一种用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌及其制备方法与流程

技术特征：
1.一种用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌(burkholderia)，命名为伯克霍尔德氏菌jp2-270δ38940，由伯克霍尔德氏菌jp2-270敲除了dm992_38940基因得到，双氢剑兰制霉菌素的化学结构式如式ⅰ所示：2.如权利要求1所述用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌，其特征在于，dm992_38940基因的dna序列如seq id no.1所示。3.如权利要求2所述用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌，其特征在于，将基因序列如seq id no.3所示的插入基因片段38940up和基因序列如seq id no.4所示的插入基因片段38940dw同时连接至制备的线性化pk18mobsacb载体上，制备用于dm992_38940基因敲除质粒pk18-38940，将质粒pk18-38940转入伯克霍尔德氏菌jp2-270感受态细胞，筛选获得用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌，其中质粒pk18-38940的基因序列如seq id no.5所示。4.如权利要求1-3任一项所述用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌在制备双氢剑兰制霉菌素中的应用。5.权利要求1所述用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌的制备方法，其特征在于，将伯克霍尔德氏菌jp2-270中dm992_38940基因敲除，获得用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌。6.如权利要求5所述用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌的制备方法，其特征在于，基因敲除时，将基因序列如seq id no.3所示的插入基因片段38940up和基因序列如seq id no.4所示的插入基因片段38940dw同时连接到制备的线性化pk18mobsacb载体上，制备用于基因敲除的质粒pk18-38940，将质粒pk18-38940转入伯克霍尔德氏菌jp2-270感受态细胞，筛选得到用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌。7.一种用于制备双氢剑兰制霉菌素的方法，其特征在于，发酵培养用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌后，将获得的发酵液采用乙酸乙酯抽提，抽提液进行旋转蒸发并收集沉淀物，沉淀物用甲醇溶液溶解后得到粗提物；粗提物依次经sephadex lh-20色谱柱分离和ods柱纯化得到双氢剑兰制霉菌素。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述粗提物经sephadex lh-20色谱柱分离，用无水甲醇洗脱，得到10个馏分；将第5馏分进一步用ods柱进行纯化，用80％的甲醇洗脱，得到12个馏分，在第5个馏分中得到双氢剑兰制霉菌素。9.一种抗肿瘤化合物，命名为双氢剑兰制霉菌素，其化学结构式如式ⅰ所示：
10.如权利要求9所述的抗肿瘤化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，肿瘤类型为胶质瘤。

技术总结
本发明公开了一种用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌及其制备方法，涉及基因工程和代谢工程领域。所述用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌，命名为伯克霍尔德氏菌JP2-270Δ38940，是将伯克霍尔德氏菌JP2-270中DM992_38940基因敲除，获得用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌。本发明提供的一种用于生产双氢剑兰制霉菌素的伯克霍尔德氏菌产生的双氢剑兰制霉菌素量大，且该双氢剑兰制霉菌素具有更好的抗肿瘤作用，特别是对胶质瘤具有更好的活性，在制备治疗肿瘤疾病药物方面具有潜在价值。方面具有潜在价值。方面具有潜在价值。


技术研发人员：吴丽娟 鄂志国 张治针 王磊 王惠梅
受保护的技术使用者：中国水稻研究所
技术研发日：2021.11.05
技术公布日：2022/1/18