一种治疗犬病毒性肝炎的板蓝根注射液及其制备方法与流程

1.本发明属于中兽药技术领域，具体涉及治疗犬病毒性肝炎的板蓝根注射液及其制备方法。


背景技术：

2.犬病毒性肝炎是由犬1型腺病毒(cav-1)引起的一种犬类传染性疾病，2月龄到1岁幼犬易感染，特别是刚断奶幼犬；该病具有很高的发病率及死亡率，这给养犬行业带来不小的经济损失。病犬主要以发热、和中枢神经系统症状为主，剖检见皮下水肿、肝脏肿大，肝组织镜检可见包涵体。腺病毒主要以肝细胞和血管内皮细胞为靶点，导致受损伤器官出血、坏死和炎症。抗病毒中药可以直接杀死病毒，刺激机体的免疫系统产生细胞因子，通过病毒的免疫细胞识别和吞噬作用以及双向调节人体免疫系统来减少毒素对机体的损害。抗病毒中药具有治疗效果稳定，降低毒副作用，价格低廉等优点，具有独特的优势和广阔的发展前景。
3.板蓝根为十字花科植物菘蓝的干燥根，是清热解毒、凉血利咽的代表性中药；另外，有研究表明板蓝根能够有效抑制多种病毒，具有治疗病毒性肝炎的作用。在兽药领域，目前已有板蓝根颗粒或以板蓝根为主的复方制剂应用于病毒性疾病的防治，但由于口服颗粒或复方制剂存在质量标准不一、气味刺激、患病动物不易服用或使用过程中容易造成浪费的缺点。现有技术中，没有纯度高、药效好、无杂质且易制备的犬用注射剂，相比而言，注射剂具有剂量准确、吸收快、作用迅速的优点。


技术实现要素：

4.本发明拟在中兽医药理论指导下，针对现有技术不足，进一步对板蓝根抗病毒有效部位进行提取，采用更为精细的提取纯化工艺最大限度的保留有效成分，除去有关杂质成分，研制开发了一种高纯度、低成本、质量稳定的用于治疗犬病毒性肝炎的板蓝根注射剂。
5.为实现上述目的，通过以下的技术方案实现：
6.一种治疗犬病毒性肝炎的板蓝根注射液通过以下方式制备：
7.(1)取板蓝根药材，加7～10倍量水，在40～60℃下浸泡4.5-7.5小时，通入蒸汽加热煮沸1-2小时，冷却后再次通入蒸汽煮沸0.5-1.5小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.0～1.1；
8.(2)取上述浓缩液，加乙醇使含醇量达65～70％，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，静置，滤过，得滤液a；
9.(3)取滤液a，加热煮沸0.5-2小时，并补加水至原体积，冷藏，滤过，滤液用氨试液调节ph值至8.0～8.5，冷藏，滤过，得滤液b；
10.(4)取滤液b，过大孔吸附树脂，水洗至无茚三酮反应，收集流出液和水洗液，得洗脱液c；再用醇洗至无色或颜色很浅，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液d；取洗脱液c，过聚
醚砜膜，收集分子量100-10000的部分得滤液e；取浓缩液d，加乙醇，静置，过滤，滤液过脱色树脂，收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，浓缩，得浓缩液f；
11.(5)合并洗脱液e和浓缩液f，减压浓缩，用碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，加入针用活性炭加热，滤过。滤液中加入药用辅料甘露醇及注射用水，用10％碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，冷藏过夜，过滤器过滤。
12.(6)将最后得到的溶液采用无菌灌装技术灌装、封口，灌装入洁净的安瓿中，在4小时内移至检漏灭菌柜中灭菌检漏，灭菌温度为95～110℃，灭菌时间为25～40分钟。
13.所述的板蓝根注射液制备方法，优选为以下步骤：
14.(1)取板蓝根药材，加8倍量水，在50℃下浸泡6小时，通入蒸汽加热煮沸1.5小时，冷却后再次通入蒸汽煮沸1小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.0～1.1；
15.(2)取上述浓缩液，加乙醇使含醇量达65％，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩，冷藏过夜，滤过，得滤液a；
16.(3)取滤液a，加热煮沸1小时，并补加水至原体积，冷藏24小时，滤过，滤液用氨试液调节ph值至8.5，冷藏48小时，滤过，得滤液b；
17.(4)取滤液b，过大孔吸附树脂，水洗2倍树脂床体积至无茚三酮反应，收集流出液和水洗液，得洗脱液c；再用70％醇洗至无色或颜色很浅，约5倍树脂床体积，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液d；取洗脱液c，过聚醚砜膜，收集分子量小于10000的部分得滤液e；取浓缩液d，加3倍量乙醇，静置，过滤，滤液过脱色树脂，收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，浓缩，得浓缩液f；
18.(5)合并洗脱液e和浓缩液f，减压浓缩，用碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，加入0.3～0.5％针用活性炭加热0.5小时，滤过。滤液中加入药用辅料甘露醇及注射用水，用10％碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，冷藏过夜，过滤器过滤。
19.(6)将最后得到的溶液采用无菌灌装技术灌装、封口，灌装入洁净的安瓿中，在4小时内移至检漏灭菌柜中灭菌检漏，灭菌温度为100℃，灭菌时间为30分钟。
20.所述大孔吸附树脂型号优选为d101、d21、ab-8；所述的脱色树脂型号优选为ztc-2，d301。
21.所述的药用辅料优选为氢氧化钠、碳酸钠ph调节剂；氯化钠渗透压调节剂；甘露醇增溶剂及注射用水。
22.所述的蒸馏装置优选为多功能提取罐。
23.所述的过滤器优选为微孔滤膜过滤器，其起泡点压力＞0.34mpa。
24.与现有技术相比，本发明具有以下优势及效果：本发明针对板蓝根抗病毒有效部位进行提取，通过大孔吸附树脂和脱色树脂联合纯化精制，极大限度保留抗病毒有效成分并去除杂质，开发出活性成分含量高临床使用效果更为显著的犬用注射液。另外优化注射液工艺流程使操作简单，可提高生产效率，同时改善了产品易产生沉积的缺点，使药物更易储存并保障药用安全。
具体实施方式
25.为更加清楚地表述本发明，下面对本发明作进一步的描述，以下描述为本发明的较佳实施方式，并不能对本发明的保护范围做任何限制。
26.(1)取板蓝根药材1000g，加8倍量水，在50℃下浸泡6小时，通入蒸汽加热煮沸1.5小时，冷却后再次通入蒸汽煮沸1小时，滤过，滤液浓缩至1000ml；
27.(2)取上述浓缩液，加乙醇使含醇量达65％，搅匀，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至1000ml，冷藏过夜，滤过；
28.(3)取上述滤液，加热煮沸1小时，并补加水至1000ml，冷藏24小时，滤过，滤液用氨试液调节ph值至8.5，冷藏48小时，滤过；
29.(4)取滤液过d101大孔吸附树脂，水洗2倍树脂床体积至无茚三酮反应，收集流出液和水洗液，过聚醚砜膜，收集分子量小于10000的流出液，再用70％醇洗大孔树脂至无色或颜色很浅，约5～6倍树脂床体积，减压回收乙醇至无醇味，浓缩后加3倍量乙醇，静置，过滤，滤液过ztc-2脱色树脂，收集洗脱液，回收乙醇至无醇味，浓缩；
30.(5)将上述洗脱液和浓缩液合并，减压浓缩至950ml，冷藏过滤，滤液用10％碳酸钠溶液调ph值至7.0，加入0.3％针用活性炭，加热0.5小时，滤过；滤液加20g药用辅料甘露醇，并加注射用水至2000ml，用10％碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，冷藏过夜，微孔滤膜过滤。
31.(6)将最后得到的溶液采用无菌灌装技术灌装、封口，灌装入洁净的安瓿中，在4小时内移至检漏灭菌柜中灭菌温度为100℃，灭菌时间为30分钟，检漏即得。
32.治疗犬病毒性肝炎临床试验
33.1.试验材料
34.试验动物及分组：临床上患有病毒性肝炎的病犬45只，将患犬随机分3组，每组15只，即复方板蓝根颗粒组、板蓝根注射剂组和空白对照组。
35.试验药物：(1)复方板蓝根颗粒：板蓝根600g、大青叶900g，加水煎煮后收集滤液，浓缩，3倍量乙醇沉淀，滤液浓缩成稠膏，制成颗粒。(2)板蓝根注射剂：板蓝根药材1000g，蒸汽煮沸，滤过，浓缩，加乙醇使含醇量达65％以上，减压浓缩至1000ml，氨试液调节ph值至8.0～8.5，过大孔吸附树脂，洗脱，过聚醚砜膜，收集分子量100-10000的部分得滤液，减压浓缩至950ml，用碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，滤过。滤液中加入20g甘露醇及注射用水至2000ml，用10％碳酸钠溶液调ph值至7.0～7.5，冷藏过夜，过滤器过滤，灌封，灭菌，即得。
36.2.方法与结果
37.患病毒性肝炎的犬具有以下临床症状：发病初期表现精神沉郁食欲不振，喜饮水。体温升高至40-41c，持续几天后降至常温。有时出现呕吐、咳喘、腹泻粪便中带有黏液及血液。腹痛回头顾腹，眼结膜苍白，有的头颈领下及眼脸出现水肿。在急性症状消失后部分患犬会出现“蓝眼症”；黏膜苍白，口腔糜烂，扁桃体肿大。
38.患病毒性肝炎的犬病理剖检：患犬呈全身败血症变化。皮下水肿，实质器官、浆膜、黏膜上有出血点，腹腔内有大量淡红色积液，肠系膜轻微黄染，淋巴结肿胀出血。肝外观肿大，边缘变钝，质地脆软，有点状出血，呈淡棕色或血红色胆囊壁增厚，水肿，肾肿大。
39.治疗方法：给药方式及给药剂量见表1。
40.表1治疗犬病毒性肝炎的方法
41.疗效判定标准：(1)治愈：犬病毒性肝炎症状完全消失，食欲及饮水恢复正常，病理剖检未见异常；(2)好转：犬病毒性肝炎症状有所好转，食欲及饮水有所恢复，病理剖检较前好转；(3)无效：犬病毒性肝炎症状没有变化，食欲、饮水及病理剖检与治疗前相同。
42.治疗效果统计具体见表2。
43.表2患犬病毒性肝炎治疗结果统计表
44.注：与空白组相比，a、b代表差异极显著(p＜0.01)。
45.由表2可以看出与空白组相比，板蓝根注射剂组和复方板蓝根颗粒组总有效率极显著升高(p＜0.01)，且板蓝根注射剂组总有效率极显著高于板蓝根复方颗粒组总有效率(p＜0.01)。
46.以上试验结果表明，本发明的板蓝根注射剂对犬病毒性肝炎具有良好的治疗效果，可改善病犬呕吐、腹泻、结膜苍白、口腔糜烂等临床症状，且临床治疗效果优于复方板蓝根颗粒。