一种中药组合物中多种成分鉴别及含量的测定方法与流程

1.本发明属于药物分析领域，具体的涉及中药成分的鉴别及含量测定方法。


背景技术：

2.本发明涉及一种中药组合物中多种成分鉴别及含量测定方法。该中药组合物是由酸枣仁、何首乌、桑葚、百合等组成；实验研究表明，该中药组合物益肾健脑，养心安神。补中有通，补而不滞，对治疗失眠有显著的疗效。各药合用，脑神得充，失眠健忘，头晕神疲，腰膝酸软诸症自除。
3.有报道采用薄层色谱法以及高效液相色谱法可以测定丹参、知母等药材的活性成分。对于该中药复方制剂，目前只公开了同时测定其中几种成分含量的方法，但公开的检测方法和检测成分并非该药物组合物中的标志性成分。该药物组合物中包含有几十种甚至几百种生物活性成分，公开上市后，需要对其进行全面质量控制，保证人民用药安全，这是目前迫切需要解决的问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种中药组合物多种成分的鉴别以及含量测定方法。具有高灵敏度，可以有效快速的全面控制该中药组合物的质量。
5.本发明所采用的技术方案是：一种中药组合物中多种成分鉴别及含量的测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：何首乌150-270、酸枣仁145-275、桑椹160-255、灵芝80-135、百合75-160、知母50-110、丹参120-200、菊花45-120、茯苓75-145、合欢花165-288，该中药组合物的多种成分鉴别及含量的测定方法包括：何首乌的鉴别方法：取该中药组合物，加甲醇超声处理，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液，另取何首乌对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液，对照药材溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-正已烷-丙酮为展开剂，展开，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；酸枣仁的鉴别方法：取该中药组合物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用三氯甲烷除杂，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液，另取酸枣仁皂苷a对照品，加甲醇制成对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液，对照品溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；知母鉴别方法：取该中药组合物，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加盐酸使溶解，加热回流后，用三氯甲烷提取，三氯甲烷作为供试品溶液，另取菝葜皂苷元对照品，加无水乙醇溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液点于同一硅胶g
薄层板上，以石油醚-正已烷-丙酮为展开剂展开，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点；丹参鉴别方法：取何首乌供试品溶液作为供试品溶液；取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，喷以三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点；合欢花鉴别方法：取何首乌供试品溶液作为供试品溶液；取合欢花对照药材，加甲醇超声处理，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水为展开剂，展开，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；该药物组合物的何首乌成分含量测定方法由以下步骤组成：a供试品溶液的制备：取本发明药物组合物，加乙醇，超声处理，蒸干，残渣加乙腈溶解，即得；b对照品溶液的制备：取2，3，5，4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品，加乙腈，即得；c、hplc检测：色谱柱为c
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，流动相为乙腈-水，检测波长300-340nm；d、测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；该药物组合物的丹参成分含量测定方法由以下步骤组成：a、供试品溶液的制备：取本发明组合物，精密称定，加甲醇超声处理，即得；b、对照品溶液的制备：取丹酚酸b对照品，加甲醇溶解，即得；c、hplc检测：色谱柱为c
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，流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈；d、测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
6.优选的，该中药组合物的多种成分鉴别及含量的测定方法为：何首乌的鉴别方法：取该中药组合物1-5g，加甲醇20-50ml超声处理，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙酸乙酯萃取，萃取液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液，另取何首乌对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液，对照药材溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-正已烷-丙酮比例1：1：1为展开剂，展开，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；酸枣仁的鉴别方法：取该中药组合物1-10g，加甲醇10-100ml超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，用三氯甲烷除杂，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取，用氨试液除杂，弃去氨试液，再用水洗，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液，另取酸枣仁皂苷a对照品，加甲醇制成对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液，对照品溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇配比为1:4溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；知母鉴别方法：取该中药组合物1-10g，加甲醇10-100ml超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2mol/l盐酸10-50ml使溶解，加热回流后，用三氯甲烷提取，三氯甲烷作为供试品溶液，另取菝葜皂苷元对照品，加无水乙醇溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取
上述两种溶液点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚-正已烷-丙酮比例为1：1：1为展开剂展开，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇1:4溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点；丹参鉴别方法：取何首乌供试品溶液作为供试品溶液；取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸比例为8：1：1为展开剂，展开，喷以三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点；合欢花鉴别方法：取何首乌供试品溶液作为供试品溶液；取合欢花对照药材，加甲醇超声处理，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水比例为7：2.5：2.5为展开剂，展开，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；该药物组合物的何首乌醇提成分含量测定方法由以下步骤组成：a供试品溶液的制备：取本发明药物组合物，加60%乙醇，超声处理，蒸干，残渣加乙腈溶解，即得；b对照品溶液的制备：取2，3，5，4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品，加乙腈，即得；c、hplc检测：色谱柱为c
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，流动相为乙腈-水，检测波长300-340nm；d、测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；该药物组合物的丹参水提成分含量测定方法由以下步骤组成：a、供试品溶液的制备：取本发明组合物，精密称定，加甲醇超声处理，即得；b、对照品溶液的制备：取丹酚酸b对照品，加甲醇溶解，即得；c、hplc检测：色谱柱为c
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，流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈；d、测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
7.更优选的，该中药组合物的多种成分鉴别及含量的测定方法为：何首乌的鉴别方法：取该中药组合物2g，加甲醇25ml超声处理20分钟，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每次15ml，合并萃取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取何首乌对照药材0.5g加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液，对照药材溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以60-90℃石油醚-正已烷-丙酮比例1：1：1为展开剂，展开，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；酸枣仁的鉴别方法：取该中药组合物4g，加甲醇40ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml溶解，用三氯甲烷除杂3次，每次20ml，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液除杂3次，每次15ml，弃去氨试液，再用水洗三次，每次15ml，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，另取酸枣仁皂苷a对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液，对照品溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇配比为1:4溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
知母鉴别方法：取该中药组合物4g，加甲醇30ml超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2mol/l盐酸30ml使溶解，加热回流1小时后，用三氯甲烷提取3次，每次15ml，合并三氯甲烷液挥干，残渣加三氯甲烷1ml溶解，作为供试品溶液，另取菝葜皂苷元对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液点于同一硅胶g薄层板上，以60-90℃石油醚-正已烷-丙酮比例为1：1：1为展开剂展开，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇1:4溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点；丹参鉴别方法：取何首乌供试品溶液作为供试品溶液；取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸比例为8：1：1为展开剂，展开，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，加热，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点；合欢花鉴别方法：取何首乌供试品溶液作为供试品溶液；取合欢花对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液，点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水比例为7：2.5：2.5为展开剂，展开，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，加热，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；该药物组合物的何首乌醇提成分含量测定方法由以下步骤组成：a供试品溶液的制备：取本发明药物组合物0.25g，精密称定，加60%乙醇25ml，超声处理10分钟，滤过，取5ml，蒸干，残渣加15%乙腈溶解转移至10ml量瓶中，即得；b对照品溶液的制备：取2，3，5，4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品，加15%乙腈制成每1ml含20μg的溶液，即得；c、hplc检测：色谱柱为c
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，流动相为乙腈-水，比例为15：85，检测波长320nm；d、测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得；该药物组合物的丹参水提成分含量测定方法由以下步骤组成：a、供试品溶液的制备：取本发明组合物0.2g，精密称定，加80%甲醇20ml超声处理30分钟，即得；b、对照品溶液的制备：取丹酚酸b对照品，加80%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；c、hplc检测：色谱柱为c
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，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相；检测波长为286nm，d、测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
8.作为优选方案，该中药组合物由如下重量份比例的原料药制成的：何首乌158
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酸枣仁270
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桑椹165
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灵芝135
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百合80知母110
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丹参125
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菊花118
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茯苓80
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合欢花280。
9.或者由如下重量份原料药制成：何首乌265
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酸枣仁147
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桑椹250
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灵芝81
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百合158知母55
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丹参188
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菊花50
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茯苓145
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合欢花170。
10.还可以由如下重量份比例的原料药制成的：何首乌225
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酸枣仁163
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桑椹220
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灵芝83
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百合113
知母50
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丹参193
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菊花45
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茯苓113
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合欢花178。
11.也可以由如下重量份比例的原料药制成的：何首乌200
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酸枣仁200
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桑椹200
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灵芝100
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百合100知母66.7
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丹参166.7
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菊花66.7
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茯苓100
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合欢花200。
12.为便于携带、服用方便，该中药组合物可以制成胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂或注射剂。
13.该中药组合物的片剂的制备方法，是由如下步骤组成：a) 按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加6-12倍量30%-70%乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.10-1.15，得醇提浸膏，备用；b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10-15倍量水提取1-3次，每次提取1-3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.10-1.15，得水提浸膏，备用；c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉干燥制粒，整粒后，加入适当辅料，混匀，压片，包衣，即得。
14.【鉴别】本发明中药组合物为了全面控制产品质量，采用薄层色谱鉴别法建立了何首乌、酸枣仁、知母、丹参、合欢花的鉴别方法，在长达数年的质量控制方法确立试验期间持续不断的对薄层色谱鉴别方法进行了优化和完善，期间还对菊花、茯苓、灵芝、桑葚及百合进行了薄层色谱研究，因干扰过多，只能放弃。
15.方中各味药的薄层色谱鉴别研究结果如下：制何首乌的薄层色谱鉴别，曾采用乙醇超声提取后，水浴挥干，加甲醇1ml溶解点样，由于样品溶解较差，给点样造成一定的困难，故将样品用乙酸乙酯提取后再溶解点样，以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（12：4：0.2）与正已烷-乙酸乙酯-甲酸（12：3：0.2）为展开剂，展开后，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。但在进行知母的薄层色谱摸索时，发现以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂进行展开，效果也比较好，经试验，重现性良好，且阴性无干扰，故确定石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）这一展开系统。（tlc图谱见图1）炒酸枣仁的薄层色谱鉴别，曾采用甲醇超声提取后，水浴挥干，加甲醇1ml溶解点样，由于甲醇提取出来的成分较多，在薄层色谱图上不能清楚辨认酸枣仁皂苷a和酸枣仁皂苷b，又将样品按本发明需要保护的方法进行了处理，结果酸枣仁皂苷a较清楚，而与酸枣仁皂苷b对应的位置上背景较深，更换多种显色剂后，薄层色谱图没有得到改善，故只鉴别酸枣仁皂苷a，经试验，酸枣仁皂苷a的重现性良好，阴性无干扰，故确定这一展开系统。（tlc图谱见图2）知母的薄层色谱鉴别，曾采用苯-丙酮（9：1）与石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）两种展开系统进行展开，结果效果都比较好，但石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）展开系统对制何首乌也比较适用，故将石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）这一展开系统收入正文。显色剂曾采用5%的香草醛硫酸为显色剂，但显色后由于硫酸的作用，薄层板面腐
蚀较严重，而采用正文所述显色剂显色后，薄层板面没有太大变化，且斑点能保持较长时间，经试验，重现性良好，且阴性无干扰，故确定这一展开系统。（tlc图谱见图3）丹参的薄层色谱鉴别，曾采用样品加乙醇超声提取后，水浴蒸干水溶解，加酸加热回流水解后，用乙酸乙酯萃取点样，结果在与原儿茶醛相应的位置上显相同颜色的斑点，而与原儿茶酸对照品相应的位置上由于背景干扰严重，不能清晰的检出。后改用制何首乌的供试品溶液，情况没有改善，故只确定原儿茶醛的鉴别展开系统。（tlc图谱见图4）合欢花的薄层色谱鉴别，曾采用石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层液为展开剂，展开晾干后，置紫外光灯（365nm）下检视及喷以5%的香草醛硫酸溶液，在与对照药材色谱相同的位置上均无对应斑点，后以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层液为展开剂，展开，在日光下和紫外光灯（365nm）下检视，斑点分离效果均较好，但由于斑点较多，使整个薄层板面不清楚，喷1%的三氯化铁乙醇溶液，热风吹干后，日光下检视，供试品色谱与对照品色谱均较清晰，且斑点对应，经三批样品试验，重复性良好，且阴性无干扰，故确定这一展开系统。（tlc图谱见图5）曾对方中菊花的薄层色谱进行研究，采用乙酸丁酯-丙酮-甲酸-水（5：1：1：1）、乙酸乙酯-甲酸-水（12：2：3）上层液、乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层液为展开剂，结果斑点分离度均较差；显色剂曾采用１%三氯化铁乙醇溶液和１%三氯化铝乙醇溶液，结果斑点的分离度仍不好，故未采用。
16.曾对方中茯苓的薄层色谱进行研究，将样品加甲醇20ml，超声提取20分钟，蒸干，甲醇溶解点样，以石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层液与甲苯-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果以甲苯-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开后，供试品在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且rf值适中。经与灵芝对照试验，灵芝中也含相同的斑点，故未采用。
17.曾对方中灵芝的薄层色谱进行了研究，采用甲苯-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开后，供试品在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，且rf值适中，但此斑点与茯苓的斑点颜色相同。将茯苓样品与茯苓对照与灵芝样品及灵芝对照点于同一板上，结果四份样品在相应的位置上均显相同颜色的斑点。更换石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层液为展开剂后，四份样品仍然在相应的位置上均显相同颜色的斑点，二者互相干扰，故未采用。
18.曾对方中桑椹的薄层色谱进行研究，取鉴别（1）项下供试品溶液进行点样，以石油醚（30-60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层液为展开剂，展开后，斑点分离较差，后改用甲苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨（2：3：4：0.1）后，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，但经阴性试验有干扰，故未采用。
19.曾对方中百合的薄层色谱进行研究，取鉴别（1）项下供试品溶液进行点样，以甲苯-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，曾采用5%香草醛硫酸、5%磷钼酸无水乙醇溶液显色，结果5%磷钼酸无水乙醇溶液显色后斑点清晰，但有一斑点重叠，后将比例调整为（8：2），斑点分离较好，rf值适中，但经阴性试验，阴性有干扰。又采用gf254板，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯（22：5：6）为展开剂，氨蒸气饱和后展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，阴性仍有干扰，故未采用。
20.经过多年持续不断的试验和研究，在参照现有文献的基础上，实验人员经过无数
次的摸索，对供试品的制备、对照品的处理方法的改良和验证，并对显色剂、展开剂的成分和配比以及对试验温度、湿度等条件进行各种摸索和改进，最终确定下来的多种成分的鉴别方法，由于该中药组合物为大复方制剂，其中的活性成分复杂，相互作用众多，发明人采用的鉴别方法能准确有效的鉴别出该中药组合物中多种药材的成分，且何首乌、丹参、合欢花的鉴别供试品溶液采用了同一种处理方法，节省了时间和步骤，但是专属性极强，达到了非常准确的结果，有效的达到了控制该中药组合物产品质量，提高药品的安全性和可靠性，保障了人民用药安全。
21.【含量测定】制何首乌含量测定对方中制何首乌中的主要有效成分2,3,5,4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷进行了含量测定；在临床研究过程中又对方中水提部分丹参的主要成分丹酚酸b进行了含量测定方法研究，确定了含量测定方法。所定质量标准能够控制成品的质量。
22.何首乌为方中君药。为了有效的控制成品质量，选择2，3，5，4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷作为含量测定指标，采用高效液相色谱法，建立了该中药组合物中2，3，5，4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的含量测定方法。试验结果表明：采用发明人专利的方法测定2，3，5，4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷含量，专属性强、重现性好、分析时间短、结果稳定可靠，能够有效的控制本品的质量。研究过程如下：制何首乌中2,3,5,4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的含量测定：检测波长的选择：对2,3,5,4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品进行光谱检测，光谱图上可见，在320nm和214nm处均有吸收，但在320nm处吸收最大，所以选择320nm为样品的检测波长。
23.流动相的选择：采用乙腈－水（15：85）为流动相，2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷吸收峰的对称性以及与杂质峰的分离度均较好。
24.色谱条件的确定：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相：乙腈－水（15：85）；检测波长：320nm；流速：1ml/min；理论塔板数：按2,3,5,4
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四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
25.供试品溶液的制备：对供试品处理时所采用的提取溶媒和超声时间进行了考察，从而优选出供试品处理的最佳提取方法。
26.专属性试验：阴性试验表明：方中的其它药味不干扰2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的含量测定。
27.线性关系的考察：2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品在98ng～1960ng范围内呈良好线性关系，回归方程为y= 2.7847x 16.0164，r＝0.99999。
28.精密度试验：吸取对照品溶液及供试品溶液，各进样5次，测定峰面积，结果对照品的rsd值为0.14%，样品的rsd值为0.05%。说明仪器性能良好。
29.稳定性试验：在考察的24小时内，对照品的rsd为0.09%，样品的rsd为0.07%。
30.重复性试验：取按实施例1制得的本发明中药组合物，分别取高、中、低三个样品
量，每个样品量3份，按供试品溶液的制备方法，分别进行提取，制备，测定。结果rsd为2.57%，说明方法的重现性良好。
31.回收率试验：采用加样回收试验，取按实施例1制得的本发明中药组合物9份，分为三组，每组三份，按高、中、低三种剂量分别加入2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品溶液，按供试品测定项下方法进行提取，制备，测定，计算回收率。2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的平均回收率100.01%，rsd为1.55%（n＝9）。
32.进行了系统耐用性试验，结果流动相比例发生小的变化，测定的同一份样品含量的rsd为0.63%；柱温发生变化，测定的同一份样品含量的rsd为1.36%；检测波长变化，测定的同一份样品含量的rsd为0.21%；同时，更换不同的色谱柱测定同一份样品，测定的同一份样品含量的rsd为0.96%。说明该检测方法稳定有效。
33.含量数据积累：为了对2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的含量数据进行积累，相继进行了六批中试和八批大生产试验，测定各批样品中2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的含量，结果表明，各批样品中2,3,5,4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷的含量，均符合质量标准草案的规定。
34.丹参中丹酚酸b含量测定：检测波长的选择：对丹酚酸b对照品和按实施例1制得的本发明中药组合物供试品进行光谱扫描，光谱图上可见，在286nm左右均有最大吸收，与中国药典2010年版第二增补本丹参药味项下的检测波长一致，所以选择286nm为样品的检测波长。
35.流动相的选择：采用乙腈－0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相，丹酚酸b吸收峰的对称性以及与杂质峰的分离度均较好。
36.供试品溶液的制备：对供试品处理时所采用的提取溶媒、超声时间及溶媒量进行了考察，从而优选出供试品处理的最佳提取方法。
37.专属性试验：通过对阴性样品、供试品及丹酚酸b对照品按选定条件进行了检测，无干扰。
38.线性关系的考察：丹酚酸b在100.6ng～3018.0ng范围内呈良好线性关系，回归方程为y=1.157887x-31.519614，r＝0.99998。
39.精密度试验：吸取对照品溶液及供试品溶液，各进样5次，测定峰面积，结果对照品的rsd值为0.28%，样品的rsd值为0.29%。说明仪器性能良好。
40.稳定性试验：在考察的24小时内，对照品的rsd为0.79%，样品的rsd为1.26%。
41.重复性试验：取按实施例1制得的本发明中药组合物，分别取高、中、低三个样品量，每个样品量3份，按供试品溶液的制备方法，分别进行提取，制备，测定。结果rsd为0.64%，说明方法的重现性良好。
42.回收率试验：采用加样回收试验，取按实施例1制得的本发明中药组合物9份，分为三组，每组三份，按高、中、低三种剂量分别加入丹酚酸b对照品溶液，按供试品测定项下方法进行提取，制备，测定，计算回收率。丹酚酸b的平均回收率99.80%，rsd为1.74%（n＝9）。
43.进行了系统耐用性试验，结果流动相比例发生小的变化，测定的同一份样品含量的rsd为1.26%；柱温发生变化，测定的同一份样品含量的rsd为2.28%；检测波长变化，测定的同一份样品含量的rsd为0.36%；同时，更换不同的色谱柱测定同一份样品，测定的同一份
样品含量的rsd为1.41%。说明该检测方法稳定有效。
44.质量研究评价以上研究结果表明，质控研究比较充分，检测项目设置合理，方法简便易行，质量标准比较完善，能够有效控制成品质量。
附图说明
45.图1何首乌薄层鉴别色谱图：1、何首乌对照药材 2～4、供试品；图2酸枣仁薄层鉴别色谱图1、酸枣仁皂苷a 2～4、供试品；图3知母薄层鉴别色谱图1、菝葜皂苷元对照品 2～4、供试品；图4合欢花薄层鉴别色谱图1、合欢花对照药材 2 ～4、供试品；图5丹参薄层鉴别色谱图1、原儿茶醛对照品 2～4、供试品。
具体实施方式
46.下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明：实施例1：本发明药物片剂鉴别及含量测定方法何首乌200克
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酸枣仁200克
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桑椹200克
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灵芝100克
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百合100克知母66. 7克
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丹参166.7克
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菊花66.7克
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茯苓100克合欢花200克中药组合物片剂的制备方法为：a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加60%乙醇，加热回流提取2次，第一次加10倍量，提取2小时，第二次加8倍量，提取1小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.10，得醇提浸膏，备用；b) 按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加11倍量水提取2次，每次1.5小时，提取液过滤，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.10，得水提浸膏，备用；c) 按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；d)将步骤c)所得百合细粉加入喷雾干燥制粒机原料容器内，将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏喷入，喷雾制粒，整粒后，加入0.5％硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得。
47.鉴别及含量测定：何首乌鉴别：取本品，除去薄膜衣，研细，称取2g，加甲醇25ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理5分钟，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取供试品溶液8μl，对照药材溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
48.酸枣仁鉴别：取本品，除去薄膜衣，研细，称取4g，加甲醇40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇振摇提取，正丁醇液用氨试液振摇提取，弃去氨试液，再用水洗，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷a对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取供试
品溶液6μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇（1：4）溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
49.知母鉴别：取本品，除去薄膜衣，研细，称取4g，加甲醇30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2mol/l盐酸30ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取，三氯甲烷液挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇（1：4）溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
50.丹参鉴别：取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取〔鉴别〕何首乌项下的供试品溶液5μl及上述对照品溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
51.合欢花鉴别：取合欢花对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取〔鉴别〕何首乌项下的供试品溶液5μl及上述对照药材溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
52.【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）试验。
53.制何首乌 避光操作色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（15：85）为流动相；检测波长为320nm，理论板数按2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
54.对照品溶液的制备 取2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加15%乙腈制成每1ml含20μg的溶液，即得。
55.供试品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60%乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加15%乙腈溶解，并转移至10ml量瓶中，加15%乙腈至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
56.测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
57.本品每片含制何首乌以2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷（c
20h22
o9）计，为1.0mg。
58.丹参色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于3000。
59.对照品溶液的制备 取丹酚酸b对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含
0.1mg的溶液，即得。
60.供试品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加80%甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
61.测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
62.本品每片含丹参以丹酚酸b（c
36h30o16
）计，为2.2mg。
63.实施例2：本发明药物胶囊剂鉴别及含量测定方法实施例2：原料药配方为：何首乌158克
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酸枣仁270克
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桑椹165克
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灵芝135克
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百合80克知母110克
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丹参125克
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菊花118克
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茯苓80克
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合欢花280克。
64.中药组合物胶囊剂的制备方法为：a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加6倍量30%乙醇，加热回流提取3次，每次3小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.15，得醇提浸膏，备用；b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加10倍量水提取3次，每次提取3小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.15，得水提浸膏，备用；c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉干燥制粒，整粒后，加入适当辅料，混匀，填充胶囊，即得。
65.鉴别及含量测定：（1）取本品内容物2g，加甲醇25ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取供试品溶液5μl，对照药材溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
66.（2）取本品内容物4g，加甲醇40ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇振摇提取，正丁醇液用氨试液振摇提取，弃去氨试液，再用水洗，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷a对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇（1：4）溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
67.（3）取本品内容物4g，加甲醇30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2mol/l盐酸30ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取，挥干，残渣加三氯甲烷1ml
使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇（1：4）溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
68.（4）取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取〔鉴别〕何首乌项下的供试品溶液5μl及上述对照品溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
69.（5）取合欢花对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取〔鉴别〕何首乌项下的供试品溶液3μl及上述对照药材溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
70.【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）试验。
71.制何首乌 避光操作色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（15：85）为流动相；检测波长为320nm，理论板数按2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
72.对照品溶液的制备 取2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加15%乙腈制成每1ml含20μg的溶液，即得。
73.供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60%乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz）10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加15%乙腈溶解，并转移至10ml量瓶中，加15%乙腈至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
74.测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
75.本品每粒含制何首乌以2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷（c
20h22
o9）计，为2.0mg。
76.丹参色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于3000。
77.对照品溶液的制备 取丹酚酸b对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
78.供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加80%甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz）30分钟，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
79.测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测
定，即得。
80.本品每粒含丹参以丹酚酸b（c
36h30o16
）计，为2.3mg。
81.实施例3：本发明药物丸剂鉴别及含量测定方法原料药配方为：何首乌265克
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酸枣仁147克
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桑椹250克
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灵芝81克
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百合158克知母55克
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丹参188克
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菊花50克
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茯苓145克
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合欢花170克。
82.中药组合物丸剂的制备方法为：a)按比例称取选净的何首乌、知母及选净粗碎的酸枣仁，加12倍量70%乙醇，加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，合并，减压回收乙醇，浓缩至在60℃测定相对密度为1.12，得醇提浸膏，备用；b)按比例称取选净的桑椹、茯苓、灵芝、丹参、合欢花、菊花，加15倍量水提取2次，每次提取2小时，提取液滤过，合并，浓缩至在60℃测定相对密度约为1.12，得水提浸膏，备用；c)按比例称取选净的百合，粉碎成100目粉，备用；d)将步骤a)所得醇提浸膏和步骤b)的水提浸膏及步骤c)所得百合细粉按照常规方法制成丸剂，即得。
83.鉴别及含量测定：（1）取本品研细，称取2g，加甲醇25ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取供试品溶液4-8μl，对照药材溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
84.（2）取本品研细，称取4g，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱和正丁醇振摇提取，用氨试液振摇提取，弃去氨试液，再用水洗，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷a对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇（1：4）溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
85.（3）取本品研细，称取4g，加甲醇30ml，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加2mol/l盐酸30ml使溶解，加热回流1小时，取出，放冷，用三氯甲烷振摇提取，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取菝葜皂苷元对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚（60-90℃）-正已烷-丙酮（1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸-乙醇（1：4）溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
86.（4）取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取〔鉴别〕何首乌项下的供试品溶液5μl及上述对照品溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。
87.（5）取合欢花对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理，滤过，滤液浓缩至约2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版通则0502）试验，吸取〔鉴别〕何首乌项下的供试品溶液6μl及上述对照药材溶液5μl，点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7：2.5：2.5）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
88.【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）试验。
89.制何首乌 避光操作色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（15：85）为流动相；检测波长为320nm，理论板数按2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷峰计算应不低于3000。
90.对照品溶液的制备 取2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加15%乙腈制成每1ml含20μg的溶液，即得。
91.供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加60%乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40khz）10分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过；精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加15%乙腈溶解，并转移至10ml量瓶中，加15%乙腈至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
92.测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
93.本品每片含制何首乌以2，3，5，4
′-
四羟基二苯乙烯-2-o-β-d-葡萄糖苷（c
20h22
o9）计，为2.2mg。
94.丹参色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）为流动相；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸b峰计算应不低于3000。
95.对照品溶液的制备 取丹酚酸b对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
96.供试品溶液的制备 取本品，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加80%甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
97.测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
98.本品每丸含丹参以丹酚酸b（c
36h30o16
）计，为1.3mg。