约2小时和约6小时，施用另外剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。在其它方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后约2小时、约6小时、约12小时和约24小时，进一步施用另外剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。265.在一些方面，具体是在急性tlr-4介导的疾病或病状的情况下，本公开的适体(例如，aptoll)通常在急性事件之后几分钟(例如，10到60分钟)、几小时(例如，1小时到48小时)或数天施用。在其它方面，例如在亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，类风湿性关节炎)tlr-4介导的疾病或病状中，本公开的适体(例如，aptoll)可以施用数周、数月，或年。266.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.5mg/天与约80mg/天之间的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以至少约0.5mg/天、至少约1mg/天、至少约2mg/天、至少约5mg/天、至少约10mg/天、至少约15mg/天、至少约20mg/天、至少约25mg/天或至少约30mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以0.5mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以1mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以2mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以5mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以10mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以15mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以20mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以25mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以30mg/天的剂量施用。267.在一些方面，当适体通过静脉内或动脉内途径(团注)每天施用两次(例如，相隔6小时)持续14天时，本公开的适体(例如，aptoll)的大约14mg/kg/天的剂量被认为是无观察到的不良反应水平(noael)。在一些方面，对于体重70kg的受试者，要向健康受试者施用的最大推荐起始剂量(mrsd)为大约31.5mg。在一些方面，对于体重70kg的受试者，要向健康受试者施用的最大推荐起始剂量(mrsd)为大约0.5mg。268.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以大约0.007mg/kg的剂量(即，对于70kg的受试者大约0.5mg/天)施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约0.1mg/kg、至少约0.2mg/kg、至少约0.3mg/kg、至少约0.4mg/kg、至少约0.5mg/kg、至少约0.6mg/kg、至少约0.7mg/kg、至少约0.8mg/kg、至少约0.9mg/kg、至少约1mg/kg、至少约1.1mg/kg、至少约1.2mg/kg、至少约1.3mg/kg、至少约1.4mg/kg、至少约1.5mg/kg、至少约1.6mg/kg、至少约1.7mg/kg、至少约1.8mg/kg、至少约1.9mg/kg、至少约2mg/kg、至少约2.1mg/kg、至少约2.2mg/kg、至少约2.3mg/kg、至少约2.4mg/kg、至少约2.5mg/kg、至少约2.6mg/kg、至少约2.7mg/kg、至少约2.8mg/kg、至少约2.9mg/kg、至少约3mg/kg、至少约3.1mg/kg、至少约3.2mg/kg、至少约3.3mg/kg、至少约3.4mg/kg、至少约3.5mg/kg、至少约3.6mg/kg、至少约3.7mg/kg、至少约3.8mg/kg、至少约3.9mg/kg、至少约4mg/kg、至少约4.1mg/kg、至少约4.2mg/kg、至少约4.3mg/kg、至少约4.4mg/kg、至少约4.5mg/kg、至少约4.6mg/kg、至少约4.7mg/kg、至少约4.8mg/kg、至少约4.9mg/kg、至少约5mg/kg、至少约5.1mg/kg、至少约5.2mg/kg、至少约5.3mg/kg、至少约5.4mg/kg、至少约5.5mg/kg、至少约5.6mg/kg、至少约5.7mg/kg、至少约5.8mg/kg、至少约5.9mg/kg、至少约6mg/kg、至少约6.1mg/kg、至少约6.2mg/kg、至少约6.3mg/kg、至少约6.4mg/kg、至少约6.5mg/kg、至少约6.6mg/kg、至少约6.7mg/kg、至少约6.8mg/kg、至少约6.9mg/kg、至少约7mg/kg、至少约7.1mg/kg、至少约7.2mg/kg、至少约7.3mg/kg、至少约7.4mg/kg、至少约7.5mg/kg、至少约7.6mg/kg、至少约7.7mg/kg、约至少7.8mg/kg、至少约7.9mg/kg、至少约8mg/kg、至少约8.1mg/kg、至少约8.2mg/kg、至少约8.3mg/kg、至少约8.4mg/kg、至少约8.5mg/kg、至少约8.6mg/kg、至少约8.7mg/kg、至少约8.8mg/kg、至少约8.9mg/kg、至少约9mg/kg、至少约9.1mg/kg、至少约9.2mg/kg、至少约9.3mg/kg、至少约9.4mg/kg、至少约9.5mg/kg、至少约9.6mg/kg、至少约9.7mg/kg、至少约9.8mg/kg、至少约9.9mg/kg、至少约10mg/kg、至少约11mg/kg、至少约12mg/kg、至少约13mg/kg、至少约14mg/kg、至少约15mg/kg、至少约16mg/kg、至少约17mg/kg、至少约18mg/kg、至少约19mg/kg、至少约20mg/kg、至少约21mg/kg、至少约22mg/kg、至少约23mg/kg、至少约24mg/kg、至少约25mg/kg、至少约26mg/kg、至少约27mg/kg、至少约28mg/kg、至少约29mg/kg或至少约30mg/kg。269.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约0.001mg/kg/天、至少约0.002mg/kg/天、至少约0.003mg/kg/天、至少约0.004mg/kg/天、至少约0.005mg/kg/天、至少约0.006mg/kg/天、至少约0.007mg/kg/天、至少约0.008mg/kg/天、至少约0.009mg/kg/天、至少约0.010mg/kg/天、至少约0.015mg/kg/天、至少约0.020mg/kg/天、至少约0.025mg/kg/天、至少约0.030mg/kg/天、至少约0.035mg/kg/天、至少约0.040mg/kg/天、至少约0.045mg/kg/天、至少约0.050mg/kg/天、至少约0.055mg/kg/天、至少约0.060mg/kg/天、至少约0.065mg/kg/天、至少约0.070mg/kg/天、至少约0.075mg/kg/天、至少约0.080mg/kg/天、至少约0.085mg/kg/天、至少约0.090mg/kg/天、至少约0.095mg/kg/天、至少约0.1mg/kg/天、至少约0.11mg/kg/天、至少约0.12mg/kg/天、至少约0.13mg/kg/天、至少约0.14mg/kg/天或至少约0.15mg/kg/天。270.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天、至少约1.1μg/kg/天、至少约1.2μg/kg/天、至少约1.3μg/kg/天、至少约1.4μg/kg/天、至少约1.5μg/kg/天、至少约1.6μg/kg/天、至少约1.7μg/kg/天、至少约1.8μg/kg/天、至少约1.9μg/kg/天、至少约2μg/kg/天、至少约2.1μg/kg/天、至少约2.2μg/kg/天、至少约2.3μg/kg/天、至少约2.4μg/kg/天、至少约2.5μg/kg/天、至少约2.6μg/kg/天、至少约2.7μg/kg/天、至少约2.8μg/kg/天、至少约2.9μg/kg/天、至少约3μg/kg/天、至少约3.1μg/kg/天、至少约3.2μg/kg/天、至少约3.3μg/kg/天、至少约3.4μg/kg/天、至少约3.5μg/kg/天、至少约3.6μg/kg/天、至少约3.7μg/kg/天、至少约3.8μg/kg/天、至少约3.9μg/kg/天、至少约4μg/kg/天、至少约4.1μg/kg/天、至少约4.2μg/kg/天、至少约4.3μg/kg/天、至少约4.4μg/kg/天、至少约4.5μg/kg/天、至少约4.6μg/kg/天、至少约4.7μg/kg/天、至少约4.8μg/kg/天、至少约4.9μg/kg/天、至少约5μg/kg/天、至少约5.1μg/kg/天、至少约5.2μg/kg/天、至少约5.3μg/kg/天、至少约5.4μg/kg/天、至少约5.5μg/kg/天、至少约5.6μg/kg/天、至少约5.7μg/kg/天、至少约5.8μg/kg/天、至少约5.9μg/kg/天、至少约6μg/kg/天、至少约6.1μg/kg/天、至少约6.2μg/kg/天、至少约6.3μg/kg/天、至少约6.4μg/kg/天、至少约6.5μg/kg/天、至少约6.6μg/kg/天、至少约6.7μg/kg/天、至少约6.8μg/kg/天、至少约6.9μg/kg/天、至少约7μg/kg/天、至少约7.1μg/kg/天、至少约7.2μg/kg/天、至少约7.3μg/kg/天、至少约7.4μg/kg/天、至少约7.5μg/kg/天、至少约7.6μg/kg/天、至少约7.7μg/kg/天、至少约7.8μg/kg/天、至少约7.9μg/kg/天、至少约8μg/kg/天、至少约8.1μg/kg/天、至少约8.2μg/kg/天、至少约8.3μg/kg/天、至少约8.4μg/kg/天、至少约8.5μg/kg/天、至少约8.6μg/kg/天、至少约8.7μg/kg/天、至少约8.8μg/kg/天、至少约8.9μg/kg/天、至少约9μg/kg/天、至少约9.1μg/kg/天、至少约9.2μg/kg/天、至少约9.3μg/kg/天、至少约9.4μg/kg/天、至少约9.5μg/kg/天、至少约9.6μg/kg/天、至少约9.7μg/kg/天、至少约9.8μg/kg/天、至少约9.9μg/kg/天、至少约10μg/kg/天、至少约10.1μg/kg/天、至少约10.2μg/kg/天、至少约10.3μg/kg/天、至少约10.4μg/kg/天、至少约10.5μg/kg/天、至少约10.6μg/kg/天、至少约10.7μg/kg/天、至少约10.8μg/kg/天、至少约10.9μg/kg/天、至少约11μg/kg/天、至少约11.1μg/kg/天、至少约11.2μg/kg/天、至少约11.3μg/kg/天、至少约11.4μg/kg/天、至少约11.5μg/kg/天、至少约11.6μg/kg/天、至少约11.7μg/kg/天、至少约11.8μg/kg/天、至少约11.9μg/kg/天、至少约12μg/kg/天、至少约12.1μg/kg/天、至少约12.2μg/kg/天、至少约12.3μg/kg/天、至少约12.4μg/kg/天、至少约12.5μg/kg/天、至少约12.6μg/kg/天、至少约12.7μg/kg/天、至少约12.8μg/kg/天、至少约12.9μg/kg/天、至少约13μg/kg/天、至少约13.1μg/kg/天、至少约13.2μg/kg/天、至少约13.3μg/kg/天、至少约13.4μg/kg/天、至少约13.5μg/kg/天、至少约13.6μg/kg/天、至少约13.7μg/kg/天、至少约13.8μg/kg/天、至少约13.9μg/kg/天、至少约14μg/kg/天、至少约14.1μg/kg/天、至少约14.2μg/kg/天、至少约14.3μg/kg/天、至少约14.4μg/kg/天、至少约14.5μg/kg/天、至少约14.6μg/kg/天、至少约14.7μg/kg/天、至少约14.8μg/kg/天、至少约14.9μg/kg/天或至少约15μg/kg/天。271.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约2μg/kg/天、至少约2μg/kg/天到至少约3μg/kg/天、至少约3μg/kg/天到至少约4μg/kg/天、至少约4μg/kg/天到至少约5μg/kg/天、至少约5μg/kg/天到至少约6μg/kg/天、至少约6μg/kg/天到至少约7μg/kg/天、至少约7μg/kg/天到至少约8μg/kg/天、至少约8μg/kg/天到至少约9μg/kg/天、至少约9μg/kg/天到至少约10μg/kg/天、至少约10μg/kg/天到至少约11μg/kg/天、至少约11μg/kg/天到至少约12μg/kg/天、至少约12μg/kg/天到至少约13μg/kg/天、至少约13μg/kg/天到至少约14μg/kg/天或至少约14μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。272.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约3μg/kg/天、至少约3μg/kg/天到至少约6μg/kg/天、至少约6μg/kg/天到至少约9μg/kg/天、至少约9μg/kg/天到至少约12μg/kg/天或至少约12μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。273.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约4μg/kg/天、至少约4μg/kg/天到至少约8μg/kg/天、至少约8μg/kg/天到至少约12μg/kg/天、至少约11μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。274.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约5μg/kg/天、至少约5μg/kg/天到至少约10μg/kg/天或至少约10μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。275.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约6.5μg/kg/天到至少约7.5μg/kg/天、至少约6μg/kg/天到至少约8μg/kg/天、至少约5.5μg/kg/天到至少约8.5μg/kg/天、至少约5μg/kg/天到至少约9μg/kg/天、至少约4.5μg/kg/天到至少约9.5μg/kg/天、至少约4μg/kg/天到至少约10μg/kg/天、至少约3.5μg/kg/天到至少约10.5μg/kg/天、至少约3μg/kg/天到至少约11μg/kg/天、至少约2.5μg/kg/天到至少约11.5μg/kg/天、至少约2μg/kg/天到至少约12μg/kg/天、至少约1.5μg/kg/天到至少约12.5μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约13μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约13.5μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约14μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约14.5μg/kg/天或至少约1μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。276.上文公开的剂量可以在一天期间作为单剂量或多剂量施用。因此，可以施用0.6mg的总日剂量，例如，作为两个0.3mg剂量，或三个0.2mg剂量，或五个0.1剂量。277.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的t1/2(血浆半衰期)为约0.5小时、约0.6小时、约0.7小时、约0.8小时、约0.9小时、约1小时、约1.1小时、约1.2小时、约1.3小时、约1.4小时、约1.5小时、约1.6小时、约1.7小时、约1.8小时、约1.9小时、约2小时、约2.1小时、约2.2小时、约2.3小时、约2.4小时、约2.5小时、约2.6小时、约2.7小时、约2.8小时、约2.9小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时或约8小时。在一个具体方面，适体(例如，aptoll)的t1/2为约0.8小时和1.4小时。在一个具体方面，适体(例如，aptoll)的t1/2为约1.4小时。在一个具体方面，aptoll在人血浆中的t1/2为约8小时。278.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以多剂量施用。一方面，适体以一个、二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量施用。在一些方面，适体以三个剂量施用。在一些方面，三个剂量在同一天期间施用。在一些方面，第一剂量在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后小于一小时，例如在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后10分钟施用。在一些方面，第二剂量在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后小于3小时，例如在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后约2小时施用。在一些方面，第三剂量在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后小于8小时，例如在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后约6小时施用。279.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)静脉内或动脉内施用。在特定方面，本公开的适体以团注的形式施用。在一些方面，团注是缓慢团注。280.在一些方面，向患有tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风、多发性硬化症的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)：281.(i)使受损组织减少；282.(ii)使炎症减少；283.(iii)使预后和结果改善；284.(iv)使促炎生物标志物(例如，干扰素-γ、白介素-12p70、tnfα、il-6或其任何组合)的水平降低；285.(v)使生活质量提高；286.(vi)使功能评分，例如运动评分改善(例如，活动能力改善)；287.(vii)使存活率增加；或者288.(v)其任何组合。289.上文描述的作用是关于患有或曾经患有tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风、多发性硬化症但没有施用本公开的适体例如aptoll的对照患者或对照患者群体的。290.在一些方面，相对于未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者的对照群体中获得的参考值，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使组织损伤(例如，脑组织或心脏组织)的减少介于20％与75％之间。在一个具体方面，相对于未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者的对照群体中获得的参考值，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使组织损伤(例如，脑组织或心脏组织)的减少为大约65％。291.在一些方面，相对于未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者的对照群体中获得的参考值，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体使组织损伤(例如，脑组织或心脏组织)减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％，至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。292.在具体方面，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小减小，当以多剂量方案施用时，所述面积显著更小。例如，在具体方面，与在梗塞之后10分钟处施用单剂量时观察到的大约19％的减少相比，施用三个剂量的适体(例如，在梗塞之后10分钟、2小时和6小时)使受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小减少了至少24％。293.在一些方面，与施用对应单剂量方案之后观察到的受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小相比，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)的多剂量方案产生以下功效：受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小减小至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约100％、至少105％、至少约110％、至少约115％、至少约120％、至少约125％、至少约130％、至少约135％、至少约140％、至少约145％、至少约150％、至少约155％、至少约160％、至少约165％、至少约170％、至少约175％、至少约180％、至少约185％、至少约190％、至少约195％、至少约200％、至少约205％、至少约210％、至少约215％、至少约220％、至少约225％、至少约230％、至少约235％、至少约240％、至少约245％、至少约250％、至少约255％、至少约260％、至少约265％、至少约270％、至少约275％、至少约280％、至少约285％、至少约290％、至少约295％、至少约300％、至少约305％、至少约310％、至少约315％、至少约320％、至少约325％、至少约330％、至少约335％、至少约340％、至少约345％或至少约350％。294.在一些方面，通过施用至少一种本公开的适体(例如，aptoll)来治疗所公开的tlr-4介导的或本文公开的病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症)可以与其它治疗性和/或预防性治疗组合。例如，本公开的适体可以与生物活性分子如抗凝剂、抗炎剂或血压调节剂一起施用。295.在一些方面，在患有心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的受试者中，本公开的适体(例如，aptoll)的施用可以与例如外科手术干预(例如，血栓切除术)组合。在一些方面，本公开的适体的施用可以与导管插入术例如球囊导管插入术或支架的插入组合。在一些方面，动脉再通可以通过药理学(例如，溶栓)、机械(例如，血管内血栓切除术)或其组合来诱导。296.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的施用发生在外科手术(例如，血栓切除术)之前、期间或之后，或其组合。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的施用发生在溶栓例如药物溶栓、药物机械溶栓、机械血栓切除术或其组合之前、期间或之后。在一些方面，血栓切除术是支架取栓术血栓切除术、球囊栓塞切除术、直接抽吸血栓切除术、外科栓塞切除术或其任何组合。297.在一些方面，本文公开的治疗缺血性中风的方法包括溶栓(例如，药物机械溶栓)和/或血栓切除术(例如，机械血栓切除术)与本公开的适体(例如，aptoll)的施用组合，其中与在不存在溶栓的情况下施用本公开的适体(例如，aptoll)之后观察到的组织损伤(例如，梗塞面积)减少的功效相比，组合治疗使减少组织损伤(例如，减少梗塞面积)的功效增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约100％、至少约105％、至少约110％、至少约115％、至少约120％、至少约125％、至少约130％、至少约135％、至少约140％、至少约145％、至少约150％、至少约155％、至少约160％、至少约165％、至少约170％、至少约175％、至少约180％、至少约185％、至少约190％、至少约195％、至少约200％、至少约205％、至少约210％、至少约215％、至少约220％、至少约225％、至少约230％、至少约235％、至少约240％、至少约245％、至少约250％、至少约255％、至少约260％、至少约265％、至少约270％、至少约275％、至少约280％、至少约285％、至少约290％、至少约295％、至少约300％、至少约305％、至少约310％、至少约315％、至少约320％、至少约325％、至少约330％、至少约335％、至少约340％、至少约345％或至少约350％。298.在本公开的一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)产生保护性作用。299.因此，在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致特定并发症例如脑梗塞的发生率在tlr-4介导的疾病或病状发作之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续降低。300.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致特定并发症例如脑梗塞的发生率在施用本公开的适体(单独或与药理学的，例如溶栓和/或机械的，例如血管内血栓切除术、干预组合)之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续降低。301.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风、事件的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。302.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在施用本公开的适体之后(单独或与药理学的，例如溶栓和/或机械的，例如血管内血栓切除术、干预组合)之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续的保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。303.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后至少约1天、至少约2天，至少约3天，至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天、至少约18天、至少约19天、至少约20天、至少约21天、至少约22天、至少约23天、至少约24天、至少约25天、至少约26天、至少约27天或至少约28天内的持续的保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。304.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在施用本公开的适体后(单独或与药理学的，例如溶栓和/或机械的，例如血管内血栓切除术、干预组合)之后至少约1天、至少约2天，至少约3天，至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天、至少约18天、至少约19天、至少约20天、至少约21天、至少约22天、至少约23天、至少约24天、至少约25天、至少约26天、至少约27天或至少约28天内的持续的保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。305.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或在对照群体中观察到的受损组织的体积，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使受损组织的体积(例如，梗塞体积)(例如，如在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后24小时、48小时或72小时之后确定的)减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。306.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或在对照群体中观察到的受损组织的体积，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使受损组织的体积(例如，梗塞体积)(例如，如在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后24小时、48小时或72小时之后确定的)减少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、至少约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。307.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的组织损伤(例如，皮质损伤或心肌损伤)，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使组织损伤(例如，皮质损伤或心肌损伤)减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％或至少约40％。308.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的神经恢复，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使神经恢复改善至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％。309.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的运动评分，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使运动功能改善至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％。310.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的促炎生物标志物的血浆蛋白水平，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使促炎生物标志物的血浆蛋白水平减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％。311.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以通过静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注来施用。在具体方面，本公开的适体(例如，aptoll)例如通过输注或通过团注来静脉内或动脉内施用。在一些方面，通过缓慢团注施用，即通过持续约1分钟、约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约11分钟、约12分钟、约13分钟、约14分钟或约15分钟的注射来施用剂量。312.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以与适合于治疗局部缺血性病状和/或血栓的其它药物或治疗(例如，如上文所描述的溶栓)同时使用。313.在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗缺血性中风的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗心肌梗塞的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗心肌梗塞的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗出血性中风的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗出血性转化的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗多发性硬化症的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。314.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以以例如tlr-4拮抗剂、抗炎剂、核酸、肽或蛋白质或其组合的组合形式施用。在一些方面，本文公开的方法还可以与如颈动脉内膜切除术和/或颈动脉支架术等手术程序组合。315.在一些方面，本文公开的方法包括施用至少一种本公开的适体(例如，aptoll)，单独或与药理学或机械溶栓组合，并且任选地与异丁司特(ibudilast)、tak242、ni-0101、依立托伦(eritoran)、依达拉奉(edaravone)、尿酸、芬戈莫德、那他珠单抗(natalizumab)、米诺环素(minocycline)、阿那白滞素(anakinra)、神经肽或其任何组合进行组合。316.在一些方面，本文公开的方法包括将至少一种本公开的适体(例如，aptoll)作为组合疗法共同施用，其包括施用：317.(i)选自由以下组成的组的tlr-4拮抗剂：纳洛酮(naloxone)、( )-纳洛酮、纳曲酮(naltrexone)、( )-纳曲酮、脂多糖(lps)、异丁司特、丙戊茶碱(propentofylline)、阿米替林(amitriptyline)、酮替芬(ketotifen)、环苯扎林(cyclobenzaprine)、米安色林(mianserin)、丙咪嗪(imipramine)、脂质a类似物(例如，依立托伦或e5531)、松属素(pinocembrin)、十六酰胺乙醇(palmitoylethanolamide)、他喷他多(tapentadol)、聚丙醚亚胺树枝状葡萄糖胺(dg)、氨基烷基氨基葡萄糖4-磷酸(例如，crx-526)、iaxo-102、rs-lps、tlr-in-c34、tak-242、e5564或其任何组合；318.(ii)抗血小板药物，例如阿司匹林或氯吡格雷(clopidogrel)；319.(iii)抗凝血剂，例如肝素、醋硝香豆素(acenocumarol)、华法林(warfarin)、达比加群(dabigatran)或利伐沙班(rivaroxaban)；320.(iv)抗氧化剂，例如依达拉奉；321.(v)组织纤溶酶原活化剂；或者322.(vi)其任何组合。323.在一些方面，本文公开的方法包括将至少一种本公开的适体(例如，aptoll)作为组合疗法共同施用，包括施用核酸，所述核酸具有使涉及通过tlr-4的表达增加和/或tlr-4的活化增加表征的病理的基因的表达沉默的能力，例如反义寡核苷酸(例如，反义rna、反义dna或反义rna/dna)、小干扰rna(sirna)、短发夹rna(shrna)、抗微rna(抗mir)；肽，如信号传导肽和靶结合肽(例如，抗体或其抗原结合片段，包括抗体或其抗原结合片段的化合物的肽，如抗原-药物缀合物或免疫毒素)。324.在一些方面，本文公开的方法包括施用至少一种本公开的适体，例如aptoll或下文公开的任何适体，具体是表1中公开的任何适体或其变体或衍生物。325.在一些方面，本文公开的方法可以使用除适体之外的核酸实施，所述核酸不是通过与tlr-4蛋白结合来降低和/或抑制tlr-4作用，而是通过与tlr4基因或tlr4基因的转录产物如对tlr-4进行编码的信使rna(mrna)相互作用或与调节tlr-4表达的核酸(例如，mirna)例如反义寡核苷酸、sirna、shrna或抗mir相互作用来直接或间接降低和/或抑制(例如，耗竭或消除)tlr-4表达。还考虑使用瞬时或永久改变tlr-4表达的药剂实施本文公开的方法，例如使用例如crispr/cas、talen或zfn的基因疗法方法。还考虑使用药剂来实施本文公开的方法，所述药剂转录后修饰tlr-4的活性或通过tlr-4信号传导通路内的上游和/或下游的药理学或基因疗法干预来改变tlr-4向质膜的掺入、改变tlr-4功能性(例如，抗体或小分子药物)、改变tlr-4运输和/或再循环或改变tlr-4信号传导。326.在一些方面，本公开提供了一种用于减轻或改善有需要的受试者的疾病或病状的至少一种症状或后遗症的核酸适体，其中327.(a)所述适体的长度例如介于约40与约100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中328.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且329.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者330.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有例如至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。331.在一些方面，本公开提供了一种用于治疗本文公开的疾病或病状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用核酸，其中332.(a)所述适体的长度例如介于约40与约100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中333.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且334.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者335.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有例如至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。336.在一些方面，本公开提供了一种用于减轻、改善、抑制或减少有需要的受试者的本文公开的疾病或病状的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括向所述受试者施用核酸，其中337.(a)所述适体的长度例如介于约40与约100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中338.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且339.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者340.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有例如至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。341.在一些方面，本文公开的方法可以实施表1中公开的任何适体或其组合。因此，在一些方面，长度例如介于约40与约100个核苷酸之间的适体选自由seqidno:1-16组成的组。342.在一些方面，长度例如介于约40与约100个核苷酸之间的适体是与seqidno:1-16的适体具有例如至少85％序列同一性的功能等效变体，其中所述功能等效变体衍生自seqidno:1-16，并且维持与tlr-4活化特异性结合和减少和/或抑制所述活化的能力。343.在一些方面，所述适体的长度为约45、约59、约68、约76或约78个核苷酸。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约78个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约59与约78个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约68与约78个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约76个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约68个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约59个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约59与约76个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约59与约68个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约68与约76个核苷酸之间。344.在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)或其组合施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者可以减少梗塞体积。在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)或其组合施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者可以减少在施用倍剂量的本公开的适体(例如，aptoll)或其组合例如一个剂量、二个剂量、三个剂量、四个剂量或五个剂量之后的梗塞体积。345.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)或其组合的多剂量的施用可以在闭塞之后例如约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约12小时、约18小时、约24小时、约30小时、约36小时、约42或约48小时开始。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟施用单剂量，其中与对照病状相比，例如与未用适体治疗的受试者的梗塞体积相比，适体的施用诱导梗塞体积减少。346.在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟和约2小时施用两个剂量。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟、约2小时和约6小时施用三个剂量。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟、约2小时、约6小时和约24小时施用四个剂量。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟、约2小时、约6小时、约24小时和约48小时施用五个剂量。在一些方面，与对照病状相比，例如与未用适体治疗的受试者的梗塞体积相比，此类剂量方案诱导梗塞体积减少。347.在一些方面，与对照病状相比，例如与未用适体治疗的受试者的梗塞体积相比，本公开的适体(例如，aptoll)或其组合的施用诱导梗塞体积减少至少约10％、至少15％、至少约20％或至少约25％。348.在一些方面，当在缺血性事件之后立即施用时，例如在缺血性事件之后约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟或约30分钟施用时，将本公开的适体(例如，aptoll)施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者减少了梗塞体积。在一些方面，与对照病状下观察到的梗塞体积相比，例如与未用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的受试者的梗塞体积相比，梗塞体积的减少为约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。349.在一些方面，当在缺血性事件之后约10分钟施用时，本公开的适体(例如，aptoll)静脉内施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者使梗塞体积减少了约65％。350.本公开还提供了一种用于选择患有缺血性病状和/或血栓的受试者以用本公开的适体(例如，aptoll)进行治疗的方法，其中所述受试者选自治疗，如果例如血管闭塞是适用于机械血栓切除术，例如，由计算机化断层扫描血管造影术(cta)确定或证实。在某一些方面，用于选择的标准是大血管闭塞，适合于由神经影像标准(ct或mri)确定或证实的机械血栓切除术，如：351.(i)磁共振成像(mri)标准：扩散加权成像(dwi)限制的体积≥约5ml且≤约70ml，如例如通过软件确定；和/或352.(ii)计算机化断层扫描(ct)标准：阿尔伯塔中风计划早期ct评分(aspects)约6到约10和关于入院脑血流量(cbf)确定的梗塞评分《30％和≥约5ml且≤约70ml，例如，通过软件确定。353.在一些方面，用于选择受试者的标准是从症状发作开始的时间。因此，在一些方面，如果自缺血性病状和/或血栓发作起已经过去了小于6小时，例如小于5小时、小于4小时、小于3小时、小于2小时或小于1小时，那么选择受试者以用本公开的适体(例如，aptoll)进行治疗。354.在一些方面，用于选择用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的受试者的标准是受试者是否是接受evt治疗(例如，血栓切除术)的候选者。355.在一些方面，受试者是人受试者，并且本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.2mg/kg之间的剂量施用。因此，在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于人受试者以治疗本文公开的任何疾病或病状，或预防、抑制或减少与此类疾病或病状相关联的任何症状和/或后遗症：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。356.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于人受试者以治疗本文公开的任何疾病或病状，或预防、抑制或减少任何症状和/或后遗症：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约14mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。357.在一些方面，本公开提供了一种用于预防患有急性心肌梗塞的受试者发生炎性反应的预防方法，所述方法包括施用本公开的适体(例如，aptoll)。358.在一些方面，本公开提供了一种用于选择患有急性心肌梗塞的受试者以用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的方法，所述方法包括例如：(i)进行测量、评估或定量梗塞面积；(ii)评估心脏功能；(iii)测量与组织损伤或组织重塑相关的生物标志物；或者(iv)其组合。359.本公开还提供了一种用于促进或诱导患有急性心肌梗塞的受试者的心脏功能恢复的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。还提供了一种用于减少患有急性心肌梗塞的受试者的坏死(例如，左心室坏死)和/或纤维化的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，可以在向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)之后至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天观察到心脏功能的恢复、相对于对照的梗塞面积的减少、相对于对照的坏死(例如，左心室坏死)的减少、相对于对照的纤维化的减少或其任何组合。在一些方面，患有急性心肌梗塞并且已经施用过本公开的适体(例如，aptoll)的受试者的肌钙蛋白i水平低于未施用过适体的受试者的肌钙蛋白i水平。在一些方面，较低的肌钙蛋白i水平是可检测的，例如，在向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)之后约2小时、约4小时、约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约30小时、约36小时、约42小时或约48小时。360.在一些方面，相对于对照病状，例如相对于尚未施用过本公开的适体(例如，aptoll)的受试者，向患有急性心肌梗塞的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可以使梗塞面积减少至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％。361.在一些方面，向患有急性心肌梗塞的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可以362.(i)相对于对照减少梗塞面积(例如，梗塞面积的体积)；363.(ii)保留心脏组织的完整性；364.(iii)减少或抑制纤维化；365.(iv)抑制胞外基质降解标志物的表达；366.(v)减少、降低风险或抑制错误的心脏重塑；367.(vi)诱导心脏保护；368.(vii)减少或抑制胞外基质降解；369.(viii)改善或促进心脏重塑；370.(ix)保留心室解剖；371.(x)保留心脏功能；372.(xi)减少梗塞的进展373.(xii)改善心肌修复374.(xiii)增加或恢复心室收缩力；或者375.(xiv)其任何组合。376.因此，在一些方面，本公开提供了用于在患有急性心肌梗塞的受试者中进行以下的方法：377.(i)相对于对照减少梗塞面积(例如，梗塞面积的体积)；378.(ii)保留心脏组织的完整性；379.(iii)减少或抑制纤维化；380.(iv)抑制胞外基质降解标志物的表达；381.(v)减少、降低风险或抑制错误的心脏重塑；382.(vi)诱导心脏保护；383.(vii)减少或抑制胞外基质降解；384.(viii)改善或促进心脏重塑；385.(ix)保留心室解剖；386.(x)保留心脏功能；387.(xi)减少梗塞的进展；388.(xii)改善心肌修复；389.(xiii)增加或恢复心室收缩力；或者390.(xiv)其任何组合；391.所述方法包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。392.在一些方面，相对于尚未施用过本公开的适体(例如，aptoll)的受试者中的表达，患有急性心肌梗塞的受试者(包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll))中mmp-9的表达减少了至少约10％，至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、在至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。393.在一些方面，本公开提供了用于选择患有急性心肌梗塞的受试者以施用本公开的适体(例如，aptoll)的方法，所述方法包括测量受试者的mmp-9的表达水平(例如，蛋白质表达水平、mrna表达水平或其组合)，并且如果mmp-9相对于对照值(例如，未用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的受试者的观察值或标准正常表达值)升高，则施用本公开的适体(例如，aptoll)。394.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量施用于患有急性心肌梗塞的人受试者。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有急性心肌梗塞的人受试者：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。395.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的患有急性心肌梗塞的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有急性心肌梗塞的人受试者：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约14mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。396.在一些方面，本公开提供预防、抑制、遏制或延迟有需要的受试者的神经肌肉或神经退行性疾病或病状例如多发性硬化症的症状和/或后遗症的发作，包括向所述受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)在神经肌肉或神经退行性疾病或病状的症状发作之后约24小时施用于受试者。在一些方面，向受试者施用单剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，向受试者施用超过一个剂量的本公开的适体(例如，aptoll)，例如，两个剂量、三个剂量、四个剂量或五个剂量。397.在一些方面，向患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)：(i)使临床评分改善；(ii)使体重减轻(体重恢复)减少；(iii)使髓鞘再生；(iv)使轴突损伤减少；(v)使炎症减少；(vi)使脱髓鞘减少；(vii)使髓鞘面积增加；(viii)使神经丝增加；或者(ix)任何组合。因此，在一些方面，本公开提供了一种用于使患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的受试者发生如下变化的方法：(i)改善临床评分；(ii)减少体重减轻(恢复体重)；(iii)髓鞘再生；(iv)减少轴突损伤；(v)减少炎症；(vi)减少脱髓鞘；(vii)增加髓鞘面积；(viii)增加神经丝；或者(ix)任何组合，所述方法包括向所述受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，髓鞘再生可以通过测量如pdgfrα、cc1、oligo2或其组合等生物标志物的水平来确定。398.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量施用于患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。399.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。400.还提供了用于预防、抑制、遏制或延迟受试者的包括原发性和继发性脱髓鞘如中风或颅脑外伤(创伤性脑损伤)的病理学症状和/或后遗症的发作的方法，所述方法包括向所述受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。401.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量施用于患有中风或创伤性脑损伤的人受试者。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有中风或创伤性脑损伤的人受试者：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。402.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的患有中风或创伤性脑损伤的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有中风或创伤性脑损伤的人受试者：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约14mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。403.iii.对tlr-4具有特异性的适体404.本公开的方法中使用的适体具有与定位于tlr-4的胞外结构域上的至少一个表位特异性结合并抑制tlr-4的能力。本公开的适体的具体实例在表1中呈现。在一些方面，本公开的适体是表1中公开的适体的变体和/或衍生物。405.表1.对tlr-4具有特异性的示例性适体[0406][0407]表1的适体的长度介于45个核苷酸到78个核苷酸之间。a含量的范围为约17％到约27％。t含量的范围为约17％到约28％。g含量的范围为约21％到约33％。c含量的范围为约20％到约34％。[0408]在一些方面，本公开的适体是如下文公开的经化学修饰的适体。在一些方面，本公开的适体是这样的dna和/或rna适体(例如，ssdna适体)：其可以以特异性结合并抑制表1中公开的适体的tlr-4的能力的至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％特异性结合并抑制tlr-4。[0409]在一些方面，本公开的适体包括表1中公开的序列的5'处的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、160、180、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000或更多个核苷酸，其中所述适体能够特异性结合并抑制tlr-4。[0410]在一些方面，本公开的适体包括表1中公开的序列的3'处的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、160、180、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000或更多个核苷酸，其中所述适体能够特异性结合并抑制tlr-4。[0411]在一些方面，本公开的适体包括与表1中公开的序列具有至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％序列同一性的核酸序列，其中所述适体能够特异性结合并抑制tlr-4。[0412]在一些方面，本公开的适体由介于约30与约200个核苷酸之间、介于约35与约150个核苷酸之间、介于约40与约100个核苷酸之间、介于约45与约80个核苷酸之间、介于约40与约50个核苷酸之间、介于约35与约55个核苷酸之间、介于30与约60个核苷酸之间、介于约35与约65个核苷酸之间、介于约40与约70个核苷酸之间、介于约75与约85个核苷酸之间、介于约70与约90个核苷酸之间、介于约65与约95个核苷酸之间、介于约60与约100个核苷酸之间、介于约55与约95个核苷酸之间、介于约50与约90个核苷酸之间、介于约45与约85个核苷酸之间、介于约50与约80个核苷酸之间、介于约55与约75之间或介于约60与约75个核苷酸之间的核酸序列(例如，ssdna)组成。[0413]在一些方面，本公开的适体可以与至少一个生物活性分子共价或非共价连接。在一些方面，生物活性分子可以与tlr-4特异性结合。在一些方面，生物活性分子包括例如抗体或其抗原结合片段、小分子、肽、适体、脂质、脂多糖、多糖、酶或核酸。在一些方面，生物活性分子包括包含抗炎剂。[0414]在一些方面，生物活性分子是选自由以下组成的组的tlr-4拮抗剂：纳洛酮、( )-纳洛酮、纳曲酮、( )-纳曲酮、脂多糖(lps)、异丁司特、丙戊茶碱、阿米替林、酮替芬、环苯扎林、米安色林、丙咪嗪、脂质a类似物(例如，依立托伦或e5531)、松属素、十六酰胺乙醇、他喷他多、聚丙醚亚胺树枝状葡萄糖胺(dg)、氨基烷基氨基葡萄糖4-磷酸(例如，crx-526)、iaxo-102、rs-lps、tlr-in-c34、tak-242、e5564或其任何组合。[0415]在一些方面，生物活性分子包括抗血小板药物，例如阿司匹林或氯吡格雷。在一些方面，生物活性分子包括抗凝剂，例如肝素、醋苯马酚、华法林、达比加群或利伐沙班。在一些方面，生物活性分子包括抗氧化剂，例如依达拉奉。在一些方面，生物活性分子是组织纤溶酶原活化剂。[0416]在一些方面，生物活性分子是β阻滞剂，例如美托洛尔(metoprolol)或卡地洛尔(cavedilol)、ace抑制剂、他汀类药物或醛固酮拮抗剂，例如安体舒通(spironolactone)或依普利酮(eplerenone)。[0417]在一些方面，生物活性分子包括核酸(例如，反义rna、反义dna和小干扰rna)，其具有使涉及通过tlr-4的表达增加和/或tlr-4的活化增加表征的病理的基因的表达沉默的能力，包含但不限于nfkb1、ripk3、ifnb1、ly96(md-2)、irf3、tlr3、tirap(mai)、ticam1(trif)、ripk1、traf6、cd14、tram、ikbkg(ikk-γ)、ifna1和tlr4基因。在本公开的上下文中，术语“反义rna”是指单链rna，其核苷酸序列与靶信使rna互补，从而干扰相应基因的表达。在本公开的上下文中，术语“反义dna”是指单链dna，其核苷酸序列与靶信使rna互补，从而干扰相应基因的表达或使所述表达沉默。在本公开的上下文中，术语“小干扰rna”或“sirna”是指长度为20到25个核苷酸的双链rna，其对其靶信使rna的核苷酸序列具有高度特异性，从而干扰相应基因的表达。[0418]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)对λ-核酸外切酶的降解具有抗性。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)对λ-核酸外切酶的降解具有抗性，例如，在与核酸酶一起温育至少约5分钟、至少约15分钟、至少约30分钟、至少约1小时、至少2小时或至少约4小时之后。[0419]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)抑制或减少由lps(脂多糖)介导的tlr-4活化，例如，如使用本领域已知的方法使用表达htlr-4的hek-blue-htlr-4细胞以及tlr-4共活化蛋白md2和cd14测量的。在一些方面，与在对照病状下例如在没有施用本公开的适体(例如，aptoll)的情况下观察到的作用相比，此类活化减少为至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。[0420]在一些方面，如使用本领域已知的方法以及食蟹猴和人单核细胞所测量的，本公开的适体(例如，aptoll)对人tlr-4的结合亲和力为30-60nm。在一些方面，本公开的适体对人tlr-4的结合亲和力为至少约20nm、至少约25nm、至少约30nm、至少约35nm、至少约40nm、至少约45nm、至少约50nm、至少约55nm、至少约60nm、至少约65nm或至少约70nm。[0421]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)抑制由损伤相关分子模式(damp)诱导的tlr-4活化，例如，如使用本领域已知的方法使用表达htlr-4的hek-blue-htlr-4细胞以及tlr-4共活化蛋白md2和cd14测量的。damp(损伤相关分子模式)是在损伤条件下在脑实质中释放的组织分子，如热休克蛋白、核酸、纤连蛋白或透明质酸。因此，在一些方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，本公开的适体可以通过内源性tlr-4激动剂(例如，damp)使tlr-4活化抑制至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。[0422]在一些方面，如使用本领域已知的方法测量的，本公开的适体诱导例如由lps刺激的鼠腹膜巨噬细胞中的下游tlr-4细胞效应子如nox水平的降低。在一些方面，在一些方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，本公开的适体的施用诱导nox水平降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。[0423]在一些方面，本公开的适体对tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr7、tlr8或tlr9人toll受体没有可检测的激动作用，并且对tlr2和tlr5没有拮抗作用。[0424]在一些方面，tlr-4受体在与本公开的适体结合之后被内化，例如，如使用本领域已知的方法在人巨噬细胞中测量的。在一些方面，包括本公开的结合适体的tlr-4受体在适体与tlr-4结合之后大约20分钟被内化到细胞质中。[0425]在一些方面，在本公开的适体与tlr-4结合后tlr-4内化之后，在细胞表面检测到能够结合本公开的适体的新tlr-4受体(即，内化的tlr-4再循环到质膜)，例如，如使用本领域已知的方法在人巨噬细胞中测量的。[0426]在一些方面，在本公开的适体与tlr-4结合后tlr-4内化之后大约5小时，在细胞表面上检测到能够结合本公开的适体的新tlr-4受体。[0427]在一些方面，向ipsc衍生的皮质谷氨酰胺能(80％)和gaba能(20％)神经元施用本公开的适体使对神经元没有可检测的毒性。[0428]在一些方面，向有需要的受试者施用本公开的适体使促炎细胞因子减少。在一些方面，促炎细胞因子选自由以下组成的组：白介素-6(il-6)、干扰素-γ(ifn-γ)、肿瘤坏死因子α(tnf-α)、白介素-12p70(il-12p70)以及其任何组合。[0429]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使干扰素-γ(ifn-γ)水平降低至少约5％、至少约10％、至少15％、至少约20％或至少约25％。[0430]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使白介素-12p70(il-12p70)水平降低至少约5％、至少约10％、至少15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％或至少约35％。[0431]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使肿瘤坏死因子α(tnf-α)水平降低至少约5％、至少约10％或至少约15％。[0432]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使白介素-6(il-6)水平降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少45％或至少约50％。[0433]在一些方面，本公开的适体可以跨血脑屏障(bbb)转运。在一些方面，本公开的适体可以在bbb受到损害之后，例如由于出血性或缺血性事件而跨bbb转运。因此，在一些方面，本公开的适体不能跨过健康受试者的bbb。[0434]在一个具体方面，本公开的适体是aptoll。如本文所用，术语“aptoll”是指与包括seqidno:1的序列的tlr-4特异性结合的核酸(单链dna，ssdna)适体。在特定方面，术语aptoll是指seqidno:1的结构化核酸适体。如本文所用，术语“结构化核酸适体”或“结构化适体”是指已通过暴露于变性条件(例如，高温，如95℃，例如持续10分钟)而线性化并随后在低温(例如，通过浸入冰中，例如持续10分钟)下重折叠使得其获取允许结构化适体(例如，aptoll)与其靶标(例如，tlr-4胞外结构域上的表位)之间发生相互作用的三级结构的核酸适体。参见图1。[0435]aptoll的化学式为c575h723n223o351p58，并且其分子量为18,170.80da。aptoll的分子序列已通过受控酶消化然后ms-ms(质谱法)测序被证实。通过在体外测定中证实预期的生物活性，已经评估了正确的结构。为了采用其生物活性构象，将适体溶解在pbs-1mmmgcl2中，并且溶解之后，适体必须加热至95℃持续约10分钟，并且然后在冰上快速冷却约10分钟。这种缓冲溶液和条件支持适体结构和其生物活性。[0436]研究医药产品(imp)aptoll的剂型对应于输注用溶液的浓缩物的粉剂，所述粉剂由要用注射用水重组并且进一步用盐水溶液稀释以供其静脉施用的冻干粉剂组成。[0437]aptoll已证明与人tlr-4的特异性结合以及tlr4拮抗作用。aptoll已示出，例如，对中动脉闭塞(mcao)诱导的脑损伤具有持久的保护作用。另外地，aptoll在脑缺血再灌注模型中的功效支持此适体在经历由药物和/或机械干预诱导的动脉再通的患者中使用。[0438]临床前药代动力学研究证明，在0.45到2mg/kg剂量范围内，大鼠中的aptoll的cmax值似乎通过不依赖剂量的(线性)动力学表征，并且在0.45到2mg/kg剂量范围内，雌性大鼠全身暴露于aptoll的程度似乎通过非线性(剂量依赖性)动力学表征。将aptoll的剂量增加高于0.45mg/kg可能导致比线性关系预测的更低的全身暴露，这与更高剂量水平下对aptoll的血浆清除率增加的可能性一致。已经进行了药效学、安全药理学、药代动力学和毒理学非临床研究，以表征三个物种的aptoll：小鼠(c57bl6，icr)、大鼠(威斯塔和斯普拉格道利(sd))和nhp(非人灵长类动物；食蟹猴)。由于受体人类同源性和tlr4药理学，选择了这些物种。[0439]在体外和体内进行的药效学表征表明，aptoll与人和非人灵长类动物(nhp)的tlr-4的结合的ka为大约30到60nm，并且还表明aptoll不与其它tlr结合。[0440]本公开的适体(例如，aptoll)的体内药效学表征表明，在向患有急性缺血性中风的受试者施用适体之后，可以观察到例如至多65.5％的梗塞体积减少。已观察到至多12小时的治疗窗口。多剂量施用本公开的适体，例如aptoll，通常比单剂量施用提供更好的保护。向患有急性缺血性中风的受试者施用本公开的适体，例如aptoll，使短期和长期的神经学结果改善。实验观察已经证实，向有需要的受试者施用本公开的适体，例如aptoll，使炎症级联阻断。此外，本公开的适体(例如，aptoll)的施用未示出与静脉内rt-pa的任何药物-药物相互作用。[0441]生物分布研究表明，静脉注射之后1小时，aptoll主要存在于原初受试者和缺血性受试者两者中的肾脏、脾脏和肝脏中。注射之后24小时，几乎检测不到aptoll水平。在生理条件下，aptoll不能在健康受试者中跨过bbb。然而，aptoll能够在经历过缺血性事件的个体中跨过bbb。当在缺血性事件之后施用时，aptoll主要存在于受试者大脑的同侧半球(即，遭受缺血性事件的半球)中。[0442]aptoll的代谢和分布已在体外和体内确定。aptoll在施用之后几分钟被血浆中的核酸外切酶降解。未检测到药物相互作用或转运蛋白或细胞色素的抑制。在sd大鼠中进行的体内调节药代动力学研究表明tmax在给药后1分钟达到；cmax在介于0.45mg/kg与2mg/kg之间的剂量范围内示出了线性动力学，而暴露(auct)在相同剂量范围内呈现出非线性动力学。[0443]在一些特定方面，aptoll以1瓶7mg冻干粉剂的形式呈现，所述冻干粉剂用3ml水重组以生成aptoll浓缩物，所述浓缩物进一步用100ml0.9％氯化钠溶液稀释。所得溶液可以静脉内施用，例如通过输注泵施用。在一些方面，aptoll施用作为单剂量发生。在其它方面，施用多剂量。在一些方面，aptoll输注的持续时间为大约30分钟。[0444]在一些方面，当aptoll输注作为血栓切除术手术的一部分施用时，aptoll输注在包括rt-pa(重组组织纤溶酶原活化剂；阿替普酶)施用的静脉内溶栓之后立即施用，如果适当的话，并且在血栓切除术之前施用。[0445]iv.经化学修饰的适体[0446]本公开的适体(例如，aptoll)可以被化学修饰以变得极其稳定或者可以被进一步截短以消除对于与靶标的相互作用或对于正确的三维适体结构不重要的寡核苷酸序列。本公开的适体可以呈未经修饰的单链dna(ssdna)适体的形式，例如用于治疗急性缺血性中风和本文公开的其它疾病和病状，由于其快速的药代动力学和低毒性特征。然而，为了扩展例如本公开的适体的治疗性和/或保护性作用，适体可以进行旨在增加例如其对核酸酶降解的抗性和/或其在循环中的半衰期的修饰。[0447]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)包括至少一种经化学修饰的核苷和/或核苷酸。当本公开的适体被化学修饰时，适体可以被称为“经修饰的适体”。[0448]“核苷”是指含有糖分子(例如，戊糖或核糖)或其衍生物与有机碱(例如，嘌呤或嘧啶)或其衍生物(在本文中也被称为“有机碱基”)组合的化合物。[0449]“核苷酸”是指包含磷酸基团的核苷。经修饰的核苷酸可以通过任何有用的方法合成，例如化学、酶促或重组，以包含一种或多种经修饰的或非天然核苷。[0450]本公开的适体可以包括所连接核苷的一个或多个区域。此类区域可以具有可变骨架键。所述键可以是标准磷酸二酯键，在所述情况下适体将包括核苷酸区域。[0451]本文公开的经修饰的适体可以包括各种不同的修饰。在一些方面，经修饰的适体含有一种、两种或更多种(任选地不同的)核苷或核苷酸修饰。在一些方面，与对应的未经修饰的适体相比，经修饰的适体可以表现出一种或多种期望的性质，例如改善的热稳定性或化学稳定性、降低的免疫原性、减少的降解、增加与tlr-4靶表位的结合、减少与tlr-4的其它区域或其它分子的非特异性结合，例如其它toll样受体。[0452]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)被化学修饰。如本文所用，关于多核苷酸，术语“化学修饰”或适当时“经化学修饰的”是指关于腺苷(a)、鸟苷(g)、尿苷(u)、胸苷(t)或胞苷(c)核糖或脱氧核糖核苷在其位置、模式、百分比或群体中的一项或多项，包含但不限于其核碱基、糖、骨架或其任何组合的修饰。[0453]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)可以具有所有或任何相同核苷类型或通过在所有或任何相同核苷类型中向下滴定相同起始修饰产生的修饰群体的统一化学修饰，或所有任何相同核苷类型但随机掺入的化学修饰的测量百分比。在另一方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)可以具有贯穿整个多核苷酸(如所有腺苷和/或所有胞苷等以相同方式修饰)的两个、三个或四个相同核苷类型的统一化学修饰。[0454]经修饰的核苷酸碱基配对不仅涵盖标准的腺嘌呤-胸腺嘧啶、腺嘌呤-尿嘧啶或鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对，还涵盖核苷酸和/或经修饰的核苷酸之间形成的包括非标准或经修饰的碱基的碱基对，其中氢键供体和氢键受体的排列允许非标准碱基与标准碱基之间或两个互补的非标准碱基结构之间的氢结合。此类非标准碱基配对的一个实例是经修饰的核碱基肌苷与腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之间的碱基配对。碱基/糖或接头的任何组合可以并入本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)种。[0455]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的核碱基、糖、骨架键或其任何组合被修饰至少约5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％。[0456]1.碱基修饰[0457]在某些方面，化学修饰处于本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的核碱基处。在一些方面，至少一种经化学修饰的核苷是经修饰的尿苷(例如，假尿苷(ψ)、2-硫尿苷(s2u)、1-甲基-假尿苷(m1ψ)、1-乙基-假尿苷(e1ψ)或5-甲氧基-尿苷(mo5u))、经修饰的胞嘧啶(例如，5-甲基-胞苷(m5c))、经修饰的腺苷(例如，1-甲基-腺苷(m1a)、n6-甲基-腺苷(m6a)或2-甲基-腺嘌呤(m2a))、经修饰的鸟苷(例如，7-甲基-鸟苷(m7g)或1-甲基-鸟苷(m1g))或其组合。[0458]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)针对特定修饰被统一修饰(例如，完全修饰、在整个序列中修饰)。例如，多核苷酸可以用相同类型的碱基修饰例如5-甲基-胞苷(m5c)统一修饰，这意味着多核苷酸序列中的所有胞嘧啶残基都用5-甲基-胞苷(m5c)替代。类似地，多核苷酸可以通过用经修饰的核苷(例如上文所述的那些中的任一种)替代而针对序列中存在的任何类型的核苷残基进行统一修饰。[0459]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80或超过80个经修饰的核碱基的组合。在一些方面，本公开的多核苷酸中至少约5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的一种类型的核碱基(例如，适体如aptoll)是经修饰的核碱基。[0460]2.骨架修饰[0461]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)包含对核苷之间的键的任何有用的修饰。可用于本公开的组合物中的此类键，包含骨架修饰，包含但不限于以下：3'-亚烷基膦酸酯、3'-氨基氨基磷酸酯、含烯烃的骨架、氨基烷基磷酸酯、氨基烷基磷酸三酯、硼酸磷酸酯、-ch2-o-n(ch3)-ch2-、-ch2-n(ch3)-n(ch3)-ch2-、-ch2-nh-ch2-、手性膦酸酯、手性硫代磷酸酯、甲乙酰基和硫代甲乙酰基骨架、亚甲基(甲基亚氨基)、亚甲基甲乙酰基和硫代甲乙酰基骨架、亚甲基亚氨基和亚甲基肼基骨架、吗啉键、-n(ch3)-ch2-ch2-、具有杂原子核苷间键的寡核苷、次膦酸盐、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代磷酸酯核苷间键、硫代磷酸酯、磷酸三酯、pna、硅氧烷骨架、氨基磺酸酯骨架、硫化亚砜和砜骨架、磺酸酯和磺酰胺骨架、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯和硫代磷酰胺。[0462][0463]在一些方面，上文公开的骨架键的存在增加了本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)的稳定性(例如，热稳定性)和/或对降解(例如，酶降解)的抗性。[0464]在一些方面，与没有修饰的对应多核苷酸(参考或对照适体)相比，本公开的经修饰的多核苷酸(例如，适体)的稳定性和/或对降解(例如，核酸酶的降解)的抗性增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。[0465]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的骨架键被修饰(例如，所有骨架键都是硫代磷酸酯)。[0466]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80或超过80个骨架键被修饰(例如，硫代磷酸酯)。[0467]在一些方面，骨架包括选自由以下组成的组的键：磷酸二酯键、磷酸三酯键、甲基膦酸酯键、氨基磷酸酯键、硫代磷酸酯键以及其组合。[0468]3.糖修饰[0469]可以并入本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的经修饰的核苷和核苷酸可以在核酸的糖上进行修饰。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)包括至少一种核苷类似物(例如，具有糖修饰的核苷)。[0470]在一些方面，糖修饰增加了本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)与其靶表位的结合的亲和力。在本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中并入亲和力增强的核苷酸类似物，如lna或2'-经取代的糖，可以允许减少本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)的长度，并且还可以在非特异性或异常结合发生之前减小本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)的大小的上限。[0471]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的核苷酸含有糖修饰(例如，lna)。[0472]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80或超过80个核苷酸单位是糖修饰的(例如，lna)。[0473]通常，rna包含糖基核糖，其是具有氧的5元环。示例性的、非限制性的经修饰的核苷酸包含替代核糖中的氧(例如，用s、se或亚烷基，如亚甲基或亚乙基)；添加双键(例如，用环戊烯基或环己烯基替代核糖)；对核糖进行环收缩(例如，以形成环丁烷或氧杂环丁烷的4元环)；对核糖进行扩环(例如，以形成具有另外碳或杂原子的6元或7元环，如针对脱水己糖醇、阿曲糖醇、甘露糖醇、环己基、环己烯基和也具有氨基磷酸酯骨架的吗啉代)；多环形式(例如，三环；以及“解锁”形式，如二醇核酸(gna)(例如，r-gna或s-gna，其中核糖被与磷酸二酯键连接的二醇单元取代)、苏糖核酸(tna，其中核糖用α-l-呋喃苏糖基-(3′→2′)替代)和肽核酸(pna，其中2-氨基-乙基-甘氨酸键取代核糖和磷酸二酯骨架)。糖基还可以含有具有与核糖中对应碳的立体化学构型相反的立体化学构型的一个或多个碳。因此，多核苷酸分子可以包含含有例如阿拉伯糖作为糖的核苷酸。[0474]核糖的2'羟基(oh)可以用许多不同的取代基修饰或替代。2'-位处的示例性取代包含但不限于h、卤素、任选地经取代的c1-6烷基；任选地经取代的c1-6烷氧基；任选地经取代的c6-10芳氧基；任选地经取代的c3-8环烷基；任选地经取代的c3-8环烷氧基；任选地经取代的c6-10芳氧基；任选地经取代的c6-10芳基-c1-6烷氧基、任选地经取代的c1-12(杂环基)氧基；糖(例如，核糖、戊糖或本文所描述的任何糖)；聚乙二醇(peg)、-o(ch2ch2o)nch2ch2or，其中r是h或任选地经取代的烷基，并且n是0到20的整数(例如，0到4、0到8、0到10、0到16、1到4、1到8、1到10、1到16、1到20、2到4、2到8、2到10、2到16、2到20、4到8、4到10、4到16和4到20)；“锁”核酸(lna)，其中2'-羟基通过c1-6亚烷基或c1-6杂亚烷基桥连接到相同核糖的4'-碳，其中示例性桥包含亚甲基、丙烯、醚、氨基桥、氨基烷基、氨基烷氧基、氨基和氨基酸。[0475]在一些方面，本公开的多核苷酸中存在的核苷类似物(例如，适体如aptoll)包括例如2'-o-烷基-rna单元、2'-ome-rna单元、2'-o-烷基-sna、2'-氨基-dna单元、2'-氟-dna单元、lna单元、阿拉伯糖核酸(ana)单元、2'-氟-ana单元、hna单元、ina(嵌入核酸)单元、2'moe单元或其任何组合。在一些方面，lna是例如氧基-lna(如β-d-氧基-lna或α-l-氧基-lna)、氨基-lna(如β-d-氨基-lna或α-l-氨基-lna)、硫代-lna(如β-d-硫代-lna或α-l-硫代-lna)、ena(如β-d-ena或α-l-ena)或其任何组合。[0476]在一些方面，本公开的多核苷酸中存在的核苷类似物(例如，适体如aptoll)包括锁核酸(lna)；2'-o-烷基-rna；2'-氨基-dna；2'-氟代-dna；阿拉伯糖核酸(ana)；2'-氟代-ana、己糖醇核酸(hna)、嵌入核酸(ina)、受限乙基核苷(cet)、2'-o-甲基核酸(2'-ome)、2'-o-甲氧基乙基核酸(2'-moe)或其任何组合。[0477]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)可以包括经修饰的rna核苷酸类似物(例如，lna)和dna单元两者。参见例如美国专利第8,404,649号；第8,580,756号；第8,163,708号；第9,034,837号；所有这些申请均通过引用整体并入本文。[0478]v.制造和调配方法[0479]本公开还提供了制备本公开的适体(例如，aptoll)的方法。通常，本公开的适体可以使用美国专利第10,196,642号中公开的方法获得，并且使用其中描述的方法或本领域公知的方法合成。[0480]本公开的适体(例如，aptoll)的产生可以按照本领域的常规方法进行。用于产生适体的技术的非限制性实例包含酶促技术，如转录、重组表达系统和标准固相(或溶液相)化学合成，所有这些都可商购获得。在适当时，例如，如果本公开的适体包括核酸变体如上文描述的那些核酸变体、核苷酸类似物如具有经化学修饰的碱基或糖、骨架修饰等的类似物，则本发明的适体可以是通过化学合成产生的。可替代地，当适体的长度为例如200个核苷酸或更多时，重组表达可以是用于产生本公开的适体的优选技术。通过或任何前述技术产生的适体可以任选地通过本领域公知的方法纯化。[0481]如本文所用，术语“合成”是指使用本领域已知的多核苷酸合成方法组装适体。术语合成还涵盖包括本公开的适体(例如，aptoll)和至少一种生物活性分子(例如，与适体共价或非共价连接的小分子药物)的缀合物或复合物的组装。例如，肽或小分子组分可以重组、化学或酶促制备，并且随后在一个或多个合成步骤中与适体(例如，aptoll)缀合(例如，将接头与本公开的适体缀合，然后是小分子与接头的缀合)。在一些方面，包括本公开的至少一种适体(例如，aptoll)的缀合物或复合物的组分中的每种组分可以使用本领域已知的方法制备，例如重组蛋白产生、固相肽或核酸合成、化学合成、酶促合成或其任何组合，并且所得组分可以使用本领域已知的化学和/或酶促方法缀合。[0482]本公开的适体(例如aptoll)可以例如通过过滤被纯化，以去除污染物。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的制造包括冻干或适合重组的任何其它形式的干燥储存。在一些方面，呈干燥形式的适体的制备发生在适体(例如，aptoll)与生物活性分子(例如，小分子药物)的组合之后，即两种治疗剂可以共冻干。[0483]在一些方面，制备包括本公开的适体(例如，aptoll)与生物活性分子(例如，小分子药物)的组合物的方法包括将适体与生物活性分子(例如，小分子药物)在溶液中混合。在一些方面，在适体(例如，aptoll)和生物活性分子(例如，小分子药物)在溶液中组合之后，将所得溶液冻干或干燥。在一些方面，适体(例如，aptoll)和生物活性分子(例如，小分子药物)的组合以干燥形式进行。[0484]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以被纯化，例如以去除污染物和/或产生一致的适体群体。[0485]本公开还提供了包括本公开的适体例如aptoll的调配物。本公开的适体可以根据图20中示意性描绘的方法调配。适体api(活性药物成分)与包括先前过滤的赋形剂的溶液组合。在结构化阶段之后，包括适体(例如，aptoll)和赋形剂的溶液经受两个过滤步骤，转移到小瓶中并冻干。结构化步骤是制备适体(例如，aptoll)的关键步骤。结构化过程包括将适体溶解在适当的溶剂中。在一些方面，溶剂包括二价离子。在一些方面，二价离子是mg2 。在一些方面，溶剂是包括mgcl2的磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在一些方面，溶剂是包括1mmmgcl2的pbs。在适体(例如，aptoll)已经溶解之后，将其加热到变性温度(例如，95℃)持续一定短时间段(例如，大约10分钟)，然后快速冷却(例如，通过转移到冰，例如，在大约10分钟期间)。在一些方面，适体(例如，aptoll)在没有加热和冷却步骤的情况下不起作用。[0486]合成之后，本公开的适体(例如，aptoll)是线性的。增加温度使适体完全线性化，而随后的冷却使适体正确折叠，从而产生功能性适体。在一些方面，如果加热和冷却步骤不在存在二价离子例如mg2 的情况下进行，则本公开的适体(例如，aptoll)不起作用。在本公开的特定方面，本公开的适体(例如，aptoll)没有治疗功能，除非所述适体已经溶解在含有mg2 (例如，1mmmgcl2)的缓冲液中，在95℃下加热10分钟，并且随后在冰中在0℃下冷却10分钟。[0487]本公开的适体(例如，aptoll)的制造过程包括两个冻干步骤。在第一步骤中，pbs中的结构化适体(例如，本公开的适体)被冻干。将冻干的适体(例如，aptoll)重新溶解在缓冲液(例如，pbs)中，并冻干。相对于经历单个冻干步骤的相同适体，第二次冻干增加了本公开的适体(例如，aptoll)的稳定性。[0488]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以包括7mg的适体例如结构化和冻干适体的剂量调配。在其它方面，本公开的适体以包括至少约1mg、至少约2mg、至少约3mg、至少约4mg、至少约5mg、至少约6mg、至少约7mg、至少约8mg、至少约9mg或至少约10mg的本公开的适体(例如，aptoll)的剂量调配。[0489]在一些方面，本公开的适体可以以例如纳米颗粒如聚合物纳米颗粒、脂质纳米颗粒(例如，脂质体或胶束)或金属纳米颗粒的形式调配，所述适体包括与纳米颗粒共价或非共价连接(例如，包封在纳米颗粒中)的本公开的适体。参见例如美国专利第10,196,642号，所述美国专利通过引用整体并入本文。[0490]如上文所描述的，本公开的适体可以与生物活性分子和/或与纳米颗粒(例如，形成的纳米颗粒或纳米颗粒的组分)共价或非共价连接。本公开的适体(例如，aptoll)与生物活性分子和/或纳米颗粒之间的共价连接可以通过本领域技术人员公知的缀合技术进行。结果是本公开的适体与生物活性分子和/或纳米颗粒或其组分之间的共价键。缀合可以涉及在适体的化学合成期间本公开的适体的3'端或5'端的伯胺与官能团的结合。[0491]缀合也可以通过常规的交联反应进行，其优点是伯烷基胺标记相对于核苷酸本身的芳基胺具有更高的化学反应性。缀合方法是本领域公知的并且基于交联剂的使用。交联剂含有至少两个反应性基团，其靶向生物活性分子和/或纳米颗粒中的基团，如伯胺、巯基、醛、羧基、羟基、叠氮化物等，以与本公开的适体缀合。[0492]交联剂的不同之处在于其化学特异性、间隔臂长度、间隔臂组成、切割间隔臂和结构。例如，生物活性分子和/或纳米颗粒或其组分与本公开的适体的缀合可以直接或通过连接部分、通过适体中的一个或多个非官能团和/或官能团如胺、羧基、苯基、硫醇或羟基进行。通过使用异双功能接头可以实现更具选择性的键。可以使用常规接头，如二异氰酸酯、二异硫氰酸酯、双(羟基琥珀酰亚胺)酯、碳二亚胺、马来酰亚胺-羟基琥珀酰亚胺酯、戊二醛等，或肼和酰肼，如4-(4-n-马来酰亚胺苯基)丁酸酰肼(mpbh)。[0493]在一些方面，缀合可以在通过重组或酶促方法产生本公开的适体之后发生。[0494]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)在小瓶中调配，其中每个剂量小瓶包括每小瓶约0.5、约1、约1.5、约2、约2.5、约3、约3.5、约4、约4.5、约5、约5.5、约6、约6.5、约7、约7.5、约8、约8.5、约9、约9.5或约10mg的本公开的适体(例如，aptoll)。在一个具体方面，每个剂量小瓶包括每小瓶7mg的本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，小瓶的内容物是本公开的冻干的适体(例如，aptoll)。[0495]vi.药物组合物[0496]本公开还提供了包括本公开的一种或多种适体(例如，aptoll)的药物组合物，其适于根据本文公开的方法(例如，针对本文公开的任何疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风的方法)向受试者施用。[0497]所述药物组合物通常包括一种或多种具有期望纯度的本公开的适体(例如，aptoll)，以及呈适合向受试者施用的形式的药学上可接受的赋形剂或载体。药学上可接受的赋形剂或载体部分地由所施用的特定组合物以及通过用于施用组合物的特定方法来确定。因此，存在包括本公开的一种或多种适体的多种合适的药物组合物调配物(参见例如，《雷明顿氏医药科学》,马克出版公司,宾夕法尼亚州伊斯顿第18版(1990))。药物组合物通常是无菌调配的并且完全符合美国食品和药物管理局的所有良好生产规范(gmp)规定。[0498]在一些方面，药物组合物包括本公开的一种或多种适体(例如，aptoll)。在某些方面，本公开的适体(例如，aptoll)与在药学上可接受的载体中的一种或多种另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)共同施用。在一些方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物在施用另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)之前施用。[0499]在其它方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物在施用另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)之后施用。在另外的方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物与另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)同时施用。[0500]可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者(例如，动物或人)无毒并且包含：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包含抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；氯化苄烷铵、苄索氯铵；酚醇、丁醇或苯甲醇；烷基对羟苯甲酸酯，如甲基或丙基对羟苯甲酸酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如edta；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属复合物(例如，zn-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，如tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。[0501]载体或稀释剂的实例包含但不限于水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。此类介质和化合物用于药物活性物质的用途是本领域公知的。除了在任何常规介质或化合物与本公开的适体不相容的范围内之外，设想了其在组合物中的用途。[0502]适用于治疗或预防(例如，遏制、抑制或延迟)本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)，或适用于改善患有本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)或有患所述疾病或病状的风险的受试者的体内平衡的补充治疗剂也可以并入本公开的组合物中。[0503]通常，药物组合物被调配成与其预期施用途径相容。本公开的适体(例如，aptoll)可以例如通过肠胃外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内或肌肉内途径或作为吸入剂施用。[0504]在某些方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物是例如通过注射静脉内或动脉内施用的。本文所描述的适体(例如，aptoll)可以任选地与在治疗本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)中至少部分有效的其它治疗剂组合施用，本文所描述的适体(例如，aptoll)旨在用于这些疾病或病状。[0505]溶液或悬浮液可以包含以下组分：无菌稀释剂，如水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，如乙二胺四乙酸(edta)；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的化合物，如氯化钠或右旋糖。可以用如盐酸或氢氧化钠等酸或碱调节ph。制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。[0506]适用于注射用途的药物组合物包含无菌水溶液(如果水溶性)或分散体和无菌粉末。对于静脉内或动脉内施用，合适的载体包含生理盐水、抑菌水、cremophoreltm(basf，新泽西州帕西波尼)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)。组合物通常是无菌的并且具有达到易于注射的程度的流动性。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。恰当的流动性可以例如通过使用如卵磷脂等包衣、在分散体的情况下通过维持所需的粒度、以及通过使用表面活性剂来维持。预防微生物的作用可以通过各种抗细菌剂以及抗真菌化合物(例如，对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现。如果期望的话，可以向组合物中添加等渗化合物，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇和氯化钠)。可以通过在组合物中包含延迟吸收的化合物(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。[0507]本公开的药物组合物可以通过常规的、公知的灭菌技术进行灭菌。水溶液可以包装使用或在无菌条件下过滤并冻干，冻干制剂在施用前与无菌水溶液组合。[0508]无菌可注射溶液可以通过将本公开的适体(例如，aptoll)以有效量并在适当的溶剂中与本文列举的一种或多种成分的组合根据需要并入来制备。通常，分散体是通过将本公开的适体(例如，aptoll)并入到含有基本分散介质和任何期望的其它成分的无菌媒剂中来制备的。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法为真空干燥和冷冻干燥，这些干燥产生活性成分加来自其先前经无菌过滤溶液的任何另外的所需成分的粉末。本文所描述的适体(例如，aptoll)可以以贮库注射剂或植入制剂的形式施用，其可以以允许本公开的适体持续或脉动释放的方式进行调配。[0509]包括本文所描述的适体(例如，aptoll)的组合物的全身施用也可以通过经粘膜方式进行。对于经粘膜施用，在调配物中使用适于待被渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域中已知的并且包含例如就经粘膜给予而言洗涤剂、胆盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜给予可以通过使用例如鼻腔喷雾剂来完成。[0510]在某些方面，将包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物静脉内或动脉内施用到将受益于所述药物组合物的受试者中。在某些其它方面，将组合物施用于淋巴系统，例如通过淋巴管内注射、结内注射(参见例如senti等人,《美国国家科学院院刊(pnas)》105(46):17908(2008))、肌内注射、腹膜内或皮下施用。[0511]在某些方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物作为液体悬浮液施用。在某些方面，药物组合物作为在施用后能够形成贮库的调配物施用。在某些优选的方面，贮库缓慢地将适体释放到循环中，或保持贮库形式。[0512]通常，药学上可接受的组合物是高度纯化的，不含污染物，具有生物相容性且无毒，并且适合施用于受试者。如果水是载体的组成部分，则水经过高度纯化和处理，不含污染物，例如内毒素。[0513]药学上可接受的载体可以是乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和/或矿物油，但不限于此。药物组合物可以进一步包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、增味剂、乳化剂、悬浮剂和/或防腐剂。[0514]本文所描述的药物组合物包括本文所描述的适体(例如aptoll)和任选地药物活性剂或治疗剂。治疗剂可以是例如生物剂(例如肽或核酸)、小分子剂或其组合。[0515]提供了包括供根据本文公开的方法使用的本文所描述的适体(例如，aptoll)或药物组合物的剂型。在一些方面，剂型被调配为用于静脉内或动脉内注射的液体悬浮液。[0516]本公开的适体(例如，aptoll)或包括本公开的适体的药物组合物可以与其它疗法(例如，药物和/或外科手术)同时使用。具体而言，本公开的适体(例如，aptoll)或药物组合物可以与通常用于治疗本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的药物一起使用，或与本领域已知的用于治疗此类疾病或病状的药理学和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下，血栓切除术)组合使用。[0517]vii.试剂盒[0518]本公开还提供了试剂盒或制造产品，其包括本公开的适体(例如，本公开的分离的适体或与生物活性分子如aptoll缀合或复合的本公开的适体)和任选地供根据本公开的方法使用的说明书。[0519]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括本公开的药物组合物，其包括在一个或多个容器中的至少一种本公开的适体(例如，aptoll)，以及任选地供根据本公开的方法使用的说明书。[0520]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括本公开的适体(例如，aptoll)，或本公开的药物组合物和手册。在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括本公开的适体(例如，aptoll)或本公开的药物组合物和使用说明书。本领域技术人员将容易地认识到，本公开的适体(例如，aptoll)或药物组合物，或其组合，可以容易地并入到本领域公知的已建立的试剂盒形式之一中。[0521]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括在容器(例如玻璃小瓶)中呈干燥形式的本公开的适体(例如，aptoll)，以及任选地具有适合于使适体水合的溶剂的小瓶，以及任选地，用于根据本文公开的方法使用重组产品的说明书。在一些方面，所述试剂盒或制造产品进一步包括至少一个另外的容器(例如玻璃小瓶)，其包括生物活性分子(例如，第二tlr-4拮抗剂)。[0522]本领域技术人员将容易地认识到，本公开的适体(例如，aptoll)、包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物或其组合可以容易地并入到本领域公知的已建立的试剂盒形式之一中。[0523]在一些方面，所述试剂盒包括用于将生物活性分子与本公开的适体(例如aptoll)缀合的试剂、用于进行缀合的说明书以及用于根据本公开的方法使用缀合物的说明书。[0524]在一些方面，所述试剂盒包括生物活性分子和本公开的适体(例如，aptoll)、用于进行将其混合以形成复合物的说明书以及用于根据本公开的方法使用所得复合物的说明书。[0525]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括呈溶液形式的本公开的适体(例如，aptoll)和用于根据本公开的方法使用的说明书。在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括呈干燥形式的本公开的适体(例如，aptoll)和使用说明书(例如，用于根据本文公开的方法进行重构和施用的说明书)。[0526]viii.实施例[0527]e1.一种治疗有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个剂量的长度为40到80个核碱基的核酸适体，其中所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化。[0528]e2.根据实施例e1所述的方法，其进一步包括施用另外的治疗或其组合。[0529]e3.根据实施例e2所述的方法，其中所述另外的治疗是第二tlr-4拮抗剂。[0530]e4.根据实施例e3所述的方法，其中所述另外的治疗是外科手术干预。[0531]e5.根据实施例e2所述的方法，其中所述另外的治疗包括施用抗炎剂、核酸、肽或其组合。[0532]e6.根据实施例e5所述的方法，其中所述肽包括抗体或其抗原结合片段。[0533]e7.根据实施例e5所述的方法，其中所述核酸包括反义寡核苷酸、抗mir、sirna或shrna。[0534]e8.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体包括与seqid:1、2、3或4或其组合至少70％相同的序列。[0535]e9.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体进一步包括与所述适体共价或非共价连接的生物活性分子。[0536]e10.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体与和seqid:1、2、3或4的核酸适体相同的tlr-4表位交叉竞争或结合。[0537]e11.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体与和由seqid:1、2、3或4的核酸适体识别的tlr-4表位重叠的表位交叉竞争或结合。[0538]e12.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体以包括多剂量的剂量方案施用。[0539]e13.根据实施例e12所述的方法，其中所述多剂量同时、连续或其组合施用。[0540]e14.根据实施例e12所述的方法，其中所述多剂量包括两个、三个、四个或五个剂量。[0541]e15.根据实施例e1所述的方法，其中每个剂量包括介于0.007与0.45mg/kg之间的核酸适体。[0542]e16.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体通过静脉内、动脉内或腹膜内施用。[0543]e17.根据实施例e1所述的方法，其中所述tlr-4介导的疾病或病状是缺血性疾病或病状。[0544]e18.根据实施例e17所述的方法，其中所述缺血性病状是心肌梗塞或缺血性中风。[0545]e19.根据实施例e1所述的方法，其中所述tlr-4介导的疾病或病状是出血性病状。[0546]e20.根据实施例e19所述的方法，其中所述出血性病状是出血性中风或出血性转化。[0547]e21.根据实施例e1所述的方法，其中所述tlr-4介导的疾病或病状是神经肌肉疾病或病状。[0548]e22.根据实施例e21所述的方法，其中所述神经肌肉疾病或病状是神经退行性疾病或病状。[0549]e23.根据实施例e22所述的方法，其中所述神经退行性疾病或病状是多发性硬化症。[0550]e24.一种减轻或改善有需要的受试者的急性心肌梗塞的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括在所述急性心肌梗塞期间、之前或之后立即向所述受试者施用适体，其中[0551](a)所述适体的长度介于40与100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中[0552](i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且[0553](ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者[0554](b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。[0555]e25根据实施例24所述的方法，其中所述适体的所述施用使梗塞面积减少。[0556]e26.根据实施例e25所述的方法，其中与对照病状相比，所述适体的所述施用使梗塞面积减少至少25％。[0557]e27.根据实施例e24所述的方法，其中所述适体的所述施用使由所述急性心肌梗塞引起的纤维化和/或坏死减少。[0558]e28.根据实施例e24所述的方法，其中所述适体的所述施用[0559](i)使心脏功能改善；[0560](ii)使胞外基质降解减少；[0561](iii)使心脏重塑改善；[0562](iv)使心室解剖保存；[0563](v)使梗塞进展减少；或者[0564](vi)其任何组合。[0565]e29.一种减轻或改善有需要的受试者的神经肌肉或神经退行性疾病或病状的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括在所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状的发作期间、之前或之后向所述受试者施用适体，其中[0566](a)所述适体的长度介于40与100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中[0567](i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且[0568](ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者[0569](b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。[0570]e30.根据实施例e29所述的方法，其中所述适体的施用[0571](i)使脱髓鞘减少；[0572](ii)使轴突损伤减少；或者[0573](iii)其组合。[0574]e31.根据实施例e30所述的方法，其中与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使脱髓鞘抑制至少20-80％。[0575]e32.根据实施例e30所述的方法，其中与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使轴突损伤减少至少10-30％。[0576]e33.根据实施例e29所述的方法，其中所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状选自由以下组成的组：心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风。[0577]e34.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体是aptoll。[0578]e35.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体以介于约0.5mg/剂量与约14mg/剂量之间的剂量范围施用。[0579]e36.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体以介于每剂量约0.007mg/kg与每剂量约0.2mg/kg之间的剂量范围施用。[0580]e37.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体在ph7.4的pbs(氯化钠、氯化钾、脱水磷酸氢二钠和磷酸二氢钾)中调配，所述pbs包括六水合氯化镁，并且任选地包括a-海藻糖二水合物。[0581]e38.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体通过输注静脉内施用。[0582]***[0583]除非另有说明，否则本公开的实践将采用在本领域的技术范围内的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组dna和免疫学的常规技术。此类技术在文献中有充分解释。参见例如，sambrook等人,编辑(1989)《分子克隆：实验室手册(molecularcloningalaboratorymanual)》(第2版；冷泉港实验室出版社(coldspringharborlaboratorypress))；sambrook等人,编辑(1992)《分子克隆：实验室手册》,(纽约冷泉港实验室出版社)；d.n.glover编辑,(1985)《dna克隆(dnacloning)》,第i卷和第ii卷；gait,编辑(1984)《寡核苷酸合成(oligonucleotidesynthesis)》；mullis等人美国专利第4,683,195号；hames和higgins,编辑(1984)《核酸杂交(nucleicacidhybridization)》；hames和higgins,编辑(1984)《转录和翻译(transcriptionandtranslation)》；freshney(1987)《动物细胞培养(cultureofanimalcells)》(alanr.liss公司)；《固定化细胞和酶(immobilizedcellsandenzymes)》(irl出版社)(1986)；perbal(1984)《分子克隆实用性指南(apracticalguidetomolecularcloning)》；论文《酶学方法(methodsinenzymology)》(学术出版社公司,纽约)；miller和calos编辑(1987)《哺乳动物细胞的基因转移载体(genetransfervectorsformammaliancells)》,(泉港实验室出版社)；wu等人,编辑,《酶学方法》,第154卷和第155卷；mayer和walker,编辑(1987)《细胞和分子生物学中的免疫化学方法(immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology)》(学术出版社公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.多次施用。[0620]小鼠模型中使用的0.91mg/kgaptoll剂量根据fda物种间剂量外推指南(根据体表标准并校正动物体重)外推至大鼠，并且闭塞之后10分钟将0.45mg/kg静脉内注射在雄性威斯塔8-10周龄大鼠(每组8只动物)中。在此测定中，在闭塞之后2小时(10分钟 2小时)和6小时(10分钟 2小时 6小时)施用第二剂量和第三剂量以便确定若干剂量施用的效果。在闭塞之后48小时评估梗塞体积(图13)。[0621]结果和结论：当与媒剂治疗的动物相比时，在缺血之后10分钟对大鼠施用0.45mg/kgaptoll诱导梗塞体积减少(32.4％保护，n＝8)。当aptoll施用两次(闭塞之后10分钟和2小时)时，也观察到最终梗塞体积减少(35％保护，n＝8)。最后，当施用第三剂量时，证实减少了15％。这些数据证实了aptoll在用多剂量施用的永久性缺血动物模型和不同啮齿类动物(大鼠)中的功效。伴随着在24小时施用第四剂量，在闭塞之后48小时评估梗塞，并且在闭塞之后48小时施用第五剂量并且在闭塞之后72小时测量梗塞面积，研究完成。[0622]当与媒剂治疗的动物相比时，在缺血之后10分钟对大鼠施用0.45mg/kgaptoll诱导梗塞体积减少(19％保护，n＝8)。当施用多剂量的aptoll时，也检测到梗塞体积的减少。闭塞之后10分钟和2小时施用的两个剂量产生21％的保护(n＝8)。闭塞之后10分钟、2小时和6小时施用的三个剂量产生24％的保护(n＝8)。闭塞之后10分钟、2小时、6小时和24小时施用的四个剂量产生25％的保护(n＝8)。在闭塞后10分钟、2小时、6小时、24小时和48小时处施用的五个剂量产生18％的保护(n＝8)。术语保护是指梗塞体积的预防、抑制或减少，这是缺血的效果或后遗症。[0623]在pmcao之后48小时使组中的接受一个剂量、二个剂量、三个剂量或四个剂量的动物安乐死。在pmcao之后72小时使组中的接受5个剂量的动物安乐死。将所有经aptoll治疗的组与其相应的经媒剂治疗的组进行比较(图43)。因此，当在缺血性事件之后以多剂量(一个剂量、二个剂量、三个剂量、四个剂量或五个剂量)施用例如在缺血性事件之后至多48的时间段内施用时，aptoll诱导梗塞体积减少。[0624]2.4.tmcao大鼠模型[0625]此研究中使用雄性威斯塔8-10周龄大鼠(每组5只动物)。外科手术之后十分钟给大鼠静脉内施用0.45mg/kgaptoll或媒剂，与接受媒剂的大鼠相比，使诱导中风之后24小时的最终梗塞体积减少(图14，图a)。这些数据证实了aptoll在不同的缺血再灌注动物模型中的功效。[0626]此外，使用雄性斯普拉格道利8-10周龄大鼠(每组15只动物)重现此结果。缺血程序和治疗与之前描述的相同，但测定是在独立实验室进行的。结果示出，当与经媒剂处理的动物相比时，接受aptoll的大鼠的梗塞体积减少(图14，图b)。[0627]2.5.对中风发作之后aptoll的保护时间窗口的表征[0628]小鼠研究在8-10周龄的c57bl/6雄性品系中进行(每组8只动物)，通过结扎使其经受永久性大脑中动脉闭塞。当在pmcao之后至多6小时静脉内给予时，由aptoll(0.91mg/kg)介导的保护得以维持(图15)，从而延长了急性缺血性中风治疗(r-tpa)的唯一药物疗法的治疗窗口。保护的时间窗口可以延长超过6小时。[0629]在威斯塔雄性大鼠(8-10周龄，每组8只动物)中进行第二组确定。进行单丝tmcao模型，并且在再灌注(b.r.)之前30分钟或再灌注之后10分钟-2小时-6小时-9小时-12小时或24小时注射媒剂或aptoll(0.45mg/kg)。缺血之后72小时评估梗塞体积和水肿，并且结果证实了缺血之后至多12小时的aptoll介导的保护，此研究中梗塞体积的减少甚至高于在pmcao模型中进行的减少，证实减少了50％(30分钟b.r.)、65.5％(10分钟)、45％(2、6小时和9小时)和40％(12小时)。当在缺血之后24小时施用适体时，作用消失(图39)。有趣的是，当在再灌注之前施用时，aptoll也具有高保护性。这些结果表明，基于梗塞体积和水肿减少，施用aptoll与血栓切除术组合的最佳时机是刚好再灌注之前和再灌注之后几分钟。出于这个原因，并考虑到人体施用不是团注而是30分钟的输注，因此可以刚好在血栓切除术之前开始向患者输注aptoll。[0630]2.6.对aptoll施用之后生物标志物的表征[0631]为了在体内鉴定中风结果的可能生物标志物，在pmcao之后24小时获得了来自用0.91mg/kgaptoll/媒剂腹腔内治疗的缺血性小鼠的血浆样品，并且使用cba进行分析。为了评估这些生物标志物，通过电凝小鼠模型对前一节pmcao进行了子研究，并且进行了cba技术。简而言之，bdtmcba小鼠炎症试剂盒常用于定量地测量单个样品中的白介素-6(il-6)、白介素-10(il-10)、单核细胞趋化蛋白-1(mcp-1)、干扰素-γ(ifn-γ)、肿瘤坏死因子(tnf)和白介素-12p70(il-12p70)蛋白水平。此研究中获得的结果表明，与媒剂小鼠组相比，在缺血性损伤之后24小时，用aptoll治疗显著降低了il-6、il-12p70和ifn-γ的血浆水平，但未降低tnf、il-10或mcp-1的血浆水平(图16，n＝8)。[0632]2.7.aptoll诱导的保护作用的长期解剖和功能相关性[0633]为了将对aptoll的体内功效的评估与对临床试验中中风患者的保护的终点评估近似，在一项独立研究中验证了aptoll急性给予时诱导的梗塞大小减少的长期持久性，以及解剖保护与小鼠功能、神经学表现的相关性。通过在中风之后10分钟给予0.91mg/kg的静脉内aptoll实现的保护在整个亚急性期(中风发作之后至多72小时)持续(图17，图a)。此外，对中风之后21天长期损伤大小的定量表明，在此小鼠模型(c57bl/6j雄性小鼠，8-10周龄，通过结扎经受永久性大脑中动脉闭塞)中使梗塞稳定时的至多此时间点，保护作用得以保留(图17，图b)。通过使用足迹测试进行神经功能的评估(图17，图e)。在中风之后21天，与没有脑损伤的假手术动物相比，接受媒剂的小鼠急剧地示出步幅长度增加(图17，图d)，表明在路径期间肢体控制发生了改变。在前肢和同侧后肢中都观察到了此作用(图17，图c；图17，图d)。在中风之后10分钟接受0.91mg/kgaptoll的小鼠在中风之后21天没有示出这种神经功能缺损(图17，图c；图17，图d)，表明由适体诱导的梗塞大小减少与长期改善功能性能有关。[0634]在另一组实验中，评估了大鼠的神经长期结果。通过电凝模型对雄性威斯塔大鼠进行永久性脑缺血(每组n＝8只动物)。aptoll在闭塞之后10分钟施用，并且在其后2、7、14和21天进行运动评估。所获得的结果表明，当与经媒剂治疗的大鼠相比时，用aptoll治疗的大鼠在中风之后2天和7天的运动评分显著降低(图18)。[0635]2.8.lps在败血症小鼠模型中体内对抗tlr-4活化的拮抗作用[0636]为了在体内验证aptoll作为tlr-4拮抗剂的功效，将8-10周龄的c57bl/6j雄性小鼠腹膜内注射20mg/kg超纯lps。lps注射导致小鼠内毒素血症，这反映在8小时可测量的体重减轻和24小时更严重的体重减轻上(图19，图a)。另外地，温度损失在8小时处也很明显，并且在24小时处加剧(图19，图b)。败血症评分是通过对与内毒素血症的可见迹象相关的多个变量的定量获得的(schrum等人(2014)《bmc研究笔记(bmcresearchnotes)》7:233)(图19，图c)。与用媒剂注射的动物相比，注射有0.91mg/kgaptoll的动物组在8小时处体重减轻％降低(图19，图a)，以及在24小时处败血症评分降低(图19，图c)。在lps注射之后72小时处，用适体aptoll治疗的动物的存活率也更高(30％对用媒剂治疗的小鼠存活率的7％，图19，图d)，表明aptoll干扰了tlr-4的lps活化，降低了诱导的内毒素血症的严重性。[0637]2.9.药效学药物相互作用[0638]由于rt-pa是唯一被批准用于治疗缺血性中风的药物治疗，因此进行了用于确定aptoll与rt-pa相互作用的研究，因此，这两种药物很可能在临床实践中同时使用。[0639]威斯塔原初雄性大鼠(8-10周龄，每组4只动物)单独用aptoll、aptoll rt-pa或rt-pa施用。施用之后评估临床体征，并且在任何情况下均未出现任何体征。[0640]实例3.人体中的aptoll作用[0641]3.1aptoll用于治疗健康志愿者的急性缺血性中风的双盲、安慰剂对照、随机ia期临床研究，以评估耐受性和药代动力学[0642]人体最大推荐起始剂量[0643]对要在健康受试者中施用的最大推荐起始剂量(mrsd)的计算：[0644]noael(未观察到副作用水平)：[0645]大鼠：用较高剂量50mg/kg/天静脉内注射14天未观察到副作用。[0646]食蟹猴：用较高剂量13.9mg/kg/天(静脉内团注)14天未观察到副作用。[0647]hed(人体等效剂量)是根据noael计算出的，考虑到基于体表面积将动物剂量转换为人体等效剂量。考虑了10的校正因子：[0648]大鼠：50mg/kgx0.162/10＝0.81mg/kg[0649]猴：13.9mg/kgx0.324/10＝0.45mg/kg[0650]因此，考虑到较低的所计算剂量(0.45mg/kg)，70kg体重的人的mrsd为31.5mg。[0651]mabel(最低预期生物作用水平)：[0652]在中风啮齿动物模型中的功效：[0653]a)结扎小鼠模型的pmcao：对0.91mg/kg剂量的保护(静脉内单次团注)。[0654]b)电凝小鼠模型的pmcao：腹膜内0.91mg/kg。[0655]c)tmcao小鼠模型：静脉内0.91mg/kg。[0656]d)电凝大鼠模型的pmcao：0.45mg/kg静脉内两次(闭塞之后10分钟和2小时)，与一个剂量的功效类似。[0657]f)tmcao大鼠模型：0.45mg/kg静脉内单次团注。[0658]hed是根据mabel计算的，考虑到基于体表面积从动物剂量转换为人体等效剂量。考虑了10的校正因子：[0659]a)小鼠：0.91mg/kgx0.081/10＝0.0073mg/kg[0660]b)大鼠：0.45mg/kgx0.162/10＝0.0073mg/kg[0661]因此，70kg体重的人的mrsd为0.5mg。[0662]考虑这个剂量是因为其远低于根据noael计算的mrsd。[0663]研究概要[0664]受试者：健康的男性或女性，没有怀孕的可能性。[0665]设计：单剂量，静脉内施用(缓慢输注)，剂量递增，最多7个单剂量水平，随机、双盲、安慰剂对照(盐溶液)，在健康受试者中进行，然后在健康受试者中进行多次给药。[0666]临床试验具有两个部分：[0667]a-健康受试者单剂量递增(最多38名受试者)[0668]剂量递增的剂量水平：[0669]-第一剂量水平：2名受试者随机接受0.7mg或安慰剂(盐溶液)。[0670]-第二剂量水平：2名受试者随机接受2.1mg或安慰剂。[0671]-第三剂量水平：2名受试者随机接受7mg或安慰剂。[0672]-第四剂量水平：2名前哨受试者随机接受14mg或安慰剂，随后6名受试者随机接受14mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0673]-第五剂量水平：2名前哨受试者随机接受21mg或安慰剂，随后5名受试者随机接受21mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0674]-第六剂量水平：2名前哨受试者随机接受42mg或安慰剂，随后6名受试者随机接受42mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0675]-第七剂量水平：2名前哨受试者随机接受70mg或安慰剂，随后6名受试者随机接受70mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0676]每个受试者从给药前一晚到给药之后2天都被送入临床试验室；如果未检测到安全问题，他/她可以在给药之后48小时回家，并且在给药之后72小时(3天)、96小时(4天)、120小时(5天)、168小时(7天)、240小时(10天)和336小时(14天)返回到临床试验室。[0677]一个剂量水平与下一个剂量水平之间间隔至少两周，使数据安全监测委员会(dsmc)有足够的时间审查所有信息并决定继续下一个剂量水平。前哨受试者与相同剂量水平的其它受试者之间也有一周的时间。[0678]b-健康受试者的多剂量(8名受试者)[0679]2名前哨受试者在0、8和16小时随机接受三个剂量的药物(a部分的较高安全剂量)或安慰剂。[0680]没有报告任何安全问题，其它6名受试者随机接受相同剂量(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0681]志愿者在药物施用之后48小时离开临床试验室，除非检测到不良事件，在这种情况下，所述志愿者保持接收直到其问题解决。[0682]药物施用：[0683]将药物(aptoll，药物物质批批次编号255887)稀释在100ml盐水中，并且在30分钟内通过泵缓慢静脉内输注施用(考虑在输注开始时输注速度低，并且然后增加输注速度，并且如果出现某个不良事件，则停止输注)。[0684]受试者评估：[0685]-通过以下方式评估受试者的安全性：[0686]记录研究期间发生的所有不良事件。[0687]体格检查。[0688]常规实验室评估(血液、生化和尿液测试)：筛查、第1天(给药前)、第2天、第7天和第14天。[0689]尿液中的毒物：筛查、第1天(给药前)和第14天。[0690]血清学(hbv、hcv、hiv)：筛查。[0691]血压、心率、呼吸速率和12导联ecg：基线，在入院和每次来访期间的不同时间处。[0692]-药代动力学：在不同时间采集15份血液样品(每份9ml)以限定药物的药代动力学特征：给药前、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、20小时、24小时和32小时。[0693]-药效学：在不同时间采集4份血液样品(每份9ml)以评估体外脂多糖激发诱导的细胞因子水平：给药前、4小时、8小时和24小时。[0694]ia期临床试验结果[0695]这是一项i期、首次人体、剂量递增、随机、安慰剂对照临床研究，以评估aptoll在健康志愿者中的耐受性和药代动力学。研究的主要目标如下：[0696](i)评估aptoll在健康志愿者中的耐受性和药代动力学特性，在空腹条件下单剂量施用之后，遵循递增给药方案。还评估了此化合物的药效学特性；以及[0697](ii)在空腹条件下多次施用之后，评估aptoll在健康志愿者中的耐受性和药代动力学特性。还评估了此化合物的药效学特性。[0698]所述研究分为2个部分：第一个部分(a部分)是剂量递增，其中最多为7个单剂量水平。一旦这部分完成，就在健康志愿者中进行多剂量(3次施用)部分(b部分)，其中剂量选自前一部分。两个部分都是随机的、双盲的、安慰剂对照的(生理盐溶液)。所述研究是在健康男性受试者中进行的。用于剂量递增(a部分)和多剂量(b部分)的所选剂量水平是如上文所描述的。[0699]本次临床试验已完成，并且结论如下：[0700]1.关于安全性问题，在任何剂量水平下都没有报告严重的不良事件或显著的分析改变。[0701]2.药代动力学：在不同时间采集十五份血液样品(每份9ml)以限定药物的药代动力学特征：给药前、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、20小时、24小时、32小时、48小时和72小时。在sad(单次递增剂量)部分，cmax数据显示注射之后在时间0.5小时处(输注结束时)的最大值，随后随时间立即下降，并且其中所估计平均半衰期为8小时。aptoll水平在时间72小时处不可定量。[0702]3.没有被认为可能与研究药物相关的具有临床意义的实验室、生命体征或ecg结果。因此，aptoll的安全性和耐受性与安慰剂的类似。[0703]实例4.aptoll调配物[0704]4.1.用于人体肠胃外施用的aptoll调配物[0705]imp(研究药物产品)是在完全gmp条件下制造的(图20)。简而言之，胃肠外制备过程应在无菌区进行，并且按以下方式发展：[0706]1.赋形剂溶液的制备：[0707]将大约80％的注射用水在20-25℃的温度下放入设置有搅拌器的反应器中。添加氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠二水物、磷酸二氢钾、六水合氯化镁，搅拌直至完全溶解。用注射用水将溶液定容至100％的体积，并且检查溶液的ph，并且如果必要时调节至7.4。[0708]2.通过0.22μm过滤器过滤缓冲溶液以进行消毒。[0709]3.添加活性药物成分适体4ft：将90％体积的赋形剂溶液放入夹套玻璃反应器中，并且在缓冲液中溶解适体4ft，搅拌直至完全溶解。[0710]4.体积调节：用预先制备的赋形剂溶液将溶液调至100％体积。搅拌最低10分钟。[0711]5.就其生物活性而言，必须将其溶解在pbs-1mmcl2mg中，以便为其提供三级结构。溶解之后，适体必须加热至95℃±2℃。将溶液在此温度下保持至少10分钟。然后，将溶液冷却至5℃±3℃。将溶液在此温度下保持10分钟。[0712]6.生物负载降低：[0713]通过0.2μm聚醚砜无菌过滤器过滤溶液。用泡点测试的最小值验证过滤器1(用水)的完整性。[0714]在过滤器1之后为质量控制部门(生物负载(bioburden))采集样品100ml。[0715]7.通过0.2μm聚醚砜过滤器进行灭菌过滤，所述过滤器先前已在蒸汽灭菌器中灭菌。[0716]8.小瓶填充(在无菌条件下)：小瓶洗涤和灭菌(小瓶：烤箱；塞子：γ辐照，铝胶囊：蒸汽灭菌器)。填充和预封闭过程。[0717]9.冻干过程：冷冻过程：干燥(初级和次级)；小瓶封闭。[0718]10.小瓶的加盖和控制[0719]4.2.用于体内研究的aptoll调配物[0720]适体被冷冻干燥并保持在-20℃直至使用。避免污染：戴手套、过滤嘴、无核酸酶管。溶解在缓冲液a中：pbs(磷酸盐缓冲盐水) 不含核酸酶的1mmmgcl2。[0721]1-在添加缓冲液之前，将具有冻干适体的试管离心。[0722]2-储备溶液：将缓冲液a添加到冻干适体中并搅拌直至完全溶解。分成等份并保持在-20℃/-40℃直至使用。[0723]3-工作溶液：将缓冲液a中的储备溶液稀释到期望的最终浓度。[0724]4-折叠过程：将溶液加热至95℃持续10分钟，并且然后在冰上保持10分钟。[0725]5-在测定中使用结构化适体。[0726]结构化适体维持功能构象：室温下1小时，4℃下24小时。[0727]实例5.安全药理学[0728]对一般生理参数的影响[0729]aptoll对一般生理参数的潜在影响在原初动物和缺血性动物(c57bl/6j雄性小鼠，8-10周龄)中进行了测试。当在与媒剂施用相比时，aptoll的施用对所测得参数中的任何参数没有示出影响(图21)。[0730]神经毒性[0731]不同的研究表明，适体不会跨过血脑屏障(bbb)，但很少有涉及高度专业化转运机制的例外(cheng等人(2013)《分子治疗核酸(molthernucleicacids)》2(1):e67)。具体地，在aptoll的情况下，非监管水平的动物研究表明，在施用的几分钟内，其在不同组织(如肺或脾脏)中的分布。然而，仅在其中bbb受损的实验性中风诱导之后才证明aptoll在大脑中的存在，尽管在这些动物中，药物的神经保护作用已被明确证明。[0732]另一方面，与所有寡核苷酸一样，aptoll的自我寿命短以及其快速降解将阻止其在bbb不受损害的条件下(即健康志愿者)进入脑组织。事实上，迄今为止由如伊奥尼斯制药公司(ionispharmaceuticals)(伊希斯先锋制药公司(pioneerisispharmaceuticals)的当前名称)或opthotech公司等公司对这种性质的分子进行的研究，其活动也集中在cns，是在其人体施用中不存在神经毒性事件的明显实例。这些公司参与的临床试验直接在玻璃体内注射高浓度的dna和rna分子，不会对神经元细胞产生毒性作用。[0733]体外神经毒性评估[0734]为了评估aptoll的一般毒性，以半对数增量在0.01-30μm的八个浓度范围内产生了剂量应答曲线。每个点是n＝3。在用测试化合物治疗之前，将人ipsc衍生的皮质谷氨酸能神经元(80％)和gaba能(20％)神经元的混合培养物培养一周。包含阳性(鱼藤酮)对照和阴性(dmso)对照。使用celltiter-glo2.0发光细胞活力测定(普洛麦格(promega))在处理后72小时评估毒性，所述测定测量总atp浓度并与活细胞数量成比例。[0735]本研究中获得的结果表明，基于形态学标准，所有培养物在治疗时都显示出极好的细胞健康状况。此外，如通过测量细胞atp水平来评估的，抑制线粒体电子传递链的阳性毒性化合物鱼藤酮示出了明显的剂量依赖性毒性。aptoll在至多所测试的最高剂量(30μm)下均未示出毒性。在谷氨酸能(80％)神经元和gaba能(20％)神经元的混合培养物以及每种类型的纯培养物中观察到这种无毒性(图22)。[0736]跨过血脑屏障bbb[0737]目的是确定适体是否能够跨过血脑屏障(bbb)。为此，bend.3细胞(小鼠内皮细胞)和星形胶质细胞(ctx-tna2)位于transwell插入物的土壤层中，模拟bbb。温育之后，通过qpcr确定培养基中适体的存在。aptoll在40nm到4000nm的浓度范围内进行了测试。使用能够通过bbb的76ntssdna适体作为阳性对照。本研究中获得的结果表明，适体不能在正常生理条件下跨过bbb(表2)，即在不存在任何改变bbb通透性的疾病或病状例如tlr介导的疾病或病状的情况下。[0738]表2.gaiker3722研究中获得的结果[0739]样品长度(核苷酸)回收的适体(总％)sem(％)r6bbb-4f7662,39651,846r6bbb-11r7670,88284,686r6bbb-15r7668,81690,144r6bbb-4r7644,76213,888aptoll(40nm)590,00210,001aptoll(400nm)590,00450,001aptoll(4000nm)590,00560,002[0740]神经毒性[0741]大鼠神经毒性评估：此研究是作为主要毒性研究的一部分进行的：大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。毒性研究的目的是评估aptoll在以5、25和50mg/kg/天的剂量每天一次向大鼠静脉内施用持续2周时段时的毒性作用。所述研究是按照glp进行的。在治疗前和治疗第2周对恢复动物进行观察(感觉反应性、握力和运动活动)。此研究获得的结果表明，fob记录中各组之间没有相关变化。[0742]缺血性大鼠神经毒性评估：在缺血之后，bbb的通透性受损，并且aptoll能够到达脑组织。因此，使用改良的irwin测试评估了aptoll施用产生的潜在神经毒性。此测试由一组测定组成，以评估来自药物的神经毒性作用的存在。为此，对注射有aptoll(0.45mg/kg)或媒剂的缺血性大鼠(n＝8)进行了测试。此研究中使用的实验模型是电凝引起的永久性缺血。施用aptoll之后无论是在经治疗的动物还是媒剂动物中均未检测到差异。因此，没有观察到对与肌肉张力、协调和感觉运动应答相关的参数的影响。未报告开放场测试的变化。[0743]在呼吸功能的作用[0744]此研究的目的是评估aptoll对大鼠呼吸频速率、潮气量和分钟通气量的可能的副作用。[0745]aptoll以5、25和50mg/kg的剂量通过静脉内团注注射向雄性斯普拉格道利大鼠(8只/组)施用，以评估对呼吸速率、潮气量和分钟体积的作用。另外两组接受等效体积(3ml/kg)的媒剂作为单次静脉内团注剂量，或口服剂量(10ml/kg)的巴氯芬，剂量为20mg/kg(阳性对照)。在给药后0(给药前)、30、60、90、120、150、180、210和240分钟报告呼吸速率、潮气量和分钟通气量。[0746]aptoll，通过静脉团注以5、25和50mg/kg的剂量施用，对呼吸率、潮气量或分钟通气量没有产生生物学相关的影响，这些影响被认为是与测试项目相关的(图23)。巴氯芬以20mg/kg的剂量口服施用，呼吸速率显著降低，潮气量值显著升高。没有观察到不良临床体征。[0747]在心血管系统中的作用[0748]此研究符合glp标准，作为主要毒性研究的一部分：大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。此研究的目的是评估aptoll对食蟹猴每天两次、间隔六小时通过静脉途径(团注)施用14天时对心血管系统的作用。[0749]aptoll在总共32只猴子中施用(0.7-2.3-6.9mg/kg/bid)。心率、p波持续时间和幅度、p-q间期、qrs间期和q-t间期是使用来自导联ii的心电图的代表性部分测量的。还计算了对心率的qt间期校正。在测试前、治疗第13天时(第一次每日给药之后)和恢复期间进行记录。结果表明，没有发现与测试项目的治疗有关。[0750]实例6.动物的药代动力学和产物代谢[0751]分布[0752]与血浆蛋白结合[0753]确定了aptoll结合血浆蛋白的分数。出于此目的，使用了与alexa-488缀合的aptoll。与血浆蛋白结合的适体的百分比通过比率(所有级分中的荧光总和/总荧光)x100在两到三个不同的人、大鼠和nhp样品中计算(图24)。[0754]在所有情况下，将不含血浆蛋白的适体溶液用作确定未结合洗脱峰的对照。aptoll与血浆蛋白结合的分数在人样品中为15.7％，在大鼠和nhp血浆中为3.5％。[0755]aptoll在靶器官(大脑)中的体内分布[0756]使用alexafluor488标记的aptoll进行了aptoll、外周和中心研究的分布。[0757]首先，对经受外科手术之后10分钟接受静脉内施用alexafluor488标记的aptoll(0.9mg/kg)的pmcao的tlr4 / 和tlr4-/-小鼠(n＝3-5)血液中的适体进行流式细胞术分析。在适体施用之后5、10、15、30分钟和5小时，从尾部获得基础样品和系列血液样品。结果证明，在pmcaotlr4 / 小鼠中施用之后5分钟在血液中检测到aptoll(图25，图a)。然而，在tlr4-/-小鼠中，在任何研究时间都未检测到适体结合。此外，alexafluor488标记的aptoll门控细胞主要出于基于前向散射(fsc)和侧向散射(ssc)门控策略的粒细胞区域中(图25，图b)。[0758]此外，与alexa-488缀合的aptoll用于检测静脉注射之后其在大脑中的存在。六只小鼠(c57bl/6j雄性小鼠，8-10周龄)经受pmcao以便重现缺血性脑中的血脑屏障的状况，在采集pmcao和大脑之后10分钟注射标记的适体，并且在24小时处进行免疫荧光处理。在缺血区域中观察到绿色荧光(图25，图c)，并且通过将脑切片与cy3缀合的抗alexa488抗体一起温育来证实信号的特异性(图25，图c，红色)。在用非标记的适体注射的动物中不存在荧光(图25，图d)。这些观察表明，在静脉注射之后至少24小时，aptoll存在于梗塞的脑组织内。[0759]代谢[0760]在人、大鼠和猴血浆中以及对核酸酶的体外稳定性[0761]aptoll在存在λ-核酸外切酶和dnasei处理的情况下的完整性，以及在大鼠、猴或人血浆中的稳定性被定量。结果表明，即使在温育4小时之后，aptoll仍对λ-核酸外切酶具有抗性(图26，图a)。此结果与λ-核酸外切酶活性所需的合成适体中缺少3'端磷酸酯一致。相比之下，在暴露于dnasei5分钟之后，aptoll的降解是明显的(图26，图b)。当在生理条件下在大鼠、猴和人血浆中温育aptoll时，观察到时间依赖性降解(图26，图c)。考虑到aptoll的适应症是急性中风治疗，这种半衰期曲线被认为是tlr-4短期急性暴露于适体的最佳选择，例如治疗急性tlr-4介导的疾病或病状如缺血性中风。[0762]药代动力学药物相互作用[0763]本研究的目的是在结合、酶和摄取、体外吸收和体外代谢测定中测试aptoll。由于在药效学研究中获得的结果，aptoll在20nm下进行了测试(请参考前面的部分)。[0764]体外药理学：摄取测定和结合测定[0765]执行safetyscreen44tm图以能够尽早鉴定与aptoll的显著脱靶相互作用。选择了所有44个靶标(gpcr、离子通道、激酶、核受体、转运蛋白和其它非激酶酶)，以将稳健性(每个测定是hts相容的)和信息丰富靶标的战略选择两者结合在一起。化合物结合被计算为对每个靶标特异性的放射性标记配体结合的抑制％。复合酶抑制作用被计算为对照酶活性的抑制％。示出了高于50％的抑制的结果被认为表示了测试化合物的显著作用。在所研究的任何靶标处均未观察到此类作用(图27)。在每个实验中，并且如果适用，相应的参考化合物与aptoll同时进行测试，并且将数据与历史值进行比较。[0766]尽管在酶测定中获得的值没有示出显著作用，但对pde3a和pde4d2进行了更深入的表征，并且没有获得显著的结果。因此，在所选的任何靶标中均未检测到抑制作用。[0767]adme-tox：体外吸收[0768]这些测定被设计成评估化合物影响主要药物转运蛋白的方式。具体地，这些测定测试了可能干扰aptoll吸收、分布或排泄的药物转运蛋白的潜在抑制作用。[0769]aptoll转运蛋白抑制作用被计算为媒剂对照活性的抑制％。示出了高于50％的抑制的结果被认为表示了测试化合物的显著作用。在所研究的任何受体中均未观察到此类作用(图28)。[0770]尽管在药物转运蛋白测定中获得的值没有示出显著作用，但对asbt进行了深入表征，并且在此研究条件下未检测到任何作用。[0771]细胞色素抑制测定[0772]进行这些测定以评估aptoll可能影响对细胞色素p450(cyp)酶的潜在抑制作用进行表征的主要药物代谢酶的方式，这可能导致共同施用的化合物的积累。[0773]aptollcyp酶抑制作用被计算为媒剂对照活性的抑制％。示出了高于50％的抑制的结果被认为表示了测试化合物的显著作用。在所研究的任何酶中均未观察到此类作用(图29)。[0774]此外，在这些测定中，对cyp酶的诱导进行了评估，以预防aptoll或共同施用的化合物的血浆浓度降低。aptoll以不同浓度(2-20-200nm)施用，以更好地进行现象表征。[0775]aptollcyp酶诱导作用被计算为媒剂对照活性的诱导倍数。示出了高于50％的刺激的结果被认为表示测试化合物的显著作用。在所研究的任何酶中均未观察到此类作用(图30)。[0776]其它药代动力学研究[0777]斯普拉格道利大鼠的静脉内药代动力学研究[0778]此研究的目的是获得在对雌性斯普拉格道利大鼠以0.45、1和2mg/kg单次静脉内团注施用之后aptoll的药代动力学特征。因此，九只雌性大鼠(10-12周龄)以0.45、1和2mg/kg在1ml/kg下通过侧尾静脉内单次静脉内团注施用aptoll。[0779]在施用当天以下时间从侧尾静脉获得血液样品：1分钟(施用后立即)、5、15、30分钟和1、2、4、8和24小时。[0780]将血液样品(每份大约250μl)收集到edta-k3管中并制备血浆。将试管置于冷浴中不超过30分钟，直至在2-8℃下以1900g离心10分钟。离心之后，将至少100μl的血浆转移到塑料(聚丙烯)管中并且储存在-80±10℃下直至装运。[0781]药代动力学分析表明，在所有剂量水平下的所有动物(在样品可用的情况下)中，直至给药后8小时，血浆中的aptoll浓度均可定量。通常，在第一个时间点(1分钟)观察到最大血浆浓度(tmax)。平均cmax和auct值总结如下：[0782]表3.在雌性斯普拉格道利大鼠中单次施用aptoll之后的平均cmax和auct值(其中括号中为标准偏差)[0783]剂量水平(mg/kg)cmax(ng/ml)auct(ng.h/ml)0.458100(3470)2310(510)118400(6000)3530(260)239700(10500)6710(660)[0784]此研究得出的主要结论是：[0785]-以正确的剂量水平施用动物。[0786]-由于实验困难在8小时处从所有动物收集血液样品，除了动物编号3f。除了五个样品在2小时、4小时和24小时的采样时间点偏离1分钟和5分钟外，在正确的时间获得了样品。[0787]-没有临床体征。[0788]-根据合格方法分析的研究样品示出了良好的测定性能。[0789]-所有动物中的血浆aptoll浓度可在所有剂量水平(在样品可用的情况下)下至多给药后8小时定量，并且tmax是在第一时间点(给药后1分钟)处。[0790]-cmax在0.45到2mg/kg的剂量范围内示出了线性动力学而暴露(auct)在相同剂量范围内呈现出非线性动力学。[0791]药效学和药代动力学结论[0792]pd和pk研究得出的主要结论总结如下：[0793]-aptoll已从大量设计的适体中选择出来，因为其具有针对tlr-4的适当拮抗特征。[0794]-在体外，aptoll在20和200nm下表现出良好的药效学特征。[0795]-aptoll在猴和人单核细胞中的ka为30-60nm。[0796]-aptoll不显示与其它tlr的任何相互作用(既不激动也不拮抗)。[0797]-在小鼠和大鼠中，aptoll在短期和长期两者以及在不同的实验模型中诱导脑缺血之后的保护。[0798]-aptoll的治疗窗是中风之后至少6小时。[0799]-aptoll对生理参数和神经毒性均位展示出影响。[0800]-未报告pk研究中的临床体征。根据合格方法分析的研究样品示出了良好的测定性能。[0801]-所有动物中的血浆aptoll浓度可在所有剂量水平(在样品可用的情况下)下至多给药后8小时定量，并且tmax是在第一时间点(给药后1分钟)处。[0802]-cmax在0.45到2mg/kg的剂量范围内示出了线性动力学而暴露(auct)在相同剂量范围内呈现出非线性动力学。[0803]实例7.毒理学[0804]单剂量毒性[0805]体外毒理学：aptoll对细胞活力的作用[0806]aptoll的潜在细胞毒性通过与这些研究中常用的两种不同细胞系(hep-g2和hl60)一起温育来评估。在将适体(2-2000nm)添加到温育培养基中之后24和48小时，通过mtt和ldh测定来对细胞活力进行定量(图31)。只有比生物活性浓度高100倍的浓度才显示出对24小时细胞活力的适度影响(图31，图a)。此外，在较高剂量下温育48小时之后ldh水平的降低可能与这些培养物中细胞数量的减少有关(图31，图b)。[0807]重复剂量毒性[0808]对于重复剂量毒性研究，选择大鼠作为啮齿动物模型(由于类似的药理学)和猴作为非啮齿动物模型(由于其人-tlr-4同源性)。[0809]斯普拉格道利大鼠的初步毒性研究[0810]此研究的目的是评估连续七天每天向大鼠静脉注射aptoll后的毒性作用。此研究指示了潜在的靶器官，并且为随后为期两周的毒性研究的剂量水平选择提供了合理的基础。[0811]aptoll每天一次向斯普拉格道利大鼠静脉施用，持续7天。动物被分配到四个治疗组，如下：[0812]表4.涉及pw28xn研究的不同组的设计[0813]组1*234测试项目-aptollaptollaptoll剂量水平0mg/kg/天5mg/kg/天25mg/kg/天50mg/kg/天剂量浓度0mg/ml5mg/ml25mg/ml50mg/ml男性1-56-1011-1516-20女性101-105106-110111-115116-120[0814]在整个研究中，每天两次观察所有动物的存活率/死亡率。在驯化和预测试期间每天进行笼边观察，并且在治疗期期间每天记录临床体征；在给药之前呵之后检查注射位点的局部体征。在治疗开始之前和治疗期期间每周两次记录食物消耗。在预测试期间记录一次体重，在治疗期期间和处死之前(未禁食)每周记录两次体重。在治疗期结束时(第8天)从所有动物中收集用于血液学和临床生物化学的血液样品。治疗完成后处死所有主要动物并进行尸体剖检，并且称重器官。保留了一整套组织，但没有对其进行检查。[0815]研究结果总结如下：[0816]-所有动物都存活到治疗期结束，并且在第8天按计划处死。[0817]-在以5、25和50mg/kg/天的aptoll施用的动物中没有记录到与测试项目相关的临床体征。然而，从第5天到第7天，在包含对照的一些动物中观察到尾部上的发声和不适。[0818]-在任何施用的剂量下，注射位点均未观察到局部体征。[0819]-在5、25和50mg/kg/天的aptoll下，考虑到样品大小和变化幅度，食物消耗没有相关差异。在对照组中没有观察到食物消耗的明显变化。[0820]-在5、25或50mg/kg/天的aptoll下没有观察到体重的明显差异。[0821]-没有毒理学相关的血液学或生物化学影响。[0822]-aptoll的施用不会在尸体剖检时产生与测试项目相关的宏观发现。[0823]-所收集器官的平均绝对重量或调整重量没有统计学上的显著差异：脑、心脏、肾脏、肝脏、肺和支气管和脾脏。[0824]-没有观察到跨治疗组或在时间点之间对aptoll的细胞因子应答，除了预处理组和终末组两者的雌性的il-6略有增加。[0825]在此研究的条件下，每天一次向斯普拉格道利大鼠静脉内施用aptoll，持续7天，至多50mg/kg/天，不会引起任何毒理学作用。[0826]大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。[0827]此毒性研究的目的是评估aptoll在以5、25和50mg/kg/天的剂量每天一次向大鼠静脉内施用持续2周时段时的毒性作用。此外，在1周无治疗恢复期之后，在几只动物中评估了任何治疗相关变化或延迟毒性的可逆性或进展。所述研究指示了潜在的靶器官，并且为人的风险评估提供了合理的基础。[0828]研究中总共使用了74只雄性和74只雌性，5-7周龄的sd大鼠。大鼠分为4组，每组15-20只雄性大鼠和15-20只雌性大鼠。aptoll每天一次静脉内施用，单次团注。治疗的持续时间为：[0829]-14天(主要和恢复)[0830]-14天(毒代动力学)[0831]-1天(生物标志物)[0832]治疗组和剂量在图32中示出。[0833]此研究中获得的结果表明，aptoll施用之后没有临床体征。此外，用aptoll治疗之后的大鼠在执行fob测试时没有示出任何改变。血液学、凝血、临床生化和尿液分析均在正常参数内。大体病理学也正常。除ip-10外，在施用aptoll之后未观察到细胞因子水平的统计学显著性剂量相关差异。与对照组相比，ip-10水平的显著差异量随着所有第1天样品的剂量增加而增加。在第14天，在第3组和第4组的雄性大鼠中观察到小但显著的增加；然而，当与对照组相比时，第14天的大鼠没有观察到显著增加。[0834]由于向sd大鼠连续和每日施用aptoll(50mg/kg)14天之后没有观察到显著的毒理学发现(即在经治疗的动物的形态学、功能能力、生长、发育或跨度方面的不利改变)，上述研究的主要结论是此化合物没有引起显著的毒理学改变。[0835]因此，50mg/kgaptoll被认为是noael(未观察到副作用水平)。50mg/kg是使用的最大剂量。使用更高剂量可能导致更高的noael值。[0836]毒代动力学评估：在第1天(范围1.0-18.3ng/ml)3只雄性和2只雌性和在第14天(1.4-11.4ng/ml)3只雄性和1只雌性中，在给药后5分钟发现了可定量的浓度。这些浓度远低于等效时间在经治疗的动物中观察到的浓度；然而，这种明显差异的来源并未鉴定。[0837]aptoll血浆浓度的个体间差异很高，变异系数通常大于70％，并且在2.2％到173％的范围内。[0838]总的来说，观察到最大血浆浓度的时间(tmax)是在第一时间点(5分钟)处，正如静脉内施用后所预期的那样。尽管如此，在第1天接受25mg/kg/天剂量水平的雌性的血浆浓度-时间曲线表明这些动物没有接受静脉内剂量(例如，剂量是动脉内或肌肉内施用的)。[0839]aptoll的最大平均血浆浓度(cmax)和直到第1天和第14天最后可定量血浆浓度(auct)的平均血浆aptoll浓度时间曲线下的面积总结如下：[0840]表5.斯普拉格道利大鼠模型中cmax和auct值的总结[0841][0842]大鼠全身暴露于aptoll的程度似乎通过在第1天和第14天的5到50mg/kg/天的剂量范围内的非线性(剂量依赖性)动力学表征。[0843]总体而言，aptoll浓度通常与雄性类似，并且在14天重复静脉团注施用之后没有观察到累积。[0844]食蟹猴的7天的初步静脉(团注)毒性研究[0845]此研究的目的是评估连续七天每天向猴静脉注射aptoll后的毒性作用。此研究指示了潜在的靶器官，并且为随后为期两周的毒性研究的剂量水平选择提供了合理的基础。[0846]aptoll每天一次向6只食蟹猴(3只雄性和3只雌性，24-36个月大)静脉内注射，持续7天。动物被分配到四个治疗组，如下：[0847]表6.涉及食蟹猴模型研究的组的设计[0848][0849]此研究中获得的结果表明，在aptoll施用之后没有观察到相关的临床体征。食物消耗和体重保持在正常参数处。无法确定所确定的细胞因子(ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6和tnf-α)中的任何细胞因子或所确定的补体活化复合物中的两者的治疗或性别相关效应(ch50和c5b-9)。既没有报告宏观发现也没有报告器官重量的变化。[0850]基于这些结果，每日施用持续一周之后的mtd(最大耐受剂量)被确定为6.9mg/kg/天aptoll。[0851]毒代动力学：抗tlr-4dna适体的最大血浆浓度(cmax)和直至最后可定量血浆浓度(auct)的血浆浓度-时间曲线下面积总结如下：[0852]表7.对食蟹猴模型研究中的cmax和auct值的总结[0853][0854]因此，单次给药之后猴的cmax值和全身暴露于aptoll的程度似乎通过0.7到6.9mg/kg/天的剂量范围内的线性(不依赖剂量的)动力学表征。[0855]终末半衰期(t1/2)的范围为0.8到1.4小时，并且似乎与剂量和性别无关。总血浆清除率(cl)的范围为252到409毫升/小时/千克，并且稳态平均分布体积(vss)的范围为34.0到68.3ml/kg。[0856]通过静脉途径对食蟹猴进行为期14天的重复剂量毒性研究，然后是1周的恢复期[0857]此研究的目的是评估在14天的时段内通过静脉途径(团注)每天两次间隔六小时向食蟹猴施用时的aptoll的累积毒性和毒代动力学。在治疗期后的1周恢复期期间，评估了治疗相关变化或任何延迟毒性的可逆性或进展。[0858]总共32只动物(16只雄性和16只雌性，28-29个月大)被分为四组，所述四组的向动物施用的aptoll的浓度不同：[0859]表8.涉及食蟹猴模型研究的组的设计[0860][0861]此研究中获得的结果表明，没有与aptoll施用相关的毒理学体征。在治疗结束时仅观察到注射位点(包含对照组)的血管周围纤维化和皮下纤维化，其中一周后部分恢复。没有观察到相关的临床体征：所有动物都存活到研究结束，对食物消耗和体重没有影响，在检眼镜检查中没有发现。无法观察到所确定的细胞因子(ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6和tnf-α)中的任何细胞因子或所确定的补体活化复合物中的两者的治疗或性别相关效应(ch50和c5b-9)。没有报告宏观或微观变化。[0862]总之，当aptoll每天两次(间隔6小时)通过静脉(团注)途径向食蟹猴施用持续14天的时段时，13.9mg/kg/天aptoll的剂量被认为是noael。[0863]毒代动力学[0864]4ft适体的主要毒代动力学参数的总结在图33中给出。[0865]在这些给药方案下没有观察到aptoll的积累。[0866]在所有组中的雄性与雌性之间观察到相当的暴露。cmax的雄性/雌性比率的范围为1.0到1.5，并且auct的范围为0.7到1.6。[0867]基因毒性[0868]体外[0869]基因毒性测定是根据ichs2(r2)指南设计的。进行了包含ames和体外微核测定(有和没有s9代谢活化)的测试组。ames波动测试评估了化合物的致突变潜力，并且体外微核测定补充了ames波动测试在如评估染色体损伤等遗传毒性效应的方面。在每次测定期间平行评估细胞毒性以鉴定由于细胞毒性可能导致的假阴性。[0870]为了评估各种类型的遗传毒性，使用了几种体外测定作为筛选工具。在每个实验中，并且如果适用，相应的参考化合物与aptoll同时进行测试，并且将数据与历史值进行比较。[0871]细菌细胞毒性：化合物的细菌细胞毒性与ames测定同时进行测试，以鉴定由于细胞毒性可能导致的假阴性。细胞数量细胞毒性％是基于细胞数量的指数，其中：[0872][0873]生长60％或低于对照的化合物被标记并被认为具有细胞毒性。在这些条件下，此研究中获得的结果示出了非细菌细胞毒性作用(图34和图35)。[0874]ames测试：进行ames测试以确定aptoll是否会导致直接dna突变。由于生长需求的变化，可以很容易地在细菌中测量基因突变。ames测试是使用鼠伤寒沙门氏菌进行的，这是一种广泛使用的细菌测定，用于鉴定可以产生基因突变的化合物，在啮齿动物致癌性测试中示出很高的预测价值。ames测试通常使用五种沙门氏菌菌株，这些菌株具有预先存在的突变，这些突变使细菌无法合成必需氨基酸组氨酸，并且因此无法在不含组氨酸的培养基中生长。[0875]使用四种沙门氏菌菌株ta98、ta100、ta1535和ta1537在384孔板中进行ames波动测定。将细菌板与测试化合物一起温育96小时，并且使用ph指示剂通过分光光度法测量细菌生长，所述指示剂响应因细菌生长导致的培养基酸化而改变颜色。通过使用大鼠肝脏s9部分实现代谢活化。为了预防由于杀菌或抑菌作用导致的假阴性，细菌细胞毒性试验与ames波动测定同时进行。[0876]由于组氨酸突变的逆转而显示出细菌生长的孔(如通过od430/od570的比率大于1.0判断)被计数并记录为阳性计数。使用单尾飞世尔精确测试计算治疗(在存在测试化合物的情况下)与对照(在不存在测试化合物的情况下)之间的阳性计数的显著性。[0877]此研究中获得的结果在ames测试中没有示出任何显著作用，因此，在aptoll施用之后没有鉴定出直接的dna突变(图36和图37)。[0878]体外微核测定：进行此测定以评估aptoll是否会通过引入双链dna断裂或影响有丝分裂细胞分裂而导致染色体损伤。微核形成是遗传毒性的标志，并且微核测定是遗传毒性筛选的重要组成部分。微核是含有染色质的小体，其表示在有丝分裂时未并入到子细胞核中的片段或甚至整个染色体。所述测定的目的是检测那些诱导染色体损伤的药剂，从而在间期细胞中诱导微核。[0879]体外微核测定在cho-k1细胞中进行。将细胞接种在96孔板中并且用测试化合物处理24小时(无s9)和4小时(有s9)。24小时之后添加胞质分裂阻断剂细胞松弛素b，并且将细胞再温育另外24小时，然后固定细胞并对微核进行评分。计算微核细胞的百分比。细胞分裂阻滞增殖指数(cbpi)细胞毒性％使用(cbpi)的修饰版本。这种方法利用了这样的事实：细胞毒性通常会诱导细胞周期停滞，这反映在使用细胞松弛素b时双核细胞与单核细胞的比率降低。cbpi为1相当于100％的细胞毒性。[0880]在此测定中获得的结果没有示出任何微核诱导(图38)。[0881]局部耐受[0882]斯普拉格道利大鼠的初步毒性研究[0883]在任何研究的aptoll浓度下，注射位点处均未检测到毒性相关体征。[0884]大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。[0885]总体而言，注射位点处没有局部体征。然而，从第5天到第7天，两只雄性(第4组)的尾巴上呈现红斑。[0886]食蟹猴的7天的初步静脉(团注)毒性研究[0887]记录注射位点处的瘀伤。没有观察到其它局部变化。[0888]通过静脉途径对食蟹猴进行为期14天的重复剂量毒性研究，然后是1周的恢复期[0889]在包含对照组的宏观检查处记录了在一些静脉注射位点处看到的暗区。显微镜评估导致四个施用位点处(血管周围纤维化和皮下纤维化)的治疗相关发现。媒剂被认为是纤维化的主要诱因，这是由每天两次的注射程序造成的。在1周恢复期后对动物的评估证明在四个施用位点处部分恢复。[0890]实例8.aptoll在心肌梗塞之后左心室重构中的功效[0891]为了评估aptoll在心肌梗塞之后左心室重构中的影响，在大鼠中进行了通过对左前降支(lad)的结扎的心肌缺血再灌注损伤模型。简而言之，将lad冠状动脉结扎以进行缺血保持30分钟。然后，去除结扎以允许再灌注。在再灌注之后10分钟内单次团注静脉内注射单剂量的aptoll(0.45mg/kg)。含有1mmmgcl2的pbs溶液用作对照(媒剂)。在基础条件和梗塞之后72小时记录超声心动图参数射血分数和缩短分数。[0892]结果：如图所描绘的，缺血再灌注损伤之后射血分数和缩短分数受到显著影响。然而，施用一个单剂量的aptoll(0.45mg/kg)分别示出了18.3％和23.8％的恢复(图40)。所有这些数据一起表明aptoll对心肌梗塞之后心脏的肌肉收缩力具有保护作用，并且这种作用可以保护心脏功能。[0893]实例9.aptoll在实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)小鼠模型中的功效[0894]9.1.使用0.91mg/kg的aptoll进行测定[0895]为了评估aptoll对多发性硬化症(ms)的炎症组分的潜在神经保护作用，在eae小鼠模型中进行了测定。此模型是人类炎性脱髓鞘疾病ms的最常用的实验模型。[0896]用含有结核分枝杆菌的不完全弗氏佐剂中的mog35-55肽对麻醉的7周龄雌性c57/bl6小鼠进行皮下免疫。然后，在免疫时和48小时后通过尾静脉注射给小鼠静脉施用百日咳毒素。一个单剂量的aptoll(0.91mg/kg)在尾部静脉内施用，在eae的第一体征(发作)时单次团注。含有1mmmgcl2的pbs溶液用作对照(媒剂)。使用以下临床评分标准，每天检查小鼠的神经系统症状，自发作以来和在所有测定时间期间：0，没有可检测的体征；0.25，尖尾部下降；0.5，半尾部下降；0.75，除基部外尾部下降；1，尾部松弛；1.5，尾部松弛伴后肢局部无力；2，明显的后肢无力；2.5，单侧部分后肢麻痹；3，双侧后肢完全麻痹；3.5，后肢完全麻痹伴部分前肢无力；4，双侧前肢完全麻痹；5，死亡。[0897]结果：如果与媒剂相比，aptoll的施用在症状高峰期(发作后4天)示出临床评分降低27％，并且在测定结束时降低甚至更高(66％)(图41)。此数据表明aptoll的神经保护作用对疾病的炎症组分有影响。[0898]9.2.疾病发作之后24小时施用aptoll的功效[0899]进行了一项独立的测定，在eae的第一个体征(发作)后24小时，静脉内施用单剂量的aptoll(0.91mg/kg)，单次团注。[0900]结果：当在发作之后24小时注射aptoll时，观察到临床评分明显降低(图44)。[0901]9.3.使用不同剂量的aptoll进行测定：0.45、0.91、1.82、3.6mg/kg[0902]测定如第9.1节所述进行。[0903]组织处理：神经组织的提取和处理在发作后10天(药物施用时间)进行。进行安乐死剂量的经心脏灌注，使用蠕动泵通过循环系统用4％多聚甲醛(pfa)固定组织。然后获得组织，在这种情况下，是大脑和脊髓。接下来，将组织在pb中在10分钟内洗涤数次，通过连续三次在pb中不断增加的蔗糖浓度进行冷冻保护，并且最后在oct中冷冻，分成不同的部分(两部分(t1和t2)中的脑、小脑、颈脊髓、胸脊髓和腰脊髓)。t1用于此研究并且用低温恒温器在横向平面上以20微米的厚度切割。[0904]铬花青染色：为了分析cns脱髓鞘，进行了铬花青(ec)染色。将组织切片在室温(rt)下干燥2小时，然后在37℃下的炉子中再干燥另外2小时。将载玻片在rt下浸入冷丙酮中5分钟，并且允许通气30分钟以蒸发丙酮。随后，将切片在rt下浸入蒸馏水中的含有0.2％铬花青(西格玛(sigma))、0.5％硫酸(h2so4，西格玛)和4％三价铁铝(西格玛，10％在蒸馏水中制备)的染色溶液中30分钟。去除过量的染料，并且将切片在rt下浸入蒸馏水中的含5％三价铝(西格玛)的水溶液中10分钟，以区分染色的组织。再次用水去除过量的染料，并且将其在rt下浸入硼砂-亚铁氰化物溶液中10分钟。用水洗涤之后，在光场显微镜下验证染色的正确区分(有髓区域染色为蓝白色或淡黄色脱髓鞘区域)。为了保存，切片在70、80、90、96和100％乙醇浓度递增的乙醇溶液中脱水，在两个100％二甲苯浴中冲洗，并且用封固剂封固。[0905]免疫组织化学：为了检测切片中存在的抗原，让所述切片在rt下解冻和干燥1小时。然后，在rt和搅拌下用0.1mpb(磷酸盐缓冲液)中的10％甲醇进行预处理15分钟。在0.1mpb和1xpbs各10分钟洗涤两次之后，在封闭溶液中进行温育以避免非特异性结合(5％的正常驴血清(nds；密理博(millipore))并且0.02％的tritonx-100(西格玛奥德里奇公司(sigma-aldrich)在1xpbs中，在黑暗、湿室和rt中温育一小时。此后，将切片在第一抗体(mbp(大鼠，serotec公司)、nfh(兔，艾博抗公司(abcam))、iba1(豚鼠，新立德系统公司(synapticsystem))、olig2(兔，密理博)、cc1(小鼠，密理博)和pdgfrα(山羊，rd公司))的混合物在4℃下和湿度箱中在对应的封闭溶液中温育12小时，显影是通过在封闭溶液中以1:1000的浓度在rt下使用荧光第二抗体持续一小时进行的。然后将切片用(西格玛)染色，以在相对于原液(100μg/ml的双苯甲酰亚胺，西格玛-奥德里奇公司，在milliq水中)的1:10的浓度下在pbs中，并在rt下持续10分钟，在黑暗和潮湿的室中进行核心显影。最后，将切片在pbs中洗涤并在封固剂(southernbiotech公司)中用幼崽载玻片封固。[0906]图像和分析：使用leicasp-5共聚焦显微镜拍摄脊髓切口的图像。每只动物拍摄三张照片(马赛克)，在40倍放大倍率和512x512像素分辨率下，平面之间的间距为3μm。为了分析nfh、iba1和mbp的面积以及花青色素染色的脱髓鞘面积，使用imagej应用程序。用于3d和4d成像的imaris软件用于对小胶质细胞和细胞核进行计数。[0907]结果：如图45和46所见，在剂量为0.45mg/kg的情况下，eae-aptoll组的临床评分有所改善。在0.91mg/kgaptoll剂量的情况下，在症状发作时注射aptoll之后4天，eae的临床病程得到显著改善。在1.82mg/kgaptoll剂量的情况下，相对于媒剂组，注射aptoll之后5天，临床评分显著改善。在3.6mg/kgaptoll剂量的情况下，eae-aptoll组的临床评分略高于媒剂。因此，特别是用0.91mg/kg和1.82mg/kg的剂量进行治疗使eae临床病程曲线斜率显著降低。相对于媒剂组，在剂量为0.91mg/kg的情况下在开始之后4天和在剂量为1.82mg/kg的情况下在开始之后5天直到实验结束，动物达到的评分的这种差异是显著的。对接受0.91mg/kg和1.82mg/kg剂量的小鼠脊髓进行组织学分析，以研究此化合物的髓鞘再生和神经保护作用，并比较两种浓度。[0908]通过铬-花青染色分析脊髓切片的脱髓鞘区域(图47)，观察到媒剂组中白质脱髓鞘区域(未示出)的百分比高于用aptoll处理的那些动物。因此，aptoll在eae期间可以预防脱髓鞘过程，因为脱髓鞘面积％低于媒剂。[0909]接下来，在这两个剂量中分析不同的标志物，其中经处理的组与媒剂之间的差异更大(0.91mg/kg和1.82mg/kg)，以研究aptoll在此模型中可能具有的神经保护作用。使用mbp标志物(髓鞘碱性蛋白)研究存在于脊髓白质中的髓鞘面积，并且使用nfh标志物(神经丝重多肽蛋白，轴突损伤的标志物)研究神经轴突损伤，并且使用活化小胶质细胞的标志物(iba1，对小胶质细胞具有特异性的钙结合蛋白)研究处死时产生的炎症水平。在两种剂量中，在eae-aptoll组中均观察到更高百分比的mbp和nfh两者，并且相对于媒剂组，iba1显著降低(图48)。这表明这两种浓度下的aptoll在具有炎性组分的此ms动物模型中具有神经保护作用。[0910]为了确定aptoll的最佳浓度，计算了两个所选剂量之间(再)髓鞘形成、神经保护和炎症的比率。结果示出0.91mg/kg剂量的剂量效应比1.82mg/kg剂量的剂量效应有所改善。[0911]为了确定aptoll是否改善了髓鞘形成细胞的增殖和分化，进行了少突胶质细胞谱系的组织学研究。对于每个剂量，相对于经媒剂处理的组，在eae-aptoll组中观察到更大量的前体少突胶质细胞(pdgfrα 细胞，增殖标志物)和成熟少突胶质细胞(cc1 细胞，分化标志物)(图49)，从而证实先前通过使用髓鞘标志物mbp观察到的髓鞘再生作用。[0912]结论：通过在ms的eae动物模型中测试四种不同剂量的aptoll对aptoll的剂量应答研究表明，此类治疗的最佳剂量可以是0.91mg/kg，其中第二种选择为1.82mg/kg。在eae模型中出现症状时，与媒剂组中的动物相比，aptoll施用在经处理的动物中产生了显著的体重恢复和临床病程的显著减少。此外，除了产生轴突损伤和炎症的显著减少外，aptoll施用还对组织髓鞘再生有明显影响。与媒剂不同，这两个剂量的施用使脱髓鞘面积减少以及有髓鞘面积和神经丝数量增加。[0913]9.4.此研究中使用的aptoll[0914][0915]实例10.aptoll对大鼠的少突胶质前体细胞(opc)体外模型中促进髓鞘形成的功效[0916]此研究是盲目进行的，并且测定了aptoll对从7天大的大鼠中提取的opc的潜在促进髓鞘形成作用。为此，测量了用aptoll处理之后的opc的存活、增殖和分化。[0917]存活测定：在用对照、媒剂(含10mmmgcl2的pbs)、aptoll(20nm-200nm)和h2o2死亡阳性对照处理之前24小时铺板opc。温育24小时之后，按照制造商规格，通过mtt试剂盒测量细胞存活％，并且在595nm处测量信号。[0918]增殖测定：在用对照、媒剂(含10mmmgcl2的pbs)和aptoll(20nm-200nm)处理之前24小时铺板opc。然后，向细胞给予brdu脉冲6小时。24小时后将细胞固定在多聚甲醛溶液中，使用brdu和olig2作为第一抗体进行免疫细胞化学。为了对增殖细胞进行定量，通过共聚焦显微镜使图像可视化。[0919]分化测定：将opc铺板并生长24小时。然后，将培养基替换为补充有生长因子(pdgf-αyfgf2)的培养基，并且用对照(不含生长因子的培养基)、媒剂(含10mmmgcl2的pbs)、aptoll(20nm-200nm)和用甲状腺激素(t3)进行分化的阳性对照进行处理。将细胞固定在多聚甲醛溶液中，以用第一抗体mbp和olig2进行免疫细胞化学。为了对增殖细胞进行定量，通过共聚焦显微镜使图像可视化。[0920]用aptoll处理对opc增殖和分化示出了剂量依赖性影响。在200nmaptoll处理条件下，细胞增殖和分化分别增加了43.2％和53.6％。然而，没有观察到对细胞存活的影响(图42)。这些数据表明aptoll在导致ms模型中促进髓鞘形成的过程中的作用。这种作用也可能有益于治疗与其它tlr-4介导的病状相关的神经元组织损伤，如缺血性中风、出血性转化、出血性中风或心肌梗塞。[0921]实例11.aptoll治疗出血性中风或出血性转化的功效[0922]出血性中风和出血性转化与在缺血性中风中在同一组织(脑组织)中也观察到的生理变化有关，并且也已知是tlr-4介导的病状。因此，上文公开的用于表征本公开的适体对缺血性中风的作用的实验方法和本领域已知的其它方法将用于确定本公开的适体(例如，aptoll)治疗出血性中风和出血性转化以及其症状和后遗症的作用。[0923]预期的是，向患有出血性中风或出血性转化的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)将(i)使受损组织减少；(ii)使炎症减少；(iii)使预后和结果改善；(iv)使促炎生物标志物(例如，干扰素-γ、白介素-12p70、tnfα、il-6或其任何组合)的水平降低；(v)使生活质量提高；(vi)使功能评分，例如运动评分改善(例如，活动能力改善)；(vii)使存活率增加；或者(v)其任何组合。[0924]实例12.通过猪的缺血和冠状动脉再灌注实验程序研究aptoll治疗对心肌梗塞之后心脏功能和组织损伤的作用[0925]测试项目：aptoll被调配为冷冻干燥的单剂量小瓶，预先溶解在pbs 1mmcl2mg中并进行结构化。[0926]名称tlr4-4ft所需数量单剂量0.078mg/kg包装微量离心管方面无色冻干粉储存条件-20℃避光制备方案与本文件的第9.4节相同(实例9)溶解度至多0.05nmol/μl的水溶液制备时间使用前10分钟[0927]媒剂：制备pbs加1mmcl2mg的溶液作为媒剂。根据动物体重计算剂量(0.078mg/kg)。[0928]材料：苏木精-伊红、三色马森染色试剂、ttc、伊文思蓝和胎牛血清均来自西格玛公司。辣根过氧化物酶(hrp)缀合的抗小鼠第二抗体和液体3,3'-二氨基联苯胺(dab)底物来自dako公司。抗mmp-9抗体和人心脏肌钙蛋白1simple-stepelisa试剂盒(ab200016)来自艾博抗公司，蛋白质组剖线仪阵列(proteomeprofilerarray)(ary005b)来自r&d系统公司(r&dsystem)，氯胺酮(ketamine)来自辉瑞公司(pfizer)，咪达唑仑(midazolam)来自博朗公司(braun)，异氟醚(isoflurane)来自艾伯维公司(abbvie)，丙泊酚(propocol)来自费森尤斯公司(fresenius)，芬太尼(fentanyl)来自科恩制药(kernpharma)，地西泮(diazepam)来自罗氏公司(roche)，胺碘酮(amiodarone)来自赛诺菲安万特(sanofiaventis)。所有导管均来自强生公司(cordis)。以下是此研究中最常用的设备清单：5415r冷冻离心机来自艾本德公司(eppendorf)(德国汉堡)。化学发光成像系统fusionsolo-s和图像分析软件fusion-capt来自vilber-lourmat公司(德国埃伯哈德采尔)。tcs-sp5共聚焦显微镜来自徕卡公司(leica)(德国韦茨拉尔)。酶标仪来自伯腾公司(biotek)(佛蒙特州威努斯基)。nanodropone分光光度计来自赛默飞世尔科技公司(thermoscientific)(马萨诸塞州沃尔瑟姆)。引导导管、血管成形术球囊和导管导引器来自强生公司(佛罗里达州迈阿密)。诊断和可操纵导丝来自波士顿科学公司(bostonscientifics)(马萨诸塞州马尔堡)，并且球囊充气装置来自博朗公司(德国梅尔松根)。[0929]方案：动物和心源性休克(cs)程序[0930]约克郡母猪(37.8±5.2kg)预先肌肉注射氯胺酮(10mg/kg，辉瑞公司)和咪达唑仑(0.5mg/kg，博朗公司)。通过吸入异氟醚(艾伯维西班牙分公司(abbviespainslu))诱导麻醉，并且通过持续输注丙泊酚(2毫升/千克/小时，费森尤斯卡比公司(freseniuskabi))、芬太尼(50微克/千克/小时，科恩制药公司(kernpharma))和地西泮(10微克/千克/小时，罗氏公司)维持麻醉)。对动物进行插管并在100％氧饱和度下通气。动物分别接受5000iu肝素和胺碘酮(2毫克/千克/小时，赛诺菲安万特)，以避免导管的血液凝固和恶性心律失常。[0931]使用jl36f导管和血管成形术球囊(充气至8个大气压)，通过左前降支(lad)闭塞45分钟诱导缺血/再灌注。在发生心室纤颤/室性心动过速的情况下，施用双相dc电击(10-20焦耳)与直接手动胸外按压组合。lad闭塞45分钟之后，动脉被疏通，并且再灌注10分钟之后，静脉内施用治疗。治疗是盲施用的，10只动物用aptoll治疗，并且10只用对照媒剂治疗。在以下时间处从股动脉获得10ml动脉血：ami之前、ami后50分钟、75分钟、2小时、8小时、24小时、3天和7天。采集之后立即以3000rpm离心10分钟来分离血浆，并且所有样品在实验前均保持在-80℃下并储存以备将来研究。[0932]超声心动图：使用配备有1.9-4mhz扫描头的vividq超声系统(通用电气医疗集团(gehealthcare))通过超声心动图对猪心脏进行可视化。在麻醉的动物中，心脏的胸骨旁短轴视图图像以b模式记录，以便通过将光标定位在垂直于室间隔和左心室后壁的胸骨旁短轴视图中来允许m模式记录。根据这些记录，使用现场心脏软件包确定以下参数：收缩压和舒张压室间隔厚度(ivs)、收缩压和舒张压左心室内径(lvid)、收缩压和舒张压左心室后壁厚度(lvpw)、左心室射血分数(ef)、左心室缩短分数(fs)、心率(hr)和心输出量(co)。[0933]双伊文思蓝/ttc染色：通过伊文思蓝灌注和ttc染色评估心肌梗塞的扩展。到第7天，导管在与第0天相同的位置充气，以避免伊文思蓝灌注到风险区域的下游，并且从股动脉插入猪尾导管并向上放置到左心室，以便伊文思蓝灌注到全身循环中。灌注之后一分钟，通过注射氯化钾溶液处死动物，并且然后分离心脏，用盐水缓冲液洗涤3次，-20℃下冷冻12小时，并且从基部到顶端切成0.5cm的切片。将切片与溶解在盐水缓冲液中的1％ttc染料在37℃下一起温育20分钟，并且然后用10％多聚甲醛洗涤20分钟。通过共聚焦显微镜获取图像并且使用imagej软件进行分析，区分健康面积与风险面积和苍白坏死面积，从而计算坏死面积相对于风险面积的百分比。[0934]共聚焦显微镜：石蜡包埋的0.5μm心脏切片与抗mmp-9(在pbs1.5％bsa中以1:500稀释)第一抗体在4℃下温育过夜。用pbs洗涤3次后，将载玻片与alexa-fluor-647tm缀合的第二抗体在室温下温育1小时。载玻片用pbs洗涤3次，并且安装在含有hoechsttm的pbs培养基中，用于细胞核可视化。使用leicatcssp5共聚焦显微镜拍摄图像。每个条件获得至少三个不同的视野。[0935]确定.血浆肌钙蛋白i水平确定：按照制造商的说明书，使用来自艾博抗公司的商业试剂盒人心肌肌钙蛋白1simplesteptmelisa试剂盒确定血浆肌钙蛋白i。[0936]组织学和免疫组织荧光：通过伊红-苏木精染色使心脏形态可视化，并且通过马森三色染色检测胶原沉积。mmp-9的免疫组织化学检测是通过将样品与对应的第一抗体和第二抗体一起温育并且通过共聚焦显微镜检测结合的荧光缀合的第二抗体来进行的。通过使用非商业软件imagej评估信号的光密度确定。[0937]统计分析：所有值均以平均值±标准差给出。在5％的水平下报告了显著性。每当与共同对照进行比较时，差异的显著性通过t测试的邓奈特修改进行测试。[0938]结果：[0939]aptoll在再灌注之后24小时降低肌钙蛋白i水平。心肌肌钙蛋白i(tpni)在所谓的心绞痛胸痛的研究中非常有用，因为其对检测缺血性损伤具有很高的敏感性和特异性，这就是为什么其被常规用于那些既往有或没有急性冠状动脉综合征1诊断的患者的原因。手术8小时之后，两组动物的tpni值同样高，但在24小时之后，用aptoll治疗的组有29.5％的显著降低(图50)。[0940]aptoll在再灌注之后第7天诱导心脏功能恢复。为了评估再灌注之后3天和7天的心脏功能是否受到影响，通过经麻醉的猪的超声心动图确定了以下参数：[0941]ivsd：舒张末期室间隔厚度。[0942]lvidd：左心室舒张末期内径。[0943]lvpwd：舒张末期左心室后壁厚度。[0944]ivss：收缩末期室间隔厚度。[0945]lvids：左心室收缩末期内径。[0946]lvpws：收缩末期左心室后壁厚度。[0947]ef：左心室射血分数。[0948]fs：缩短分数。[0949]hr：心率。[0950]co：心输出量。[0951]再灌注之后3天对aptoll施用的应答没有发现差异(数据未示出)。然而，到第7天，ef和fs响应aptoll而显著增加(图51)。[0952]aptoll在再灌注之后第7天减少了左心室坏死和纤维化。此测试评估了aptoll是否可以有效减少心肌坏死。进行外科手术以检测心脏的健康灌注区(健康面积)、风险灌注区(风险面积)和梗塞非灌注区(坏死面积)。此外科手术方法允许使用风险区作为梗塞面积的百分比，以能够避免因每颗心脏的大小和进行冠状动脉闭塞的特定区域而导致的差异。[0953]治疗7天之后，使动物经受双导管插入术，在与第零天相同的点通过一根股动脉进入和闭塞冠状动脉前降支，并且通过另一根股动脉进入带有“猪尾”导管的左心室。一旦冠状动脉在与第0天相同的区域闭塞，“伊文思蓝”染料通过猪尾导管注射到左心室中，其中目的是将其灌注到动物中。以此方式，特别是在心脏中，除了冠状动脉被气囊闭塞时处于风险中的面积外，组织的健康面积被染成蓝色。最后，在动物被处死之后，将心脏在舒张期(通过注射氯化钾)分离，并横向切成0.5cm厚的切片。切片与ttc试剂一起温育，所述试剂被内化到非坏死细胞中，将所述切片染成红色(风险区)，而坏死细胞对染色不敏感(梗塞区，白色)。一旦进行此程序，就有可能检测到用aptoll治疗的动物的梗塞面积显著减少了大约28％(相对于处于风险中的面积)(图52，左图)。图52，右图展示了aptoll中观察到的梗塞面积比单独使用媒剂时观察到的梗塞面积小42％。[0954]为了使心脏心肌纤维的完整性可视化，并且还为了评估响应于缺血和随后的冠状动脉再灌注的炎症病灶的存在，将心脏切成0.5微米的横截面以进行曙红-苏木精染色，检测用aptoll治疗如何维持心肌组织的完整性，以及浸润数量的减少(图53，图a)。马森三色染色揭示了经安慰剂治疗的动物心脏中显著的心肌纤维化(图53，图b)。[0955]aptoll在再灌注之后第7天抑制mmp-9的表达。胞外基质的降解是心肌重塑和修复期间的关键步骤。基质金属蛋白酶9(mmp-9)是不良重塑的标志物，在此过程中起着关键作用，因为其会降解胞外基质组分。在用aptoll治疗的猪中，到再灌注之后第7天，mmp-9的表达相对于安慰剂组显著降低了40％，如在先前描述的相同心脏切片中检测到的那样，通过使用特异性抗mmp-9抗体的共聚焦显微镜免疫荧光(图54)。[0956]结论：总之，这些结果表明aptoll是一种适用于治疗ami的治疗剂。其它已经表明tlr4与急性心肌梗塞(ami；心脏病发作)的不良结果相关。目前的研究表明，用aptoll的治疗通过以下来诱导心脏保护作用：(i)下调炎症过程；(ii)减少胞外基质的降解，并且因此改善心肌重构，保留心室解剖结构和心脏功能；以及(iii)减少梗塞的进展。[0957]实例13.通过qpcr的aptoll的组织分布[0958]将用hilytetmfluor488染料(0.45mg/kg)或媒剂标记的aptoll向威斯塔雄性大鼠(8-10周龄)静脉内施用，以便对不同组织(即心脏、肺、肾脏、脾脏、肝脏、小肠、大肠、胰腺、胸腺和室管膜脂肪)中的适体进行定量。分析了以下各组：[0959]-nv：用媒剂处理的原初大鼠(n＝2)。[0960]-n-1小时大鼠：用aptoll处理的原初大鼠(n＝2)。注射之后1小时收集组织。[0961]-n-24小时大鼠：用aptoll处理的原初大鼠(n＝2)。注射之后24小时收集组织。[0962]-i-1小时大鼠：闭塞之后10分钟用aptoll处理的缺血大鼠(电凝pmcao；n＝2)。注射之后1小时收集组织。[0963]-i-24小时大鼠：闭塞之后10分钟用aptoll处理的原初大鼠(电凝pmcao；n＝2)。注射之后24小时收集组织。[0964]在大脑中aptoll评估的特定情况下，6只缺血(w1-6)和1只原初大鼠用aptoll注射(静脉内0.45mg/kg，闭塞之后10分钟)，并且1小时后收集大脑。在心脏灌注描述的时间对所有动物进行麻醉和安乐死。组织用盐水输注洗涤，收集，并且立即在-80℃下冷冻。[0965]在研究的第二部分，每个器官的组织都被解冻并称重。除了胸腺和心脏(心房)外，每个组织的大约100mg用1ml的核唑(nucleozol)(马切雷-内格尔公司(macherey-nagel))处理，其中重大约50mg、500μl的核唑用于获得rna。对于所有提取，测量rna水平并在1.2％琼脂糖凝胶中检查其完整性。[0966]将一定体积的rna(25μl)用rna酶a处理30分钟，并且通过qpcr使用适当的引物并在实时热循环仪onesepplus(应用生物系统公司(appliedbiosystems))中使用试剂盒“诺唯赞公司(vazyme)的aceqqpcrgreenmastermix”确定aptoll水平。使用增加浓度的aptoll-hilyte-488(0.001-10fmole)作为标准模式。计算适体的量/组织的g。[0967]结果和结论：[0968]1.aptoll主要存在于原初大鼠和缺血性大鼠两者中的注射之后1小时的肾脏、脾脏和肝脏中。然而，注射之后24小时，aptoll水平几乎无法检测到(图55，图a、b)。[0969]2.在大脑中，aptoll在缺血性大鼠(主要在同侧半球)中可检测到，但在原初大鼠中无法检测到，从而证实了aptoll在生理条件下无法跨过bbb(图55，图c)。[0970]***[0971]应当理解，具体实施方式部分，而不是
发明内容和摘要部分，旨在用于解释权利要求。
发明内容和摘要部分可以阐述发明人所设想的本公开的一个或多个示例性实施例但不是全部示例性实施例，并且因此，并不旨在以任何方式限制本公开和所附权利要求。[0972]上文已经借助功能构建块描述了本公开，所述功能构建块展示了指定功能的实施方案和其关系。为便于描述，本文已任意定义了这些功能构建块的边界。只要适当地执行指定的功能和其关系，就可以定义替代边界。[0973]具体实施例的前述描述将如此完全地揭示本公开的一般性质，使得在不需要过度实验、不背离本公开的一般概念的情况下，通过应用本领域技术内的知识，其他人可以容易地对此类具体实施例的各种应用进行修改和/或改编。因此，基于本文所呈现的教导和指导，此类改编和修改旨在处于所公开的实施例的等效物的含义和范围内。应该理解，本文中的措辞或术语是出于描述而非限制性目的，使得本说明书的术语或措辞将由技术人员鉴于教导和指导来解释。[0974]本公开的广度和范围不应当受限于任何上文描述的示例性实施例，而是应当仅根据以下权利要求及其等效物来限定。当前第1页12当前第1页12
技术领域：
：1.本公开提供了用于治疗tlr-4介导的疾病和病状的方法，所述方法包括施用特异性靶向tlr-4的胞外结构域的核酸适体。
背景技术：
：：2.toll样受体(tlr)是最初针对其在先天免疫的活化中的也可以控制适应性免疫应答的活化的作用而被鉴定的模式识别受体家族。tlr-4是第一个在哺乳动物中表征的tlr。最重要的内源性tlr-4配体是响应组织或细胞损伤而释放的分子。因此，tlr-4涉及与细胞损伤组织相关的多种非常普遍的病理，如中风。3.先天免疫，并且具体是tlr涉及多种病理，激发了对开发这些受体的激动剂和拮抗剂作为药理学目标的兴趣。然而，能够调节tlr-4的药物很少；此外，通常，目前正在开发的能够调节tlr-4并且治疗或预防tlr-4介导的药物适用于治疗特定病状或有限数量的病状。因此，本领域需要具有特异性结合并抑制tlr-4的能力并且可用作治疗与tlr-4的过表达或过度活化相关的广泛疾病和病状的治疗剂的广谱分子。技术实现要素：4.本公开提供了一种用于减轻或改善急性心肌梗塞的至少一种症状或后遗症的适体，其中(a)所述适体的长度介于40与100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4(或表1的任何适体序列或其组合)组成的组，其中5.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且6.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者7.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)具有至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力；并且其中8.在所述急性心肌梗塞期间、之前或之后立即施用所述适体。9.在一个实施例中，与对照病状相比，所述适体的所述施用使梗塞面积减少，并且特别是梗塞面积减少至少25％。10.在另一个实施例中，所述适体的所述施用使由所述急性心肌梗塞引起的纤维化和/或坏死减少。11.在另一个实施例中，所述适体的所述施用12.(i)使心脏功能改善；13.(ii)使胞外基质降解减少；14.(iii)使心脏重塑改善；15.(iv)使心室解剖保存；16.(v)使梗塞进展减少；或者17.(vi)其任何组合。18.本公开还提供了如上定义的适体，用于减轻或改善神经肌肉或神经退行性疾病或病状的至少一种症状或后遗症，其中在所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状发作期间、之前或之后施用所述适体。19.在一个实施例中，所述适体的所述施用20.(i)使脱髓鞘减少；21.(ii)使轴突损伤减少；或者22.(iii)其组合。23.在另一个实施例中，与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使脱髓鞘抑制至少20-80％。24.在另一个实施例中，与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使轴突损伤减少(即，预防轴突损伤)至少10-30％。25.在一些实施例中，所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状选自由以下组成的组：肌萎缩性侧索硬化症(als)、帕金森氏病(parkinson'sdisease)、亨廷顿氏病(huntington'sdisease)、阿尔茨海默氏病(alzheimer'sdisease)和血管性痴呆病。26.在一些实施例中，治疗中使用的适体是aptoll。在其它实施例中，所述适体以介于约0.5mg/剂量与约14mg/剂量之间的剂量范围施用。在一些实施例中，所述适体以介于每剂量约0.007mg/kg与每剂量约0.2mg/kg之间的剂量范围施用。在一些实施例中，所述适体在ph7.4的pbs(氯化钠、氯化钾、脱水磷酸氢二钠和磷酸二氢钾)中调配，所述pbs包括六水合氯化镁，并且任选地包括a-海藻糖二水合物。在一个实施例中，所述适体通过输注静脉内施用。27.本公开还提供了治疗有需要的受试者的tlr-4介导的疾病和病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)中风的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个剂量的长度为40到80个核碱基的核酸适体，其中所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化。在一些方面，所述适体与所述表位的结合减少tlr-4活化。在一些方面，所述适体与所述表位的结合抑制tlr-4活化。28.在一些方面，所述方法进一步包括施用另外的治疗或其组合。在一些方面，所述另外的治疗是第二tlr-4拮抗剂。在一些方面，所述另外的治疗是外科手术干预。在一些方面，所述另外的治疗包括施用抗炎剂、核酸、肽或其组合。在一些方面，所述肽包括抗体或其抗原结合片段。在一些方面，所述核酸包括反义寡核苷酸、抗mir、sirna或shrna。29.在一些方面，所述核酸适体包括与seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)或其组合至少70％相同的序列。在一些方面，所述核酸适体进一步包括与所述适体共价或非共价连接的生物活性分子。在一些方面，所述核酸适体与和seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或组合)的核酸适体相同的tlr-4表位交叉竞争或与所述表位结合。在一些方面，所述核酸适体与和由seqidno:1、2、3或4(或表1的任何适体序列或其组合)的核酸适体识别的tlr-4表位重叠的表位交叉竞争或与所述表位结合。30.在一些方面，所述核酸适体以包括多个剂量的剂量方案施用。在一些方面，同时、连续或其组合地施用多剂量。在一些方面，所述多剂量包括两个、三个、或四个、或五个剂量。在一些方面，每个剂量包括介于0.007与0.2mg/kg之间的核酸适体。31.在一些方面，所述核酸适体通过静脉内、动脉内或腹膜内施用。在一些方面，所述tlr-4介导的疾病或病状是缺血性疾病或病状。在一些方面，所述缺血性病状是心肌梗塞或缺血性中风。在一些方面，所述tlr-4介导的疾病或病状是出血性病状。在一些方面，所述出血性病状是出血性中风或出血性转化。在一些方面，所述tlr-4介导的疾病或病状是神经肌肉疾病或病状。在一些方面，所述神经肌肉疾病或病状是神经退行性疾病或病状。在一些方面，所述神经退行性疾病或病状是多发性硬化症。附图说明32.图1示出了本公开的适体(aptoll；seqidno:1)的一级、二级和三级序列。33.图2示出了适体aptlr#1r和aptlr#4f在体外的拮抗作用。在将适体(0.2-200nm)添加到温育培养基之前，将表达htlr-4的与活化报告基因系统seap偶联的hek-blue细胞与选择性tlr-4激动剂lps(200ng/ml)一起温育一小时。htlr-4活化被定量，示出在存在lps的情况下两种适体的浓度依赖性拮抗作用。34.图3示出了适体aptlr#1r和aptlr#4f的序列优化。示意性图示示出了不涉及3d结构获取的适体aptlr#1r和aptlr#4f的序列的部分的消除，从而导致对应的截短形式aptlr#1rt和aptlr#4ft。35.图4示出了对截短的适体aptlr#1rt和aptlr#4ft的htlr-4结合能力的维持的证实。a)流式细胞仪图，描述了与对照hek293细胞相比，aptlr#1rt(红线)和aptlr#4ft(蓝线)对293-htlra细胞中表达的htlr-4的定量；b)流式细胞仪图，示出了在用lps刺激293-htlra细胞之后，截短的适体与htlr-4结合的轻微变化。36.图5示出了对截短的适体aptlr#1rt和aptlr#4ft在表达htlr-4的hek-blue细胞中的拮抗作用的证实。a)与亲本适体aptlr#1r和aptlr#4f相比，示出了由报告基因系统seap定量的htlr-4活化。b)由seap定量的h-tlr-4活化的时间窗口。37.图6示出了对由内源性配体(damp)活化的htlr-4的抑制。htlr-4活性测定示出了aptlr#1r、aptlr#4f和对应的截短形式(0.2-200nm)对由内源性tlr-4激动剂介导的活化的抑制作用。38.图7示出了aptoll对下游tlr-4细胞效应子的抑制作用。a)示意图示出了用于nox检测的格利斯(griess)测定的化学基础；b)对用tlr-4激动剂lps活化并在一小时后与aptoll(20和200nm)一起温育的腹膜鼠巨噬细胞培养基中nox浓度的定量。39.图8示出了aptoll对tlr-4的体外结合亲和力。对向食蟹猴单核细胞(a)和人单核细胞(b)施用不同浓度的aptoll之后受体饱和度％的定量。40.图9示出了aptoll在其它tlr中的激动作用。人tlr2-3-4-5-7-8-和9表达细胞系中的tlr活性测定。与aptoll(20和200nm)一起温育之后未检测到激动作用。41.图10示出了分别用htlr2和htlr5激动剂pam3和flat-st活化的hek-blue-htlr2和hek-blue-htlr5细胞中的htlr2和htlr5活性测定。与aptoll(20和200nm)一起温育对先前被适当激动剂活化的htlr2和htlr5的活化没有示出抑制作用。42.图11示出了aptoll在小鼠实验性中风之后的急性保护作用。a)对aptoll剂量应答研究中的梗塞体积的定量示出了对pmcao之后10分钟腹膜内(i.p.)给予0.45mg/kg和0.9mg/kg的保护；b)对tlr4敲除小鼠的梗塞体积的定量示出了aptoll没有作用。c)对通过静脉施用aptoll时野生型动物的梗塞体积的定量；(*)单向方差分析p《0.05对媒剂。43.图12示出了电凝小鼠模型在永久性大脑中动脉闭塞中由aptoll介导的保护。对当在闭塞之后10分钟施用0.91mg/kgofaptoll时，缺血之后24小时梗塞体积的定量。(*)t-学生p《0.05对媒剂。44.图13示出了在通过电凝进行永久性大脑中动脉闭塞之后在大鼠中施用两个剂量和三个剂量(缺血之后10分钟、2小时和6小时)的aptoll。a)对aptoll多剂量研究中的梗塞体积的定量示出了，当在缺血之后10分钟、10分钟和2小时以及10分钟-2小时和6小时施用0.45mg/kg的适体时的保护。(*)单向方差分析p《0.05对媒剂。45.图14示出了大鼠缺血再灌注之后由aptoll介导的保护。a)定量示出了在威斯塔(wistar)大鼠中的tmcao之后24小时梗塞大小减小。b)对sd大鼠的aptoll或媒剂治疗之后的梗塞体积的定量。(*)t-学生p《0.05对媒剂。46.图15示出了小鼠中风之后aptoll保护的治疗窗口的设计方案。对在pmcao之后10分钟、2小时或6小时被给予aptoll的小鼠永久性缺血之后24小时的梗塞面积的定量，示出了在所有测试时间处类似的保护程度。(*)单向方差分析p《0.05对媒剂。47.图16示出了经aptoll/赋形剂治疗的动物的缺血之后细胞因子确定。对pmcao之后24小时血浆中细胞因子水平的定量。结果示出，在aptoll治疗之后，动物血浆中的一些促炎细胞因子显著减少。(*)t-学生p《0.05对媒剂。48.图17示出了在小鼠中由急性aptoll施用(闭塞之后10分钟)诱导的长期解剖和功能保护。a)中风之后24、48和72小时处t2w-mri对脑水肿的定量示出了对用aptoll治疗的小鼠的持续保护；b)中风之后21天在尼氏染色的切片上对梗塞面积的定量，示出了由急性aptoll施用介导的长期保护；c-d)对中风之后21天步幅长度的定量示出了在用aptoll急性治疗的动物中没有神经缺陷；e)照片示出了足迹测试中的染色路径以及可能因中风而改变的不同距离。(*)学生t测试p《0.05对媒剂(a，b)或双向方差分析p《0.05对假手术(sham)(c，d)；(#)双向方差分析p《0.05对mcao媒剂。49.图18示出了由在大鼠中急性施用aptoll(闭塞之后10分钟)诱导的长期运动保护。在pmcao之后至多21天通过运动评分测试评估神经功能，示出了在由aptoll诱导的中风之后2天和7天时的显著保护(n＝8)。数据表示平均值±sem。2向方差分析，然后是邦费罗尼测试(bonferronitest)(*p《0.05对媒剂)。50.图19示出了aptoll(0.91mg/kg，lps注射之后10分钟)在败血症小鼠模型中的抗内毒素血症作用。a)腹膜内lps注射(20mg/kg)之后8小时和24小时小鼠体重减轻的％；b)腹膜内注射(20mg/kg)之后8小时和24小时小鼠温度损失的％；c)小鼠24小时的累积败血症评分，示出了用aptoll注射的动物显著降低；d)lps注射(20mg/kg)之后至多72小时的存活曲线，示出了用aptoll注射的动物的存活率增加。51.图20示出了impaptoll药物产品的制造过程的流程图。imp是在完全gmp条件下制造的。52.图21示出了aptoll的静脉内施用对生理参数的影响。当与媒剂的静脉内施用相比时，没有观察到适体的施用对血液中测量的一系列生理参数的相关影响。53.图22示出了用化合物治疗的人混合皮质神经元、皮质谷氨酸能神经元和皮质gaba能神经元。a)细胞活力(应注意，0.01μm实际上是无治疗对照病状(0μm)；仅用于对数绘图目的)。b)治疗10天之后培养物的显微照片。54.图23示出了单次静脉内施用aptoll对大鼠呼吸功能的影响。a)呼吸速率。b)潮气量。c)分钟通气量。55.图24示出了适体与血浆蛋白的结合。洗脱图示出了与人(a)、大鼠(b)和nhp(c)血浆蛋白结合和未结合的部分中的荧光aptoll。灰色阴影区域对应于未结合的适体峰。所述图分别示出了三个独立样品的数据。56.图25示出了对外周细胞和中央细胞中的aptoll的检测。a)对alexafluor488标记的aptoll(4ft-488；0.91mg/kg)在wt和tlr4-ko小鼠中的流式细胞术外周分析。b)在wt小鼠中施用适体之后5分钟，alexafluor488标记的aptoll处于粒细胞区域中。c)静脉注射之后24小时，alexafluor488标记的aptoll在脑梗塞区域内的分布。适体在缺血核心(绿色)内的分布模式，通过用与cy3缀合的抗alexa-488抗体(c；红色)进行探测来证实。d)未缀合的aptoll用作阴性对照。57.图26示出了aptoll在37℃下对λ-核酸外切酶a)、dna酶ib)和大鼠、猴和人血浆c)降解的抗性。示出了来自3个实验的代表性凝胶。58.图27示出了aptoll的直方图。与aptoll(20nm)一起温育示出了对所选的任何靶标(无论是gpcr、离子通道、激酶、核受体、转运蛋白还是其它非激酶酶)的活化没有抑制作用。a)摄取结果。b)结合测定。59.图28示出了体外吸收。与aptoll(20nm)一起温育示出了对所选转运蛋白没有抑制作用。60.图29示出了aptoll的直方图。施用aptoll(20nm)之后对照值的抑制％。结果示出了对所评估的cyp酶的任何抑制没有显著影响。61.图30示出了cyp酶的诱导。施用aptoll(2-20-200nm)之后媒剂活性的倍数诱导。使用10种已知cyp诱导剂和5种已知cyp非诱导剂预先确定截止值。结果示出了对所评估的任何cyp酶的诱导没有显著影响。62.图31示出了aptoll的体外细胞毒性测定。细胞活力测定a)mtt活性和b)ldh确定，对hepg2和hl60细胞系与aptoll(2-2000nm)一起温育24和48小时的效果进行定量，示出了在生物活性浓度(2-20nm)下没有细胞毒性作用。(*)学生t测试p《0.05对对照细胞。63.图32示出了涉及gj96nd研究(斯普拉格道利(spraguedawley)大鼠药代动力学研究)的组的设计。64.图33示出了在mc47kc研究(食蟹猴毒性研究)中获得的tmax、cmax和auct值的总结。65.图34示出了体外细菌细胞毒性测定aptoll。细胞毒性的结果表示为对照生长(od650)的百分比。66.图35示出了除图34中存在的那些外的体外细菌细胞毒性测定aptoll。细胞毒性的结果表示为对照生长(od650)的百分比。67.图36示出了aptoll的体外ames测试。弱阳性，如果p《0.05，表示为“ ”；强阳性，如果p《0.01，表示为“ ”；非常强的阳性，如果p《0.001，表示为“ ”；在可能时，评分显著低于背景的化合物被标记。这可能表明生长测定无法检测到低水平的细胞毒性。如下文所描述地标记化合物。如果p《0.05，标记为“《”，如果p《0.01，标记为“《《”，如果p《0.001，标记为“《《《”，连字符(-)表示阴性结果。68.图37示出了除图36中呈现的那些结果外aptoll的体外ames测试结果。69.图38示出了aptoll的体外微核测定。不同浓度的aptoll处理之后的微核细胞％。' 'p《0.05通过t测试和微核细胞％至少比背景水平高3倍。' /-'p《0.05通过t测试和微核细胞％至少比背景水平高2倍。'-'p》0.05通过t测试和微核细胞％比背景水平高小于2倍。cyto：高细胞毒性导致可评分细胞数量不足(》80％细胞毒性)。70.图39示出了a)大鼠的时间窗口研究的设计方案。当在再灌注之前30分钟(b.r.)和再灌注之后10分钟-2小时-6小时-9小时-12小时或24小时施用aptoll时，对大鼠短暂缺血之后72小时的梗塞体积(b)和水肿(c)的定量，证实对tmcao大鼠的保护，将治疗窗口延长至多12小时，并且在再灌注之前施用aptoll时进行保护。71.图40示出了aptoll在心脏肌肉收缩性中的作用。左心室超声心动图参数a)射血分数(％)和b)缩短分数(％)在缺血-再灌注心肌梗塞(ir)之前(基础)和之后72小时从每只大鼠中进行记录。再灌注之后10分钟通过静脉注射媒剂(含mgcl2的pbs，n＝7)或单剂量的aptoll(0.45mg/kg，n＝11)施用治疗。(*)示出的数据表示平均值±sem。t学生**p《0.01对媒剂。72.图41示出了多发性硬化症的临床前研究结果。eae模型期间的临床评分：在症状发作时，用媒剂(n＝7)或0.91mg/kg的aptoll(n＝12)静脉内注射的小鼠的疾病进展。(*)示出的数据表示平均值±sem。t学生*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001对媒剂。73.图42示出了aptoll在来自7天大的大鼠的opc中的作用。a)通过mtt测定确定的细胞存活率被描述为对照(n＝3)的％。h2o2用作死亡对照。b)增殖通过免疫细胞化学进行定量，并且描绘为细胞brdu /olig2 相对于olig2 (n＝6)的％。c)分化通过免疫细胞化学进行定量，并且描绘为细胞mbp /olig2 相对于olig2 (n＝5)的％。t3(甲状腺激素)用作分化对照。(*)示出的数据表示平均值±sem。t学生*p《0.05对媒剂。74.图43示出了对在通过电凝进行永久性大脑中动脉闭塞之后大鼠的aptoll多剂量研究中梗塞体积的定量。在脑缺血之后，施用一个(10分钟)、二个(10分钟和2小时)、三个(10分钟、2小时和6小时)、四个(10分钟、2小时、6小时和24小时)或五个(10分钟、2小时、6小时、24小时和48小时)0.45mg/kg剂量的适体。在所有测试剂量下均观察到保护。将所有组与其相应的媒剂组进行比较(1、2、3和4剂量与其在48小时处安乐死的媒剂组进行比较，并且第5组和其媒剂对照组在72小时处被安乐死)。(*)t测试学生p《0.05对媒剂。75.图44示出了当在症状发作之后24小时施用aptoll(静脉内，0.91mg/kg)时在实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)小鼠模型中的临床评分。76.图45示出了aptoll在ms的小鼠eae模型中的结果。在独立测定中静脉内施用不同剂量的aptoll之后临床评分的演变。用于每个剂量的动物数量是：0.45mg/kg剂量：6eae-aptoll、15eae-veh和5假手术；0.91mg/kg剂量：13eae-aptoll、6eae-veh和20假手术；剂量1.82mg/kg：8eae-aptoll、7eae-veh和8假手术并且对于剂量3.6mg/kg：5eae-aptoll、15eae-veh和5假手术。eae-aptoll＝用aptoll治疗的eae模型小鼠。eae-veh＝用媒剂治疗的eae模型小鼠。77.图46示出了在ms的eae模型中研究的四种剂量的aptoll(静脉内，0.45mg/kg、0.91mg/kg、1.82mg/kg和3.6mg/kg)的比较。数据示出了与媒剂组相比，用每个剂量的aptoll治疗的动物的临床过程的随访。78.图47示出了在用不同剂量的aptoll或媒剂治疗的动物的脊髓切片中通过铬-花青染色测量的髓鞘损失的研究结果。表示了对相对于每个实验组中白质面积的脱髓鞘百分比的定量。aptoll在研究的所有剂量下均诱导脱髓鞘面积减少。79.图48示出了通过eae-aptoll(0.91和1.82mg/kg)和eae-veh小鼠进行比较的髓鞘再生、轴突损伤和炎症的组织学研究结果。图形表示髓鞘面积(对mbp标志物的定量)。轴突损伤面积的图形表示(对nfh标志物的定量)。对小胶质细胞相对于总细胞的百分比(iba1标志物)的定量。80.图49示出了对在施用eae-aptoll(0.91和1.82mg/kg)和eae-veh之后，少突胶质细胞谱系olig2 细胞、成熟细胞(cc1 )和少突胶质细胞前体细胞(pdgfrα)的定量。81.图50示出了在猪的局部缺血/再灌注心肌梗塞模型中再灌注后8小时和24小时血浆中的心肌肌钙蛋白i(ctni)水平。值表示为平均值±sd*p《0.002aptoll24小时(n＝10)对媒剂24小时(n＝10)。82.图51示出了再灌注之后7天猪的心脏功能，表示为ef(射血分数)和fs(缩短分数)。n＝9aptoll(适体，静脉内，0.078mg/kg)/8安慰剂(对照)。数据表示为平均值±sd。ef：*p《0.0006适体对对照。fs：*p《0.003适体对对照。83.图52示出了在用aptoll(静脉内，0.078mg/kg)或媒剂治疗7天之后进行双导管插入术之后梗塞面积的减少。a)在0.5cm心脏切片中进行ttc/evansblue双染色，示出了健康面积(用h标记)、危险面积(r)和坏死(梗塞)面积(白色)。b)对梗塞面积的定量表示为风险面积的百分比。值表示为平均值±sd。*p《0.002安慰剂(媒剂)对aptoll。84.图53示出了(a)中央面板：再灌注和h&e染色之后7天的0.5μm心脏切片的明场显微术显微照片(20x)。外部面板：中央面板的放大倍数(60x)。n＝5aptoll/4安慰剂。(b)再灌注和用马松三色(massontrichrome)染色之后7天的0.5μm心脏切片的明场显微术显微照片。n＝5aptoll/4安慰剂。85.图54示出了再灌注7天之后，用aptoll或安慰剂mmp-9治疗的猪的心脏切片中基质金属肽酶9(mmp-9)的共聚焦显微术检测。细胞核用荧光探针4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)染色。n＝5aptoll/4安慰剂。值表示为平均值±sd。*p《0.001安慰剂对aptoll。86.图55示出了通过以下通过qpcr确定的aptoll的组织分布：(a)对心、肺、肾、脾、肝、小肠、胰腺、胸腺和室管膜脂肪中aptoll的定量。(b)对脾、肾和肝中的aptoll的定量。(c)aptoll在缺血(同侧和对侧半球)和原初大鼠的大脑中的分布。具体实施方式87.本公开内容涉及治疗tlr-4介导的疾病和病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症)的方法，所述方法包括单独或与至少另一种通常用于治疗疾病或病状的疗法例如心肌梗塞中的药物和/或机械溶栓(例如，血栓切除术)组合而向有需要的患者施用至少一种治疗有效剂量的本公开的至少一种核酸适体(例如，aptoll)。还提供了核酸适体；经化学修饰的核酸适体；包括适体的药物组合物和调配物；用于实施本公开的方法的剂量和剂量方案；试剂盒和制品；以及制造和调配方法。88.本文公开的疾病和病状表示影响不同组织和器官、具有不同原因并且具有多种症状和后遗症的tlr-4介导的疾病和病状的广泛样品，这证明本公开的核酸适体是通过调节tlr-4介导的细胞信号传导，可以成功应用于多种疾病、病状以及其症状和后遗症的广谱药物。89.所述tlr-4介导的疾病和病状包括例如急性疾病和病状，如小肠结肠炎、流感、缺血性中风、败血症、肾缺血-再灌注、肝缺血-再灌注、脑内出血或心肌缺血；亚急性疾病和病状，如多发性硬化症、戒瘾症、子宫腺肌病、角膜炎或肺部炎症；慢性疾病和病状，如类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、哮喘、狼疮、骨质疏松症、移植排斥、皮炎、牛皮癣、肥胖、ii型糖尿病、神经性疼痛、高血压、rla、主动脉瘤、结肠癌、弥漫性轴索损伤或慢性疼痛。所述tlr-4介导的疾病和病状还包括例如乳腺癌、肺癌、胰腺癌、皮肤癌、胃肠癌、肝癌、膀胱癌、头颈癌、食道癌、胃癌、结肠直肠癌、卵巢癌、宫颈癌或前列腺癌。参见例如，mai等人(2013)《肿瘤靶标与疗法(oncotargetsandtherapy)》6:1573-87，所述文献通过引用整体并入本文。通过抑制tlr-4可以减少癌症中的细胞迁移和侵袭；因此，可以通过抑制tlr-4来减少癌症转移。tlr-4抑制还可以减少肝脂肪变性。因此，本文公开的方法和组合物可以应用于治疗本文公开的tlr-4介导的疾病和病状中的任何疾病和病状，单独或与通常用于治疗此类tlr-4介导的疾病和病状的治疗干预(例如，药理学和/或外科手术)组合。此外，本文公开的方法和组合物可以用于治疗与本文公开的任何tlr-4介导的疾病和病状以及本领域已知的其它tlr-4介导的疾病和病状相关的本领域已知的症状和/或后遗症。例如，关于使用本文公开的方法治疗如癌症等病状，所公开的方法和组合物可以例如减少或预防肿瘤生长、减缓进展、抑制或减少血管生成、抑制或减少肿瘤侵袭、抑制或减少转移、提高生存率、提高生活质量、改善预后等。90.tlr-4过表达可能导致对化学疗法的抗性，例如，卵巢癌对紫杉醇的抗性和前列腺癌对sirna疗法的抗性。tlr-4信号传导也与肝癌对化学疗法的抗性有关。因此，本文公开的方法和组合物可以用于降低、预防或逆转癌症患者对化学疗法的抗性。91.肿瘤微环境中免疫和炎症细胞中的tlr-4信号传导导致炎症细胞因子的产生，这可能导致肿瘤相关巨噬细胞的进一步极化、成纤维细胞转化为肿瘤启动子癌症相关的成纤维细胞、树突细胞转化为肿瘤相关的dc，以及使未成熟髓样细胞的促肿瘤发生功能活化。因此，在一些方面，本公开的方法和组合物可以用于：(i)抑制或减少炎性细胞因子的产生；(ii)减少或抑制肿瘤相关巨噬细胞的极化；(iii)减少或抑制成纤维细胞转化为肿瘤启动子癌症相关的成纤维细胞；(iv)减少或抑制树突细胞转化为肿瘤相关dc；(v)减少或抑制未成熟髓细胞的促肿瘤发生功能的活化；或者(vi)其任何组合。92.增加的tlr-4活化与胰岛素抗性有关。因此，对于肥胖症或糖尿病，本文公开的方法和组合物可以用于降低或预防胰岛素抗性。93.宫内感染中tlr-4的活化导致子宫平滑肌收缩。因此，本文公开的方法和组合物可以用于预防或抑制子宫平滑肌收缩。94.tlr-4的活化也与若干种自身免疫性炎性疾病有关，例如人类系统性硬化症(ssc)、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征(sjogren'ssyndrome)、银屑病、多发性硬化症或自身免疫性糖尿病，并且已被特别观察到，tlr-4的抑制减少纤维化，例如皮肤或肺纤维化。因此，本文公开的方法和组合物可以用于治疗或减轻与tlr-4表达和/或活化增加相关的自身免疫性炎性疾病的症状，如人类系统性硬化症(ssc)、类风湿性关节炎、oxforddictionaryofbiochemistryandmolecularbiology)》,修订版,2000,牛津大学出版社(oxforduniversitypress)。105.用国际单位制(si)接受的形式表示单位、前缀和符号。数值范围包含定义所述范围的数字。在详述值的范围的情况下，应当理解，还具体公开了所述范围的所述上限与下限之间的每个中间整数值和其每个分数，以及此类值之间的每个子范围。任何范围的上限和下限可以独立地包含在所述范围内或排除在所述范围之外，并且包含任一限值、不包含两个限值或包含两个限值的每个范围也涵盖在本公开内。因此，本文所述的范围应被理解为所述范围内的所有值的简写，包含所述的端点。例如，1到10的范围应被理解为包含来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组的任何数字、数字组合或子范围。106.在明确详述值的情况下，应当理解，与所述数值大致相同数量或量的值也在本公开的范围内。在公开组合的情况下，所述组合的要素的每个子组合也被具体公开并且处于本公开的范围内。相反，在单独公开不同元素或元素组的情况下，也公开了其组合。在公开内容的任何要素被公开为具有多个替代方案的情况下，也特此公开其中每个替代方案被单独排除或以与其它替代方案的任何组合形式被排除的所述公开的实例；公开内容的不止一个元素可以具有此类排除，并且具有此类排除的元素的所有组合特此被公开。107.核苷酸以其普遍接受的单字母代码表示。除非另有说明，核苷酸序列以5'到3'方向从左向右书写。核苷酸在本文中通过iupac-iub生物化学命名委员会(iupac-iubbiochemicalnomenclaturecommission)推荐的通常已知的单字母符号来表示。因此，“a”表示腺嘌呤，“c”表示胞嘧啶，“g”表示鸟嘌呤，“t”表示胸腺嘧啶，“u”表示尿嘧啶。108.氨基酸序列以氨基到羧基方向从左向右书写。本文通过其通常已知的三字母符号或由iupac-iub生物化学命名委员会推荐的单字母符号来表示氨基酸。109.约：本文中使用术语“约”意指大约、大致、左右或在其区域中。当结合数值范围使用术语“约”时，所述术语通过扩展所阐述的数值以上和以下的界限来修改所述范围。通常，术语“约”可以按向上或向下(更高或更低)例如10％的变化来修饰所述值以上和以下的数值。如本文所用，术语“约”或“至少约”当应用于一系列值或范围时，同样适用于列表中的所有成员。因此，“至少约1、2、3、4……”可与“至少约1、至少约2、至少约3、至少约4……”互换。110.施用：术语“施用(administration)”、“施用(administering)”以及其语法变体是指通过药学上可接受的途径将组合物，如本公开的适体(例如，aptoll)引入到受试者中。可以通过任何合适的途径将组合物例如本公开的适体引入到受试者中，所述途径包含口服、经肺、鼻内、肠胃外(静脉内、动脉内、肌肉内、腹膜内或皮下)、直肠、淋巴管内、鞘内，眼周或局部。施用包含自我施用和由他人施用。111.合适的施用途径允许组合物或适体(例如，aptoll)执行其预期功能。例如，如果合适的途径是静脉内或动脉内，则通过将组合物或药剂引入到受试者的静脉或动脉中来施用组合物。112.拮抗剂：如本文所用，术语“拮抗剂”是指阻断或抑制激动剂介导的应答而不是在与受体结合时本身激发生物应答的分子。许多拮抗剂通过在受体上的结构定义的结合位点处与内源性配体或底物竞争来实现其效力。拮抗剂可以是竞争性、非竞争性或无竞争性拮抗剂。在本公开的一些方面，拮抗剂是tlr-4拮抗剂，例如本公开的适体，如aptoll。113.抗体：如本文所用，术语“抗体”涵盖天然或部分或全部合成产生的免疫球蛋白和其片段。所述术语还涵盖具有与免疫球蛋白结合结构域同源的结合结构域的任何蛋白质。“抗体”是指进一步包含包括来自免疫球蛋白基因或其片段的框架区的特异性结合抗原并识别抗原的多肽。术语抗体的用途意指包含完整抗体、多克隆抗体、单克隆抗体和重组抗体、其片段，并且进一步包含单链抗体、人源化抗体、鼠抗体、嵌合抗体、小鼠-人抗体、小鼠-灵长类动物抗体、灵长类动物-人单克隆抗体、抗独特型抗体、抗体片段，例如scfv、(scfv)2、fab、fab'和f(ab')2、f(ab1)2、fv、dab和fd片段、双功能抗体以及抗体相关多肽。抗体包含双特异性抗体和多特异性抗体，只要其表现出期望的生物活性或功能即可。在本公开的一些方面，生物活性分子是抗体或包括其抗原结合片段的分子。114.大约：如本文所用，术语“大约”，当应用于所关注的一个或多个值时，是指与所规定的参考值相似的值。在某些方面中，除非另有规定或另外从上下文显而易见(除了此些数字将会超过可能值的100％的情况)，否则术语“大约”是指在规定的参考值的在任一方向(大于或小于)的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小的值的范围。115.适体：如本文所用，术语“适体”是指采用特定三级结构的单链核酸链，所述结构允许其通过常规沃森-克里克(watson-crick)碱基配对以外的相互作用以与单克隆抗体相当的高特异性和亲和力与分子靶标结合。通常，适体是通过指数富集(selex)技术通过配体系统进化从组合文库中选择的。selex用于鉴定dna和rna适体，所述适体以高特异性和纳摩尔亲和力鉴定并选择性地结合胞外和胞内靶分子。一旦在生理条件下折叠，适体基于其核苷酸序列获取独特的三维结构，所述三维结构是适体的赋予其靶标选择性和亲和力的三级结构。116.适体结合位点：术语“适体结合位点”是指tlr-4的胞外区域中的包括互补适体特异性结合的连续或不连续位点(即表位)的区域。因此，适体结合位点可以含有tlr-4序列中的另外的区域，所述另外的区域超出表位并且可以确定如结合亲和力和/或稳定性等性质，或影响如抗原酶活性或二聚化等性质。因此，即使两个适体与tlr-4的胞外区域内的相同表位结合，如果适体与表位外的氨基酸建立不同的分子间接触，则认为此类适体与不同的适体结合位点结合。117.本公开的适体：术语“本公开的适体”和其语法变体是指可以与定位于tlr-4的胞外结构域上的表位结合并且可以调节tlr-4介导的信号传导，例如充当tlr-4拮抗剂的适体。在一些方面，本公开的适体阻止或减少nf-κb胞内信号传导通路的活化和/或炎性细胞因子的产生。在一些方面，本公开的适体阻断本文公开的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)发作之后释放的炎症应答。在一些方面，本公开的适体是seqidno:1-4的适体，或其变体(例如，与seqidno:1-4的适体具有一定百分比的序列同一性的适体)或衍生物(例如，seqidno:1-4的适体或其包括至少一个与适体共价或非共价连接的生物活性分子的变体)。118.在其它方面，本公开的适体是与seqidno:1-4的适体竞争结合tlr-4胞外结构域的适体。在又另一方面，本公开的适体是与tlr-4胞外结构域表位结合的适体，所述表位与seqidno:1-4的适体结合的表位部分或完全重叠。在其它方面，本公开的适体是表1中公开的适体或其变体或衍生物。119.结合：术语“结合”是指至少两个实体，例如适体与其靶表位、适体和靶蛋白、或适体和靶细胞之间的物理相互作用。120.结合亲和力：“结合亲和力”通常是指分子(例如，本公开的适体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，tlr-4)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指示，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，适体与tlr-4)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子x对其配偶体y的亲和力通常可以通过其ka(缔合常数)或其解离常数(kd)表示，所述解离常数是缔合常数的倒数。亲和力可以通过本领域已知的常见方法来测量，包含本文所描述的那些方法。低亲和力结合分子，例如低亲和力适体，通常与靶表位结合缓慢并倾向于容易地解离，而高亲和力分子，例如高亲和力适体，通常与靶表位结合得更快并且倾向于保持结合得更久。多种测量结合亲和力的方法是本领域已知的，其中任何一种都可以用于本公开的目的。121.本公开的适体(例如，aptoll)与tlr-4特异性结合的能力可以例如通过体外结合测定来确定，如酶联寡核苷酸测定(elona)、酶联适体吸附测定(elasa)、沉淀和定量pcr(qpcr)，或通过荧光技术，如适体组织化学、适体细胞化学、荧光显微术或流式细胞术。同样地，与tlr-4特异性结合的能力和适体对tlr-4的亲和力都可以通过本领域技术人员熟知的技术来确定，如凝胶迁移率变动测定、表面等离子体共振(spr)、动力学毛细管电泳和荧光结合测定。简言之，荧光结合测定由以下组成：将涂覆有tlr-4的磁球与不同浓度(例如，从0到100nm)的本发明标记(例如，用羧基荧光素，fam)的适体一起温育，以及随后洗脱和检测结合的适体；解离常数(kd)通过非线性拟合分析计算。122.结合特异性：术语“特异性”或“结合特异性”是指结合分子例如本公开的适体优先与表位而不是不同表位结合的能力，并且不一定意味着高亲和力。术语“结合特异性”和“特异性”可互换使用并且可以指(i)结合分子(例如，适体)的特异性部分，和(ii)结合分子与特定表位特异性结合的能力。当适体与其靶表位之间存在特异性相互作用时，结合分子，例如适体，“特异性结合”。术语“特异性结合”意指已产生适体以与其靶表位结合。术语“非特异性结合”意指尚未产生适体以与靶表位特异性结合，但确实通过非特异性方式以某种方式与表位结合。123.生物活性分子：如本文所用，术语“生物活性分子”是指可以与本公开的适体(例如，aptoll)共价或非共价连接的任何分子，其中所述分子可以在有需要的受试者中具有治疗或预防作用，或用于诊断目的。因此，通过实例的方式，术语生物活性分子包含蛋白质(例如，抗体、蛋白质、多肽以及其衍生物、片段和变体)、脂质以及其衍生物、碳水化合物(例如，糖蛋白中的聚糖部分)或小分子。在一些方面，生物活性分子是放射性同位素。在一些方面，生物活性分子是可检测部分，例如放射性核素、荧光分子或造影剂。在一些方面，生物活性分子可以与本公开的适体共价连接。在一些方面，生物活性分子直接与适体连接。在其它方面，生物活性分子通过接头与适体连接。124.保守的：如本文所用，术语“保守的”分别是指多核苷酸序列或多肽序列的核苷酸或氨基酸残基，所述核苷酸或氨基酸残基是在被比较的两个或更多个序列的相同位置中未改变的那些。相对保守的核苷酸或氨基酸是在比序列中其它地方出现的核苷酸或氨基酸更相关的序列中保守的核苷酸或氨基酸。125.在一些方面，如果两个或更多个序列彼此100％相同，则其被视为“完全保守的”或“相同的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此至少70％相同、至少80％相同、至少90％相同或至少95％相同，则其被视为“高度保守的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此具有约70％相同、约80％相同、约90％相同、约95％、约98％或约99％相同，则其被视为“高度保守的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此至少30％相同、至少40％相同、至少50％相同、至少60％相同、至少70％相同、至少80％相同，至少90％相同，或至少95％相同，则其被视为“保守的”。在一些方面，如果两个或更多个序列彼此约30％相同、约40％相同、约50％相同、约60％相同、约70％相同、约80％相同、约90％相同、约95％相同、约98％相同或约99％相同，则其被视为“保守的”。序列的保守性可以适用于多核苷酸或多肽的整个长度或可以适用于其部分、区域或特征。126.交叉竞争：术语“竞争”或“交叉竞争”，如本文所用的关于结合分子，例如本公开的适体，意指第一结合分子，例如第一适体，以与结合第二结合分子(例如第二适体)足够类似的方式与表位结合，使得与在不存在第二结合分子的情况下结合第一结合分子相比，在存在第二结合分子的情况下第一结合分子与其同源表位的结合结果可检测地降低。127.替代方案，其中第二结合分子与其表位的结合在存在第一结合分子的情况下也可检测地降低，可以但不一定是这种情况。也就是说，第一结合分子可以抑制第二结合分子与其表位的结合，而所述第二分子不抑制第一结合分子与其相应表位的结合。然而，在每个结合分子可检测地抑制另一个结合分子与其同源表位(或双特异性结合分子情况下的表位)的结合的情况下，无论是在相同、更大还是更小程度上，结合分子都被视为彼此“交叉竞争”以结合其相应的表位。本公开涵盖竞争性结合分子和交叉竞争性结合分子两者。128.如果适体交叉竞争使得仅一个适体可以在给定的时间点处与表位结合，即一个结合分子阻止另一个结合分子的结合或调节作用，则适体被视为“与相同的表位结合”或“包括相同的结合位点”或具有“基本上相同的结合”特征。129.本文中的竞争意指比至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％或约100％更大的相对抑制，如例如通过竞争elona或elasa分析或本领域已知的任何合适的方法确定的。可以期望的是，设置更高的相对抑制阈值作为在特定情况下合适的竞争水平的标准。因此，例如，可能的是在适体被认为具有足够的竞争力之前，设置竞争性结合的标准，其中检测到至少约40％的相对抑制，或至少约45％、或至少约50％、或至少约55％、或在至少约60％、或至少约65％、或至少约70％、或至少约75％、或至少约80％、或至少约85％、或至少约90％、或至少约95％或甚至约100％。130.衍生自：如本文所用，术语“衍生自”、“衍生物”(例如，“核酸衍生物”或“适体衍生物”)或其任何语法变体是指从指定分子(例如，本公开的核酸适体)分离或使用指定分子制成的组分。例如，衍生自第一核酸序列(例如，亲本适体)的核酸序列(例如，适体)可以包含与第一核酸序列的核苷酸序列相同或基本上类似的核苷酸序列。在核苷酸的情况下，衍生的物种可以通过例如天然诱变、人工定向诱变或人工随机诱变获得。用于衍生核苷酸的诱变可以是有意定向的或有意随机的，或每个的混合物。核苷酸的诱变以产生衍生自第一个的不同核苷酸可以是随机事件(例如，由聚合酶不忠引起)并且可以通过适当的筛选方法对衍生的核苷酸进行鉴定。131.在一些方面，本公开的衍生的核苷酸序列可以例如通过以下产生：使用组合化学、化学修饰特定位置的核苷酸单元、用核苷酸类似物取代特定位置处的核苷酸单元、修饰骨架化学键、将核苷酸序列与生物活性分子融合或缀合，或其任何组合。132.在一些方面，衍生的核酸序列可以例如通过以下产生：133.(i)与另一种治疗剂(例如，另一种tlr拮抗剂)缀合；134.(ii)与促进靶向的部分(例如，配体、结合部分或将适体引导到特定细胞或组织的部分)缀合；135.(iii)与调节，即增加或减少血浆半衰期的部分缀合(例如，通过调节对核酸酶的抗性或改变肾脏或肝脏清除率)；136.(iv)与递送部分(例如，将促进跨血脑屏障的运输的生物聚合物，如peg或脂质、肽或碳水化合物)缀合；或者137.(v)其任何组合。138.在一些方面，衍生自第一核苷酸序列(例如，亲本适体)的核苷酸序列(例如，适体)分别与第一核苷酸序列具有至少约50％、至少约51％、至少约52％、至少约53％、至少约54％、至少约55％、至少约56％、至少约57％、至少约58％、至少约59％、至少约60％、在至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、在至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性，其中所述第一核苷酸序列保留第二核苷酸序列的生物活性(在本公开的适体的情况下，例如与其tlr-4表位特异性结合并抑制tlr-4的能力)。139.互补：术语“互补的”和“互补性”是指通过沃森-克里克碱基配对规则彼此相关的两个或更多个寡聚体(即，各自包括核酸序列)，或在寡聚体与靶基因之间。例如，核酸序列“t-g-a(5'→3')”与核酸序列“a-c-t(3'→5')”互补。互补性可以是“部分的”，其中第一核酸序列的少于所有核碱基根据碱基配对规则与第二核酸序列的其它核碱基匹配。例如，在一些方面，给定核酸序列与其它核酸序列之间的互补性可以是约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。或者，在给定的核酸序列与其它核酸序列之间可以存在“完全”或“完美”(100％)互补性以继续所述实例。核酸序列之间的互补性的程度对序列之间杂交的效率和强度有显著影响。140.有效量：如本文所用，试剂例如本公开的适体(例如，aptoll)的术语“有效量”是足以产生有益或期望的结果例如临床结果的量，并且因此，“有效量”取决于其施加的环境。例如，在施用治疗tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)或减轻或预防(例如，遏制、抑制或延迟)与tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)相关的后遗症和/或症状的药剂的上下文中，药剂例如本公开的适体的有效量是例如与未施用药剂时获得的应答相比，足以减少或降低例如组织损伤、组织炎症、生理、身体或行为症状或后遗症或其任何组合的量。141.术语“有效量”可以与“有效剂量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”可互换地使用。在具体方面，所述术语是指可以例如治疗、预防、减少或减轻tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或多发性硬化症)的症状或后遗症的本公开的适体(例如，aptoll)的量。142.在特定方面，所述术语是指实现以下所需的本公开的适体(例如，aptoll)的量：(i)使受损组织减少；(ii)使炎症减少；(iii)使神经系统结果改善；(iv)使促炎生物标志物(例如，干扰素-γ、白介素-12p70、tnfα、il-6或其任何组合)的水平降低；(iv)使运动和/或行为评分(例如，改善活动能力或对刺激的应答)改善；(v)使存活率增加；(vi)使生活质量提高；(vii)与未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者群体获得的参考值相比，使有需要的受试者的疼痛或不适减少；或者(viii)其任何组合。143.表位：如本文所用，术语“表位”是指能够与结合分子例如本公开的适体例如aptoll结合的蛋白质决定簇(例如，tlr-4的氨基酸子序列)。表位通常由如氨基酸或糖侧链等分子的化学活性表面基团组成并且通常具有特异性三维结构特征以及特异性电荷特性。识别表位的适体的部分被称为互补位。表位基于其结构和与互补位的相互作用分为两类，构象表位和线性表位。构象表位由靶蛋白(例如，tlr-4)氨基酸序列的不连续区段构成。这些表位基于靶蛋白(例如，tlr-4)的3-d表面特征和形状或三级结构与适体互补位相互作用。相比之下，线性表位基于其一级结构与互补位相互作用。线性表位由来自靶蛋白(例如，tlr-4)的连续氨基酸序列形成。144.赋形剂：术语“赋形剂”和“载体”可互换使用，并且是指添加到药物组合物以进一步促进化合物，例如本公开的核酸适体(例如，aptoll)的施用的惰性物质。145.同源性：如本文所用，术语“同源性”是指聚合物分子之间例如核酸分子(例如，dna分子和/或rna分子)之间的整体关联性。通常，术语“同源性”意味着两个分子之间的进化关系。因此，同源的两个分子将具有共同的进化祖先。在本公开的上下文中，术语同源性涵盖同一性和相似性。146.在一些方面，如果分子中至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的单体相同(完全相同的单体)或类似(保守取代)，则聚合物分子被认为彼此“同源”。术语“同源”必然是指至少两个序列(例如，多核苷酸序列)之间的比较。147.同一性：如本文所用，术语“同一性”是指聚合物分子之间例如多核苷酸分子(例如，dna分子和/或rna分子)之间的整体单体保守性。没有任何另外的限定词的术语“相同”，例如，核酸a与核酸b相同，意味着序列100％相同(100％序列同一性)。将两个序列描述为例如“70％相同”等同于将其描述为具有例如“70％序列同一性”。148.两个聚合物分子(例如，多核苷酸序列)的同一性百分比的计算可以例如通过出于最佳比较目的比对两个序列来进行(例如，可以在第一多核苷酸序列与第二多核苷酸序列之一或两者中引入缺口以进行最佳比对，并且出于比较目的可以忽略不相同的序列)。在某些方面，出于比较目的比对的序列的长度为参考序列的长度的至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。在多核苷酸的情况下，然后比较对应碱基位置处的碱基。149.当第一序列中的位置被与第二序列中的对应位置相同的碱基占据时，那么分子在所述位置处是相同的。两个序列之间的同一性百分比是由所述序列共享的相同位置的数量的函数，考虑了空位的数量和每个空位的长度，需要引入所述函数以进行两个序列的最佳比对。序列的比较和两个序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法来完成。150.可以从各种来源获得合适的软件程序，用于蛋白质序列和核苷酸序列两者的比对。一种用于确定序列同一性百分比的合适程序是bl2seq，其是可从美国政府的国家生物技术信息中心blast网站(blast.ncbi.nlm.nih.gov)获得的blast程序套件的一部分。bl2seq使用blastn或blastp算法在两个序列之间进行比较。blastn用于比较核酸序列，而blastp用于比较氨基酸序列。其它合适的程序是例如needle、stretcher、water或matcher，其是生物信息学程序emboss套件的一部分，并且也可从欧洲生物信息学研究所(ebi)获得，网址为www.ebi.ac.uk/tools/psa。151.可以使用本领域已知的方法如mafft、clustal(clustalw、clustalx或clustalω)、muscle等进行序列比对。152.与多核苷酸或多肽参考序列比对的单个多核苷酸或多肽靶序列内的不同区域可以各自具有其自己的序列同一性百分比。应注意，序列同一性百分比值取整为最接近的十分之一。例如，80.11、80.12、80.13和80.14向下取整为80.1，而80.15、80.16、80.17、80.18和80.19向上取整为80.2。还应注意，长度值将始终是整数。153.在某些方面，第一氨基酸序列或核酸序列与第二氨基酸序列或核酸序列的同一性百分比(％id)计算为％id＝100x(y/z)，其中y是在第一序列与第二序列的比对中被评分为相同匹配的氨基酸残基或核碱基的数量(例如，通过目视检查或特定序列比对程序比对)并且z是第二序列中的残基总数。如果第一序列的长度长于第二序列，则第一序列与第二序列的同一性百分比将高于第二序列与第一序列的同一性百分比。154.本领域技术人员应当理解，用于计算序列同一性百分比的序列比对的产生不限于完全由一级序列数据驱动的二元序列-序列比较。还应当理解，序列比对可以通过将序列数据与来自异质来源的数据，如结构数据(例如，晶体蛋白质结构)、功能数据(例如，突变的定位)或系统发育数据整合来产生。整合异构数据以产生多序列比对的合适程序是t-coffee，可在www.tcoffee.org上获得，并且可替代地例如可从ebi获得。还应当理解，用于计算序列同一性百分比的最终比对可以自动或手动策划。155.抑制tlr-4：术语“抑制tlr-4”、“抑制tlr-4”、“tlr-4抑制”以及其语法变体是指阻断和/或降低tlr-4的活化和/或活性，例如，tlr-4介导的信号的转导。在本公开的上下文中，如果与存在天然激动剂，例如脂多糖(lps)的情况下tlr-4的活性相比，tlr-4的信号传导活性降低了至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％，则认为tlr-4被本公开的适体(例如，aptoll)抑制。脂多糖，也被称为内毒素，是革兰氏阴性细菌的外细胞壁的主要糖脂成分。lps分子通常由被称为o抗原的菌株特异性远侧多糖侧链、亲水性核心寡糖和被称为脂质a的疏水性结构域组成。156.在一些方面，术语抑制tlr-4是指，例如，通过本公开的适体(i)阻断或完全抑制tlr-4活化，(ii)减少或部分抑制tlr-4活化，(iii)阻断或完全抑制tlr-4信号传导活性，(iv)降低或部分抑制tlr-4信号传导活性，或者(v)其任何组合。157.本公开的适体(例如，aptoll)抑制tlr-4的能力可以通过本领域可用的一系列测定来确定。在一些方面，本公开的适体抑制tlr-4的能力是用细胞表达重组tlr-4和报告基因通过体外测定的方式确定的，所述报告基因的表达与重组tlr-4的活化相关。本领域技术人员将认识到此方法有多种变体，这取决于所使用的细胞和重组基因。此测定的实例包含在例如美国专利第10,196,642号中，所述美国专利通过引用整体并入本文。其它可用的技术包含确定由表达tlr-4的细胞释放的炎性细胞因子如il-1、il-8、tnf-α和il-12的水平。158.分离的：如本文所用，术语“分离的”、“纯化的”、“提取的”以及其语法变体可互换使用并且是指经过一个或多个纯化工艺的本公开的期望的组合物(例如，本公开的适体)的制剂的状态。在一些方面，如本文所用，分离或纯化是从含有污染物的样品中去除、部分去除(例如，一部分)本公开的组合物的工艺。在一些方面，分离的组合物没有可检测的不期望的活性，或者可替代地，不期望的活性的水平或量处于或低于可接受的水平或量。在其它方面，分离的组合物具有处于或高于可接受的量和/或浓度和/或活性处的本公开的期望组合物的量和/或浓度。在其它方面，与从中获得组合物的起始材料相比，分离的组合物是富集的。与起始材料相比，这种富集可以是至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约99.9％、至少约99.99％、至少约99.999％、至少约99.9999％或大于99.9999％。159.在一些方面，分离的制剂基本上不含残留的生物产物。在一些方面，分离的制剂是100％不含、至少约99％不含、至少约98％不含、至少约97％不含、至少约96％不含、至少约95％不含、至少约94％不含、至少约93％不含、至少约92％不含、至少约91％不含或至少约90％不含任何污染性生物物质。残留的生物产物可以包含非生物材料(包含化学品)或不需要的核酸、蛋白质、脂质或代谢物。160.连接的：如本文所用，术语“连接的”是指第一氨基酸序列或多核苷酸序列(例如，本公开的适体)分别与第二氨基酸序列或多核苷酸序列共价或非共价连接或连接。第一氨基酸或多核苷酸序列(例如，本公开的适体)可以与第二氨基酸或多核苷酸序列直接连接或并列，或者可替代地插入序列可以将第一序列与第二序列共价连接。术语“连接的”不仅意指第一多核苷酸序列在5'端或3'端处与第二多核苷酸序列的融合，还包含整个第一多核苷酸序列(或第二多核苷酸序列)插入到第二多核苷酸序列(或分别为第一多核苷酸序列)中的任何两个核苷酸中。第一多核苷酸序列可以通过磷酸二酯键或接头连接到第二多核苷酸序列。接头可以是例如多核苷酸。161.错配：术语“错配(mismatch)”或“错配(mismatches)”是指第一核酸序列(例如，本公开的适体)中的一个或多个核碱基(无论是连续的还是分开的)根据碱基配对规则与第二核酸序列(例如，本公开的适体的变体或衍生物)不匹配。尽管通常期望完美的互补性，但某些方面可以包含适体变体相对于亲本适体之间的一个或多个但优选地20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个错配。包含适体内的任何位置处的变异。在某些方面，本公开的适体包含末端附近、内部的核碱基序列中的变体，并且如果存在的话通常在5'和/或3'末端的约20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个亚基内。在某些方面，可以去除20个、19个、18个、17个、16个、15个、14个、13个、12个、11个、10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个核碱基并且仍然提供中靶结合。162.调节：如本文所用，术语“调节”、“修饰”以及其语法变体通常指当应用于特定浓度、水平、表达、功能或行为时，通过增加或降低例如直接或间接促进/刺激/上调或干扰/抑制/下调特定浓度、水平、表达、功能或行为而改变，例如充当拮抗剂或激动剂的能力。在一些情况下，调节剂可以相对于对照或相对于通常预期的平均活性水平或相对于对照活性水平增加和/或降低特定浓度、水平、活性或功能。163.核酸：“核酸”、“核酸分子”、“核苷酸序列”、“多核苷酸”以及其语法变体可互换使用，并且是呈单链形式或双链螺旋形式的指核糖核苷(腺苷、鸟苷、尿苷或胞苷；“rna分子”)或脱氧核糖核苷(脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧胸苷或脱氧胞苷；“dna分子”)或其任何磷酸酯类似物(如硫代磷酸酯和硫酯)的磷酸酯聚合物形式。164.单链核酸序列是指单链dna(ssdna)或单链rna(ssrna)。双链dna-dna、dna-rna和rna-rna螺旋是可能的。术语核酸分子，并且具体是dna或rna分子，仅指分子的一级和二级结构，并且不将其限制为任何特定的三级形式。因此，此术语包含尤其在线性或环状dna分子(例如，限制性片段)、质粒、超螺旋dna和染色体中发现的双链dna。在讨论特定双链dna分子的结构时，本文中可以根据通常仅给出沿非转录dna链(即，具有与mrna同源的序列的链)的5'到3'方向上的序列的常规约定来描述序列。“重组dna分子”是经过分子生物学操作的dna分子。dna包含但不限于cdna、基因组dna、质粒dna、合成dna和半合成dna。本公开的“核酸组合物”可以包括如本文所描述的一种或多种核酸(例如，核酸适体)。165.术语核酸还涵盖变体，如肽核酸(pna)、锁核酸(lna)以及其组合、其修饰，包含经修饰的核苷酸等。核酸可以从天然来源纯化，使用重组表达系统产生以及任选地纯化的、化学合成的等。当适当时，例如，在化学合成分子的情况下，核酸可以包括核苷类似物，如具有经化学修饰的碱基或糖、骨架修饰等的类似物。166.肠胃外施用：如本文所用的短语“肠胃外施用(parenteraladministration和administeredparenterally)”意指除了肠内施用和局部施用以外的通常通过注射进行的施用方式，并且包含但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊髓内以及胸骨内注射和输注。在一些方面，肠胃外施用是静脉内或动脉内。在一些方面，静脉内或动脉内施用是通过团注，例如通过缓慢团注施用包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物施用。167.药学上可接受的载体.术语“药学上可接受的载体”、“药学上可接受的赋形剂”以及其语法变体涵盖美国联邦政府监管机构批准的或美国药典中列出的用于动物(包含人类)的任何药剂，以及任何载体或稀释剂，所述载体或稀释剂在禁止向受试者施用组合物并且不会消除所施用化合物的生物活性和性质的程度上不会导致产生不期望的生理效应。包含用于制备药物组合物并且通常是安全、无毒和期望的赋形剂和载体。168.药物组合物：如本文所用，术语“药物组合物”是指本文所描述的与一种或多种其它化学组分(如药学上可接受的载体和赋形剂)混合或掺杂，或悬浮在一种或多种其它化学组分中的化合物中的一种或多种化合物，例如本公开的适体，如aptoll。药物组合物的一个目的是促进向受试者施用适体制剂。169.多核苷酸：术语“多核苷酸”与“核酸”可互换使用，并且是指任何长度的核苷酸的聚合物，包含核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸、其类似物或其混合物。在一些方面，此术语是指分子的一级结构。因此，所述术语包含三链、双链和单链脱氧核糖核酸(“dna”)，以及三链、双链和单链核糖核酸(“rna”)。所述术语还包含经修饰的，例如通过烷基化和/或通过加帽，以及未经修饰形式的多核苷酸。170.在一些方面，术语“多核苷酸”包含聚脱氧核糖核苷酸(含有2-脱氧-d-核糖)、聚核糖核苷酸(含有d-核糖)，包含例如双链dna(dsdna)、单链dna(ssdna)、单链rna(ssrna)或双链rna(dsrna)，无论是剪接的还是未剪接的，作为嘌呤或嘧啶碱基的n-或c-糖苷的任何其它类型的多核苷酸，以及其它含有正常核苷酸骨架的聚合物，例如，聚酰胺(例如，肽核酸“pna”)和聚吗啉代聚合物，以及其它合成序列特异性核酸聚合物，前提是聚合物含有处于允许碱基配对和碱基堆积的构型下的核碱基，如在dna和rna中发现的。171.在一些方面，多核苷酸可以是，例如，本公开的核酸适体(例如，aptoll)。在一些方面，多核苷酸是dna。在一些方面，dna是合成dna，例如合成ssdna。在一些方面，合成dna包括至少一种非天然核碱基。在一些方面，某一类的所有核碱基都已用非天然核碱基替代(例如，本文公开的多核苷酸中的所有尿苷都可以用非天然核碱基，例如5-甲氧基尿苷替代)。172.多肽：术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以包括经修饰的氨基酸。所述术语还涵盖已天然或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰，如与标记组分缀合。定义内还包含例如含有一个或多个氨基酸类似物(包含例如非天然氨基酸，如同型半胱氨酸、鸟氨酸、对乙酰苯丙氨酸、d-氨基酸和肌酸)以及本领域已知的其它修饰的多肽。如本文所用，术语“多肽”是指任何大小、结构或功能的蛋白质、多肽和肽。多肽包含基因产物、天然存在的多肽、合成多肽、同源物、直系同源物、旁系同源物、片段和上述的其它等效物、变体和类似物。多肽可以是单一多肽或可以是多分子复合物，如二聚体、三聚体或四聚体。所述多肽还可以包括单链或多链多肽。最常见的二硫键存在于多链多肽中。术语多肽还可以适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学类似物。在一些方面，“肽”的长度可以小于或等于50个氨基酸，例如约5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸的长度。在一些方面，多肽可以与本公开的适体共价或非共价连接。173.预防：如本文所用，术语“预防”、“抑制”、“遏制”以及其变体适用于本文公开的疾病或病状，或其症状或后遗症，是指例如174.(i)部分或完全延迟疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作；175.(ii)部分或完全延迟特定疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的一种或多种症状、特征或临床表现的发作；176.(iii)部分或完全延迟特定疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的一种或多种症状、特征或表现的发作；177.(iv)部分或完全延迟特定疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的进展；和/或178.(v)降低发生与疾病、病症和/或病状，例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)相关联的病理的风险。179.在一些方面，预防、抑制或遏制结果是通过预防性治疗例如通过施用本公开的适体来实现的。180.预防性的：如本文所用，“预防性的”是指用于预防、抑制、遏制疾病或病状例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作，或用于预防、抑制、遏制或延迟与疾病或病状例如本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)相关的症状的治疗或作用过程。181.在一些方面，可以通过将本公开的适体例如aptoll施用于处于本文公开的任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的风险中，或在任何tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作之后处于某种症状或后遗症的风险中的受试者来实现预防作用。182.预防：如本文所用，“预防”是指为维持健康和预防、抑制、遏制或延迟本文公开的tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发作，或预防、抑制、遏制或延迟与本文公开的tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的发生相关联的症状而采取的措施。在一些方面，本公开的适体可以用于预防本文公开的tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风。183.相似性：如本文所用，术语“相似性”是指在聚合物分子例如多核苷酸分子(例如，dna分子和/或rna分子)之间和/或在多肽分子之间的整体关联性。聚合物分子彼此之间的相似性百分比的计算可以以与同一性百分比的计算相同的方式进行，除了相似性百分比的计算考虑了本领域所理解的保守取代。应当理解，相似性百分比取决于所使用的比较尺度，即是否比较氨基酸，例如根据其进化接近度、电荷、体积、柔性、极性、疏水性、芳香性、等电点、抗原性或其组合。184.受试者：术语“受试者”、“患者”、“个体”和“宿主”以及其变体在本文中可互换使用，并且是指任何哺乳动物受试者，包含但不限于需要诊断、治疗或疗法的人、家养动物(例如，狗、猫等)、农场动物(例如，牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)，具体地人。本文所描述的方法适用于人类疗法和兽医应用两者。185.应当理解，在本公开全文中提及“tlr-4”是指关于人受试者的人tlr-4，以及当受试者不是人受试者时指相应的直系同源物，即，本文公开的用于例如马、猫或狗受试者的方法的兽医应用需要通过能够与马、猫或狗tlr-4的胞外结构域特异性结合的本公开的适体抑制马、猫或狗tlr-4。186.有需要的受试者：如本文所用，短语“有需要的受试者”包含将受益于施用本公开的适体例如aptoll以改善止血的受试者，如哺乳动物受试者。187.易患：“易患”疾病、病症和/或病状或其症状或后遗症或“处于风险”中的受试者尚未被诊断出和/或不表现出疾病、病症和/或病状的症状，但有发展疾病或其症状的倾向。188.在一些方面，易患疾病、病症和/或病状(例如，缺血性中风)或处于其危险中的受试者可以通过以下中的一种或多种来表征：(1)与疾病、病症和/或病状的发展相关联的基因突变；(2)与疾病、病症和/或病状的发展相关联的基因多态性；(3)与疾病、病症和/或病状相关联的蛋白质和/或核酸的表达和/或活性增加和/或降低；(4)与疾病、病症和/或病状的发展相关联的习惯和/或生活方式；(5)疾病、病症和/或病状的家族史；以及(6)暴露于和/或感染有与疾病、病症和/或病状的发展相关联的微生物。189.在一些方面，易患疾病、病症和/或病状或处于其风险的受试者将发展所述疾病、病症和/或病状。在一些方面，易患疾病、病症和/或病状或处于其风险的受试者不会发展所述疾病、病症和/或病状。190.全身施用：如本文所用，短语“全身施用(systemicadministration或administeredsystemically)”和“外周施用(peripheraladministration或administeredperipherally)”意指除直接到中枢神经系统中的施用之外的化合物、药物或其它材料的施用，使得所述化合物、药物或其它材料进入患者的系统，并且因此经历代谢和其它类似过程，例如静脉内或动脉内施用。191.靶细胞：如本文所用，术语“靶细胞”是指表达tlr-4的特定细胞，尤其包含骨髓谱系细胞，如单核细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、粒细胞和未成熟树突细胞，以及其它谱系的细胞，如神经元等。在特定方面，所述靶细胞是单核细胞或巨噬细胞。在一些方面，所述靶细胞是小胶质细胞。在一些方面，所述靶细胞是粒细胞。在一些方面，所述靶细胞是未成熟树突细胞。在一些方面，所述靶细胞是神经元。在一些方面，本公开的适体与在本文公开的靶细胞的表面上表达的tlr-4结合。192.治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”是足以对有需要的受试者产生期望的治疗效果、药理学和/或生理学效果的包括本公开的适体(例如，aptoll)的组合物的量。治疗有效量可以是“预防有效量”，因为预防可以被认为是疗法。193.术语“治疗有效量”还意指要递送的包括本公开的适体(例如，aptoll)的组合物的量足以194.(i)治疗tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；195.(ii)改善tlr-4介导的疾病或病状的症状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；196.(iii)改善tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；197.(iv)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；198.(v)延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；199.(vi)延迟tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；200.(vii)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的发作，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；201.(viii)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的复发，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者202.(ix)当施用于受试者时，其任何组合(或下文在术语“治疗”的定义中公开的任何作用)203.(a)患有tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；204.(b)易患或有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；205.(c)易患tlr-4介导的疾病或病状或有所述疾病或病状复发或恶化的风险，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者206.(d)有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如由于例如潜在感染、疾病、病症、病状、生活方式引起的心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者207.(e)其任何组合。208.治疗有效结果：如本文所用，术语“治疗有效结果”意指在以下这样的受试者中足以产生以下结果的治疗(例如，施用至少一个剂量的本公开的适体，例如aptoll)的结果：209.(i)患有tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；210.(ii)易患或有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；211.(iii)易患tlr-4介导的疾病或病状或有所述疾病或病状复发或恶化的例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；212.(iv)有患tlr-4介导的疾病或病状的风险，例如由于潜在感染、疾病、病症、病状、生活方式引起的心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者213.(v)其任何组合，214.以尤其有效地：215.(a)治疗tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；216.(b)改善tlr-4介导的疾病或病状的症状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；217.(c)改善tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；218.(d)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；219.(e)延迟tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；220.(f)延迟tlr-4介导的疾病或病状的后遗症，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；221.(g)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的发作，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；222.(h)预防、抑制、遏制或延迟tlr-4介导的疾病或病状的复发，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风；或者223.(i)其任何组合(或下文在术语“治疗”的定义中公开的任何作用)。224.tlr-4：如本文所用，术语“tlr-4”是指膜受体toll样受体4。tlr-4的活化产生信号传导级联，例如导致炎性细胞因子如il-1、il-8、tnf-α、il-6和il-12的释放，从而引起炎症和细胞损伤。受体tlr-4也可以被称为armd10、cd284、tlr-4或htoll。在人中，受体tlr-4于2014年5月27日在登录号000206.2下在genbank注册，并且其由tlr4基因编码。tlr-4有若干种同种型。用于描述tlr-4中不同结构化结构域的定位的氨基酸编号是指839个氨基酸长的同种型(同种型1；uniprot：o00206-1)。氨基酸残基1-23构成信号序列，残基24-631构成胞外结构域，残基632-652构成跨膜结构域，并且残基653-839构成胞质结构域。tlr-4同种型2(uniprot：o00206-2)缺少标准同种型1序列的氨基酸1-40。因此，同种型2的胞外结构域包括同种型1的氨基酸41-631。tlr-4同种型3(uniprot：o00206-3)缺少标准同种型1序列的氨基酸1-200。因此，同种型3的胞外结构域包括同种型1的氨基酸201-631。225.术语tlr-4还涵盖多态性和天然变体，例如等位基因tlr-4*b(gly-299、ile-399)，其与吸入lps的迟钝应答相关联，或具有以下天然存在的取代中的一种或多种取代的天然变体：t175a、q188r、c246s、e287d、d299g、c306w、v310g、n329s、f342y、l385f、t399i、s400n、f443l、e474k、q510h、k694r、r763h或q834h。226.在特定方面，本公开的适体与定位于tlr-4同种型1的胞外结构域(即，tlr-4同种型1的氨基酸24-631)上的表位特异性结合。227.在非人受试者中，术语tlr-4是指其相应的tlr-4、同种型、多态性形式和天然变体。228.治疗：如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”、“疗法(therapy)”是指，例如，降低tlr-4介导的疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风)的严重性；减轻或消除与疾病或病状相关联的一种或多种症状或后遗症；或者提供对患有疾病或病状的受试者的有益效果，但不一定治愈所述疾病或病状。所述术语还包含预防或预防(例如，遏制、抑制或延迟)疾病或病状或其症状或后遗症。229.在一些方面，所述术语是指用于产生以下结果的临床干预：预防(例如，遏制或抑制)疾病或病状；治愈疾病或病状；延迟疾病或病状的发作；降低疾病或病状的严重性；改善一种或多种症状；改善一种或多种后遗症；预防(例如，遏制、抑制或延迟)一种或多种症状；预防(例如，遏制、抑制或延迟)一种或多种后遗症；延迟一种或多种症状；延迟一种或多种后遗症；减轻一种或多种症状；减轻一种或多种后遗症；缩短一种或多种症状的持续时间；缩短一种或多种后遗症的持续时间；减少一种或多种症状的频率；减少一种或多种后遗症的频率；减少一种或多种症状的严重性；减少一种或多种后遗症的严重性；提高生活质量；增加存活率；预防(例如，遏制、抑制或延迟)疾病或病状的复发；延迟疾病或病状的复发；或其任何组合，例如，关于在没有用本公开的至少一种适体治疗的情况下预期的情况。在一些方面，疾病或病状是通过tlr-4表达增加和/或tlr-4活化增加表征的病理学。230.ii.用tlr-4结合适体治疗tlr-4介导的疾病231.本公开提供治疗有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效剂量的长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。在一方面，tlr-4介导的疾病或病状是缺血性中风或其症状或后遗症。在另一方面，tlr-4介导的疾病或病状是心肌梗塞或其症状或后遗症。在又另一方面，tlr-4介导的疾病或病状是出血性中风或其症状或后遗症。在一些方面，tlr-4介导的疾病或病状是出血性转化或其症状或后遗症。在另一方面，tlr-4介导的疾病或病状是多发性硬化症或其症状或后遗症。232.应当理解，本文公开的所有方法可替代地被调配为长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，如上所述，用于治疗tlr-4介导的疾病或病状，例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风。可替代地，还提供了核酸适体在制备用于治疗所述tlr-4介导的疾病或病状的药物中的用途。233.还提供了用于预防(例如，遏制、抑制或延迟)有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效剂量的长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。234.本公开还提供用于减轻有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症或缺血性中风的至少一种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一种治疗有效剂量的长度为约40到约100个核碱基，例如长度为约40到约80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。235.如本文所用，术语“缺血性中风”是指通过由脑血流量以异常突然的方式显著减少引起的神经功能缺损表征的一种类型的中风(也被称为脑血管疾病、脑梗塞或中风)。在缺血性中风中，由于任何灌注脑块的动脉闭塞，导致血流突然和立即中断，从而导致血液灌注丢失，从而产生梗塞区域。动脉闭塞通常是由于动脉粥样硬化或起源于另一个定位(通常是心脏或其它动脉)的栓子(脑栓塞)。缺血性中风是通过tlr-4表达增加和/或tlr-4活化增加表征的病理。鉴于tlr-4的活化产生信号传导级联，导致炎性细胞因子如il-1、il-8、tnf-α、il-6和il-12的释放，从而引起炎症和细胞损伤，通过tlr-4表达的增加和/或tlr-4活化的增加表征的病理可以进一步通过具有炎性组分表征。236.在一些方面，缺血性中风可以是血栓形成、栓塞或由于灌注不足。在一些方面，缺血性中风可以由例如动脉粥样硬化、血管炎、椎动脉和颈动脉夹层、红细胞增多症、高凝状态、感染、瓣膜赘生物、壁血栓、来自近侧来源的动脉-动脉栓塞、脂肪栓塞、脓毒性栓塞、心脏衰竭引起，从而导致全身性低血压、镰状细胞性贫血、血管受压、室性心动过速、血凝块、心肺骤停、中风或先天性心脏缺陷。因此，本公开提供了用于治疗有需要的受试者(例如，患有缺血性中风、处于缺血性中风风险中或处于缺血性中风复发风险中的受试者)的这些疾病或病状中的任何疾病或病状的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。237.缺血性中风的症状和后遗症包括例如无意识、失明、强直性凝视偏差、全面性失语、书写困难、阅读障碍、计算障碍、定向障碍、空间忽视、视觉忽视、感觉和/或运动症状以及面部、感觉和/或四肢(上肢、下肢或两者)运动症状缺陷、尿失禁、运动障碍性缄默症、经皮层运动性失语症、意识模糊、运动偏侧偏瘫、偏瘫、面部麻痹、感觉丧失、构音障碍、注意力不集中、同侧偏盲、cn缺陷、头晕、眩晕、共济失调、复视、吞咽困难、一过性aloc、跌倒发作、头晕、四肢麻痹、昏迷、闭锁综合征、死亡、密拉-古布勒综合征(millard-gublersyndrome)、垂直眼球运动不受影响、一个半综合征、桥脑内侧下综合征、眼球震颤、共济失调、本体感觉减退、桥脑内侧综合征、对侧麻痹、咽/声带/面部肌阵挛、桥脑外侧综合征、霍纳氏综合征(horner'ssyndrome)、共轭凝视轻瘫、面部/四肢/躯干疼痛或温度消失、单侧头痛、视野缺损、视觉失认、中脑外侧综合征、对侧偏瘫、震颤、运动过度、中脑内侧综合征、桥脑外侧综合征、面瘫、角膜反射丧失、听力丧失、四肢和步态共济失调、沃伦伯格综合征、声音嘶哑、笨拙手综合征、内侧延髓综合征、舌偏或脊髓前动脉综合征。238.因此，本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的缺血性中风的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。239.如本文所用，术语“出血性中风”是指发生脑血管破裂，剥夺依赖于所述血液动脉的脑区域的病状。另外，流出的血液会压迫包含其它血管的大脑结构，从而增加被继发于脑内出血的缺血影响的区域。出血性中风的症状可以包含完全或有限的意识丧失、恶心、呕吐、突然和严重的头痛、身体一侧的面部、腿部或手臂无力或麻木、癫痫发作、头晕、失去平衡、言语或吞咽问题、混乱或迷失方向。最常见的原因是动脉瘤。更罕见的原因是动静脉畸形(avm)。出血性中风有两种类型：脑内出血和蛛网膜下腔出血。通常，由出血性中风引起的缺血性事件可能导致上文描述的缺血性中风的后遗症。240.因此，本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的出血性中风(脑内出血或蛛网膜下腔出血)的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。241.如本文所用，术语“出血性转化”是指单纯梗塞，例如缺血性中风的结果，转化为血性梗塞。因此，所述术语是指发生在死亡或垂死组织中的出血，例如因缺血性中风而失去其通常血液供应的脑组织。出血性转化的幅度从轻微的点状出血(出血性梗塞)到大量的主要大量产生出血(实质血肿)的范围。通常，例如由缺血性中风引起的出血性转化可能引起上文描述的缺血性中风的后遗症。242.本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的出血性转化(例如，出血性梗塞或实质血肿)的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。243.如本文所用，术语“心肌梗塞”(也被称为“梗塞”或“心脏病发作”)是指通过由冠状动脉之一的阻塞引起的心脏区域中的血液供应不足伴随组织损伤表征的病理学。由此类阻塞导致的心肌缺血或供氧不足会导致心绞痛，如果足够快地重新插管，则不会导致心脏组织死亡，而如果这种缺氧持续下去，则心肌会受到损伤和坏死，即梗塞，最终发生。心肌梗塞的原因通常是动脉粥样硬化。其它可能的原因是冠状动脉痉挛。心肌梗塞可能导致心力衰竭、心律不齐、心源性休克或心脏骤停。风险因素包含高血压、吸烟、糖尿病、缺乏运动、肥胖、高血脂、不良饮食和过量饮酒等。受损的血液流入心肌可能触发缺血性级联。心肌梗塞会造成组织损伤(主要是坏死)，从而导致胶原疤痕形成。组织死亡和心肌疤痕形成改变心脏的正常传导通路并削弱受影响的区域。因此，心肌梗塞可能导致后遗症，如异常心脏节律(心律失常)、心脏传导阻滞、心室动脉瘤、心脏炎症或心脏破裂。244.本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的心肌梗塞的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。245.在一些方面，与在未经治疗的受试者或未经治疗的受试者群体中观察到的心脏功能(如例如通过测量射血分数和/或缩短分数来确定的)相比，在心肌梗塞之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使心脏功能改善至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。246.如本文所用，术语“缩短分数”是指心脏泵功能的量度。所述缩短分数是左心室松弛时的直径与收缩时的直径之间的比率。247.如本文所用，术语“射血分数”是指每次收缩(或心跳)时从腔室(通常是心脏)射出的流体(通常是血液)的体积分数(或总量的一部分)。射血分数被广泛用作心脏泵血效率的量度，并且用于对心力衰竭类型进行分类。所述射血分数也被用作心力衰竭严重性的指标。248.如本文所用，术语“多发性硬化症”是指通过中枢神经系统的脱髓鞘、神经变性和慢性损伤的发作表征的病理。尽管已经证明了各种自身免疫性机制的参与，但其原因目前未知。在多发性硬化症患者中，淋巴细胞穿过血脑屏障以影响髓鞘，同时发生由巨噬细胞和神经胶质细胞辅助的炎性过程。249.脱髓鞘会破坏部分神经系统的通信能力，从而导致一系列体征和症状，包含生理问题、心理问题以及有时的精神问题。具体症状可以包含复视、单眼失明、肌肉无力、感觉障碍或协调障碍。多发性硬化症呈现若干种形式，其中新症状要么以孤立的发作形式出现(复发形式)，要么随时间推移逐渐累积(进展形式)。在发作之间，症状可能完全消失；然而，永久性神经问题往往仍然存在，尤其是随着疾病的进展。250.多发性硬化症可能引起多种症状，例如感觉改变(感觉减退)、肌肉无力、异常肌肉痉挛或移动困难；协调和平衡困难；言语(构音障碍)或吞咽(吞咽困难)问题、视觉问题(眼球震颤、视神经炎、幻视或复视)、共济失调、震颤、疼痛、痉挛、性功能障碍、痉挛、疲劳和急性或慢性疼痛综合征、膀胱和肠道困难、认知障碍或情绪征候学(主要是重性抑郁症)。残疾进展和症状严重性的主要临床量度是扩展残疾状态量表或edds。一些最常见的认知缺陷会影响最近的记忆力、注意力、处理速度、视觉空间能力和执行功能。251.与其它原发性脱髓鞘疾病一样，ms的主要病理生理特征是中枢神经系统中少突胶质细胞的丢失，并且因此，白质和灰质两者中的髓鞘丢失。另一方面，作为多发性硬化症病理基础的自身免疫性组分是炎症、脱髓鞘和轴突网络损伤过程的促进剂，其中tlr-4和触发其活化的促炎信号传导起着至关重要的作用。252.在作为疾病基础的病理生理过程中，中枢和外周神经系统的轴突脱髓鞘起着至关重要的作用，并且是受疾病影响的个体所呈现的症状的基础。髓鞘是一种细胞分化，其允许正确传输神经冲动，并且由少突胶质细胞(在中枢神经系统中)和细胞(在外周神经系统中)生理合成。253.本公开还提供了用于治疗、预防(例如，遏制、抑制或延迟)或减轻有需要的受试者的本文公开的多发性硬化症的任何症状和后遗症或其任何组合的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的本公开的至少一种适体(例如，aptoll)。254.在一些方面，向患有多发性硬化症的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使临床评分降低，其中较高的临床评分与较高的残疾程度和症状的严重性相关，并且其中观察到的临床评分小于约90％、小于约85％、小于约80％、小于约75％、小于约70％、小于约65％、小于约60％，小于约55％、小于约50％、小于约45％、小于约40％、小于约35％或小于约30％的在未经治疗的受试者或未经治疗的受试者群体中观察到的临床评分值。255.在一些方面，向患有多发性硬化症的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致的流动性增加比用芬戈莫德(fingolimod)或甲基强的松龙(methylprednisolone)治疗受试者时观察到的流动性增加高至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。256.在一些方面，施用本公开的适体(例如，aptoll)可以使少突胶质前体细胞增殖的增加比在不存在本公开的适体(例如，aptoll)的情况下生长的少突胶质前体细胞中观察到的增殖水平高至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％。257.在一些方面，施用本公开的适体(例如，aptoll)可以使少突胶质前体细胞分化的增加比在不存在本公开的适体(例如，aptoll)的情况下生长的少突胶质前体细胞中观察到的分化水平高至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％。258.在一些方面，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可能导致例如由于急性(例如，缺血性中风、脑内出血、出血性中风或出血性转化)、亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，弥漫性轴索损伤)tlr-4介导的疾病或病状导致的受损神经元组织的再髓鞘化。在一些方面，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可能导致由于急性(例如，缺血性中风、脑出血或蛛网膜下腔出血)、亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，弥漫性轴索损伤)tlr-4介导的疾病或病状期间而受损的神经元组织中的神经元增殖和/或神经元分化。因此，本公开提供了一种用于使由于急性(例如，缺血性中风、脑内出血或蛛网膜下腔出血)、亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，弥漫性轴索损伤)tlr-4介导的疾病或病状而受损的神经元组织再髓鞘化的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个治疗有效剂量的长度为40到80个核碱基的核酸适体(例如，aptoll)或其变体或衍生物，其中所述适体、变体或衍生物与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与所述表位的结合降低和/或抑制tlr-4活化。259.在一些方面，自tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作起小于16小时就施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后小于约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、95、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、415、420、425、430、435、440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495、500、505、510、515、520、525、530、535、540、545、550、555、560、565、570、575、580、585、590、595、600、605、610、615、620、625、630、635、640、645、650、655、670、675、680、685、690、695、700、705、710、715、720、725、730、735、740、745、750、755、760、765、770、775、780、785、790、795、800、805、810、815、820、825、830、835、840、845、850、855、860、865、870、875、880、885、890、895、900、905、910、915、920、925、930、935、940、945、950、955或960分钟，施用本公开的适体(例如，aptoll)。260.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后小于约1小时、小于约2小时、小于约3小时、小于约4小时、小于约5小时、小于约6小时、小于约7小时、小于约8小时、小于约9小时、小于约10小时、小于约11小时、小于约12小时、小于约13小时、小于约14小时、小于约15小时、小于约16小时、小于约17小时、小于约18小时、小于约19小时、小于约20小时、小于约21小时、小于约22小时、小于约23小时或小于约24小时，施用本公开的适体(例如，aptoll)。261.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时，施用本公开的适体(例如，aptoll)。262.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后立即施用本公开的适体(例如，aptoll)。263.在一些方面，在初始剂量之后随后施用另外剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，在初始剂量之后施用至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个另外剂量。在一些方面，在同一天期间施用若干个剂量。在一些方面，一个或多个加强剂量之后是一个或多个维持剂量。在一些方面，所有剂量都包括相同量的本公开的适体(例如，aptoll)。264.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后约2小时和约6小时，施用另外剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。在其它方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后约2小时、约6小时、约12小时和约24小时，进一步施用另外剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。265.在一些方面，具体是在急性tlr-4介导的疾病或病状的情况下，本公开的适体(例如，aptoll)通常在急性事件之后几分钟(例如，10到60分钟)、几小时(例如，1小时到48小时)或数天施用。在其它方面，例如在亚急性(例如，多发性硬化症)或慢性(例如，类风湿性关节炎)tlr-4介导的疾病或病状中，本公开的适体(例如，aptoll)可以施用数周、数月，或年。266.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.5mg/天与约80mg/天之间的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以至少约0.5mg/天、至少约1mg/天、至少约2mg/天、至少约5mg/天、至少约10mg/天、至少约15mg/天、至少约20mg/天、至少约25mg/天或至少约30mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以0.5mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以1mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以2mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以5mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以10mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以15mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以20mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以25mg/天的剂量施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以30mg/天的剂量施用。267.在一些方面，当适体通过静脉内或动脉内途径(团注)每天施用两次(例如，相隔6小时)持续14天时，本公开的适体(例如，aptoll)的大约14mg/kg/天的剂量被认为是无观察到的不良反应水平(noael)。在一些方面，对于体重70kg的受试者，要向健康受试者施用的最大推荐起始剂量(mrsd)为大约31.5mg。在一些方面，对于体重70kg的受试者，要向健康受试者施用的最大推荐起始剂量(mrsd)为大约0.5mg。268.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以大约0.007mg/kg的剂量(即，对于70kg的受试者大约0.5mg/天)施用。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约0.1mg/kg、至少约0.2mg/kg、至少约0.3mg/kg、至少约0.4mg/kg、至少约0.5mg/kg、至少约0.6mg/kg、至少约0.7mg/kg、至少约0.8mg/kg、至少约0.9mg/kg、至少约1mg/kg、至少约1.1mg/kg、至少约1.2mg/kg、至少约1.3mg/kg、至少约1.4mg/kg、至少约1.5mg/kg、至少约1.6mg/kg、至少约1.7mg/kg、至少约1.8mg/kg、至少约1.9mg/kg、至少约2mg/kg、至少约2.1mg/kg、至少约2.2mg/kg、至少约2.3mg/kg、至少约2.4mg/kg、至少约2.5mg/kg、至少约2.6mg/kg、至少约2.7mg/kg、至少约2.8mg/kg、至少约2.9mg/kg、至少约3mg/kg、至少约3.1mg/kg、至少约3.2mg/kg、至少约3.3mg/kg、至少约3.4mg/kg、至少约3.5mg/kg、至少约3.6mg/kg、至少约3.7mg/kg、至少约3.8mg/kg、至少约3.9mg/kg、至少约4mg/kg、至少约4.1mg/kg、至少约4.2mg/kg、至少约4.3mg/kg、至少约4.4mg/kg、至少约4.5mg/kg、至少约4.6mg/kg、至少约4.7mg/kg、至少约4.8mg/kg、至少约4.9mg/kg、至少约5mg/kg、至少约5.1mg/kg、至少约5.2mg/kg、至少约5.3mg/kg、至少约5.4mg/kg、至少约5.5mg/kg、至少约5.6mg/kg、至少约5.7mg/kg、至少约5.8mg/kg、至少约5.9mg/kg、至少约6mg/kg、至少约6.1mg/kg、至少约6.2mg/kg、至少约6.3mg/kg、至少约6.4mg/kg、至少约6.5mg/kg、至少约6.6mg/kg、至少约6.7mg/kg、至少约6.8mg/kg、至少约6.9mg/kg、至少约7mg/kg、至少约7.1mg/kg、至少约7.2mg/kg、至少约7.3mg/kg、至少约7.4mg/kg、至少约7.5mg/kg、至少约7.6mg/kg、至少约7.7mg/kg、约至少7.8mg/kg、至少约7.9mg/kg、至少约8mg/kg、至少约8.1mg/kg、至少约8.2mg/kg、至少约8.3mg/kg、至少约8.4mg/kg、至少约8.5mg/kg、至少约8.6mg/kg、至少约8.7mg/kg、至少约8.8mg/kg、至少约8.9mg/kg、至少约9mg/kg、至少约9.1mg/kg、至少约9.2mg/kg、至少约9.3mg/kg、至少约9.4mg/kg、至少约9.5mg/kg、至少约9.6mg/kg、至少约9.7mg/kg、至少约9.8mg/kg、至少约9.9mg/kg、至少约10mg/kg、至少约11mg/kg、至少约12mg/kg、至少约13mg/kg、至少约14mg/kg、至少约15mg/kg、至少约16mg/kg、至少约17mg/kg、至少约18mg/kg、至少约19mg/kg、至少约20mg/kg、至少约21mg/kg、至少约22mg/kg、至少约23mg/kg、至少约24mg/kg、至少约25mg/kg、至少约26mg/kg、至少约27mg/kg、至少约28mg/kg、至少约29mg/kg或至少约30mg/kg。269.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约0.001mg/kg/天、至少约0.002mg/kg/天、至少约0.003mg/kg/天、至少约0.004mg/kg/天、至少约0.005mg/kg/天、至少约0.006mg/kg/天、至少约0.007mg/kg/天、至少约0.008mg/kg/天、至少约0.009mg/kg/天、至少约0.010mg/kg/天、至少约0.015mg/kg/天、至少约0.020mg/kg/天、至少约0.025mg/kg/天、至少约0.030mg/kg/天、至少约0.035mg/kg/天、至少约0.040mg/kg/天、至少约0.045mg/kg/天、至少约0.050mg/kg/天、至少约0.055mg/kg/天、至少约0.060mg/kg/天、至少约0.065mg/kg/天、至少约0.070mg/kg/天、至少约0.075mg/kg/天、至少约0.080mg/kg/天、至少约0.085mg/kg/天、至少约0.090mg/kg/天、至少约0.095mg/kg/天、至少约0.1mg/kg/天、至少约0.11mg/kg/天、至少约0.12mg/kg/天、至少约0.13mg/kg/天、至少约0.14mg/kg/天或至少约0.15mg/kg/天。270.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天、至少约1.1μg/kg/天、至少约1.2μg/kg/天、至少约1.3μg/kg/天、至少约1.4μg/kg/天、至少约1.5μg/kg/天、至少约1.6μg/kg/天、至少约1.7μg/kg/天、至少约1.8μg/kg/天、至少约1.9μg/kg/天、至少约2μg/kg/天、至少约2.1μg/kg/天、至少约2.2μg/kg/天、至少约2.3μg/kg/天、至少约2.4μg/kg/天、至少约2.5μg/kg/天、至少约2.6μg/kg/天、至少约2.7μg/kg/天、至少约2.8μg/kg/天、至少约2.9μg/kg/天、至少约3μg/kg/天、至少约3.1μg/kg/天、至少约3.2μg/kg/天、至少约3.3μg/kg/天、至少约3.4μg/kg/天、至少约3.5μg/kg/天、至少约3.6μg/kg/天、至少约3.7μg/kg/天、至少约3.8μg/kg/天、至少约3.9μg/kg/天、至少约4μg/kg/天、至少约4.1μg/kg/天、至少约4.2μg/kg/天、至少约4.3μg/kg/天、至少约4.4μg/kg/天、至少约4.5μg/kg/天、至少约4.6μg/kg/天、至少约4.7μg/kg/天、至少约4.8μg/kg/天、至少约4.9μg/kg/天、至少约5μg/kg/天、至少约5.1μg/kg/天、至少约5.2μg/kg/天、至少约5.3μg/kg/天、至少约5.4μg/kg/天、至少约5.5μg/kg/天、至少约5.6μg/kg/天、至少约5.7μg/kg/天、至少约5.8μg/kg/天、至少约5.9μg/kg/天、至少约6μg/kg/天、至少约6.1μg/kg/天、至少约6.2μg/kg/天、至少约6.3μg/kg/天、至少约6.4μg/kg/天、至少约6.5μg/kg/天、至少约6.6μg/kg/天、至少约6.7μg/kg/天、至少约6.8μg/kg/天、至少约6.9μg/kg/天、至少约7μg/kg/天、至少约7.1μg/kg/天、至少约7.2μg/kg/天、至少约7.3μg/kg/天、至少约7.4μg/kg/天、至少约7.5μg/kg/天、至少约7.6μg/kg/天、至少约7.7μg/kg/天、至少约7.8μg/kg/天、至少约7.9μg/kg/天、至少约8μg/kg/天、至少约8.1μg/kg/天、至少约8.2μg/kg/天、至少约8.3μg/kg/天、至少约8.4μg/kg/天、至少约8.5μg/kg/天、至少约8.6μg/kg/天、至少约8.7μg/kg/天、至少约8.8μg/kg/天、至少约8.9μg/kg/天、至少约9μg/kg/天、至少约9.1μg/kg/天、至少约9.2μg/kg/天、至少约9.3μg/kg/天、至少约9.4μg/kg/天、至少约9.5μg/kg/天、至少约9.6μg/kg/天、至少约9.7μg/kg/天、至少约9.8μg/kg/天、至少约9.9μg/kg/天、至少约10μg/kg/天、至少约10.1μg/kg/天、至少约10.2μg/kg/天、至少约10.3μg/kg/天、至少约10.4μg/kg/天、至少约10.5μg/kg/天、至少约10.6μg/kg/天、至少约10.7μg/kg/天、至少约10.8μg/kg/天、至少约10.9μg/kg/天、至少约11μg/kg/天、至少约11.1μg/kg/天、至少约11.2μg/kg/天、至少约11.3μg/kg/天、至少约11.4μg/kg/天、至少约11.5μg/kg/天、至少约11.6μg/kg/天、至少约11.7μg/kg/天、至少约11.8μg/kg/天、至少约11.9μg/kg/天、至少约12μg/kg/天、至少约12.1μg/kg/天、至少约12.2μg/kg/天、至少约12.3μg/kg/天、至少约12.4μg/kg/天、至少约12.5μg/kg/天、至少约12.6μg/kg/天、至少约12.7μg/kg/天、至少约12.8μg/kg/天、至少约12.9μg/kg/天、至少约13μg/kg/天、至少约13.1μg/kg/天、至少约13.2μg/kg/天、至少约13.3μg/kg/天、至少约13.4μg/kg/天、至少约13.5μg/kg/天、至少约13.6μg/kg/天、至少约13.7μg/kg/天、至少约13.8μg/kg/天、至少约13.9μg/kg/天、至少约14μg/kg/天、至少约14.1μg/kg/天、至少约14.2μg/kg/天、至少约14.3μg/kg/天、至少约14.4μg/kg/天、至少约14.5μg/kg/天、至少约14.6μg/kg/天、至少约14.7μg/kg/天、至少约14.8μg/kg/天、至少约14.9μg/kg/天或至少约15μg/kg/天。271.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约2μg/kg/天、至少约2μg/kg/天到至少约3μg/kg/天、至少约3μg/kg/天到至少约4μg/kg/天、至少约4μg/kg/天到至少约5μg/kg/天、至少约5μg/kg/天到至少约6μg/kg/天、至少约6μg/kg/天到至少约7μg/kg/天、至少约7μg/kg/天到至少约8μg/kg/天、至少约8μg/kg/天到至少约9μg/kg/天、至少约9μg/kg/天到至少约10μg/kg/天、至少约10μg/kg/天到至少约11μg/kg/天、至少约11μg/kg/天到至少约12μg/kg/天、至少约12μg/kg/天到至少约13μg/kg/天、至少约13μg/kg/天到至少约14μg/kg/天或至少约14μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。272.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约3μg/kg/天、至少约3μg/kg/天到至少约6μg/kg/天、至少约6μg/kg/天到至少约9μg/kg/天、至少约9μg/kg/天到至少约12μg/kg/天或至少约12μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。273.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约4μg/kg/天、至少约4μg/kg/天到至少约8μg/kg/天、至少约8μg/kg/天到至少约12μg/kg/天、至少约11μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。274.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约1μg/kg/天到至少约5μg/kg/天、至少约5μg/kg/天到至少约10μg/kg/天或至少约10μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。275.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用：至少约6.5μg/kg/天到至少约7.5μg/kg/天、至少约6μg/kg/天到至少约8μg/kg/天、至少约5.5μg/kg/天到至少约8.5μg/kg/天、至少约5μg/kg/天到至少约9μg/kg/天、至少约4.5μg/kg/天到至少约9.5μg/kg/天、至少约4μg/kg/天到至少约10μg/kg/天、至少约3.5μg/kg/天到至少约10.5μg/kg/天、至少约3μg/kg/天到至少约11μg/kg/天、至少约2.5μg/kg/天到至少约11.5μg/kg/天、至少约2μg/kg/天到至少约12μg/kg/天、至少约1.5μg/kg/天到至少约12.5μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约13μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约13.5μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约14μg/kg/天、至少约1μg/kg/天到至少约14.5μg/kg/天或至少约1μg/kg/天到至少约15μg/kg/天。276.上文公开的剂量可以在一天期间作为单剂量或多剂量施用。因此，可以施用0.6mg的总日剂量，例如，作为两个0.3mg剂量，或三个0.2mg剂量，或五个0.1剂量。277.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的t1/2(血浆半衰期)为约0.5小时、约0.6小时、约0.7小时、约0.8小时、约0.9小时、约1小时、约1.1小时、约1.2小时、约1.3小时、约1.4小时、约1.5小时、约1.6小时、约1.7小时、约1.8小时、约1.9小时、约2小时、约2.1小时、约2.2小时、约2.3小时、约2.4小时、约2.5小时、约2.6小时、约2.7小时、约2.8小时、约2.9小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时或约8小时。在一个具体方面，适体(例如，aptoll)的t1/2为约0.8小时和1.4小时。在一个具体方面，适体(例如，aptoll)的t1/2为约1.4小时。在一个具体方面，aptoll在人血浆中的t1/2为约8小时。278.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以多剂量施用。一方面，适体以一个、二个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个剂量施用。在一些方面，适体以三个剂量施用。在一些方面，三个剂量在同一天期间施用。在一些方面，第一剂量在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后小于一小时，例如在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后10分钟施用。在一些方面，第二剂量在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后小于3小时，例如在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后约2小时施用。在一些方面，第三剂量在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后小于8小时，例如在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风发作之后约6小时施用。279.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)静脉内或动脉内施用。在特定方面，本公开的适体以团注的形式施用。在一些方面，团注是缓慢团注。280.在一些方面，向患有tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风、多发性硬化症的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)：281.(i)使受损组织减少；282.(ii)使炎症减少；283.(iii)使预后和结果改善；284.(iv)使促炎生物标志物(例如，干扰素-γ、白介素-12p70、tnfα、il-6或其任何组合)的水平降低；285.(v)使生活质量提高；286.(vi)使功能评分，例如运动评分改善(例如，活动能力改善)；287.(vii)使存活率增加；或者288.(v)其任何组合。289.上文描述的作用是关于患有或曾经患有tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风、多发性硬化症但没有施用本公开的适体例如aptoll的对照患者或对照患者群体的。290.在一些方面，相对于未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者的对照群体中获得的参考值，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使组织损伤(例如，脑组织或心脏组织)的减少介于20％与75％之间。在一个具体方面，相对于未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者的对照群体中获得的参考值，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使组织损伤(例如，脑组织或心脏组织)的减少为大约65％。291.在一些方面，相对于未经治疗的受试者或从未经治疗的受试者的对照群体中获得的参考值，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体使组织损伤(例如，脑组织或心脏组织)减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％，至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。292.在具体方面，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小减小，当以多剂量方案施用时，所述面积显著更小。例如，在具体方面，与在梗塞之后10分钟处施用单剂量时观察到的大约19％的减少相比，施用三个剂量的适体(例如，在梗塞之后10分钟、2小时和6小时)使受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小减少了至少24％。293.在一些方面，与施用对应单剂量方案之后观察到的受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小相比，向有需要的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)的多剂量方案产生以下功效：受损或损伤面积(例如，缺血性事件之后的梗塞面积)的大小减小至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约100％、至少105％、至少约110％、至少约115％、至少约120％、至少约125％、至少约130％、至少约135％、至少约140％、至少约145％、至少约150％、至少约155％、至少约160％、至少约165％、至少约170％、至少约175％、至少约180％、至少约185％、至少约190％、至少约195％、至少约200％、至少约205％、至少约210％、至少约215％、至少约220％、至少约225％、至少约230％、至少约235％、至少约240％、至少约245％、至少约250％、至少约255％、至少约260％、至少约265％、至少约270％、至少约275％、至少约280％、至少约285％、至少约290％、至少约295％、至少约300％、至少约305％、至少约310％、至少约315％、至少约320％、至少约325％、至少约330％、至少约335％、至少约340％、至少约345％或至少约350％。294.在一些方面，通过施用至少一种本公开的适体(例如，aptoll)来治疗所公开的tlr-4介导的或本文公开的病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症)可以与其它治疗性和/或预防性治疗组合。例如，本公开的适体可以与生物活性分子如抗凝剂、抗炎剂或血压调节剂一起施用。295.在一些方面，在患有心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的受试者中，本公开的适体(例如，aptoll)的施用可以与例如外科手术干预(例如，血栓切除术)组合。在一些方面，本公开的适体的施用可以与导管插入术例如球囊导管插入术或支架的插入组合。在一些方面，动脉再通可以通过药理学(例如，溶栓)、机械(例如，血管内血栓切除术)或其组合来诱导。296.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的施用发生在外科手术(例如，血栓切除术)之前、期间或之后，或其组合。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的施用发生在溶栓例如药物溶栓、药物机械溶栓、机械血栓切除术或其组合之前、期间或之后。在一些方面，血栓切除术是支架取栓术血栓切除术、球囊栓塞切除术、直接抽吸血栓切除术、外科栓塞切除术或其任何组合。297.在一些方面，本文公开的治疗缺血性中风的方法包括溶栓(例如，药物机械溶栓)和/或血栓切除术(例如，机械血栓切除术)与本公开的适体(例如，aptoll)的施用组合，其中与在不存在溶栓的情况下施用本公开的适体(例如，aptoll)之后观察到的组织损伤(例如，梗塞面积)减少的功效相比，组合治疗使减少组织损伤(例如，减少梗塞面积)的功效增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约100％、至少约105％、至少约110％、至少约115％、至少约120％、至少约125％、至少约130％、至少约135％、至少约140％、至少约145％、至少约150％、至少约155％、至少约160％、至少约165％、至少约170％、至少约175％、至少约180％、至少约185％、至少约190％、至少约195％、至少约200％、至少约205％、至少约210％、至少约215％、至少约220％、至少约225％、至少约230％、至少约235％、至少约240％、至少约245％、至少约250％、至少约255％、至少约260％、至少约265％、至少约270％、至少约275％、至少约280％、至少约285％、至少约290％、至少约295％、至少约300％、至少约305％、至少约310％、至少约315％、至少约320％、至少约325％、至少约330％、至少约335％、至少约340％、至少约345％或至少约350％。298.在本公开的一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)产生保护性作用。299.因此，在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致特定并发症例如脑梗塞的发生率在tlr-4介导的疾病或病状发作之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续降低。300.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致特定并发症例如脑梗塞的发生率在施用本公开的适体(单独或与药理学的，例如溶栓和/或机械的，例如血管内血栓切除术、干预组合)之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续降低。301.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风、事件的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。302.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在施用本公开的适体之后(单独或与药理学的，例如溶栓和/或机械的，例如血管内血栓切除术、干预组合)之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96小时内的持续的保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。303.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后至少约1天、至少约2天，至少约3天，至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天、至少约18天、至少约19天、至少约20天、至少约21天、至少约22天、至少约23天、至少约24天、至少约25天、至少约26天、至少约27天或至少约28天内的持续的保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。304.在一些方面，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化或缺血性中风的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)导致在施用本公开的适体后(单独或与药理学的，例如溶栓和/或机械的，例如血管内血栓切除术、干预组合)之后至少约1天、至少约2天，至少约3天，至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约8天、至少约9天、至少约10天、至少约11天、至少约12天、至少约13天、至少约14天、至少约15天、至少约16天、至少约17天、至少约18天、至少约19天、至少约20天、至少约21天、至少约22天、至少约23天、至少约24天、至少约25天、至少约26天、至少约27天或至少约28天内的持续的保护作用(例如，减少复发、减少组织损伤、减少炎症、减少症状和/或后遗症或其任何组合)。305.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或在对照群体中观察到的受损组织的体积，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使受损组织的体积(例如，梗塞体积)(例如，如在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后24小时、48小时或72小时之后确定的)减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。306.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或在对照群体中观察到的受损组织的体积，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使受损组织的体积(例如，梗塞体积)(例如，如在tlr-4介导的疾病或病状的发作之后24小时、48小时或72小时之后确定的)减少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、至少约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。307.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的组织损伤(例如，皮质损伤或心肌损伤)，在tlr-4介导的疾病或病状如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使组织损伤(例如，皮质损伤或心肌损伤)减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％或至少约40％。308.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的神经恢复，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使神经恢复改善至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％。309.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的运动评分，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使运动功能改善至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％。310.在一些方面，相对于在没有用本公开的适体治疗的情况下在对照受试者或对照群体中观察到的促炎生物标志物的血浆蛋白水平，在tlr-4介导的疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、缺血性中风或多发性硬化症的发作之后向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)使促炎生物标志物的血浆蛋白水平减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％。311.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以通过静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注来施用。在具体方面，本公开的适体(例如，aptoll)例如通过输注或通过团注来静脉内或动脉内施用。在一些方面，通过缓慢团注施用，即通过持续约1分钟、约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约11分钟、约12分钟、约13分钟、约14分钟或约15分钟的注射来施用剂量。312.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以与适合于治疗局部缺血性病状和/或血栓的其它药物或治疗(例如，如上文所描述的溶栓)同时使用。313.在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗缺血性中风的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗心肌梗塞的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗心肌梗塞的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗出血性中风的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗出血性转化的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。在一些方面，根据本文公开的方法使用本公开的适体(例如，aptoll)可以与本领域已知的用于治疗多发性硬化症的一种或多种疗法(药理学和/或外科手术)组合。314.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以以例如tlr-4拮抗剂、抗炎剂、核酸、肽或蛋白质或其组合的组合形式施用。在一些方面，本文公开的方法还可以与如颈动脉内膜切除术和/或颈动脉支架术等手术程序组合。315.在一些方面，本文公开的方法包括施用至少一种本公开的适体(例如，aptoll)，单独或与药理学或机械溶栓组合，并且任选地与异丁司特(ibudilast)、tak242、ni-0101、依立托伦(eritoran)、依达拉奉(edaravone)、尿酸、芬戈莫德、那他珠单抗(natalizumab)、米诺环素(minocycline)、阿那白滞素(anakinra)、神经肽或其任何组合进行组合。316.在一些方面，本文公开的方法包括将至少一种本公开的适体(例如，aptoll)作为组合疗法共同施用，其包括施用：317.(i)选自由以下组成的组的tlr-4拮抗剂：纳洛酮(naloxone)、( )-纳洛酮、纳曲酮(naltrexone)、( )-纳曲酮、脂多糖(lps)、异丁司特、丙戊茶碱(propentofylline)、阿米替林(amitriptyline)、酮替芬(ketotifen)、环苯扎林(cyclobenzaprine)、米安色林(mianserin)、丙咪嗪(imipramine)、脂质a类似物(例如，依立托伦或e5531)、松属素(pinocembrin)、十六酰胺乙醇(palmitoylethanolamide)、他喷他多(tapentadol)、聚丙醚亚胺树枝状葡萄糖胺(dg)、氨基烷基氨基葡萄糖4-磷酸(例如，crx-526)、iaxo-102、rs-lps、tlr-in-c34、tak-242、e5564或其任何组合；318.(ii)抗血小板药物，例如阿司匹林或氯吡格雷(clopidogrel)；319.(iii)抗凝血剂，例如肝素、醋硝香豆素(acenocumarol)、华法林(warfarin)、达比加群(dabigatran)或利伐沙班(rivaroxaban)；320.(iv)抗氧化剂，例如依达拉奉；321.(v)组织纤溶酶原活化剂；或者322.(vi)其任何组合。323.在一些方面，本文公开的方法包括将至少一种本公开的适体(例如，aptoll)作为组合疗法共同施用，包括施用核酸，所述核酸具有使涉及通过tlr-4的表达增加和/或tlr-4的活化增加表征的病理的基因的表达沉默的能力，例如反义寡核苷酸(例如，反义rna、反义dna或反义rna/dna)、小干扰rna(sirna)、短发夹rna(shrna)、抗微rna(抗mir)；肽，如信号传导肽和靶结合肽(例如，抗体或其抗原结合片段，包括抗体或其抗原结合片段的化合物的肽，如抗原-药物缀合物或免疫毒素)。324.在一些方面，本文公开的方法包括施用至少一种本公开的适体，例如aptoll或下文公开的任何适体，具体是表1中公开的任何适体或其变体或衍生物。325.在一些方面，本文公开的方法可以使用除适体之外的核酸实施，所述核酸不是通过与tlr-4蛋白结合来降低和/或抑制tlr-4作用，而是通过与tlr4基因或tlr4基因的转录产物如对tlr-4进行编码的信使rna(mrna)相互作用或与调节tlr-4表达的核酸(例如，mirna)例如反义寡核苷酸、sirna、shrna或抗mir相互作用来直接或间接降低和/或抑制(例如，耗竭或消除)tlr-4表达。还考虑使用瞬时或永久改变tlr-4表达的药剂实施本文公开的方法，例如使用例如crispr/cas、talen或zfn的基因疗法方法。还考虑使用药剂来实施本文公开的方法，所述药剂转录后修饰tlr-4的活性或通过tlr-4信号传导通路内的上游和/或下游的药理学或基因疗法干预来改变tlr-4向质膜的掺入、改变tlr-4功能性(例如，抗体或小分子药物)、改变tlr-4运输和/或再循环或改变tlr-4信号传导。326.在一些方面，本公开提供了一种用于减轻或改善有需要的受试者的疾病或病状的至少一种症状或后遗症的核酸适体，其中327.(a)所述适体的长度例如介于约40与约100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中328.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且329.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者330.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有例如至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。331.在一些方面，本公开提供了一种用于治疗本文公开的疾病或病状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用核酸，其中332.(a)所述适体的长度例如介于约40与约100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中333.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且334.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者335.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有例如至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。336.在一些方面，本公开提供了一种用于减轻、改善、抑制或减少有需要的受试者的本文公开的疾病或病状的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括向所述受试者施用核酸，其中337.(a)所述适体的长度例如介于约40与约100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中338.(i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且339.(ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者340.(b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有例如至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4，并且维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。341.在一些方面，本文公开的方法可以实施表1中公开的任何适体或其组合。因此，在一些方面，长度例如介于约40与约100个核苷酸之间的适体选自由seqidno:1-16组成的组。342.在一些方面，长度例如介于约40与约100个核苷酸之间的适体是与seqidno:1-16的适体具有例如至少85％序列同一性的功能等效变体，其中所述功能等效变体衍生自seqidno:1-16，并且维持与tlr-4活化特异性结合和减少和/或抑制所述活化的能力。343.在一些方面，所述适体的长度为约45、约59、约68、约76或约78个核苷酸。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约78个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约59与约78个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约68与约78个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约76个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约68个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约45与约59个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约59与约76个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约59与约68个核苷酸之间。在一些方面，所述适体的长度介于约68与约76个核苷酸之间。344.在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)或其组合施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者可以减少梗塞体积。在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)或其组合施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者可以减少在施用倍剂量的本公开的适体(例如，aptoll)或其组合例如一个剂量、二个剂量、三个剂量、四个剂量或五个剂量之后的梗塞体积。345.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)或其组合的多剂量的施用可以在闭塞之后例如约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约12小时、约18小时、约24小时、约30小时、约36小时、约42或约48小时开始。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟施用单剂量，其中与对照病状相比，例如与未用适体治疗的受试者的梗塞体积相比，适体的施用诱导梗塞体积减少。346.在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟和约2小时施用两个剂量。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟、约2小时和约6小时施用三个剂量。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟、约2小时、约6小时和约24小时施用四个剂量。在一些方面，例如在闭塞之后约10分钟、约2小时、约6小时、约24小时和约48小时施用五个剂量。在一些方面，与对照病状相比，例如与未用适体治疗的受试者的梗塞体积相比，此类剂量方案诱导梗塞体积减少。347.在一些方面，与对照病状相比，例如与未用适体治疗的受试者的梗塞体积相比，本公开的适体(例如，aptoll)或其组合的施用诱导梗塞体积减少至少约10％、至少15％、至少约20％或至少约25％。348.在一些方面，当在缺血性事件之后立即施用时，例如在缺血性事件之后约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟或约30分钟施用时，将本公开的适体(例如，aptoll)施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者减少了梗塞体积。在一些方面，与对照病状下观察到的梗塞体积相比，例如与未用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的受试者的梗塞体积相比，梗塞体积的减少为约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％。349.在一些方面，当在缺血性事件之后约10分钟施用时，本公开的适体(例如，aptoll)静脉内施用于患有缺血性病状和/或血栓的受试者使梗塞体积减少了约65％。350.本公开还提供了一种用于选择患有缺血性病状和/或血栓的受试者以用本公开的适体(例如，aptoll)进行治疗的方法，其中所述受试者选自治疗，如果例如血管闭塞是适用于机械血栓切除术，例如，由计算机化断层扫描血管造影术(cta)确定或证实。在某一些方面，用于选择的标准是大血管闭塞，适合于由神经影像标准(ct或mri)确定或证实的机械血栓切除术，如：351.(i)磁共振成像(mri)标准：扩散加权成像(dwi)限制的体积≥约5ml且≤约70ml，如例如通过软件确定；和/或352.(ii)计算机化断层扫描(ct)标准：阿尔伯塔中风计划早期ct评分(aspects)约6到约10和关于入院脑血流量(cbf)确定的梗塞评分《30％和≥约5ml且≤约70ml，例如，通过软件确定。353.在一些方面，用于选择受试者的标准是从症状发作开始的时间。因此，在一些方面，如果自缺血性病状和/或血栓发作起已经过去了小于6小时，例如小于5小时、小于4小时、小于3小时、小于2小时或小于1小时，那么选择受试者以用本公开的适体(例如，aptoll)进行治疗。354.在一些方面，用于选择用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的受试者的标准是受试者是否是接受evt治疗(例如，血栓切除术)的候选者。355.在一些方面，受试者是人受试者，并且本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.2mg/kg之间的剂量施用。因此，在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于人受试者以治疗本文公开的任何疾病或病状，或预防、抑制或减少与此类疾病或病状相关联的任何症状和/或后遗症：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。356.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，将本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于人受试者以治疗本文公开的任何疾病或病状，或预防、抑制或减少任何症状和/或后遗症：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约14mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。357.在一些方面，本公开提供了一种用于预防患有急性心肌梗塞的受试者发生炎性反应的预防方法，所述方法包括施用本公开的适体(例如，aptoll)。358.在一些方面，本公开提供了一种用于选择患有急性心肌梗塞的受试者以用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的方法，所述方法包括例如：(i)进行测量、评估或定量梗塞面积；(ii)评估心脏功能；(iii)测量与组织损伤或组织重塑相关的生物标志物；或者(iv)其组合。359.本公开还提供了一种用于促进或诱导患有急性心肌梗塞的受试者的心脏功能恢复的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。还提供了一种用于减少患有急性心肌梗塞的受试者的坏死(例如，左心室坏死)和/或纤维化的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，可以在向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)之后至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天观察到心脏功能的恢复、相对于对照的梗塞面积的减少、相对于对照的坏死(例如，左心室坏死)的减少、相对于对照的纤维化的减少或其任何组合。在一些方面，患有急性心肌梗塞并且已经施用过本公开的适体(例如，aptoll)的受试者的肌钙蛋白i水平低于未施用过适体的受试者的肌钙蛋白i水平。在一些方面，较低的肌钙蛋白i水平是可检测的，例如，在向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)之后约2小时、约4小时、约6小时、约8小时、约10小时、约12小时、约14小时、约16小时、约18小时、约20小时、约22小时、约24小时、约30小时、约36小时、约42小时或约48小时。360.在一些方面，相对于对照病状，例如相对于尚未施用过本公开的适体(例如，aptoll)的受试者，向患有急性心肌梗塞的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可以使梗塞面积减少至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％。361.在一些方面，向患有急性心肌梗塞的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)可以362.(i)相对于对照减少梗塞面积(例如，梗塞面积的体积)；363.(ii)保留心脏组织的完整性；364.(iii)减少或抑制纤维化；365.(iv)抑制胞外基质降解标志物的表达；366.(v)减少、降低风险或抑制错误的心脏重塑；367.(vi)诱导心脏保护；368.(vii)减少或抑制胞外基质降解；369.(viii)改善或促进心脏重塑；370.(ix)保留心室解剖；371.(x)保留心脏功能；372.(xi)减少梗塞的进展373.(xii)改善心肌修复374.(xiii)增加或恢复心室收缩力；或者375.(xiv)其任何组合。376.因此，在一些方面，本公开提供了用于在患有急性心肌梗塞的受试者中进行以下的方法：377.(i)相对于对照减少梗塞面积(例如，梗塞面积的体积)；378.(ii)保留心脏组织的完整性；379.(iii)减少或抑制纤维化；380.(iv)抑制胞外基质降解标志物的表达；381.(v)减少、降低风险或抑制错误的心脏重塑；382.(vi)诱导心脏保护；383.(vii)减少或抑制胞外基质降解；384.(viii)改善或促进心脏重塑；385.(ix)保留心室解剖；386.(x)保留心脏功能；387.(xi)减少梗塞的进展；388.(xii)改善心肌修复；389.(xiii)增加或恢复心室收缩力；或者390.(xiv)其任何组合；391.所述方法包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。392.在一些方面，相对于尚未施用过本公开的适体(例如，aptoll)的受试者中的表达，患有急性心肌梗塞的受试者(包括向受试者施用本公开的适体(例如，aptoll))中mmp-9的表达减少了至少约10％，至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、在至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。393.在一些方面，本公开提供了用于选择患有急性心肌梗塞的受试者以施用本公开的适体(例如，aptoll)的方法，所述方法包括测量受试者的mmp-9的表达水平(例如，蛋白质表达水平、mrna表达水平或其组合)，并且如果mmp-9相对于对照值(例如，未用本公开的适体(例如，aptoll)治疗的受试者的观察值或标准正常表达值)升高，则施用本公开的适体(例如，aptoll)。394.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量施用于患有急性心肌梗塞的人受试者。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有急性心肌梗塞的人受试者：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。395.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的患有急性心肌梗塞的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有急性心肌梗塞的人受试者：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约14mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。396.在一些方面，本公开提供预防、抑制、遏制或延迟有需要的受试者的神经肌肉或神经退行性疾病或病状例如多发性硬化症的症状和/或后遗症的发作，包括向所述受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)在神经肌肉或神经退行性疾病或病状的症状发作之后约24小时施用于受试者。在一些方面，向受试者施用单剂量的本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，向受试者施用超过一个剂量的本公开的适体(例如，aptoll)，例如，两个剂量、三个剂量、四个剂量或五个剂量。397.在一些方面，向患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)：(i)使临床评分改善；(ii)使体重减轻(体重恢复)减少；(iii)使髓鞘再生；(iv)使轴突损伤减少；(v)使炎症减少；(vi)使脱髓鞘减少；(vii)使髓鞘面积增加；(viii)使神经丝增加；或者(ix)任何组合。因此，在一些方面，本公开提供了一种用于使患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的受试者发生如下变化的方法：(i)改善临床评分；(ii)减少体重减轻(恢复体重)；(iii)髓鞘再生；(iv)减少轴突损伤；(v)减少炎症；(vi)减少脱髓鞘；(vii)增加髓鞘面积；(viii)增加神经丝；或者(ix)任何组合，所述方法包括向所述受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，髓鞘再生可以通过测量如pdgfrα、cc1、oligo2或其组合等生物标志物的水平来确定。398.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量施用于患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。399.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有神经肌肉或神经退行性疾病或病状的人受试者：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。400.还提供了用于预防、抑制、遏制或延迟受试者的包括原发性和继发性脱髓鞘如中风或颅脑外伤(创伤性脑损伤)的病理学症状和/或后遗症的发作的方法，所述方法包括向所述受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)。401.在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量施用于患有中风或创伤性脑损伤的人受试者。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有中风或创伤性脑损伤的人受试者：每剂量约0.007mg/kg、每剂量约0.008mg/kg、每剂量约0.009mg/kg、每剂量约0.010mg/kg、每剂量约0.011mg/kg、每剂量约0.012mg/kg、每剂量约0.013mg/kg、每剂量约0.014mg/kg，每剂量约0.015mg/kg、每剂量约0.016mg/kg、每剂量约0.017mg/kg、每剂量约0.018mg/kg、每剂量约0.019mg/kg、每剂量约0.020mg/kg、每剂量约0.021mg/kg、每剂量约0.022mg/kg、每剂量约0.023mg/kg、每剂量约0.024mg/kg、每剂量约0.025mg/kg、每剂量约0.030mg/kg、每剂量约0.035mg/kg、每剂量约0.040mg/kg、每剂量约0.045mg/kg、每剂量约0.050mg/kg、每剂量约0.055mg/kg、每剂量约0.060mg/kg、每剂量约0.065mg/kg、每剂量约0.070mg/kg、每剂量约0.075mg/kg、每剂量约0.080mg/kg、每剂量约0.085mg/kg、每剂量约0.090mg/kg、每剂量约0.095mg/kg、每剂量约0.100mg/kg、每剂量约0.105mg/kg、每剂量约0.110mg/kg、每剂量约0.115mg/kg、每剂量约0.120mg/kg、每剂量约0.125mg/kg、每剂量约0.130mg/kg、每剂量约0.135mg/kg、每剂量约0.140mg/kg、每剂量约0.145mg/kg、每剂量约0.150mg/kg、每剂量约0.155mg/kg、每剂量约0.160mg/kg、每剂量约0.165mg/kg、每剂量约0.170mg/kg、每剂量约0.175mg/kg、每剂量约0.180mg/kg、每剂量约0.185mg/kg、每剂量约0.190mg/kg或每剂量约0.2mg/kg。402.根据以上公开，考虑到介于约0.007mg/kg与约0.20mg/kg之间的剂量范围，并且考虑到约70kg的患有中风或创伤性脑损伤的人受试者的标准体重，标准单次剂量的量介于约0.5mg/剂量与约10mg/剂量之间。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以以下剂量施用于患有中风或创伤性脑损伤的人受试者：约0.5mg/剂量、约0.6mg/剂量、约0.7mg/剂量、约0.8mg/剂量、约0.9mg/剂量、约1mg/剂量、约1.1mg/剂量、约1.2mg/剂量、约1.3mg/剂量、约1.4mg/剂量、约1.5mg/剂量、约1.6mg/剂量、约1.7mg/剂量、约1.8mg/剂量、约1.9mg/剂量、约2mg/剂量、约2.5mg/剂量、约3mg/剂量、约3.5mg/剂量、约4mg/剂量、约4.5mg/剂量、约5mg/剂量、约5.5mg/剂量、约6mg/剂量、约6.5mg/剂量、约7mg/剂量、约7.5mg/剂量、约8mg/剂量、约8.5mg/剂量、约9mg/剂量、约9.5mg/剂量、约10mg/剂量、约11mg/剂量、约12mg/剂量、约13mg/剂量、约14mg/剂量、约15mg/剂量、约16mg/剂量、约17mg/剂量、约18mg/剂量、约19mg/剂量或约20mg/剂量。403.iii.对tlr-4具有特异性的适体404.本公开的方法中使用的适体具有与定位于tlr-4的胞外结构域上的至少一个表位特异性结合并抑制tlr-4的能力。本公开的适体的具体实例在表1中呈现。在一些方面，本公开的适体是表1中公开的适体的变体和/或衍生物。405.表1.对tlr-4具有特异性的示例性适体[0406][0407]表1的适体的长度介于45个核苷酸到78个核苷酸之间。a含量的范围为约17％到约27％。t含量的范围为约17％到约28％。g含量的范围为约21％到约33％。c含量的范围为约20％到约34％。[0408]在一些方面，本公开的适体是如下文公开的经化学修饰的适体。在一些方面，本公开的适体是这样的dna和/或rna适体(例如，ssdna适体)：其可以以特异性结合并抑制表1中公开的适体的tlr-4的能力的至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％特异性结合并抑制tlr-4。[0409]在一些方面，本公开的适体包括表1中公开的序列的5'处的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、160、180、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000或更多个核苷酸，其中所述适体能够特异性结合并抑制tlr-4。[0410]在一些方面，本公开的适体包括表1中公开的序列的3'处的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、160、180、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000或更多个核苷酸，其中所述适体能够特异性结合并抑制tlr-4。[0411]在一些方面，本公开的适体包括与表1中公开的序列具有至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％序列同一性的核酸序列，其中所述适体能够特异性结合并抑制tlr-4。[0412]在一些方面，本公开的适体由介于约30与约200个核苷酸之间、介于约35与约150个核苷酸之间、介于约40与约100个核苷酸之间、介于约45与约80个核苷酸之间、介于约40与约50个核苷酸之间、介于约35与约55个核苷酸之间、介于30与约60个核苷酸之间、介于约35与约65个核苷酸之间、介于约40与约70个核苷酸之间、介于约75与约85个核苷酸之间、介于约70与约90个核苷酸之间、介于约65与约95个核苷酸之间、介于约60与约100个核苷酸之间、介于约55与约95个核苷酸之间、介于约50与约90个核苷酸之间、介于约45与约85个核苷酸之间、介于约50与约80个核苷酸之间、介于约55与约75之间或介于约60与约75个核苷酸之间的核酸序列(例如，ssdna)组成。[0413]在一些方面，本公开的适体可以与至少一个生物活性分子共价或非共价连接。在一些方面，生物活性分子可以与tlr-4特异性结合。在一些方面，生物活性分子包括例如抗体或其抗原结合片段、小分子、肽、适体、脂质、脂多糖、多糖、酶或核酸。在一些方面，生物活性分子包括包含抗炎剂。[0414]在一些方面，生物活性分子是选自由以下组成的组的tlr-4拮抗剂：纳洛酮、( )-纳洛酮、纳曲酮、( )-纳曲酮、脂多糖(lps)、异丁司特、丙戊茶碱、阿米替林、酮替芬、环苯扎林、米安色林、丙咪嗪、脂质a类似物(例如，依立托伦或e5531)、松属素、十六酰胺乙醇、他喷他多、聚丙醚亚胺树枝状葡萄糖胺(dg)、氨基烷基氨基葡萄糖4-磷酸(例如，crx-526)、iaxo-102、rs-lps、tlr-in-c34、tak-242、e5564或其任何组合。[0415]在一些方面，生物活性分子包括抗血小板药物，例如阿司匹林或氯吡格雷。在一些方面，生物活性分子包括抗凝剂，例如肝素、醋苯马酚、华法林、达比加群或利伐沙班。在一些方面，生物活性分子包括抗氧化剂，例如依达拉奉。在一些方面，生物活性分子是组织纤溶酶原活化剂。[0416]在一些方面，生物活性分子是β阻滞剂，例如美托洛尔(metoprolol)或卡地洛尔(cavedilol)、ace抑制剂、他汀类药物或醛固酮拮抗剂，例如安体舒通(spironolactone)或依普利酮(eplerenone)。[0417]在一些方面，生物活性分子包括核酸(例如，反义rna、反义dna和小干扰rna)，其具有使涉及通过tlr-4的表达增加和/或tlr-4的活化增加表征的病理的基因的表达沉默的能力，包含但不限于nfkb1、ripk3、ifnb1、ly96(md-2)、irf3、tlr3、tirap(mai)、ticam1(trif)、ripk1、traf6、cd14、tram、ikbkg(ikk-γ)、ifna1和tlr4基因。在本公开的上下文中，术语“反义rna”是指单链rna，其核苷酸序列与靶信使rna互补，从而干扰相应基因的表达。在本公开的上下文中，术语“反义dna”是指单链dna，其核苷酸序列与靶信使rna互补，从而干扰相应基因的表达或使所述表达沉默。在本公开的上下文中，术语“小干扰rna”或“sirna”是指长度为20到25个核苷酸的双链rna，其对其靶信使rna的核苷酸序列具有高度特异性，从而干扰相应基因的表达。[0418]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)对λ-核酸外切酶的降解具有抗性。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)对λ-核酸外切酶的降解具有抗性，例如，在与核酸酶一起温育至少约5分钟、至少约15分钟、至少约30分钟、至少约1小时、至少2小时或至少约4小时之后。[0419]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)抑制或减少由lps(脂多糖)介导的tlr-4活化，例如，如使用本领域已知的方法使用表达htlr-4的hek-blue-htlr-4细胞以及tlr-4共活化蛋白md2和cd14测量的。在一些方面，与在对照病状下例如在没有施用本公开的适体(例如，aptoll)的情况下观察到的作用相比，此类活化减少为至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。[0420]在一些方面，如使用本领域已知的方法以及食蟹猴和人单核细胞所测量的，本公开的适体(例如，aptoll)对人tlr-4的结合亲和力为30-60nm。在一些方面，本公开的适体对人tlr-4的结合亲和力为至少约20nm、至少约25nm、至少约30nm、至少约35nm、至少约40nm、至少约45nm、至少约50nm、至少约55nm、至少约60nm、至少约65nm或至少约70nm。[0421]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)抑制由损伤相关分子模式(damp)诱导的tlr-4活化，例如，如使用本领域已知的方法使用表达htlr-4的hek-blue-htlr-4细胞以及tlr-4共活化蛋白md2和cd14测量的。damp(损伤相关分子模式)是在损伤条件下在脑实质中释放的组织分子，如热休克蛋白、核酸、纤连蛋白或透明质酸。因此，在一些方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，本公开的适体可以通过内源性tlr-4激动剂(例如，damp)使tlr-4活化抑制至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。[0422]在一些方面，如使用本领域已知的方法测量的，本公开的适体诱导例如由lps刺激的鼠腹膜巨噬细胞中的下游tlr-4细胞效应子如nox水平的降低。在一些方面，在一些方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，本公开的适体的施用诱导nox水平降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％或至少约75％。[0423]在一些方面，本公开的适体对tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr7、tlr8或tlr9人toll受体没有可检测的激动作用，并且对tlr2和tlr5没有拮抗作用。[0424]在一些方面，tlr-4受体在与本公开的适体结合之后被内化，例如，如使用本领域已知的方法在人巨噬细胞中测量的。在一些方面，包括本公开的结合适体的tlr-4受体在适体与tlr-4结合之后大约20分钟被内化到细胞质中。[0425]在一些方面，在本公开的适体与tlr-4结合后tlr-4内化之后，在细胞表面检测到能够结合本公开的适体的新tlr-4受体(即，内化的tlr-4再循环到质膜)，例如，如使用本领域已知的方法在人巨噬细胞中测量的。[0426]在一些方面，在本公开的适体与tlr-4结合后tlr-4内化之后大约5小时，在细胞表面上检测到能够结合本公开的适体的新tlr-4受体。[0427]在一些方面，向ipsc衍生的皮质谷氨酰胺能(80％)和gaba能(20％)神经元施用本公开的适体使对神经元没有可检测的毒性。[0428]在一些方面，向有需要的受试者施用本公开的适体使促炎细胞因子减少。在一些方面，促炎细胞因子选自由以下组成的组：白介素-6(il-6)、干扰素-γ(ifn-γ)、肿瘤坏死因子α(tnf-α)、白介素-12p70(il-12p70)以及其任何组合。[0429]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使干扰素-γ(ifn-γ)水平降低至少约5％、至少约10％、至少15％、至少约20％或至少约25％。[0430]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使白介素-12p70(il-12p70)水平降低至少约5％、至少约10％、至少15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％或至少约35％。[0431]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使肿瘤坏死因子α(tnf-α)水平降低至少约5％、至少约10％或至少约15％。[0432]一方面，与对照病状相比(例如，在没有施用本公开的适体的情况下)，施用本公开的适体可以使白介素-6(il-6)水平降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少45％或至少约50％。[0433]在一些方面，本公开的适体可以跨血脑屏障(bbb)转运。在一些方面，本公开的适体可以在bbb受到损害之后，例如由于出血性或缺血性事件而跨bbb转运。因此，在一些方面，本公开的适体不能跨过健康受试者的bbb。[0434]在一个具体方面，本公开的适体是aptoll。如本文所用，术语“aptoll”是指与包括seqidno:1的序列的tlr-4特异性结合的核酸(单链dna，ssdna)适体。在特定方面，术语aptoll是指seqidno:1的结构化核酸适体。如本文所用，术语“结构化核酸适体”或“结构化适体”是指已通过暴露于变性条件(例如，高温，如95℃，例如持续10分钟)而线性化并随后在低温(例如，通过浸入冰中，例如持续10分钟)下重折叠使得其获取允许结构化适体(例如，aptoll)与其靶标(例如，tlr-4胞外结构域上的表位)之间发生相互作用的三级结构的核酸适体。参见图1。[0435]aptoll的化学式为c575h723n223o351p58，并且其分子量为18,170.80da。aptoll的分子序列已通过受控酶消化然后ms-ms(质谱法)测序被证实。通过在体外测定中证实预期的生物活性，已经评估了正确的结构。为了采用其生物活性构象，将适体溶解在pbs-1mmmgcl2中，并且溶解之后，适体必须加热至95℃持续约10分钟，并且然后在冰上快速冷却约10分钟。这种缓冲溶液和条件支持适体结构和其生物活性。[0436]研究医药产品(imp)aptoll的剂型对应于输注用溶液的浓缩物的粉剂，所述粉剂由要用注射用水重组并且进一步用盐水溶液稀释以供其静脉施用的冻干粉剂组成。[0437]aptoll已证明与人tlr-4的特异性结合以及tlr4拮抗作用。aptoll已示出，例如，对中动脉闭塞(mcao)诱导的脑损伤具有持久的保护作用。另外地，aptoll在脑缺血再灌注模型中的功效支持此适体在经历由药物和/或机械干预诱导的动脉再通的患者中使用。[0438]临床前药代动力学研究证明，在0.45到2mg/kg剂量范围内，大鼠中的aptoll的cmax值似乎通过不依赖剂量的(线性)动力学表征，并且在0.45到2mg/kg剂量范围内，雌性大鼠全身暴露于aptoll的程度似乎通过非线性(剂量依赖性)动力学表征。将aptoll的剂量增加高于0.45mg/kg可能导致比线性关系预测的更低的全身暴露，这与更高剂量水平下对aptoll的血浆清除率增加的可能性一致。已经进行了药效学、安全药理学、药代动力学和毒理学非临床研究，以表征三个物种的aptoll：小鼠(c57bl6，icr)、大鼠(威斯塔和斯普拉格道利(sd))和nhp(非人灵长类动物；食蟹猴)。由于受体人类同源性和tlr4药理学，选择了这些物种。[0439]在体外和体内进行的药效学表征表明，aptoll与人和非人灵长类动物(nhp)的tlr-4的结合的ka为大约30到60nm，并且还表明aptoll不与其它tlr结合。[0440]本公开的适体(例如，aptoll)的体内药效学表征表明，在向患有急性缺血性中风的受试者施用适体之后，可以观察到例如至多65.5％的梗塞体积减少。已观察到至多12小时的治疗窗口。多剂量施用本公开的适体，例如aptoll，通常比单剂量施用提供更好的保护。向患有急性缺血性中风的受试者施用本公开的适体，例如aptoll，使短期和长期的神经学结果改善。实验观察已经证实，向有需要的受试者施用本公开的适体，例如aptoll，使炎症级联阻断。此外，本公开的适体(例如，aptoll)的施用未示出与静脉内rt-pa的任何药物-药物相互作用。[0441]生物分布研究表明，静脉注射之后1小时，aptoll主要存在于原初受试者和缺血性受试者两者中的肾脏、脾脏和肝脏中。注射之后24小时，几乎检测不到aptoll水平。在生理条件下，aptoll不能在健康受试者中跨过bbb。然而，aptoll能够在经历过缺血性事件的个体中跨过bbb。当在缺血性事件之后施用时，aptoll主要存在于受试者大脑的同侧半球(即，遭受缺血性事件的半球)中。[0442]aptoll的代谢和分布已在体外和体内确定。aptoll在施用之后几分钟被血浆中的核酸外切酶降解。未检测到药物相互作用或转运蛋白或细胞色素的抑制。在sd大鼠中进行的体内调节药代动力学研究表明tmax在给药后1分钟达到；cmax在介于0.45mg/kg与2mg/kg之间的剂量范围内示出了线性动力学，而暴露(auct)在相同剂量范围内呈现出非线性动力学。[0443]在一些特定方面，aptoll以1瓶7mg冻干粉剂的形式呈现，所述冻干粉剂用3ml水重组以生成aptoll浓缩物，所述浓缩物进一步用100ml0.9％氯化钠溶液稀释。所得溶液可以静脉内施用，例如通过输注泵施用。在一些方面，aptoll施用作为单剂量发生。在其它方面，施用多剂量。在一些方面，aptoll输注的持续时间为大约30分钟。[0444]在一些方面，当aptoll输注作为血栓切除术手术的一部分施用时，aptoll输注在包括rt-pa(重组组织纤溶酶原活化剂；阿替普酶)施用的静脉内溶栓之后立即施用，如果适当的话，并且在血栓切除术之前施用。[0445]iv.经化学修饰的适体[0446]本公开的适体(例如，aptoll)可以被化学修饰以变得极其稳定或者可以被进一步截短以消除对于与靶标的相互作用或对于正确的三维适体结构不重要的寡核苷酸序列。本公开的适体可以呈未经修饰的单链dna(ssdna)适体的形式，例如用于治疗急性缺血性中风和本文公开的其它疾病和病状，由于其快速的药代动力学和低毒性特征。然而，为了扩展例如本公开的适体的治疗性和/或保护性作用，适体可以进行旨在增加例如其对核酸酶降解的抗性和/或其在循环中的半衰期的修饰。[0447]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)包括至少一种经化学修饰的核苷和/或核苷酸。当本公开的适体被化学修饰时，适体可以被称为“经修饰的适体”。[0448]“核苷”是指含有糖分子(例如，戊糖或核糖)或其衍生物与有机碱(例如，嘌呤或嘧啶)或其衍生物(在本文中也被称为“有机碱基”)组合的化合物。[0449]“核苷酸”是指包含磷酸基团的核苷。经修饰的核苷酸可以通过任何有用的方法合成，例如化学、酶促或重组，以包含一种或多种经修饰的或非天然核苷。[0450]本公开的适体可以包括所连接核苷的一个或多个区域。此类区域可以具有可变骨架键。所述键可以是标准磷酸二酯键，在所述情况下适体将包括核苷酸区域。[0451]本文公开的经修饰的适体可以包括各种不同的修饰。在一些方面，经修饰的适体含有一种、两种或更多种(任选地不同的)核苷或核苷酸修饰。在一些方面，与对应的未经修饰的适体相比，经修饰的适体可以表现出一种或多种期望的性质，例如改善的热稳定性或化学稳定性、降低的免疫原性、减少的降解、增加与tlr-4靶表位的结合、减少与tlr-4的其它区域或其它分子的非特异性结合，例如其它toll样受体。[0452]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)被化学修饰。如本文所用，关于多核苷酸，术语“化学修饰”或适当时“经化学修饰的”是指关于腺苷(a)、鸟苷(g)、尿苷(u)、胸苷(t)或胞苷(c)核糖或脱氧核糖核苷在其位置、模式、百分比或群体中的一项或多项，包含但不限于其核碱基、糖、骨架或其任何组合的修饰。[0453]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)可以具有所有或任何相同核苷类型或通过在所有或任何相同核苷类型中向下滴定相同起始修饰产生的修饰群体的统一化学修饰，或所有任何相同核苷类型但随机掺入的化学修饰的测量百分比。在另一方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)可以具有贯穿整个多核苷酸(如所有腺苷和/或所有胞苷等以相同方式修饰)的两个、三个或四个相同核苷类型的统一化学修饰。[0454]经修饰的核苷酸碱基配对不仅涵盖标准的腺嘌呤-胸腺嘧啶、腺嘌呤-尿嘧啶或鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对，还涵盖核苷酸和/或经修饰的核苷酸之间形成的包括非标准或经修饰的碱基的碱基对，其中氢键供体和氢键受体的排列允许非标准碱基与标准碱基之间或两个互补的非标准碱基结构之间的氢结合。此类非标准碱基配对的一个实例是经修饰的核碱基肌苷与腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之间的碱基配对。碱基/糖或接头的任何组合可以并入本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)种。[0455]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的核碱基、糖、骨架键或其任何组合被修饰至少约5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％。[0456]1.碱基修饰[0457]在某些方面，化学修饰处于本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的核碱基处。在一些方面，至少一种经化学修饰的核苷是经修饰的尿苷(例如，假尿苷(ψ)、2-硫尿苷(s2u)、1-甲基-假尿苷(m1ψ)、1-乙基-假尿苷(e1ψ)或5-甲氧基-尿苷(mo5u))、经修饰的胞嘧啶(例如，5-甲基-胞苷(m5c))、经修饰的腺苷(例如，1-甲基-腺苷(m1a)、n6-甲基-腺苷(m6a)或2-甲基-腺嘌呤(m2a))、经修饰的鸟苷(例如，7-甲基-鸟苷(m7g)或1-甲基-鸟苷(m1g))或其组合。[0458]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)针对特定修饰被统一修饰(例如，完全修饰、在整个序列中修饰)。例如，多核苷酸可以用相同类型的碱基修饰例如5-甲基-胞苷(m5c)统一修饰，这意味着多核苷酸序列中的所有胞嘧啶残基都用5-甲基-胞苷(m5c)替代。类似地，多核苷酸可以通过用经修饰的核苷(例如上文所述的那些中的任一种)替代而针对序列中存在的任何类型的核苷残基进行统一修饰。[0459]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80或超过80个经修饰的核碱基的组合。在一些方面，本公开的多核苷酸中至少约5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的一种类型的核碱基(例如，适体如aptoll)是经修饰的核碱基。[0460]2.骨架修饰[0461]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)包含对核苷之间的键的任何有用的修饰。可用于本公开的组合物中的此类键，包含骨架修饰，包含但不限于以下：3'-亚烷基膦酸酯、3'-氨基氨基磷酸酯、含烯烃的骨架、氨基烷基磷酸酯、氨基烷基磷酸三酯、硼酸磷酸酯、-ch2-o-n(ch3)-ch2-、-ch2-n(ch3)-n(ch3)-ch2-、-ch2-nh-ch2-、手性膦酸酯、手性硫代磷酸酯、甲乙酰基和硫代甲乙酰基骨架、亚甲基(甲基亚氨基)、亚甲基甲乙酰基和硫代甲乙酰基骨架、亚甲基亚氨基和亚甲基肼基骨架、吗啉键、-n(ch3)-ch2-ch2-、具有杂原子核苷间键的寡核苷、次膦酸盐、氨基磷酸酯、二硫代磷酸酯、硫代磷酸酯核苷间键、硫代磷酸酯、磷酸三酯、pna、硅氧烷骨架、氨基磺酸酯骨架、硫化亚砜和砜骨架、磺酸酯和磺酰胺骨架、硫代烷基膦酸酯、硫代烷基磷酸三酯和硫代磷酰胺。[0462][0463]在一些方面，上文公开的骨架键的存在增加了本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)的稳定性(例如，热稳定性)和/或对降解(例如，酶降解)的抗性。[0464]在一些方面，与没有修饰的对应多核苷酸(参考或对照适体)相比，本公开的经修饰的多核苷酸(例如，适体)的稳定性和/或对降解(例如，核酸酶的降解)的抗性增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约100％。[0465]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的骨架键被修饰(例如，所有骨架键都是硫代磷酸酯)。[0466]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80或超过80个骨架键被修饰(例如，硫代磷酸酯)。[0467]在一些方面，骨架包括选自由以下组成的组的键：磷酸二酯键、磷酸三酯键、甲基膦酸酯键、氨基磷酸酯键、硫代磷酸酯键以及其组合。[0468]3.糖修饰[0469]可以并入本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的经修饰的核苷和核苷酸可以在核酸的糖上进行修饰。因此，在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)包括至少一种核苷类似物(例如，具有糖修饰的核苷)。[0470]在一些方面，糖修饰增加了本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)与其靶表位的结合的亲和力。在本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中并入亲和力增强的核苷酸类似物，如lna或2'-经取代的糖，可以允许减少本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)的长度，并且还可以在非特异性或异常结合发生之前减小本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)的大小的上限。[0471]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％的核苷酸含有糖修饰(例如，lna)。[0472]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80或超过80个核苷酸单位是糖修饰的(例如，lna)。[0473]通常，rna包含糖基核糖，其是具有氧的5元环。示例性的、非限制性的经修饰的核苷酸包含替代核糖中的氧(例如，用s、se或亚烷基，如亚甲基或亚乙基)；添加双键(例如，用环戊烯基或环己烯基替代核糖)；对核糖进行环收缩(例如，以形成环丁烷或氧杂环丁烷的4元环)；对核糖进行扩环(例如，以形成具有另外碳或杂原子的6元或7元环，如针对脱水己糖醇、阿曲糖醇、甘露糖醇、环己基、环己烯基和也具有氨基磷酸酯骨架的吗啉代)；多环形式(例如，三环；以及“解锁”形式，如二醇核酸(gna)(例如，r-gna或s-gna，其中核糖被与磷酸二酯键连接的二醇单元取代)、苏糖核酸(tna，其中核糖用α-l-呋喃苏糖基-(3′→2′)替代)和肽核酸(pna，其中2-氨基-乙基-甘氨酸键取代核糖和磷酸二酯骨架)。糖基还可以含有具有与核糖中对应碳的立体化学构型相反的立体化学构型的一个或多个碳。因此，多核苷酸分子可以包含含有例如阿拉伯糖作为糖的核苷酸。[0474]核糖的2'羟基(oh)可以用许多不同的取代基修饰或替代。2'-位处的示例性取代包含但不限于h、卤素、任选地经取代的c1-6烷基；任选地经取代的c1-6烷氧基；任选地经取代的c6-10芳氧基；任选地经取代的c3-8环烷基；任选地经取代的c3-8环烷氧基；任选地经取代的c6-10芳氧基；任选地经取代的c6-10芳基-c1-6烷氧基、任选地经取代的c1-12(杂环基)氧基；糖(例如，核糖、戊糖或本文所描述的任何糖)；聚乙二醇(peg)、-o(ch2ch2o)nch2ch2or，其中r是h或任选地经取代的烷基，并且n是0到20的整数(例如，0到4、0到8、0到10、0到16、1到4、1到8、1到10、1到16、1到20、2到4、2到8、2到10、2到16、2到20、4到8、4到10、4到16和4到20)；“锁”核酸(lna)，其中2'-羟基通过c1-6亚烷基或c1-6杂亚烷基桥连接到相同核糖的4'-碳，其中示例性桥包含亚甲基、丙烯、醚、氨基桥、氨基烷基、氨基烷氧基、氨基和氨基酸。[0475]在一些方面，本公开的多核苷酸中存在的核苷类似物(例如，适体如aptoll)包括例如2'-o-烷基-rna单元、2'-ome-rna单元、2'-o-烷基-sna、2'-氨基-dna单元、2'-氟-dna单元、lna单元、阿拉伯糖核酸(ana)单元、2'-氟-ana单元、hna单元、ina(嵌入核酸)单元、2'moe单元或其任何组合。在一些方面，lna是例如氧基-lna(如β-d-氧基-lna或α-l-氧基-lna)、氨基-lna(如β-d-氨基-lna或α-l-氨基-lna)、硫代-lna(如β-d-硫代-lna或α-l-硫代-lna)、ena(如β-d-ena或α-l-ena)或其任何组合。[0476]在一些方面，本公开的多核苷酸中存在的核苷类似物(例如，适体如aptoll)包括锁核酸(lna)；2'-o-烷基-rna；2'-氨基-dna；2'-氟代-dna；阿拉伯糖核酸(ana)；2'-氟代-ana、己糖醇核酸(hna)、嵌入核酸(ina)、受限乙基核苷(cet)、2'-o-甲基核酸(2'-ome)、2'-o-甲氧基乙基核酸(2'-moe)或其任何组合。[0477]在一些方面，本公开的多核苷酸(例如，适体如aptoll)可以包括经修饰的rna核苷酸类似物(例如，lna)和dna单元两者。参见例如美国专利第8,404,649号；第8,580,756号；第8,163,708号；第9,034,837号；所有这些申请均通过引用整体并入本文。[0478]v.制造和调配方法[0479]本公开还提供了制备本公开的适体(例如，aptoll)的方法。通常，本公开的适体可以使用美国专利第10,196,642号中公开的方法获得，并且使用其中描述的方法或本领域公知的方法合成。[0480]本公开的适体(例如，aptoll)的产生可以按照本领域的常规方法进行。用于产生适体的技术的非限制性实例包含酶促技术，如转录、重组表达系统和标准固相(或溶液相)化学合成，所有这些都可商购获得。在适当时，例如，如果本公开的适体包括核酸变体如上文描述的那些核酸变体、核苷酸类似物如具有经化学修饰的碱基或糖、骨架修饰等的类似物，则本发明的适体可以是通过化学合成产生的。可替代地，当适体的长度为例如200个核苷酸或更多时，重组表达可以是用于产生本公开的适体的优选技术。通过或任何前述技术产生的适体可以任选地通过本领域公知的方法纯化。[0481]如本文所用，术语“合成”是指使用本领域已知的多核苷酸合成方法组装适体。术语合成还涵盖包括本公开的适体(例如，aptoll)和至少一种生物活性分子(例如，与适体共价或非共价连接的小分子药物)的缀合物或复合物的组装。例如，肽或小分子组分可以重组、化学或酶促制备，并且随后在一个或多个合成步骤中与适体(例如，aptoll)缀合(例如，将接头与本公开的适体缀合，然后是小分子与接头的缀合)。在一些方面，包括本公开的至少一种适体(例如，aptoll)的缀合物或复合物的组分中的每种组分可以使用本领域已知的方法制备，例如重组蛋白产生、固相肽或核酸合成、化学合成、酶促合成或其任何组合，并且所得组分可以使用本领域已知的化学和/或酶促方法缀合。[0482]本公开的适体(例如aptoll)可以例如通过过滤被纯化，以去除污染物。在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)的制造包括冻干或适合重组的任何其它形式的干燥储存。在一些方面，呈干燥形式的适体的制备发生在适体(例如，aptoll)与生物活性分子(例如，小分子药物)的组合之后，即两种治疗剂可以共冻干。[0483]在一些方面，制备包括本公开的适体(例如，aptoll)与生物活性分子(例如，小分子药物)的组合物的方法包括将适体与生物活性分子(例如，小分子药物)在溶液中混合。在一些方面，在适体(例如，aptoll)和生物活性分子(例如，小分子药物)在溶液中组合之后，将所得溶液冻干或干燥。在一些方面，适体(例如，aptoll)和生物活性分子(例如，小分子药物)的组合以干燥形式进行。[0484]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)可以被纯化，例如以去除污染物和/或产生一致的适体群体。[0485]本公开还提供了包括本公开的适体例如aptoll的调配物。本公开的适体可以根据图20中示意性描绘的方法调配。适体api(活性药物成分)与包括先前过滤的赋形剂的溶液组合。在结构化阶段之后，包括适体(例如，aptoll)和赋形剂的溶液经受两个过滤步骤，转移到小瓶中并冻干。结构化步骤是制备适体(例如，aptoll)的关键步骤。结构化过程包括将适体溶解在适当的溶剂中。在一些方面，溶剂包括二价离子。在一些方面，二价离子是mg2 。在一些方面，溶剂是包括mgcl2的磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在一些方面，溶剂是包括1mmmgcl2的pbs。在适体(例如，aptoll)已经溶解之后，将其加热到变性温度(例如，95℃)持续一定短时间段(例如，大约10分钟)，然后快速冷却(例如，通过转移到冰，例如，在大约10分钟期间)。在一些方面，适体(例如，aptoll)在没有加热和冷却步骤的情况下不起作用。[0486]合成之后，本公开的适体(例如，aptoll)是线性的。增加温度使适体完全线性化，而随后的冷却使适体正确折叠，从而产生功能性适体。在一些方面，如果加热和冷却步骤不在存在二价离子例如mg2 的情况下进行，则本公开的适体(例如，aptoll)不起作用。在本公开的特定方面，本公开的适体(例如，aptoll)没有治疗功能，除非所述适体已经溶解在含有mg2 (例如，1mmmgcl2)的缓冲液中，在95℃下加热10分钟，并且随后在冰中在0℃下冷却10分钟。[0487]本公开的适体(例如，aptoll)的制造过程包括两个冻干步骤。在第一步骤中，pbs中的结构化适体(例如，本公开的适体)被冻干。将冻干的适体(例如，aptoll)重新溶解在缓冲液(例如，pbs)中，并冻干。相对于经历单个冻干步骤的相同适体，第二次冻干增加了本公开的适体(例如，aptoll)的稳定性。[0488]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)以包括7mg的适体例如结构化和冻干适体的剂量调配。在其它方面，本公开的适体以包括至少约1mg、至少约2mg、至少约3mg、至少约4mg、至少约5mg、至少约6mg、至少约7mg、至少约8mg、至少约9mg或至少约10mg的本公开的适体(例如，aptoll)的剂量调配。[0489]在一些方面，本公开的适体可以以例如纳米颗粒如聚合物纳米颗粒、脂质纳米颗粒(例如，脂质体或胶束)或金属纳米颗粒的形式调配，所述适体包括与纳米颗粒共价或非共价连接(例如，包封在纳米颗粒中)的本公开的适体。参见例如美国专利第10,196,642号，所述美国专利通过引用整体并入本文。[0490]如上文所描述的，本公开的适体可以与生物活性分子和/或与纳米颗粒(例如，形成的纳米颗粒或纳米颗粒的组分)共价或非共价连接。本公开的适体(例如，aptoll)与生物活性分子和/或纳米颗粒之间的共价连接可以通过本领域技术人员公知的缀合技术进行。结果是本公开的适体与生物活性分子和/或纳米颗粒或其组分之间的共价键。缀合可以涉及在适体的化学合成期间本公开的适体的3'端或5'端的伯胺与官能团的结合。[0491]缀合也可以通过常规的交联反应进行，其优点是伯烷基胺标记相对于核苷酸本身的芳基胺具有更高的化学反应性。缀合方法是本领域公知的并且基于交联剂的使用。交联剂含有至少两个反应性基团，其靶向生物活性分子和/或纳米颗粒中的基团，如伯胺、巯基、醛、羧基、羟基、叠氮化物等，以与本公开的适体缀合。[0492]交联剂的不同之处在于其化学特异性、间隔臂长度、间隔臂组成、切割间隔臂和结构。例如，生物活性分子和/或纳米颗粒或其组分与本公开的适体的缀合可以直接或通过连接部分、通过适体中的一个或多个非官能团和/或官能团如胺、羧基、苯基、硫醇或羟基进行。通过使用异双功能接头可以实现更具选择性的键。可以使用常规接头，如二异氰酸酯、二异硫氰酸酯、双(羟基琥珀酰亚胺)酯、碳二亚胺、马来酰亚胺-羟基琥珀酰亚胺酯、戊二醛等，或肼和酰肼，如4-(4-n-马来酰亚胺苯基)丁酸酰肼(mpbh)。[0493]在一些方面，缀合可以在通过重组或酶促方法产生本公开的适体之后发生。[0494]在一些方面，本公开的适体(例如，aptoll)在小瓶中调配，其中每个剂量小瓶包括每小瓶约0.5、约1、约1.5、约2、约2.5、约3、约3.5、约4、约4.5、约5、约5.5、约6、约6.5、约7、约7.5、约8、约8.5、约9、约9.5或约10mg的本公开的适体(例如，aptoll)。在一个具体方面，每个剂量小瓶包括每小瓶7mg的本公开的适体(例如，aptoll)。在一些方面，小瓶的内容物是本公开的冻干的适体(例如，aptoll)。[0495]vi.药物组合物[0496]本公开还提供了包括本公开的一种或多种适体(例如，aptoll)的药物组合物，其适于根据本文公开的方法(例如，针对本文公开的任何疾病或病状例如心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风的方法)向受试者施用。[0497]所述药物组合物通常包括一种或多种具有期望纯度的本公开的适体(例如，aptoll)，以及呈适合向受试者施用的形式的药学上可接受的赋形剂或载体。药学上可接受的赋形剂或载体部分地由所施用的特定组合物以及通过用于施用组合物的特定方法来确定。因此，存在包括本公开的一种或多种适体的多种合适的药物组合物调配物(参见例如，《雷明顿氏医药科学》,马克出版公司,宾夕法尼亚州伊斯顿第18版(1990))。药物组合物通常是无菌调配的并且完全符合美国食品和药物管理局的所有良好生产规范(gmp)规定。[0498]在一些方面，药物组合物包括本公开的一种或多种适体(例如，aptoll)。在某些方面，本公开的适体(例如，aptoll)与在药学上可接受的载体中的一种或多种另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)共同施用。在一些方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物在施用另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)之前施用。[0499]在其它方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物在施用另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)之后施用。在另外的方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物与另外的治疗剂和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下的血栓切除术)同时施用。[0500]可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者(例如，动物或人)无毒并且包含：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包含抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；氯化苄烷铵、苄索氯铵；酚醇、丁醇或苯甲醇；烷基对羟苯甲酸酯，如甲基或丙基对羟苯甲酸酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如edta；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属复合物(例如，zn-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，如tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。[0501]载体或稀释剂的实例包含但不限于水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。此类介质和化合物用于药物活性物质的用途是本领域公知的。除了在任何常规介质或化合物与本公开的适体不相容的范围内之外，设想了其在组合物中的用途。[0502]适用于治疗或预防(例如，遏制、抑制或延迟)本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)，或适用于改善患有本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)或有患所述疾病或病状的风险的受试者的体内平衡的补充治疗剂也可以并入本公开的组合物中。[0503]通常，药物组合物被调配成与其预期施用途径相容。本公开的适体(例如，aptoll)可以例如通过肠胃外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内或肌肉内途径或作为吸入剂施用。[0504]在某些方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物是例如通过注射静脉内或动脉内施用的。本文所描述的适体(例如，aptoll)可以任选地与在治疗本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)中至少部分有效的其它治疗剂组合施用，本文所描述的适体(例如，aptoll)旨在用于这些疾病或病状。[0505]溶液或悬浮液可以包含以下组分：无菌稀释剂，如水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌化合物，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合化合物，如乙二胺四乙酸(edta)；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的化合物，如氯化钠或右旋糖。可以用如盐酸或氢氧化钠等酸或碱调节ph。制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。[0506]适用于注射用途的药物组合物包含无菌水溶液(如果水溶性)或分散体和无菌粉末。对于静脉内或动脉内施用，合适的载体包含生理盐水、抑菌水、cremophoreltm(basf，新泽西州帕西波尼)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)。组合物通常是无菌的并且具有达到易于注射的程度的流动性。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。恰当的流动性可以例如通过使用如卵磷脂等包衣、在分散体的情况下通过维持所需的粒度、以及通过使用表面活性剂来维持。预防微生物的作用可以通过各种抗细菌剂以及抗真菌化合物(例如，对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现。如果期望的话，可以向组合物中添加等渗化合物，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇和氯化钠)。可以通过在组合物中包含延迟吸收的化合物(例如，单硬脂酸铝和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。[0507]本公开的药物组合物可以通过常规的、公知的灭菌技术进行灭菌。水溶液可以包装使用或在无菌条件下过滤并冻干，冻干制剂在施用前与无菌水溶液组合。[0508]无菌可注射溶液可以通过将本公开的适体(例如，aptoll)以有效量并在适当的溶剂中与本文列举的一种或多种成分的组合根据需要并入来制备。通常，分散体是通过将本公开的适体(例如，aptoll)并入到含有基本分散介质和任何期望的其它成分的无菌媒剂中来制备的。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法为真空干燥和冷冻干燥，这些干燥产生活性成分加来自其先前经无菌过滤溶液的任何另外的所需成分的粉末。本文所描述的适体(例如，aptoll)可以以贮库注射剂或植入制剂的形式施用，其可以以允许本公开的适体持续或脉动释放的方式进行调配。[0509]包括本文所描述的适体(例如，aptoll)的组合物的全身施用也可以通过经粘膜方式进行。对于经粘膜施用，在调配物中使用适于待被渗透的屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域中已知的并且包含例如就经粘膜给予而言洗涤剂、胆盐和梭链孢酸衍生物。经粘膜给予可以通过使用例如鼻腔喷雾剂来完成。[0510]在某些方面，将包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物静脉内或动脉内施用到将受益于所述药物组合物的受试者中。在某些其它方面，将组合物施用于淋巴系统，例如通过淋巴管内注射、结内注射(参见例如senti等人,《美国国家科学院院刊(pnas)》105(46):17908(2008))、肌内注射、腹膜内或皮下施用。[0511]在某些方面，包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物作为液体悬浮液施用。在某些方面，药物组合物作为在施用后能够形成贮库的调配物施用。在某些优选的方面，贮库缓慢地将适体释放到循环中，或保持贮库形式。[0512]通常，药学上可接受的组合物是高度纯化的，不含污染物，具有生物相容性且无毒，并且适合施用于受试者。如果水是载体的组成部分，则水经过高度纯化和处理，不含污染物，例如内毒素。[0513]药学上可接受的载体可以是乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、海藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和/或矿物油，但不限于此。药物组合物可以进一步包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、增味剂、乳化剂、悬浮剂和/或防腐剂。[0514]本文所描述的药物组合物包括本文所描述的适体(例如aptoll)和任选地药物活性剂或治疗剂。治疗剂可以是例如生物剂(例如肽或核酸)、小分子剂或其组合。[0515]提供了包括供根据本文公开的方法使用的本文所描述的适体(例如，aptoll)或药物组合物的剂型。在一些方面，剂型被调配为用于静脉内或动脉内注射的液体悬浮液。[0516]本公开的适体(例如，aptoll)或包括本公开的适体的药物组合物可以与其它疗法(例如，药物和/或外科手术)同时使用。具体而言，本公开的适体(例如，aptoll)或药物组合物可以与通常用于治疗本文公开的任何疾病或病状(例如，心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风)的药物一起使用，或与本领域已知的用于治疗此类疾病或病状的药理学和/或外科手术(例如，在心肌梗塞的情况下，血栓切除术)组合使用。[0517]vii.试剂盒[0518]本公开还提供了试剂盒或制造产品，其包括本公开的适体(例如，本公开的分离的适体或与生物活性分子如aptoll缀合或复合的本公开的适体)和任选地供根据本公开的方法使用的说明书。[0519]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括本公开的药物组合物，其包括在一个或多个容器中的至少一种本公开的适体(例如，aptoll)，以及任选地供根据本公开的方法使用的说明书。[0520]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括本公开的适体(例如，aptoll)，或本公开的药物组合物和手册。在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括本公开的适体(例如，aptoll)或本公开的药物组合物和使用说明书。本领域技术人员将容易地认识到，本公开的适体(例如，aptoll)或药物组合物，或其组合，可以容易地并入到本领域公知的已建立的试剂盒形式之一中。[0521]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括在容器(例如玻璃小瓶)中呈干燥形式的本公开的适体(例如，aptoll)，以及任选地具有适合于使适体水合的溶剂的小瓶，以及任选地，用于根据本文公开的方法使用重组产品的说明书。在一些方面，所述试剂盒或制造产品进一步包括至少一个另外的容器(例如玻璃小瓶)，其包括生物活性分子(例如，第二tlr-4拮抗剂)。[0522]本领域技术人员将容易地认识到，本公开的适体(例如，aptoll)、包括本公开的适体(例如，aptoll)的药物组合物或其组合可以容易地并入到本领域公知的已建立的试剂盒形式之一中。[0523]在一些方面，所述试剂盒包括用于将生物活性分子与本公开的适体(例如aptoll)缀合的试剂、用于进行缀合的说明书以及用于根据本公开的方法使用缀合物的说明书。[0524]在一些方面，所述试剂盒包括生物活性分子和本公开的适体(例如，aptoll)、用于进行将其混合以形成复合物的说明书以及用于根据本公开的方法使用所得复合物的说明书。[0525]在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括呈溶液形式的本公开的适体(例如，aptoll)和用于根据本公开的方法使用的说明书。在一些方面，所述试剂盒或制造产品包括呈干燥形式的本公开的适体(例如，aptoll)和使用说明书(例如，用于根据本文公开的方法进行重构和施用的说明书)。[0526]viii.实施例[0527]e1.一种治疗有需要的受试者的tlr-4介导的疾病或病状的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少一个剂量的长度为40到80个核碱基的核酸适体，其中所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位结合，并且其中所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化。[0528]e2.根据实施例e1所述的方法，其进一步包括施用另外的治疗或其组合。[0529]e3.根据实施例e2所述的方法，其中所述另外的治疗是第二tlr-4拮抗剂。[0530]e4.根据实施例e3所述的方法，其中所述另外的治疗是外科手术干预。[0531]e5.根据实施例e2所述的方法，其中所述另外的治疗包括施用抗炎剂、核酸、肽或其组合。[0532]e6.根据实施例e5所述的方法，其中所述肽包括抗体或其抗原结合片段。[0533]e7.根据实施例e5所述的方法，其中所述核酸包括反义寡核苷酸、抗mir、sirna或shrna。[0534]e8.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体包括与seqid:1、2、3或4或其组合至少70％相同的序列。[0535]e9.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体进一步包括与所述适体共价或非共价连接的生物活性分子。[0536]e10.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体与和seqid:1、2、3或4的核酸适体相同的tlr-4表位交叉竞争或结合。[0537]e11.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体与和由seqid:1、2、3或4的核酸适体识别的tlr-4表位重叠的表位交叉竞争或结合。[0538]e12.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体以包括多剂量的剂量方案施用。[0539]e13.根据实施例e12所述的方法，其中所述多剂量同时、连续或其组合施用。[0540]e14.根据实施例e12所述的方法，其中所述多剂量包括两个、三个、四个或五个剂量。[0541]e15.根据实施例e1所述的方法，其中每个剂量包括介于0.007与0.45mg/kg之间的核酸适体。[0542]e16.根据实施例e1所述的方法，其中所述核酸适体通过静脉内、动脉内或腹膜内施用。[0543]e17.根据实施例e1所述的方法，其中所述tlr-4介导的疾病或病状是缺血性疾病或病状。[0544]e18.根据实施例e17所述的方法，其中所述缺血性病状是心肌梗塞或缺血性中风。[0545]e19.根据实施例e1所述的方法，其中所述tlr-4介导的疾病或病状是出血性病状。[0546]e20.根据实施例e19所述的方法，其中所述出血性病状是出血性中风或出血性转化。[0547]e21.根据实施例e1所述的方法，其中所述tlr-4介导的疾病或病状是神经肌肉疾病或病状。[0548]e22.根据实施例e21所述的方法，其中所述神经肌肉疾病或病状是神经退行性疾病或病状。[0549]e23.根据实施例e22所述的方法，其中所述神经退行性疾病或病状是多发性硬化症。[0550]e24.一种减轻或改善有需要的受试者的急性心肌梗塞的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括在所述急性心肌梗塞期间、之前或之后立即向所述受试者施用适体，其中[0551](a)所述适体的长度介于40与100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中[0552](i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且[0553](ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者[0554](b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。[0555]e25根据实施例24所述的方法，其中所述适体的所述施用使梗塞面积减少。[0556]e26.根据实施例e25所述的方法，其中与对照病状相比，所述适体的所述施用使梗塞面积减少至少25％。[0557]e27.根据实施例e24所述的方法，其中所述适体的所述施用使由所述急性心肌梗塞引起的纤维化和/或坏死减少。[0558]e28.根据实施例e24所述的方法，其中所述适体的所述施用[0559](i)使心脏功能改善；[0560](ii)使胞外基质降解减少；[0561](iii)使心脏重塑改善；[0562](iv)使心室解剖保存；[0563](v)使梗塞进展减少；或者[0564](vi)其任何组合。[0565]e29.一种减轻或改善有需要的受试者的神经肌肉或神经退行性疾病或病状的至少一种症状或后遗症的方法，所述方法包括在所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状的发作期间、之前或之后向所述受试者施用适体，其中[0566](a)所述适体的长度介于40与100个核苷酸之间，并且选自由seqidno:1、2、3和4组成的组，其中[0567](i)所述适体与tlr-4的胞外结构域上的表位特异性结合；并且[0568](ii)所述适体与所述表位的结合减少和/或抑制tlr-4活化；或者[0569](b)所述适体是与seqidno:1、2、3或4具有至少85％序列同一性的(a)所述适体的功能等效变体，其中所述功能等效变体源自seqidno:1、2、3或4维持与tlr-4活化特异性结合并减少和/或抑制所述活化的能力。[0570]e30.根据实施例e29所述的方法，其中所述适体的施用[0571](i)使脱髓鞘减少；[0572](ii)使轴突损伤减少；或者[0573](iii)其组合。[0574]e31.根据实施例e30所述的方法，其中与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使脱髓鞘抑制至少20-80％。[0575]e32.根据实施例e30所述的方法，其中与对照病状(例如，施用安慰剂)相比，所述适体的所述施用使轴突损伤减少至少10-30％。[0576]e33.根据实施例e29所述的方法，其中所述神经肌肉或神经退行性疾病或病状选自由以下组成的组：心肌梗塞、出血性中风、出血性转化、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症、帕金森氏病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆症或缺血性中风。[0577]e34.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体是aptoll。[0578]e35.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体以介于约0.5mg/剂量与约14mg/剂量之间的剂量范围施用。[0579]e36.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体以介于每剂量约0.007mg/kg与每剂量约0.2mg/kg之间的剂量范围施用。[0580]e37.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体在ph7.4的pbs(氯化钠、氯化钾、脱水磷酸氢二钠和磷酸二氢钾)中调配，所述pbs包括六水合氯化镁，并且任选地包括a-海藻糖二水合物。[0581]e38.根据实施例e24或e29所述的方法，其中所述适体通过输注静脉内施用。[0582]***[0583]除非另有说明，否则本公开的实践将采用在本领域的技术范围内的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组dna和免疫学的常规技术。此类技术在文献中有充分解释。参见例如，sambrook等人,编辑(1989)《分子克隆：实验室手册(molecularcloningalaboratorymanual)》(第2版；冷泉港实验室出版社(coldspringharborlaboratorypress))；sambrook等人,编辑(1992)《分子克隆：实验室手册》,(纽约冷泉港实验室出版社)；d.n.glover编辑,(1985)《dna克隆(dnacloning)》,第i卷和第ii卷；gait,编辑(1984)《寡核苷酸合成(oligonucleotidesynthesis)》；mullis等人美国专利第4,683,195号；hames和higgins,编辑(1984)《核酸杂交(nucleicacidhybridization)》；hames和higgins,编辑(1984)《转录和翻译(transcriptionandtranslation)》；freshney(1987)《动物细胞培养(cultureofanimalcells)》(alanr.liss公司)；《固定化细胞和酶(immobilizedcellsandenzymes)》(irl出版社)(1986)；perbal(1984)《分子克隆实用性指南(apracticalguidetomolecularcloning)》；论文《酶学方法(methodsinenzymology)》(学术出版社公司,纽约)；miller和calos编辑(1987)《哺乳动物细胞的基因转移载体(genetransfervectorsformammaliancells)》,(泉港实验室出版社)；wu等人,编辑,《酶学方法》,第154卷和第155卷；mayer和walker,编辑(1987)《细胞和分子生物学中的免疫化学方法(immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology)》(学术出版社公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.多次施用。[0620]小鼠模型中使用的0.91mg/kgaptoll剂量根据fda物种间剂量外推指南(根据体表标准并校正动物体重)外推至大鼠，并且闭塞之后10分钟将0.45mg/kg静脉内注射在雄性威斯塔8-10周龄大鼠(每组8只动物)中。在此测定中，在闭塞之后2小时(10分钟 2小时)和6小时(10分钟 2小时 6小时)施用第二剂量和第三剂量以便确定若干剂量施用的效果。在闭塞之后48小时评估梗塞体积(图13)。[0621]结果和结论：当与媒剂治疗的动物相比时，在缺血之后10分钟对大鼠施用0.45mg/kgaptoll诱导梗塞体积减少(32.4％保护，n＝8)。当aptoll施用两次(闭塞之后10分钟和2小时)时，也观察到最终梗塞体积减少(35％保护，n＝8)。最后，当施用第三剂量时，证实减少了15％。这些数据证实了aptoll在用多剂量施用的永久性缺血动物模型和不同啮齿类动物(大鼠)中的功效。伴随着在24小时施用第四剂量，在闭塞之后48小时评估梗塞，并且在闭塞之后48小时施用第五剂量并且在闭塞之后72小时测量梗塞面积，研究完成。[0622]当与媒剂治疗的动物相比时，在缺血之后10分钟对大鼠施用0.45mg/kgaptoll诱导梗塞体积减少(19％保护，n＝8)。当施用多剂量的aptoll时，也检测到梗塞体积的减少。闭塞之后10分钟和2小时施用的两个剂量产生21％的保护(n＝8)。闭塞之后10分钟、2小时和6小时施用的三个剂量产生24％的保护(n＝8)。闭塞之后10分钟、2小时、6小时和24小时施用的四个剂量产生25％的保护(n＝8)。在闭塞后10分钟、2小时、6小时、24小时和48小时处施用的五个剂量产生18％的保护(n＝8)。术语保护是指梗塞体积的预防、抑制或减少，这是缺血的效果或后遗症。[0623]在pmcao之后48小时使组中的接受一个剂量、二个剂量、三个剂量或四个剂量的动物安乐死。在pmcao之后72小时使组中的接受5个剂量的动物安乐死。将所有经aptoll治疗的组与其相应的经媒剂治疗的组进行比较(图43)。因此，当在缺血性事件之后以多剂量(一个剂量、二个剂量、三个剂量、四个剂量或五个剂量)施用例如在缺血性事件之后至多48的时间段内施用时，aptoll诱导梗塞体积减少。[0624]2.4.tmcao大鼠模型[0625]此研究中使用雄性威斯塔8-10周龄大鼠(每组5只动物)。外科手术之后十分钟给大鼠静脉内施用0.45mg/kgaptoll或媒剂，与接受媒剂的大鼠相比，使诱导中风之后24小时的最终梗塞体积减少(图14，图a)。这些数据证实了aptoll在不同的缺血再灌注动物模型中的功效。[0626]此外，使用雄性斯普拉格道利8-10周龄大鼠(每组15只动物)重现此结果。缺血程序和治疗与之前描述的相同，但测定是在独立实验室进行的。结果示出，当与经媒剂处理的动物相比时，接受aptoll的大鼠的梗塞体积减少(图14，图b)。[0627]2.5.对中风发作之后aptoll的保护时间窗口的表征[0628]小鼠研究在8-10周龄的c57bl/6雄性品系中进行(每组8只动物)，通过结扎使其经受永久性大脑中动脉闭塞。当在pmcao之后至多6小时静脉内给予时，由aptoll(0.91mg/kg)介导的保护得以维持(图15)，从而延长了急性缺血性中风治疗(r-tpa)的唯一药物疗法的治疗窗口。保护的时间窗口可以延长超过6小时。[0629]在威斯塔雄性大鼠(8-10周龄，每组8只动物)中进行第二组确定。进行单丝tmcao模型，并且在再灌注(b.r.)之前30分钟或再灌注之后10分钟-2小时-6小时-9小时-12小时或24小时注射媒剂或aptoll(0.45mg/kg)。缺血之后72小时评估梗塞体积和水肿，并且结果证实了缺血之后至多12小时的aptoll介导的保护，此研究中梗塞体积的减少甚至高于在pmcao模型中进行的减少，证实减少了50％(30分钟b.r.)、65.5％(10分钟)、45％(2、6小时和9小时)和40％(12小时)。当在缺血之后24小时施用适体时，作用消失(图39)。有趣的是，当在再灌注之前施用时，aptoll也具有高保护性。这些结果表明，基于梗塞体积和水肿减少，施用aptoll与血栓切除术组合的最佳时机是刚好再灌注之前和再灌注之后几分钟。出于这个原因，并考虑到人体施用不是团注而是30分钟的输注，因此可以刚好在血栓切除术之前开始向患者输注aptoll。[0630]2.6.对aptoll施用之后生物标志物的表征[0631]为了在体内鉴定中风结果的可能生物标志物，在pmcao之后24小时获得了来自用0.91mg/kgaptoll/媒剂腹腔内治疗的缺血性小鼠的血浆样品，并且使用cba进行分析。为了评估这些生物标志物，通过电凝小鼠模型对前一节pmcao进行了子研究，并且进行了cba技术。简而言之，bdtmcba小鼠炎症试剂盒常用于定量地测量单个样品中的白介素-6(il-6)、白介素-10(il-10)、单核细胞趋化蛋白-1(mcp-1)、干扰素-γ(ifn-γ)、肿瘤坏死因子(tnf)和白介素-12p70(il-12p70)蛋白水平。此研究中获得的结果表明，与媒剂小鼠组相比，在缺血性损伤之后24小时，用aptoll治疗显著降低了il-6、il-12p70和ifn-γ的血浆水平，但未降低tnf、il-10或mcp-1的血浆水平(图16，n＝8)。[0632]2.7.aptoll诱导的保护作用的长期解剖和功能相关性[0633]为了将对aptoll的体内功效的评估与对临床试验中中风患者的保护的终点评估近似，在一项独立研究中验证了aptoll急性给予时诱导的梗塞大小减少的长期持久性，以及解剖保护与小鼠功能、神经学表现的相关性。通过在中风之后10分钟给予0.91mg/kg的静脉内aptoll实现的保护在整个亚急性期(中风发作之后至多72小时)持续(图17，图a)。此外，对中风之后21天长期损伤大小的定量表明，在此小鼠模型(c57bl/6j雄性小鼠，8-10周龄，通过结扎经受永久性大脑中动脉闭塞)中使梗塞稳定时的至多此时间点，保护作用得以保留(图17，图b)。通过使用足迹测试进行神经功能的评估(图17，图e)。在中风之后21天，与没有脑损伤的假手术动物相比，接受媒剂的小鼠急剧地示出步幅长度增加(图17，图d)，表明在路径期间肢体控制发生了改变。在前肢和同侧后肢中都观察到了此作用(图17，图c；图17，图d)。在中风之后10分钟接受0.91mg/kgaptoll的小鼠在中风之后21天没有示出这种神经功能缺损(图17，图c；图17，图d)，表明由适体诱导的梗塞大小减少与长期改善功能性能有关。[0634]在另一组实验中，评估了大鼠的神经长期结果。通过电凝模型对雄性威斯塔大鼠进行永久性脑缺血(每组n＝8只动物)。aptoll在闭塞之后10分钟施用，并且在其后2、7、14和21天进行运动评估。所获得的结果表明，当与经媒剂治疗的大鼠相比时，用aptoll治疗的大鼠在中风之后2天和7天的运动评分显著降低(图18)。[0635]2.8.lps在败血症小鼠模型中体内对抗tlr-4活化的拮抗作用[0636]为了在体内验证aptoll作为tlr-4拮抗剂的功效，将8-10周龄的c57bl/6j雄性小鼠腹膜内注射20mg/kg超纯lps。lps注射导致小鼠内毒素血症，这反映在8小时可测量的体重减轻和24小时更严重的体重减轻上(图19，图a)。另外地，温度损失在8小时处也很明显，并且在24小时处加剧(图19，图b)。败血症评分是通过对与内毒素血症的可见迹象相关的多个变量的定量获得的(schrum等人(2014)《bmc研究笔记(bmcresearchnotes)》7:233)(图19，图c)。与用媒剂注射的动物相比，注射有0.91mg/kgaptoll的动物组在8小时处体重减轻％降低(图19，图a)，以及在24小时处败血症评分降低(图19，图c)。在lps注射之后72小时处，用适体aptoll治疗的动物的存活率也更高(30％对用媒剂治疗的小鼠存活率的7％，图19，图d)，表明aptoll干扰了tlr-4的lps活化，降低了诱导的内毒素血症的严重性。[0637]2.9.药效学药物相互作用[0638]由于rt-pa是唯一被批准用于治疗缺血性中风的药物治疗，因此进行了用于确定aptoll与rt-pa相互作用的研究，因此，这两种药物很可能在临床实践中同时使用。[0639]威斯塔原初雄性大鼠(8-10周龄，每组4只动物)单独用aptoll、aptoll rt-pa或rt-pa施用。施用之后评估临床体征，并且在任何情况下均未出现任何体征。[0640]实例3.人体中的aptoll作用[0641]3.1aptoll用于治疗健康志愿者的急性缺血性中风的双盲、安慰剂对照、随机ia期临床研究，以评估耐受性和药代动力学[0642]人体最大推荐起始剂量[0643]对要在健康受试者中施用的最大推荐起始剂量(mrsd)的计算：[0644]noael(未观察到副作用水平)：[0645]大鼠：用较高剂量50mg/kg/天静脉内注射14天未观察到副作用。[0646]食蟹猴：用较高剂量13.9mg/kg/天(静脉内团注)14天未观察到副作用。[0647]hed(人体等效剂量)是根据noael计算出的，考虑到基于体表面积将动物剂量转换为人体等效剂量。考虑了10的校正因子：[0648]大鼠：50mg/kgx0.162/10＝0.81mg/kg[0649]猴：13.9mg/kgx0.324/10＝0.45mg/kg[0650]因此，考虑到较低的所计算剂量(0.45mg/kg)，70kg体重的人的mrsd为31.5mg。[0651]mabel(最低预期生物作用水平)：[0652]在中风啮齿动物模型中的功效：[0653]a)结扎小鼠模型的pmcao：对0.91mg/kg剂量的保护(静脉内单次团注)。[0654]b)电凝小鼠模型的pmcao：腹膜内0.91mg/kg。[0655]c)tmcao小鼠模型：静脉内0.91mg/kg。[0656]d)电凝大鼠模型的pmcao：0.45mg/kg静脉内两次(闭塞之后10分钟和2小时)，与一个剂量的功效类似。[0657]f)tmcao大鼠模型：0.45mg/kg静脉内单次团注。[0658]hed是根据mabel计算的，考虑到基于体表面积从动物剂量转换为人体等效剂量。考虑了10的校正因子：[0659]a)小鼠：0.91mg/kgx0.081/10＝0.0073mg/kg[0660]b)大鼠：0.45mg/kgx0.162/10＝0.0073mg/kg[0661]因此，70kg体重的人的mrsd为0.5mg。[0662]考虑这个剂量是因为其远低于根据noael计算的mrsd。[0663]研究概要[0664]受试者：健康的男性或女性，没有怀孕的可能性。[0665]设计：单剂量，静脉内施用(缓慢输注)，剂量递增，最多7个单剂量水平，随机、双盲、安慰剂对照(盐溶液)，在健康受试者中进行，然后在健康受试者中进行多次给药。[0666]临床试验具有两个部分：[0667]a-健康受试者单剂量递增(最多38名受试者)[0668]剂量递增的剂量水平：[0669]-第一剂量水平：2名受试者随机接受0.7mg或安慰剂(盐溶液)。[0670]-第二剂量水平：2名受试者随机接受2.1mg或安慰剂。[0671]-第三剂量水平：2名受试者随机接受7mg或安慰剂。[0672]-第四剂量水平：2名前哨受试者随机接受14mg或安慰剂，随后6名受试者随机接受14mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0673]-第五剂量水平：2名前哨受试者随机接受21mg或安慰剂，随后5名受试者随机接受21mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0674]-第六剂量水平：2名前哨受试者随机接受42mg或安慰剂，随后6名受试者随机接受42mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0675]-第七剂量水平：2名前哨受试者随机接受70mg或安慰剂，随后6名受试者随机接受70mg(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0676]每个受试者从给药前一晚到给药之后2天都被送入临床试验室；如果未检测到安全问题，他/她可以在给药之后48小时回家，并且在给药之后72小时(3天)、96小时(4天)、120小时(5天)、168小时(7天)、240小时(10天)和336小时(14天)返回到临床试验室。[0677]一个剂量水平与下一个剂量水平之间间隔至少两周，使数据安全监测委员会(dsmc)有足够的时间审查所有信息并决定继续下一个剂量水平。前哨受试者与相同剂量水平的其它受试者之间也有一周的时间。[0678]b-健康受试者的多剂量(8名受试者)[0679]2名前哨受试者在0、8和16小时随机接受三个剂量的药物(a部分的较高安全剂量)或安慰剂。[0680]没有报告任何安全问题，其它6名受试者随机接受相同剂量(5名受试者)或安慰剂(1名受试者)。[0681]志愿者在药物施用之后48小时离开临床试验室，除非检测到不良事件，在这种情况下，所述志愿者保持接收直到其问题解决。[0682]药物施用：[0683]将药物(aptoll，药物物质批批次编号255887)稀释在100ml盐水中，并且在30分钟内通过泵缓慢静脉内输注施用(考虑在输注开始时输注速度低，并且然后增加输注速度，并且如果出现某个不良事件，则停止输注)。[0684]受试者评估：[0685]-通过以下方式评估受试者的安全性：[0686]记录研究期间发生的所有不良事件。[0687]体格检查。[0688]常规实验室评估(血液、生化和尿液测试)：筛查、第1天(给药前)、第2天、第7天和第14天。[0689]尿液中的毒物：筛查、第1天(给药前)和第14天。[0690]血清学(hbv、hcv、hiv)：筛查。[0691]血压、心率、呼吸速率和12导联ecg：基线，在入院和每次来访期间的不同时间处。[0692]-药代动力学：在不同时间采集15份血液样品(每份9ml)以限定药物的药代动力学特征：给药前、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、20小时、24小时和32小时。[0693]-药效学：在不同时间采集4份血液样品(每份9ml)以评估体外脂多糖激发诱导的细胞因子水平：给药前、4小时、8小时和24小时。[0694]ia期临床试验结果[0695]这是一项i期、首次人体、剂量递增、随机、安慰剂对照临床研究，以评估aptoll在健康志愿者中的耐受性和药代动力学。研究的主要目标如下：[0696](i)评估aptoll在健康志愿者中的耐受性和药代动力学特性，在空腹条件下单剂量施用之后，遵循递增给药方案。还评估了此化合物的药效学特性；以及[0697](ii)在空腹条件下多次施用之后，评估aptoll在健康志愿者中的耐受性和药代动力学特性。还评估了此化合物的药效学特性。[0698]所述研究分为2个部分：第一个部分(a部分)是剂量递增，其中最多为7个单剂量水平。一旦这部分完成，就在健康志愿者中进行多剂量(3次施用)部分(b部分)，其中剂量选自前一部分。两个部分都是随机的、双盲的、安慰剂对照的(生理盐溶液)。所述研究是在健康男性受试者中进行的。用于剂量递增(a部分)和多剂量(b部分)的所选剂量水平是如上文所描述的。[0699]本次临床试验已完成，并且结论如下：[0700]1.关于安全性问题，在任何剂量水平下都没有报告严重的不良事件或显著的分析改变。[0701]2.药代动力学：在不同时间采集十五份血液样品(每份9ml)以限定药物的药代动力学特征：给药前、0.5小时、1小时、1.5小时、2小时、3小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、16小时、20小时、24小时、32小时、48小时和72小时。在sad(单次递增剂量)部分，cmax数据显示注射之后在时间0.5小时处(输注结束时)的最大值，随后随时间立即下降，并且其中所估计平均半衰期为8小时。aptoll水平在时间72小时处不可定量。[0702]3.没有被认为可能与研究药物相关的具有临床意义的实验室、生命体征或ecg结果。因此，aptoll的安全性和耐受性与安慰剂的类似。[0703]实例4.aptoll调配物[0704]4.1.用于人体肠胃外施用的aptoll调配物[0705]imp(研究药物产品)是在完全gmp条件下制造的(图20)。简而言之，胃肠外制备过程应在无菌区进行，并且按以下方式发展：[0706]1.赋形剂溶液的制备：[0707]将大约80％的注射用水在20-25℃的温度下放入设置有搅拌器的反应器中。添加氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠二水物、磷酸二氢钾、六水合氯化镁，搅拌直至完全溶解。用注射用水将溶液定容至100％的体积，并且检查溶液的ph，并且如果必要时调节至7.4。[0708]2.通过0.22μm过滤器过滤缓冲溶液以进行消毒。[0709]3.添加活性药物成分适体4ft：将90％体积的赋形剂溶液放入夹套玻璃反应器中，并且在缓冲液中溶解适体4ft，搅拌直至完全溶解。[0710]4.体积调节：用预先制备的赋形剂溶液将溶液调至100％体积。搅拌最低10分钟。[0711]5.就其生物活性而言，必须将其溶解在pbs-1mmcl2mg中，以便为其提供三级结构。溶解之后，适体必须加热至95℃±2℃。将溶液在此温度下保持至少10分钟。然后，将溶液冷却至5℃±3℃。将溶液在此温度下保持10分钟。[0712]6.生物负载降低：[0713]通过0.2μm聚醚砜无菌过滤器过滤溶液。用泡点测试的最小值验证过滤器1(用水)的完整性。[0714]在过滤器1之后为质量控制部门(生物负载(bioburden))采集样品100ml。[0715]7.通过0.2μm聚醚砜过滤器进行灭菌过滤，所述过滤器先前已在蒸汽灭菌器中灭菌。[0716]8.小瓶填充(在无菌条件下)：小瓶洗涤和灭菌(小瓶：烤箱；塞子：γ辐照，铝胶囊：蒸汽灭菌器)。填充和预封闭过程。[0717]9.冻干过程：冷冻过程：干燥(初级和次级)；小瓶封闭。[0718]10.小瓶的加盖和控制[0719]4.2.用于体内研究的aptoll调配物[0720]适体被冷冻干燥并保持在-20℃直至使用。避免污染：戴手套、过滤嘴、无核酸酶管。溶解在缓冲液a中：pbs(磷酸盐缓冲盐水) 不含核酸酶的1mmmgcl2。[0721]1-在添加缓冲液之前，将具有冻干适体的试管离心。[0722]2-储备溶液：将缓冲液a添加到冻干适体中并搅拌直至完全溶解。分成等份并保持在-20℃/-40℃直至使用。[0723]3-工作溶液：将缓冲液a中的储备溶液稀释到期望的最终浓度。[0724]4-折叠过程：将溶液加热至95℃持续10分钟，并且然后在冰上保持10分钟。[0725]5-在测定中使用结构化适体。[0726]结构化适体维持功能构象：室温下1小时，4℃下24小时。[0727]实例5.安全药理学[0728]对一般生理参数的影响[0729]aptoll对一般生理参数的潜在影响在原初动物和缺血性动物(c57bl/6j雄性小鼠，8-10周龄)中进行了测试。当在与媒剂施用相比时，aptoll的施用对所测得参数中的任何参数没有示出影响(图21)。[0730]神经毒性[0731]不同的研究表明，适体不会跨过血脑屏障(bbb)，但很少有涉及高度专业化转运机制的例外(cheng等人(2013)《分子治疗核酸(molthernucleicacids)》2(1):e67)。具体地，在aptoll的情况下，非监管水平的动物研究表明，在施用的几分钟内，其在不同组织(如肺或脾脏)中的分布。然而，仅在其中bbb受损的实验性中风诱导之后才证明aptoll在大脑中的存在，尽管在这些动物中，药物的神经保护作用已被明确证明。[0732]另一方面，与所有寡核苷酸一样，aptoll的自我寿命短以及其快速降解将阻止其在bbb不受损害的条件下(即健康志愿者)进入脑组织。事实上，迄今为止由如伊奥尼斯制药公司(ionispharmaceuticals)(伊希斯先锋制药公司(pioneerisispharmaceuticals)的当前名称)或opthotech公司等公司对这种性质的分子进行的研究，其活动也集中在cns，是在其人体施用中不存在神经毒性事件的明显实例。这些公司参与的临床试验直接在玻璃体内注射高浓度的dna和rna分子，不会对神经元细胞产生毒性作用。[0733]体外神经毒性评估[0734]为了评估aptoll的一般毒性，以半对数增量在0.01-30μm的八个浓度范围内产生了剂量应答曲线。每个点是n＝3。在用测试化合物治疗之前，将人ipsc衍生的皮质谷氨酸能神经元(80％)和gaba能(20％)神经元的混合培养物培养一周。包含阳性(鱼藤酮)对照和阴性(dmso)对照。使用celltiter-glo2.0发光细胞活力测定(普洛麦格(promega))在处理后72小时评估毒性，所述测定测量总atp浓度并与活细胞数量成比例。[0735]本研究中获得的结果表明，基于形态学标准，所有培养物在治疗时都显示出极好的细胞健康状况。此外，如通过测量细胞atp水平来评估的，抑制线粒体电子传递链的阳性毒性化合物鱼藤酮示出了明显的剂量依赖性毒性。aptoll在至多所测试的最高剂量(30μm)下均未示出毒性。在谷氨酸能(80％)神经元和gaba能(20％)神经元的混合培养物以及每种类型的纯培养物中观察到这种无毒性(图22)。[0736]跨过血脑屏障bbb[0737]目的是确定适体是否能够跨过血脑屏障(bbb)。为此，bend.3细胞(小鼠内皮细胞)和星形胶质细胞(ctx-tna2)位于transwell插入物的土壤层中，模拟bbb。温育之后，通过qpcr确定培养基中适体的存在。aptoll在40nm到4000nm的浓度范围内进行了测试。使用能够通过bbb的76ntssdna适体作为阳性对照。本研究中获得的结果表明，适体不能在正常生理条件下跨过bbb(表2)，即在不存在任何改变bbb通透性的疾病或病状例如tlr介导的疾病或病状的情况下。[0738]表2.gaiker3722研究中获得的结果[0739]样品长度(核苷酸)回收的适体(总％)sem(％)r6bbb-4f7662,39651,846r6bbb-11r7670,88284,686r6bbb-15r7668,81690,144r6bbb-4r7644,76213,888aptoll(40nm)590,00210,001aptoll(400nm)590,00450,001aptoll(4000nm)590,00560,002[0740]神经毒性[0741]大鼠神经毒性评估：此研究是作为主要毒性研究的一部分进行的：大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。毒性研究的目的是评估aptoll在以5、25和50mg/kg/天的剂量每天一次向大鼠静脉内施用持续2周时段时的毒性作用。所述研究是按照glp进行的。在治疗前和治疗第2周对恢复动物进行观察(感觉反应性、握力和运动活动)。此研究获得的结果表明，fob记录中各组之间没有相关变化。[0742]缺血性大鼠神经毒性评估：在缺血之后，bbb的通透性受损，并且aptoll能够到达脑组织。因此，使用改良的irwin测试评估了aptoll施用产生的潜在神经毒性。此测试由一组测定组成，以评估来自药物的神经毒性作用的存在。为此，对注射有aptoll(0.45mg/kg)或媒剂的缺血性大鼠(n＝8)进行了测试。此研究中使用的实验模型是电凝引起的永久性缺血。施用aptoll之后无论是在经治疗的动物还是媒剂动物中均未检测到差异。因此，没有观察到对与肌肉张力、协调和感觉运动应答相关的参数的影响。未报告开放场测试的变化。[0743]在呼吸功能的作用[0744]此研究的目的是评估aptoll对大鼠呼吸频速率、潮气量和分钟通气量的可能的副作用。[0745]aptoll以5、25和50mg/kg的剂量通过静脉内团注注射向雄性斯普拉格道利大鼠(8只/组)施用，以评估对呼吸速率、潮气量和分钟体积的作用。另外两组接受等效体积(3ml/kg)的媒剂作为单次静脉内团注剂量，或口服剂量(10ml/kg)的巴氯芬，剂量为20mg/kg(阳性对照)。在给药后0(给药前)、30、60、90、120、150、180、210和240分钟报告呼吸速率、潮气量和分钟通气量。[0746]aptoll，通过静脉团注以5、25和50mg/kg的剂量施用，对呼吸率、潮气量或分钟通气量没有产生生物学相关的影响，这些影响被认为是与测试项目相关的(图23)。巴氯芬以20mg/kg的剂量口服施用，呼吸速率显著降低，潮气量值显著升高。没有观察到不良临床体征。[0747]在心血管系统中的作用[0748]此研究符合glp标准，作为主要毒性研究的一部分：大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。此研究的目的是评估aptoll对食蟹猴每天两次、间隔六小时通过静脉途径(团注)施用14天时对心血管系统的作用。[0749]aptoll在总共32只猴子中施用(0.7-2.3-6.9mg/kg/bid)。心率、p波持续时间和幅度、p-q间期、qrs间期和q-t间期是使用来自导联ii的心电图的代表性部分测量的。还计算了对心率的qt间期校正。在测试前、治疗第13天时(第一次每日给药之后)和恢复期间进行记录。结果表明，没有发现与测试项目的治疗有关。[0750]实例6.动物的药代动力学和产物代谢[0751]分布[0752]与血浆蛋白结合[0753]确定了aptoll结合血浆蛋白的分数。出于此目的，使用了与alexa-488缀合的aptoll。与血浆蛋白结合的适体的百分比通过比率(所有级分中的荧光总和/总荧光)x100在两到三个不同的人、大鼠和nhp样品中计算(图24)。[0754]在所有情况下，将不含血浆蛋白的适体溶液用作确定未结合洗脱峰的对照。aptoll与血浆蛋白结合的分数在人样品中为15.7％，在大鼠和nhp血浆中为3.5％。[0755]aptoll在靶器官(大脑)中的体内分布[0756]使用alexafluor488标记的aptoll进行了aptoll、外周和中心研究的分布。[0757]首先，对经受外科手术之后10分钟接受静脉内施用alexafluor488标记的aptoll(0.9mg/kg)的pmcao的tlr4 / 和tlr4-/-小鼠(n＝3-5)血液中的适体进行流式细胞术分析。在适体施用之后5、10、15、30分钟和5小时，从尾部获得基础样品和系列血液样品。结果证明，在pmcaotlr4 / 小鼠中施用之后5分钟在血液中检测到aptoll(图25，图a)。然而，在tlr4-/-小鼠中，在任何研究时间都未检测到适体结合。此外，alexafluor488标记的aptoll门控细胞主要出于基于前向散射(fsc)和侧向散射(ssc)门控策略的粒细胞区域中(图25，图b)。[0758]此外，与alexa-488缀合的aptoll用于检测静脉注射之后其在大脑中的存在。六只小鼠(c57bl/6j雄性小鼠，8-10周龄)经受pmcao以便重现缺血性脑中的血脑屏障的状况，在采集pmcao和大脑之后10分钟注射标记的适体，并且在24小时处进行免疫荧光处理。在缺血区域中观察到绿色荧光(图25，图c)，并且通过将脑切片与cy3缀合的抗alexa488抗体一起温育来证实信号的特异性(图25，图c，红色)。在用非标记的适体注射的动物中不存在荧光(图25，图d)。这些观察表明，在静脉注射之后至少24小时，aptoll存在于梗塞的脑组织内。[0759]代谢[0760]在人、大鼠和猴血浆中以及对核酸酶的体外稳定性[0761]aptoll在存在λ-核酸外切酶和dnasei处理的情况下的完整性，以及在大鼠、猴或人血浆中的稳定性被定量。结果表明，即使在温育4小时之后，aptoll仍对λ-核酸外切酶具有抗性(图26，图a)。此结果与λ-核酸外切酶活性所需的合成适体中缺少3'端磷酸酯一致。相比之下，在暴露于dnasei5分钟之后，aptoll的降解是明显的(图26，图b)。当在生理条件下在大鼠、猴和人血浆中温育aptoll时，观察到时间依赖性降解(图26，图c)。考虑到aptoll的适应症是急性中风治疗，这种半衰期曲线被认为是tlr-4短期急性暴露于适体的最佳选择，例如治疗急性tlr-4介导的疾病或病状如缺血性中风。[0762]药代动力学药物相互作用[0763]本研究的目的是在结合、酶和摄取、体外吸收和体外代谢测定中测试aptoll。由于在药效学研究中获得的结果，aptoll在20nm下进行了测试(请参考前面的部分)。[0764]体外药理学：摄取测定和结合测定[0765]执行safetyscreen44tm图以能够尽早鉴定与aptoll的显著脱靶相互作用。选择了所有44个靶标(gpcr、离子通道、激酶、核受体、转运蛋白和其它非激酶酶)，以将稳健性(每个测定是hts相容的)和信息丰富靶标的战略选择两者结合在一起。化合物结合被计算为对每个靶标特异性的放射性标记配体结合的抑制％。复合酶抑制作用被计算为对照酶活性的抑制％。示出了高于50％的抑制的结果被认为表示了测试化合物的显著作用。在所研究的任何靶标处均未观察到此类作用(图27)。在每个实验中，并且如果适用，相应的参考化合物与aptoll同时进行测试，并且将数据与历史值进行比较。[0766]尽管在酶测定中获得的值没有示出显著作用，但对pde3a和pde4d2进行了更深入的表征，并且没有获得显著的结果。因此，在所选的任何靶标中均未检测到抑制作用。[0767]adme-tox：体外吸收[0768]这些测定被设计成评估化合物影响主要药物转运蛋白的方式。具体地，这些测定测试了可能干扰aptoll吸收、分布或排泄的药物转运蛋白的潜在抑制作用。[0769]aptoll转运蛋白抑制作用被计算为媒剂对照活性的抑制％。示出了高于50％的抑制的结果被认为表示了测试化合物的显著作用。在所研究的任何受体中均未观察到此类作用(图28)。[0770]尽管在药物转运蛋白测定中获得的值没有示出显著作用，但对asbt进行了深入表征，并且在此研究条件下未检测到任何作用。[0771]细胞色素抑制测定[0772]进行这些测定以评估aptoll可能影响对细胞色素p450(cyp)酶的潜在抑制作用进行表征的主要药物代谢酶的方式，这可能导致共同施用的化合物的积累。[0773]aptollcyp酶抑制作用被计算为媒剂对照活性的抑制％。示出了高于50％的抑制的结果被认为表示了测试化合物的显著作用。在所研究的任何酶中均未观察到此类作用(图29)。[0774]此外，在这些测定中，对cyp酶的诱导进行了评估，以预防aptoll或共同施用的化合物的血浆浓度降低。aptoll以不同浓度(2-20-200nm)施用，以更好地进行现象表征。[0775]aptollcyp酶诱导作用被计算为媒剂对照活性的诱导倍数。示出了高于50％的刺激的结果被认为表示测试化合物的显著作用。在所研究的任何酶中均未观察到此类作用(图30)。[0776]其它药代动力学研究[0777]斯普拉格道利大鼠的静脉内药代动力学研究[0778]此研究的目的是获得在对雌性斯普拉格道利大鼠以0.45、1和2mg/kg单次静脉内团注施用之后aptoll的药代动力学特征。因此，九只雌性大鼠(10-12周龄)以0.45、1和2mg/kg在1ml/kg下通过侧尾静脉内单次静脉内团注施用aptoll。[0779]在施用当天以下时间从侧尾静脉获得血液样品：1分钟(施用后立即)、5、15、30分钟和1、2、4、8和24小时。[0780]将血液样品(每份大约250μl)收集到edta-k3管中并制备血浆。将试管置于冷浴中不超过30分钟，直至在2-8℃下以1900g离心10分钟。离心之后，将至少100μl的血浆转移到塑料(聚丙烯)管中并且储存在-80±10℃下直至装运。[0781]药代动力学分析表明，在所有剂量水平下的所有动物(在样品可用的情况下)中，直至给药后8小时，血浆中的aptoll浓度均可定量。通常，在第一个时间点(1分钟)观察到最大血浆浓度(tmax)。平均cmax和auct值总结如下：[0782]表3.在雌性斯普拉格道利大鼠中单次施用aptoll之后的平均cmax和auct值(其中括号中为标准偏差)[0783]剂量水平(mg/kg)cmax(ng/ml)auct(ng.h/ml)0.458100(3470)2310(510)118400(6000)3530(260)239700(10500)6710(660)[0784]此研究得出的主要结论是：[0785]-以正确的剂量水平施用动物。[0786]-由于实验困难在8小时处从所有动物收集血液样品，除了动物编号3f。除了五个样品在2小时、4小时和24小时的采样时间点偏离1分钟和5分钟外，在正确的时间获得了样品。[0787]-没有临床体征。[0788]-根据合格方法分析的研究样品示出了良好的测定性能。[0789]-所有动物中的血浆aptoll浓度可在所有剂量水平(在样品可用的情况下)下至多给药后8小时定量，并且tmax是在第一时间点(给药后1分钟)处。[0790]-cmax在0.45到2mg/kg的剂量范围内示出了线性动力学而暴露(auct)在相同剂量范围内呈现出非线性动力学。[0791]药效学和药代动力学结论[0792]pd和pk研究得出的主要结论总结如下：[0793]-aptoll已从大量设计的适体中选择出来，因为其具有针对tlr-4的适当拮抗特征。[0794]-在体外，aptoll在20和200nm下表现出良好的药效学特征。[0795]-aptoll在猴和人单核细胞中的ka为30-60nm。[0796]-aptoll不显示与其它tlr的任何相互作用(既不激动也不拮抗)。[0797]-在小鼠和大鼠中，aptoll在短期和长期两者以及在不同的实验模型中诱导脑缺血之后的保护。[0798]-aptoll的治疗窗是中风之后至少6小时。[0799]-aptoll对生理参数和神经毒性均位展示出影响。[0800]-未报告pk研究中的临床体征。根据合格方法分析的研究样品示出了良好的测定性能。[0801]-所有动物中的血浆aptoll浓度可在所有剂量水平(在样品可用的情况下)下至多给药后8小时定量，并且tmax是在第一时间点(给药后1分钟)处。[0802]-cmax在0.45到2mg/kg的剂量范围内示出了线性动力学而暴露(auct)在相同剂量范围内呈现出非线性动力学。[0803]实例7.毒理学[0804]单剂量毒性[0805]体外毒理学：aptoll对细胞活力的作用[0806]aptoll的潜在细胞毒性通过与这些研究中常用的两种不同细胞系(hep-g2和hl60)一起温育来评估。在将适体(2-2000nm)添加到温育培养基中之后24和48小时，通过mtt和ldh测定来对细胞活力进行定量(图31)。只有比生物活性浓度高100倍的浓度才显示出对24小时细胞活力的适度影响(图31，图a)。此外，在较高剂量下温育48小时之后ldh水平的降低可能与这些培养物中细胞数量的减少有关(图31，图b)。[0807]重复剂量毒性[0808]对于重复剂量毒性研究，选择大鼠作为啮齿动物模型(由于类似的药理学)和猴作为非啮齿动物模型(由于其人-tlr-4同源性)。[0809]斯普拉格道利大鼠的初步毒性研究[0810]此研究的目的是评估连续七天每天向大鼠静脉注射aptoll后的毒性作用。此研究指示了潜在的靶器官，并且为随后为期两周的毒性研究的剂量水平选择提供了合理的基础。[0811]aptoll每天一次向斯普拉格道利大鼠静脉施用，持续7天。动物被分配到四个治疗组，如下：[0812]表4.涉及pw28xn研究的不同组的设计[0813]组1*234测试项目-aptollaptollaptoll剂量水平0mg/kg/天5mg/kg/天25mg/kg/天50mg/kg/天剂量浓度0mg/ml5mg/ml25mg/ml50mg/ml男性1-56-1011-1516-20女性101-105106-110111-115116-120[0814]在整个研究中，每天两次观察所有动物的存活率/死亡率。在驯化和预测试期间每天进行笼边观察，并且在治疗期期间每天记录临床体征；在给药之前呵之后检查注射位点的局部体征。在治疗开始之前和治疗期期间每周两次记录食物消耗。在预测试期间记录一次体重，在治疗期期间和处死之前(未禁食)每周记录两次体重。在治疗期结束时(第8天)从所有动物中收集用于血液学和临床生物化学的血液样品。治疗完成后处死所有主要动物并进行尸体剖检，并且称重器官。保留了一整套组织，但没有对其进行检查。[0815]研究结果总结如下：[0816]-所有动物都存活到治疗期结束，并且在第8天按计划处死。[0817]-在以5、25和50mg/kg/天的aptoll施用的动物中没有记录到与测试项目相关的临床体征。然而，从第5天到第7天，在包含对照的一些动物中观察到尾部上的发声和不适。[0818]-在任何施用的剂量下，注射位点均未观察到局部体征。[0819]-在5、25和50mg/kg/天的aptoll下，考虑到样品大小和变化幅度，食物消耗没有相关差异。在对照组中没有观察到食物消耗的明显变化。[0820]-在5、25或50mg/kg/天的aptoll下没有观察到体重的明显差异。[0821]-没有毒理学相关的血液学或生物化学影响。[0822]-aptoll的施用不会在尸体剖检时产生与测试项目相关的宏观发现。[0823]-所收集器官的平均绝对重量或调整重量没有统计学上的显著差异：脑、心脏、肾脏、肝脏、肺和支气管和脾脏。[0824]-没有观察到跨治疗组或在时间点之间对aptoll的细胞因子应答，除了预处理组和终末组两者的雌性的il-6略有增加。[0825]在此研究的条件下，每天一次向斯普拉格道利大鼠静脉内施用aptoll，持续7天，至多50mg/kg/天，不会引起任何毒理学作用。[0826]大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。[0827]此毒性研究的目的是评估aptoll在以5、25和50mg/kg/天的剂量每天一次向大鼠静脉内施用持续2周时段时的毒性作用。此外，在1周无治疗恢复期之后，在几只动物中评估了任何治疗相关变化或延迟毒性的可逆性或进展。所述研究指示了潜在的靶器官，并且为人的风险评估提供了合理的基础。[0828]研究中总共使用了74只雄性和74只雌性，5-7周龄的sd大鼠。大鼠分为4组，每组15-20只雄性大鼠和15-20只雌性大鼠。aptoll每天一次静脉内施用，单次团注。治疗的持续时间为：[0829]-14天(主要和恢复)[0830]-14天(毒代动力学)[0831]-1天(生物标志物)[0832]治疗组和剂量在图32中示出。[0833]此研究中获得的结果表明，aptoll施用之后没有临床体征。此外，用aptoll治疗之后的大鼠在执行fob测试时没有示出任何改变。血液学、凝血、临床生化和尿液分析均在正常参数内。大体病理学也正常。除ip-10外，在施用aptoll之后未观察到细胞因子水平的统计学显著性剂量相关差异。与对照组相比，ip-10水平的显著差异量随着所有第1天样品的剂量增加而增加。在第14天，在第3组和第4组的雄性大鼠中观察到小但显著的增加；然而，当与对照组相比时，第14天的大鼠没有观察到显著增加。[0834]由于向sd大鼠连续和每日施用aptoll(50mg/kg)14天之后没有观察到显著的毒理学发现(即在经治疗的动物的形态学、功能能力、生长、发育或跨度方面的不利改变)，上述研究的主要结论是此化合物没有引起显著的毒理学改变。[0835]因此，50mg/kgaptoll被认为是noael(未观察到副作用水平)。50mg/kg是使用的最大剂量。使用更高剂量可能导致更高的noael值。[0836]毒代动力学评估：在第1天(范围1.0-18.3ng/ml)3只雄性和2只雌性和在第14天(1.4-11.4ng/ml)3只雄性和1只雌性中，在给药后5分钟发现了可定量的浓度。这些浓度远低于等效时间在经治疗的动物中观察到的浓度；然而，这种明显差异的来源并未鉴定。[0837]aptoll血浆浓度的个体间差异很高，变异系数通常大于70％，并且在2.2％到173％的范围内。[0838]总的来说，观察到最大血浆浓度的时间(tmax)是在第一时间点(5分钟)处，正如静脉内施用后所预期的那样。尽管如此，在第1天接受25mg/kg/天剂量水平的雌性的血浆浓度-时间曲线表明这些动物没有接受静脉内剂量(例如，剂量是动脉内或肌肉内施用的)。[0839]aptoll的最大平均血浆浓度(cmax)和直到第1天和第14天最后可定量血浆浓度(auct)的平均血浆aptoll浓度时间曲线下的面积总结如下：[0840]表5.斯普拉格道利大鼠模型中cmax和auct值的总结[0841][0842]大鼠全身暴露于aptoll的程度似乎通过在第1天和第14天的5到50mg/kg/天的剂量范围内的非线性(剂量依赖性)动力学表征。[0843]总体而言，aptoll浓度通常与雄性类似，并且在14天重复静脉团注施用之后没有观察到累积。[0844]食蟹猴的7天的初步静脉(团注)毒性研究[0845]此研究的目的是评估连续七天每天向猴静脉注射aptoll后的毒性作用。此研究指示了潜在的靶器官，并且为随后为期两周的毒性研究的剂量水平选择提供了合理的基础。[0846]aptoll每天一次向6只食蟹猴(3只雄性和3只雌性，24-36个月大)静脉内注射，持续7天。动物被分配到四个治疗组，如下：[0847]表6.涉及食蟹猴模型研究的组的设计[0848][0849]此研究中获得的结果表明，在aptoll施用之后没有观察到相关的临床体征。食物消耗和体重保持在正常参数处。无法确定所确定的细胞因子(ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6和tnf-α)中的任何细胞因子或所确定的补体活化复合物中的两者的治疗或性别相关效应(ch50和c5b-9)。既没有报告宏观发现也没有报告器官重量的变化。[0850]基于这些结果，每日施用持续一周之后的mtd(最大耐受剂量)被确定为6.9mg/kg/天aptoll。[0851]毒代动力学：抗tlr-4dna适体的最大血浆浓度(cmax)和直至最后可定量血浆浓度(auct)的血浆浓度-时间曲线下面积总结如下：[0852]表7.对食蟹猴模型研究中的cmax和auct值的总结[0853][0854]因此，单次给药之后猴的cmax值和全身暴露于aptoll的程度似乎通过0.7到6.9mg/kg/天的剂量范围内的线性(不依赖剂量的)动力学表征。[0855]终末半衰期(t1/2)的范围为0.8到1.4小时，并且似乎与剂量和性别无关。总血浆清除率(cl)的范围为252到409毫升/小时/千克，并且稳态平均分布体积(vss)的范围为34.0到68.3ml/kg。[0856]通过静脉途径对食蟹猴进行为期14天的重复剂量毒性研究，然后是1周的恢复期[0857]此研究的目的是评估在14天的时段内通过静脉途径(团注)每天两次间隔六小时向食蟹猴施用时的aptoll的累积毒性和毒代动力学。在治疗期后的1周恢复期期间，评估了治疗相关变化或任何延迟毒性的可逆性或进展。[0858]总共32只动物(16只雄性和16只雌性，28-29个月大)被分为四组，所述四组的向动物施用的aptoll的浓度不同：[0859]表8.涉及食蟹猴模型研究的组的设计[0860][0861]此研究中获得的结果表明，没有与aptoll施用相关的毒理学体征。在治疗结束时仅观察到注射位点(包含对照组)的血管周围纤维化和皮下纤维化，其中一周后部分恢复。没有观察到相关的临床体征：所有动物都存活到研究结束，对食物消耗和体重没有影响，在检眼镜检查中没有发现。无法观察到所确定的细胞因子(ifn-γ、il-1β、il-2、il-4、il-6和tnf-α)中的任何细胞因子或所确定的补体活化复合物中的两者的治疗或性别相关效应(ch50和c5b-9)。没有报告宏观或微观变化。[0862]总之，当aptoll每天两次(间隔6小时)通过静脉(团注)途径向食蟹猴施用持续14天的时段时，13.9mg/kg/天aptoll的剂量被认为是noael。[0863]毒代动力学[0864]4ft适体的主要毒代动力学参数的总结在图33中给出。[0865]在这些给药方案下没有观察到aptoll的积累。[0866]在所有组中的雄性与雌性之间观察到相当的暴露。cmax的雄性/雌性比率的范围为1.0到1.5，并且auct的范围为0.7到1.6。[0867]基因毒性[0868]体外[0869]基因毒性测定是根据ichs2(r2)指南设计的。进行了包含ames和体外微核测定(有和没有s9代谢活化)的测试组。ames波动测试评估了化合物的致突变潜力，并且体外微核测定补充了ames波动测试在如评估染色体损伤等遗传毒性效应的方面。在每次测定期间平行评估细胞毒性以鉴定由于细胞毒性可能导致的假阴性。[0870]为了评估各种类型的遗传毒性，使用了几种体外测定作为筛选工具。在每个实验中，并且如果适用，相应的参考化合物与aptoll同时进行测试，并且将数据与历史值进行比较。[0871]细菌细胞毒性：化合物的细菌细胞毒性与ames测定同时进行测试，以鉴定由于细胞毒性可能导致的假阴性。细胞数量细胞毒性％是基于细胞数量的指数，其中：[0872][0873]生长60％或低于对照的化合物被标记并被认为具有细胞毒性。在这些条件下，此研究中获得的结果示出了非细菌细胞毒性作用(图34和图35)。[0874]ames测试：进行ames测试以确定aptoll是否会导致直接dna突变。由于生长需求的变化，可以很容易地在细菌中测量基因突变。ames测试是使用鼠伤寒沙门氏菌进行的，这是一种广泛使用的细菌测定，用于鉴定可以产生基因突变的化合物，在啮齿动物致癌性测试中示出很高的预测价值。ames测试通常使用五种沙门氏菌菌株，这些菌株具有预先存在的突变，这些突变使细菌无法合成必需氨基酸组氨酸，并且因此无法在不含组氨酸的培养基中生长。[0875]使用四种沙门氏菌菌株ta98、ta100、ta1535和ta1537在384孔板中进行ames波动测定。将细菌板与测试化合物一起温育96小时，并且使用ph指示剂通过分光光度法测量细菌生长，所述指示剂响应因细菌生长导致的培养基酸化而改变颜色。通过使用大鼠肝脏s9部分实现代谢活化。为了预防由于杀菌或抑菌作用导致的假阴性，细菌细胞毒性试验与ames波动测定同时进行。[0876]由于组氨酸突变的逆转而显示出细菌生长的孔(如通过od430/od570的比率大于1.0判断)被计数并记录为阳性计数。使用单尾飞世尔精确测试计算治疗(在存在测试化合物的情况下)与对照(在不存在测试化合物的情况下)之间的阳性计数的显著性。[0877]此研究中获得的结果在ames测试中没有示出任何显著作用，因此，在aptoll施用之后没有鉴定出直接的dna突变(图36和图37)。[0878]体外微核测定：进行此测定以评估aptoll是否会通过引入双链dna断裂或影响有丝分裂细胞分裂而导致染色体损伤。微核形成是遗传毒性的标志，并且微核测定是遗传毒性筛选的重要组成部分。微核是含有染色质的小体，其表示在有丝分裂时未并入到子细胞核中的片段或甚至整个染色体。所述测定的目的是检测那些诱导染色体损伤的药剂，从而在间期细胞中诱导微核。[0879]体外微核测定在cho-k1细胞中进行。将细胞接种在96孔板中并且用测试化合物处理24小时(无s9)和4小时(有s9)。24小时之后添加胞质分裂阻断剂细胞松弛素b，并且将细胞再温育另外24小时，然后固定细胞并对微核进行评分。计算微核细胞的百分比。细胞分裂阻滞增殖指数(cbpi)细胞毒性％使用(cbpi)的修饰版本。这种方法利用了这样的事实：细胞毒性通常会诱导细胞周期停滞，这反映在使用细胞松弛素b时双核细胞与单核细胞的比率降低。cbpi为1相当于100％的细胞毒性。[0880]在此测定中获得的结果没有示出任何微核诱导(图38)。[0881]局部耐受[0882]斯普拉格道利大鼠的初步毒性研究[0883]在任何研究的aptoll浓度下，注射位点处均未检测到毒性相关体征。[0884]大鼠2周毒性研究，然后是1周恢复期。[0885]总体而言，注射位点处没有局部体征。然而，从第5天到第7天，两只雄性(第4组)的尾巴上呈现红斑。[0886]食蟹猴的7天的初步静脉(团注)毒性研究[0887]记录注射位点处的瘀伤。没有观察到其它局部变化。[0888]通过静脉途径对食蟹猴进行为期14天的重复剂量毒性研究，然后是1周的恢复期[0889]在包含对照组的宏观检查处记录了在一些静脉注射位点处看到的暗区。显微镜评估导致四个施用位点处(血管周围纤维化和皮下纤维化)的治疗相关发现。媒剂被认为是纤维化的主要诱因，这是由每天两次的注射程序造成的。在1周恢复期后对动物的评估证明在四个施用位点处部分恢复。[0890]实例8.aptoll在心肌梗塞之后左心室重构中的功效[0891]为了评估aptoll在心肌梗塞之后左心室重构中的影响，在大鼠中进行了通过对左前降支(lad)的结扎的心肌缺血再灌注损伤模型。简而言之，将lad冠状动脉结扎以进行缺血保持30分钟。然后，去除结扎以允许再灌注。在再灌注之后10分钟内单次团注静脉内注射单剂量的aptoll(0.45mg/kg)。含有1mmmgcl2的pbs溶液用作对照(媒剂)。在基础条件和梗塞之后72小时记录超声心动图参数射血分数和缩短分数。[0892]结果：如图所描绘的，缺血再灌注损伤之后射血分数和缩短分数受到显著影响。然而，施用一个单剂量的aptoll(0.45mg/kg)分别示出了18.3％和23.8％的恢复(图40)。所有这些数据一起表明aptoll对心肌梗塞之后心脏的肌肉收缩力具有保护作用，并且这种作用可以保护心脏功能。[0893]实例9.aptoll在实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)小鼠模型中的功效[0894]9.1.使用0.91mg/kg的aptoll进行测定[0895]为了评估aptoll对多发性硬化症(ms)的炎症组分的潜在神经保护作用，在eae小鼠模型中进行了测定。此模型是人类炎性脱髓鞘疾病ms的最常用的实验模型。[0896]用含有结核分枝杆菌的不完全弗氏佐剂中的mog35-55肽对麻醉的7周龄雌性c57/bl6小鼠进行皮下免疫。然后，在免疫时和48小时后通过尾静脉注射给小鼠静脉施用百日咳毒素。一个单剂量的aptoll(0.91mg/kg)在尾部静脉内施用，在eae的第一体征(发作)时单次团注。含有1mmmgcl2的pbs溶液用作对照(媒剂)。使用以下临床评分标准，每天检查小鼠的神经系统症状，自发作以来和在所有测定时间期间：0，没有可检测的体征；0.25，尖尾部下降；0.5，半尾部下降；0.75，除基部外尾部下降；1，尾部松弛；1.5，尾部松弛伴后肢局部无力；2，明显的后肢无力；2.5，单侧部分后肢麻痹；3，双侧后肢完全麻痹；3.5，后肢完全麻痹伴部分前肢无力；4，双侧前肢完全麻痹；5，死亡。[0897]结果：如果与媒剂相比，aptoll的施用在症状高峰期(发作后4天)示出临床评分降低27％，并且在测定结束时降低甚至更高(66％)(图41)。此数据表明aptoll的神经保护作用对疾病的炎症组分有影响。[0898]9.2.疾病发作之后24小时施用aptoll的功效[0899]进行了一项独立的测定，在eae的第一个体征(发作)后24小时，静脉内施用单剂量的aptoll(0.91mg/kg)，单次团注。[0900]结果：当在发作之后24小时注射aptoll时，观察到临床评分明显降低(图44)。[0901]9.3.使用不同剂量的aptoll进行测定：0.45、0.91、1.82、3.6mg/kg[0902]测定如第9.1节所述进行。[0903]组织处理：神经组织的提取和处理在发作后10天(药物施用时间)进行。进行安乐死剂量的经心脏灌注，使用蠕动泵通过循环系统用4％多聚甲醛(pfa)固定组织。然后获得组织，在这种情况下，是大脑和脊髓。接下来，将组织在pb中在10分钟内洗涤数次，通过连续三次在pb中不断增加的蔗糖浓度进行冷冻保护，并且最后在oct中冷冻，分成不同的部分(两部分(t1和t2)中的脑、小脑、颈脊髓、胸脊髓和腰脊髓)。t1用于此研究并且用低温恒温器在横向平面上以20微米的厚度切割。[0904]铬花青染色：为了分析cns脱髓鞘，进行了铬花青(ec)染色。将组织切片在室温(rt)下干燥2小时，然后在37℃下的炉子中再干燥另外2小时。将载玻片在rt下浸入冷丙酮中5分钟，并且允许通气30分钟以蒸发丙酮。随后，将切片在rt下浸入蒸馏水中的含有0.2％铬花青(西格玛(sigma))、0.5％硫酸(h2so4，西格玛)和4％三价铁铝(西格玛，10％在蒸馏水中制备)的染色溶液中30分钟。去除过量的染料，并且将切片在rt下浸入蒸馏水中的含5％三价铝(西格玛)的水溶液中10分钟，以区分染色的组织。再次用水去除过量的染料，并且将其在rt下浸入硼砂-亚铁氰化物溶液中10分钟。用水洗涤之后，在光场显微镜下验证染色的正确区分(有髓区域染色为蓝白色或淡黄色脱髓鞘区域)。为了保存，切片在70、80、90、96和100％乙醇浓度递增的乙醇溶液中脱水，在两个100％二甲苯浴中冲洗，并且用封固剂封固。[0905]免疫组织化学：为了检测切片中存在的抗原，让所述切片在rt下解冻和干燥1小时。然后，在rt和搅拌下用0.1mpb(磷酸盐缓冲液)中的10％甲醇进行预处理15分钟。在0.1mpb和1xpbs各10分钟洗涤两次之后，在封闭溶液中进行温育以避免非特异性结合(5％的正常驴血清(nds；密理博(millipore))并且0.02％的tritonx-100(西格玛奥德里奇公司(sigma-aldrich)在1xpbs中，在黑暗、湿室和rt中温育一小时。此后，将切片在第一抗体(mbp(大鼠，serotec公司)、nfh(兔，艾博抗公司(abcam))、iba1(豚鼠，新立德系统公司(synapticsystem))、olig2(兔，密理博)、cc1(小鼠，密理博)和pdgfrα(山羊，rd公司))的混合物在4℃下和湿度箱中在对应的封闭溶液中温育12小时，显影是通过在封闭溶液中以1:1000的浓度在rt下使用荧光第二抗体持续一小时进行的。然后将切片用(西格玛)染色，以在相对于原液(100μg/ml的双苯甲酰亚胺，西格玛-奥德里奇公司，在milliq水中)的1:10的浓度下在pbs中，并在rt下持续10分钟，在黑暗和潮湿的室中进行核心显影。最后，将切片在pbs中洗涤并在封固剂(southernbiotech公司)中用幼崽载玻片封固。[0906]图像和分析：使用leicasp-5共聚焦显微镜拍摄脊髓切口的图像。每只动物拍摄三张照片(马赛克)，在40倍放大倍率和512x512像素分辨率下，平面之间的间距为3μm。为了分析nfh、iba1和mbp的面积以及花青色素染色的脱髓鞘面积，使用imagej应用程序。用于3d和4d成像的imaris软件用于对小胶质细胞和细胞核进行计数。[0907]结果：如图45和46所见，在剂量为0.45mg/kg的情况下，eae-aptoll组的临床评分有所改善。在0.91mg/kgaptoll剂量的情况下，在症状发作时注射aptoll之后4天，eae的临床病程得到显著改善。在1.82mg/kgaptoll剂量的情况下，相对于媒剂组，注射aptoll之后5天，临床评分显著改善。在3.6mg/kgaptoll剂量的情况下，eae-aptoll组的临床评分略高于媒剂。因此，特别是用0.91mg/kg和1.82mg/kg的剂量进行治疗使eae临床病程曲线斜率显著降低。相对于媒剂组，在剂量为0.91mg/kg的情况下在开始之后4天和在剂量为1.82mg/kg的情况下在开始之后5天直到实验结束，动物达到的评分的这种差异是显著的。对接受0.91mg/kg和1.82mg/kg剂量的小鼠脊髓进行组织学分析，以研究此化合物的髓鞘再生和神经保护作用，并比较两种浓度。[0908]通过铬-花青染色分析脊髓切片的脱髓鞘区域(图47)，观察到媒剂组中白质脱髓鞘区域(未示出)的百分比高于用aptoll处理的那些动物。因此，aptoll在eae期间可以预防脱髓鞘过程，因为脱髓鞘面积％低于媒剂。[0909]接下来，在这两个剂量中分析不同的标志物，其中经处理的组与媒剂之间的差异更大(0.91mg/kg和1.82mg/kg)，以研究aptoll在此模型中可能具有的神经保护作用。使用mbp标志物(髓鞘碱性蛋白)研究存在于脊髓白质中的髓鞘面积，并且使用nfh标志物(神经丝重多肽蛋白，轴突损伤的标志物)研究神经轴突损伤，并且使用活化小胶质细胞的标志物(iba1，对小胶质细胞具有特异性的钙结合蛋白)研究处死时产生的炎症水平。在两种剂量中，在eae-aptoll组中均观察到更高百分比的mbp和nfh两者，并且相对于媒剂组，iba1显著降低(图48)。这表明这两种浓度下的aptoll在具有炎性组分的此ms动物模型中具有神经保护作用。[0910]为了确定aptoll的最佳浓度，计算了两个所选剂量之间(再)髓鞘形成、神经保护和炎症的比率。结果示出0.91mg/kg剂量的剂量效应比1.82mg/kg剂量的剂量效应有所改善。[0911]为了确定aptoll是否改善了髓鞘形成细胞的增殖和分化，进行了少突胶质细胞谱系的组织学研究。对于每个剂量，相对于经媒剂处理的组，在eae-aptoll组中观察到更大量的前体少突胶质细胞(pdgfrα 细胞，增殖标志物)和成熟少突胶质细胞(cc1 细胞，分化标志物)(图49)，从而证实先前通过使用髓鞘标志物mbp观察到的髓鞘再生作用。[0912]结论：通过在ms的eae动物模型中测试四种不同剂量的aptoll对aptoll的剂量应答研究表明，此类治疗的最佳剂量可以是0.91mg/kg，其中第二种选择为1.82mg/kg。在eae模型中出现症状时，与媒剂组中的动物相比，aptoll施用在经处理的动物中产生了显著的体重恢复和临床病程的显著减少。此外，除了产生轴突损伤和炎症的显著减少外，aptoll施用还对组织髓鞘再生有明显影响。与媒剂不同，这两个剂量的施用使脱髓鞘面积减少以及有髓鞘面积和神经丝数量增加。[0913]9.4.此研究中使用的aptoll[0914][0915]实例10.aptoll对大鼠的少突胶质前体细胞(opc)体外模型中促进髓鞘形成的功效[0916]此研究是盲目进行的，并且测定了aptoll对从7天大的大鼠中提取的opc的潜在促进髓鞘形成作用。为此，测量了用aptoll处理之后的opc的存活、增殖和分化。[0917]存活测定：在用对照、媒剂(含10mmmgcl2的pbs)、aptoll(20nm-200nm)和h2o2死亡阳性对照处理之前24小时铺板opc。温育24小时之后，按照制造商规格，通过mtt试剂盒测量细胞存活％，并且在595nm处测量信号。[0918]增殖测定：在用对照、媒剂(含10mmmgcl2的pbs)和aptoll(20nm-200nm)处理之前24小时铺板opc。然后，向细胞给予brdu脉冲6小时。24小时后将细胞固定在多聚甲醛溶液中，使用brdu和olig2作为第一抗体进行免疫细胞化学。为了对增殖细胞进行定量，通过共聚焦显微镜使图像可视化。[0919]分化测定：将opc铺板并生长24小时。然后，将培养基替换为补充有生长因子(pdgf-αyfgf2)的培养基，并且用对照(不含生长因子的培养基)、媒剂(含10mmmgcl2的pbs)、aptoll(20nm-200nm)和用甲状腺激素(t3)进行分化的阳性对照进行处理。将细胞固定在多聚甲醛溶液中，以用第一抗体mbp和olig2进行免疫细胞化学。为了对增殖细胞进行定量，通过共聚焦显微镜使图像可视化。[0920]用aptoll处理对opc增殖和分化示出了剂量依赖性影响。在200nmaptoll处理条件下，细胞增殖和分化分别增加了43.2％和53.6％。然而，没有观察到对细胞存活的影响(图42)。这些数据表明aptoll在导致ms模型中促进髓鞘形成的过程中的作用。这种作用也可能有益于治疗与其它tlr-4介导的病状相关的神经元组织损伤，如缺血性中风、出血性转化、出血性中风或心肌梗塞。[0921]实例11.aptoll治疗出血性中风或出血性转化的功效[0922]出血性中风和出血性转化与在缺血性中风中在同一组织(脑组织)中也观察到的生理变化有关，并且也已知是tlr-4介导的病状。因此，上文公开的用于表征本公开的适体对缺血性中风的作用的实验方法和本领域已知的其它方法将用于确定本公开的适体(例如，aptoll)治疗出血性中风和出血性转化以及其症状和后遗症的作用。[0923]预期的是，向患有出血性中风或出血性转化的受试者施用本公开的适体(例如，aptoll)将(i)使受损组织减少；(ii)使炎症减少；(iii)使预后和结果改善；(iv)使促炎生物标志物(例如，干扰素-γ、白介素-12p70、tnfα、il-6或其任何组合)的水平降低；(v)使生活质量提高；(vi)使功能评分，例如运动评分改善(例如，活动能力改善)；(vii)使存活率增加；或者(v)其任何组合。[0924]实例12.通过猪的缺血和冠状动脉再灌注实验程序研究aptoll治疗对心肌梗塞之后心脏功能和组织损伤的作用[0925]测试项目：aptoll被调配为冷冻干燥的单剂量小瓶，预先溶解在pbs 1mmcl2mg中并进行结构化。[0926]名称tlr4-4ft所需数量单剂量0.078mg/kg包装微量离心管方面无色冻干粉储存条件-20℃避光制备方案与本文件的第9.4节相同(实例9)溶解度至多0.05nmol/μl的水溶液制备时间使用前10分钟[0927]媒剂：制备pbs加1mmcl2mg的溶液作为媒剂。根据动物体重计算剂量(0.078mg/kg)。[0928]材料：苏木精-伊红、三色马森染色试剂、ttc、伊文思蓝和胎牛血清均来自西格玛公司。辣根过氧化物酶(hrp)缀合的抗小鼠第二抗体和液体3,3'-二氨基联苯胺(dab)底物来自dako公司。抗mmp-9抗体和人心脏肌钙蛋白1simple-stepelisa试剂盒(ab200016)来自艾博抗公司，蛋白质组剖线仪阵列(proteomeprofilerarray)(ary005b)来自r&d系统公司(r&dsystem)，氯胺酮(ketamine)来自辉瑞公司(pfizer)，咪达唑仑(midazolam)来自博朗公司(braun)，异氟醚(isoflurane)来自艾伯维公司(abbvie)，丙泊酚(propocol)来自费森尤斯公司(fresenius)，芬太尼(fentanyl)来自科恩制药(kernpharma)，地西泮(diazepam)来自罗氏公司(roche)，胺碘酮(amiodarone)来自赛诺菲安万特(sanofiaventis)。所有导管均来自强生公司(cordis)。以下是此研究中最常用的设备清单：5415r冷冻离心机来自艾本德公司(eppendorf)(德国汉堡)。化学发光成像系统fusionsolo-s和图像分析软件fusion-capt来自vilber-lourmat公司(德国埃伯哈德采尔)。tcs-sp5共聚焦显微镜来自徕卡公司(leica)(德国韦茨拉尔)。酶标仪来自伯腾公司(biotek)(佛蒙特州威努斯基)。nanodropone分光光度计来自赛默飞世尔科技公司(thermoscientific)(马萨诸塞州沃尔瑟姆)。引导导管、血管成形术球囊和导管导引器来自强生公司(佛罗里达州迈阿密)。诊断和可操纵导丝来自波士顿科学公司(bostonscientifics)(马萨诸塞州马尔堡)，并且球囊充气装置来自博朗公司(德国梅尔松根)。[0929]方案：动物和心源性休克(cs)程序[0930]约克郡母猪(37.8±5.2kg)预先肌肉注射氯胺酮(10mg/kg，辉瑞公司)和咪达唑仑(0.5mg/kg，博朗公司)。通过吸入异氟醚(艾伯维西班牙分公司(abbviespainslu))诱导麻醉，并且通过持续输注丙泊酚(2毫升/千克/小时，费森尤斯卡比公司(freseniuskabi))、芬太尼(50微克/千克/小时，科恩制药公司(kernpharma))和地西泮(10微克/千克/小时，罗氏公司)维持麻醉)。对动物进行插管并在100％氧饱和度下通气。动物分别接受5000iu肝素和胺碘酮(2毫克/千克/小时，赛诺菲安万特)，以避免导管的血液凝固和恶性心律失常。[0931]使用jl36f导管和血管成形术球囊(充气至8个大气压)，通过左前降支(lad)闭塞45分钟诱导缺血/再灌注。在发生心室纤颤/室性心动过速的情况下，施用双相dc电击(10-20焦耳)与直接手动胸外按压组合。lad闭塞45分钟之后，动脉被疏通，并且再灌注10分钟之后，静脉内施用治疗。治疗是盲施用的，10只动物用aptoll治疗，并且10只用对照媒剂治疗。在以下时间处从股动脉获得10ml动脉血：ami之前、ami后50分钟、75分钟、2小时、8小时、24小时、3天和7天。采集之后立即以3000rpm离心10分钟来分离血浆，并且所有样品在实验前均保持在-80℃下并储存以备将来研究。[0932]超声心动图：使用配备有1.9-4mhz扫描头的vividq超声系统(通用电气医疗集团(gehealthcare))通过超声心动图对猪心脏进行可视化。在麻醉的动物中，心脏的胸骨旁短轴视图图像以b模式记录，以便通过将光标定位在垂直于室间隔和左心室后壁的胸骨旁短轴视图中来允许m模式记录。根据这些记录，使用现场心脏软件包确定以下参数：收缩压和舒张压室间隔厚度(ivs)、收缩压和舒张压左心室内径(lvid)、收缩压和舒张压左心室后壁厚度(lvpw)、左心室射血分数(ef)、左心室缩短分数(fs)、心率(hr)和心输出量(co)。[0933]双伊文思蓝/ttc染色：通过伊文思蓝灌注和ttc染色评估心肌梗塞的扩展。到第7天，导管在与第0天相同的位置充气，以避免伊文思蓝灌注到风险区域的下游，并且从股动脉插入猪尾导管并向上放置到左心室，以便伊文思蓝灌注到全身循环中。灌注之后一分钟，通过注射氯化钾溶液处死动物，并且然后分离心脏，用盐水缓冲液洗涤3次，-20℃下冷冻12小时，并且从基部到顶端切成0.5cm的切片。将切片与溶解在盐水缓冲液中的1％ttc染料在37℃下一起温育20分钟，并且然后用10％多聚甲醛洗涤20分钟。通过共聚焦显微镜获取图像并且使用imagej软件进行分析，区分健康面积与风险面积和苍白坏死面积，从而计算坏死面积相对于风险面积的百分比。[0934]共聚焦显微镜：石蜡包埋的0.5μm心脏切片与抗mmp-9(在pbs1.5％bsa中以1:500稀释)第一抗体在4℃下温育过夜。用pbs洗涤3次后，将载玻片与alexa-fluor-647tm缀合的第二抗体在室温下温育1小时。载玻片用pbs洗涤3次，并且安装在含有hoechsttm的pbs培养基中，用于细胞核可视化。使用leicatcssp5共聚焦显微镜拍摄图像。每个条件获得至少三个不同的视野。[0935]确定.血浆肌钙蛋白i水平确定：按照制造商的说明书，使用来自艾博抗公司的商业试剂盒人心肌肌钙蛋白1simplesteptmelisa试剂盒确定血浆肌钙蛋白i。[0936]组织学和免疫组织荧光：通过伊红-苏木精染色使心脏形态可视化，并且通过马森三色染色检测胶原沉积。mmp-9的免疫组织化学检测是通过将样品与对应的第一抗体和第二抗体一起温育并且通过共聚焦显微镜检测结合的荧光缀合的第二抗体来进行的。通过使用非商业软件imagej评估信号的光密度确定。[0937]统计分析：所有值均以平均值±标准差给出。在5％的水平下报告了显著性。每当与共同对照进行比较时，差异的显著性通过t测试的邓奈特修改进行测试。[0938]结果：[0939]aptoll在再灌注之后24小时降低肌钙蛋白i水平。心肌肌钙蛋白i(tpni)在所谓的心绞痛胸痛的研究中非常有用，因为其对检测缺血性损伤具有很高的敏感性和特异性，这就是为什么其被常规用于那些既往有或没有急性冠状动脉综合征1诊断的患者的原因。手术8小时之后，两组动物的tpni值同样高，但在24小时之后，用aptoll治疗的组有29.5％的显著降低(图50)。[0940]aptoll在再灌注之后第7天诱导心脏功能恢复。为了评估再灌注之后3天和7天的心脏功能是否受到影响，通过经麻醉的猪的超声心动图确定了以下参数：[0941]ivsd：舒张末期室间隔厚度。[0942]lvidd：左心室舒张末期内径。[0943]lvpwd：舒张末期左心室后壁厚度。[0944]ivss：收缩末期室间隔厚度。[0945]lvids：左心室收缩末期内径。[0946]lvpws：收缩末期左心室后壁厚度。[0947]ef：左心室射血分数。[0948]fs：缩短分数。[0949]hr：心率。[0950]co：心输出量。[0951]再灌注之后3天对aptoll施用的应答没有发现差异(数据未示出)。然而，到第7天，ef和fs响应aptoll而显著增加(图51)。[0952]aptoll在再灌注之后第7天减少了左心室坏死和纤维化。此测试评估了aptoll是否可以有效减少心肌坏死。进行外科手术以检测心脏的健康灌注区(健康面积)、风险灌注区(风险面积)和梗塞非灌注区(坏死面积)。此外科手术方法允许使用风险区作为梗塞面积的百分比，以能够避免因每颗心脏的大小和进行冠状动脉闭塞的特定区域而导致的差异。[0953]治疗7天之后，使动物经受双导管插入术，在与第零天相同的点通过一根股动脉进入和闭塞冠状动脉前降支，并且通过另一根股动脉进入带有“猪尾”导管的左心室。一旦冠状动脉在与第0天相同的区域闭塞，“伊文思蓝”染料通过猪尾导管注射到左心室中，其中目的是将其灌注到动物中。以此方式，特别是在心脏中，除了冠状动脉被气囊闭塞时处于风险中的面积外，组织的健康面积被染成蓝色。最后，在动物被处死之后，将心脏在舒张期(通过注射氯化钾)分离，并横向切成0.5cm厚的切片。切片与ttc试剂一起温育，所述试剂被内化到非坏死细胞中，将所述切片染成红色(风险区)，而坏死细胞对染色不敏感(梗塞区，白色)。一旦进行此程序，就有可能检测到用aptoll治疗的动物的梗塞面积显著减少了大约28％(相对于处于风险中的面积)(图52，左图)。图52，右图展示了aptoll中观察到的梗塞面积比单独使用媒剂时观察到的梗塞面积小42％。[0954]为了使心脏心肌纤维的完整性可视化，并且还为了评估响应于缺血和随后的冠状动脉再灌注的炎症病灶的存在，将心脏切成0.5微米的横截面以进行曙红-苏木精染色，检测用aptoll治疗如何维持心肌组织的完整性，以及浸润数量的减少(图53，图a)。马森三色染色揭示了经安慰剂治疗的动物心脏中显著的心肌纤维化(图53，图b)。[0955]aptoll在再灌注之后第7天抑制mmp-9的表达。胞外基质的降解是心肌重塑和修复期间的关键步骤。基质金属蛋白酶9(mmp-9)是不良重塑的标志物，在此过程中起着关键作用，因为其会降解胞外基质组分。在用aptoll治疗的猪中，到再灌注之后第7天，mmp-9的表达相对于安慰剂组显著降低了40％，如在先前描述的相同心脏切片中检测到的那样，通过使用特异性抗mmp-9抗体的共聚焦显微镜免疫荧光(图54)。[0956]结论：总之，这些结果表明aptoll是一种适用于治疗ami的治疗剂。其它已经表明tlr4与急性心肌梗塞(ami；心脏病发作)的不良结果相关。目前的研究表明，用aptoll的治疗通过以下来诱导心脏保护作用：(i)下调炎症过程；(ii)减少胞外基质的降解，并且因此改善心肌重构，保留心室解剖结构和心脏功能；以及(iii)减少梗塞的进展。[0957]实例13.通过qpcr的aptoll的组织分布[0958]将用hilytetmfluor488染料(0.45mg/kg)或媒剂标记的aptoll向威斯塔雄性大鼠(8-10周龄)静脉内施用，以便对不同组织(即心脏、肺、肾脏、脾脏、肝脏、小肠、大肠、胰腺、胸腺和室管膜脂肪)中的适体进行定量。分析了以下各组：[0959]-nv：用媒剂处理的原初大鼠(n＝2)。[0960]-n-1小时大鼠：用aptoll处理的原初大鼠(n＝2)。注射之后1小时收集组织。[0961]-n-24小时大鼠：用aptoll处理的原初大鼠(n＝2)。注射之后24小时收集组织。[0962]-i-1小时大鼠：闭塞之后10分钟用aptoll处理的缺血大鼠(电凝pmcao；n＝2)。注射之后1小时收集组织。[0963]-i-24小时大鼠：闭塞之后10分钟用aptoll处理的原初大鼠(电凝pmcao；n＝2)。注射之后24小时收集组织。[0964]在大脑中aptoll评估的特定情况下，6只缺血(w1-6)和1只原初大鼠用aptoll注射(静脉内0.45mg/kg，闭塞之后10分钟)，并且1小时后收集大脑。在心脏灌注描述的时间对所有动物进行麻醉和安乐死。组织用盐水输注洗涤，收集，并且立即在-80℃下冷冻。[0965]在研究的第二部分，每个器官的组织都被解冻并称重。除了胸腺和心脏(心房)外，每个组织的大约100mg用1ml的核唑(nucleozol)(马切雷-内格尔公司(macherey-nagel))处理，其中重大约50mg、500μl的核唑用于获得rna。对于所有提取，测量rna水平并在1.2％琼脂糖凝胶中检查其完整性。[0966]将一定体积的rna(25μl)用rna酶a处理30分钟，并且通过qpcr使用适当的引物并在实时热循环仪onesepplus(应用生物系统公司(appliedbiosystems))中使用试剂盒“诺唯赞公司(vazyme)的aceqqpcrgreenmastermix”确定aptoll水平。使用增加浓度的aptoll-hilyte-488(0.001-10fmole)作为标准模式。计算适体的量/组织的g。[0967]结果和结论：[0968]1.aptoll主要存在于原初大鼠和缺血性大鼠两者中的注射之后1小时的肾脏、脾脏和肝脏中。然而，注射之后24小时，aptoll水平几乎无法检测到(图55，图a、b)。[0969]2.在大脑中，aptoll在缺血性大鼠(主要在同侧半球)中可检测到，但在原初大鼠中无法检测到，从而证实了aptoll在生理条件下无法跨过bbb(图55，图c)。[0970]***[0971]应当理解，具体实施方式部分，而不是
发明内容和摘要部分，旨在用于解释权利要求。
发明内容和摘要部分可以阐述发明人所设想的本公开的一个或多个示例性实施例但不是全部示例性实施例，并且因此，并不旨在以任何方式限制本公开和所附权利要求。[0972]上文已经借助功能构建块描述了本公开，所述功能构建块展示了指定功能的实施方案和其关系。为便于描述，本文已任意定义了这些功能构建块的边界。只要适当地执行指定的功能和其关系，就可以定义替代边界。[0973]具体实施例的前述描述将如此完全地揭示本公开的一般性质，使得在不需要过度实验、不背离本公开的一般概念的情况下，通过应用本领域技术内的知识，其他人可以容易地对此类具体实施例的各种应用进行修改和/或改编。因此，基于本文所呈现的教导和指导，此类改编和修改旨在处于所公开的实施例的等效物的含义和范围内。应该理解，本文中的措辞或术语是出于描述而非限制性目的，使得本说明书的术语或措辞将由技术人员鉴于教导和指导来解释。[0974]本公开的广度和范围不应当受限于任何上文描述的示例性实施例，而是应当仅根据以下权利要求及其等效物来限定。当前第1页12当前第1页12
再多了解一些
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