抗新型冠状病毒的药物的制作方法

1.本发明属于医药领域，具体涉及一种抗新型冠状病毒活性的药物。


背景技术：

2.2019新型冠状病毒是一种rna病毒，可以引起以肺炎为代表的急性呼吸系统综合征，具有极强的传染性。宿主的固有免疫是免疫系统抵抗病原微生物的第一道防线。自然界中病毒是一种能够引起多种疾病的病原体，而抗病毒的固有免疫反应能够诱导宿主细胞产生干扰素来抑制病毒的繁殖和扩增。因此，通过诱导产生干扰素为抗新型冠状病毒治疗提供了一种新思路。
3.目前本领域熟知的技术是，利用大肠杆菌重组表达的干扰素。这种干扰素广泛应用于病毒性感染、炎症、免疫功能障碍等的治疗，但其为蛋白多肽，结构不稳定，不能口服且保存条件要求高。只能依靠注射给药，给药方式单一。另外其半衰期短且高浓度会引起严重的毒副作用。此外，大肠杆菌重组表达的干扰素另一缺点是缺少糖基化修饰，活力受限。而利用真核系统表达纯化的包含糖基化的干扰素成本较高，成药价格贵。
4.综上所述，本领域迫切需要开发能够诱导产生干扰素能力的新药物来治疗、预防、缓解新型冠状病毒感染引起的相关疾病。


技术实现要素：

5.本发明的目的就是提供一种能够诱导产生干扰素的新药物，并应用于治疗、预防、缓解新型冠状病毒感染引起的相关疾病。
6.在本发明的第一方面，提供了一种活性成分，或含所述活性成分的制剂的用途，所述活性成分为式i所示的化合物或其药学上可接受的盐：
[0007][0008]
式中，
[0009]
环a选自下组：c
6-10
芳环、5至10元杂芳环；
[0010]
环b选自下组：c
6-10
芳环、5至10元杂芳环；
[0011]
r1选自下组：c(r
11
)、和n；
[0012]r11
选自下组：h、和c
1-6
烷基；
[0013]
r2为-w-(r
l
)
m-n(r
21
)2或-w-(r
l
)
m-c(r
22
)3；
[0014]
其中，
[0015]
w选自下组：无、-n(r
23
)-、和-c(r
24
)
2-；
[0016]rl
各自独立地为-c(r
25
)
2-；
[0017]
m＝2、3、4、5、6、7或8；
[0018]r21
各自独立地选自下组：h、和c
1-6
烷基；或者两个r
21
以及与其相连的n原子共同构成5至10元杂环烷基或5至10元杂芳基；
[0019]r22
各自独立地选自下组：h、和c
1-6
烷基；或者两个r
22
以及与其相连的c原子共同构成c
4-10
环烷基、c
6-10
芳基、5至10元杂环烷基或5至10元杂芳基；
[0020]r23
、r
24
和r
25
各自独立地选自下组：h、和c
1-4
烷基；
[0021]
r3选自下组：h、-oh、-o-c
1-6
烷基、-s-c
1-6
烷基、和-oc(o)-c
1-6
烷基；
[0022]
r4选自下组：h、卤素、和c
1-6
烷基；
[0023]
除非特别说明，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基还能任选地被一个或多个r取代；其中，r各自独立地选自下组；卤素、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、和c
3-6
环烷基；
[0024]
并且，所述活性成分或制剂用于制备治疗和/或预防和/或缓解由新型冠状病毒引起的相关疾病的药物。
[0025]
在另一优选例中，环a和环b中，所述5至10元杂芳基含1或2个选自o、n和s的杂原子。
[0026]
在另一优选例中，环a为c
6-10
芳基；较佳地，为苯基。
[0027]
在另一优选例中，环b为c
6-10
芳基；较佳地，为苯基。
[0028]
在另一优选例中，r1为n。
[0029]
在另一优选例中，r2为-w-(r
l
)
m-n(r
21
)2。
[0030]
在另一优选例中，r2为-w-(r
l
)
m-n(r
21
)2；其中，w为-n(r
23
)-，其余基团如前定义。
[0031]
在另一优选例中，r2为-w-(r
l
)
m-n(r
21
)2；
[0032]
其中，w为-nh-；
[0033]rl
各自独立地选自下组：-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch(ch3)
2-、-ch(ch2ch3)-；
[0034]
m＝3、4、或5；和
[0035]r21
各自独立地为c
1-6
烷基(较佳地，甲基、乙基、丙基)；或者两个r
21
以及与其相连的n原子共同构成5、6或7元杂环烷基(较佳地，所述杂环烷基除n以外不含其它的杂原子)。
[0036]
在另一优选例中，r2为-w-(r
l
)
m-n(r
21
)2；
[0037]
其中，
[0038]
w为-nh-；
[0039]rl
各自独立地选自下组：-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch(ch3)
2-、-ch(ch2ch3)-；
[0040]
m＝3、4、或5；和
[0041]r21
各自独立地为c
1-6
烷基(较佳地，r
21
为c
1-4
烷基；更佳地，r
21
各自独立地选自下组：甲基、乙基、和丙基)。
[0042]
在另一优选例中，r
21
是相同或不同的基团。
[0043]
在另一优选例中，r2为-nh-ch(ch3)-(ch2)
3-n(ch2ch3)2。
[0044]
在另一优选例中，r3选自下组：-oh、-o-c
1-6
烷基；较佳地，r3选自下组：-oh、-o-c
1-4
烷基；更佳地，r3为-och3。
[0045]
在另一优选例中，r4选自下组：h、f、cl、br、甲基、和乙基。
[0046]
在另一优选例中，r4为卤素；较佳地，r4选自下组：f、cl和br。
[0047]
在另一优选例中，r各自独立地选自下组；f、cl、br、甲基、乙基、和环丙基。
[0048]
在另一优选例中，式i所示的化合物的其药学上可接受的盐是式i化合物的盐酸盐。
[0049]
在另一优选例中，所述式i化合物如式ii所示：
[0050][0051]
其中，r1、r2、r3和r4的定义同式i中定义。
[0052]
在另一优选例中，所述的式i化合物为如式iii所示；
[0053][0054]
其中，
[0055]
r1选自下组：ch、和n；
[0056]
r2为-w-(r
l
)
m-n(r
21
)2；
[0057]
其中，
[0058]
w为-nh-；
[0059]rl
各自独立地选自下组：-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch(ch3)
2-、-ch(ch2ch3)-；
[0060]
m＝3、4或5；
[0061]r21
各自独立地选自下组：h、和c
1-6
烷基；或者两个r
21
以及与其相连的n原子或者两个r
21
以及与其相连的n原子共同构成5、6或7元杂环烷基；并且
[0062]
所述杂环烷基除n原子以外不含其它的杂原子；
[0063]
r3选自下组：-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0064]
r4选自下组：h、f、cl、br、甲基、和乙基；
[0065]
除非特别说明，所述烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基还能任选地被一个或多个r取代；其中，r各自独立地选自下组；f、cl、br、甲基、乙基、和环丙基。
[0066]
在另一优选例中，所述的式i化合物为如式iv所示的化合物；
[0067][0068]
在另一优选例中，所述的式i化合物的药学上可接受的盐为如式iv-a所示的化合物；
[0069][0070]
在另一优选例中，所述制剂为口服制剂和非口服制剂。
[0071]
在另一优选例中，所述制剂包括：粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、酊剂、口服液、片剂、含片、或滴丸。
[0072]
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：
[0073]
(a1)作为第一活性成分的式i化合物，或其药学上可接受的盐；
[0074]
(a2)选自下组的第二活性成分：i型干扰素调节剂、抗病毒剂、或其组合；
[0075]
和(b)药学上可接受的载体；
[0076]
其中，所述式i化合物如第一方面中定义。
[0077]
在本发明的第三方面，提供了一种如第二方面所述的药物组合物的用途，所述药物组合物用于制备预防和/或缓解和/或治疗由新型冠状病毒引起的相关疾病的药物。
[0078]
在本发明的第四方面，提供了一种诱导对象产生i型干扰素的方法，所述的方法包括步骤：使对象与式i化合物接触，从而诱导所述对象产生i型干扰素；其中，所述式i化合物如第一方面定义。
[0079]
在另一优选例中，所述的对象是细胞。
[0080]
在另一优选例中，所述的细胞包括：vero细胞、thp-1细胞、hek293细胞、hek293t细胞、和/或a549细胞。
[0081]
在另一优选例中，所述的方法是体外非治疗性非诊断性的。
[0082]
在另一优选例中，所述的方法包括步骤：在含式i化合物的体系中培育所述对象，从而诱导所述对象产生干扰素。
[0083]
在另一优选例中，所述含式i化合物的体系中，式i化合物的浓度≥1μm；较佳地，≥3μm。
[0084]
在另一优选例中，培育时间为10min～48h。
[0085]
在另一优选例中，所述的i型干扰素包括(但不限于)ifnβ。
[0086]
在本发明的第五方面，提供了一种抑制新型冠状病毒感染的方法，其中，包括步骤：使对象与第一方面所述的式i化合物接触，从而抑制新型冠状病毒对所述对象的感染。
[0087]
在另一优选例中，所述的对象是细胞。
[0088]
在另一优选例中，所述的细胞包括：vero细胞、thp-1细胞、hek293细胞、hek293t细胞、和/或a549细胞。
[0089]
在另一优选例中，所述的方法是体外非治疗性非诊断性的。
[0090]
在另一优选例中，所述的方法包括步骤：在含式i化合物的体系中培育所述对象，从而诱导所述对象产生干扰素。
[0091]
在本发明的第六方面，提供了一种提高体内i型干扰素水平的方法，所述的方法包
括步骤：向需要的对象施用有效量的式i化合物，或其药学上可接受的盐；其中，所述式i化合物如第一方面中定义。
[0092]
在另一优选例中，所述的对象是哺乳动物；较佳地，选自下组：人、小鼠、和大鼠。
[0093]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0094]
图1显示了hek293细胞在用不同浓度的麦帕克林处理12小时后，ifn-β、tnf-α和il-6的mrna转录情况。
[0095]
图2显示了hek293t细胞在不同浓度的麦帕克林处理12小时后，ifn-β、tnf-α和il-6的mrna转录情况。
[0096]
图3显示了thp-1细胞在不同浓度的麦帕克林处理12小时后，ifn-β、tnf-α和il-6的mrna转录情况。
[0097]
图4显示了a549细胞在不同浓度的麦帕克林处理12小时后，ifn-β、tnf-α和il-6的mrna转录情况。
[0098]
图5显示了a549细胞在不同浓度的麦帕克林处理12小时后，在培养基上清中检测到ifn-β、tnf-α和il-6蛋白含量。
[0099]
图6显示了vero细胞在不同浓度的麦帕克林和sars-cov-2(moi＝0.01)处理24小时后，病毒的核衣壳蛋白(np)表达情况(比例尺＝500μm)。图中分别显示了相差显微镜的观察结果(dic)、病毒感染情况(np)、细胞核的染色情况(hoechst)。
[0100]
图7显示了麦帕克林对sars-cov-2的抑制曲线
具体实施方式
[0101]
本发明人经过广泛而深入地研究，意外地发现了本发明的化合物在抗新型冠状病毒中的应用，在此基础上完成了本发明。
[0102]
具体地，本发明发现麦帕克林(mepacrine)能够诱导不同的细胞表达或产生i型干扰素ifnβ，从而抑制新型冠状病毒的复制。此外，发明人还经实验证明麦帕克林对新型冠状病毒抑制作用和麦帕克林剂量相关。因此本发明的活性成分能够很好地预防、治疗、缓解由在临床治疗中具有潜在的抗新型冠状病毒作用的新药物，有很好的临床应用前景。
[0103]
术语
[0104]
如本文所用，“c
1-6
烷基”，本身或作为其他基团的一部分(如-o-c
1-6
烷基中的c
1-6
烷基)，是指包括1-6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基(如正丙基、异丙基)、丁基(如正丁基、异丁基、叔丁基)、或类似基团。应当理解，除非特别说明，烷基应包括其所有可能存在的所有异构形式，如“丙基”包括正丙基和异丙基。类似地，“c
1-4
烷基”是指包括1-4个碳原子的直链或支链的烷基。
[0105]
如本文所用，术语“环烷基”是指具有指定环原子数(例如，c
3-10
环烷基)并且完全饱和的或在环顶之间具有不超过一个双键的烃环。“环烷基”也指双环和多环烃环。术语“杂环烷基”是指具有指定环原子数(例如，5至10元杂环烷)，且含有1至5个(如1、2或3个，较佳
地，1或2个)选自n、o和s的杂原子作为环原子的环烷基，其中氮和硫原子任选被氧化，且氮原子任选被季铵化。杂环烷基可以是单环、双环或多环体系。杂环烷基可以经环碳或杂原子连接于分子的其余部分。优选地，环烷基或杂环烷基是饱和的。
[0106]
除非另有表述，术语“卤代”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴、或碘原子。此外，诸如“卤代烷基”等术语表示包括单卤代烷基或多卤代烷基。例如，术语“c
1-4
卤代烷基”表示包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
[0107]
除非另有表述，术语“芳基”或“芳环”是指多不饱和的(通常芳香性)的烃基或烃环，其可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(最多二环)。术语"杂芳基"是指含有1至5个(较佳地，1、2或3个)选自n、o和s的杂原子作为环原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，氮原子任选被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接于分子的其余部分。芳基的非限制性例子包括苯基，而杂芳基的非限制性例子包括吡啶基等。
[0108]
对于本文提供的化合物，从取代基(通常为r基团)到环(例如环苯，苯基等)的中心的键将被理解为是指在环上的任何可用顶点提供连接的键。
[0109]
在本文中，除非特别说明，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、未取代或卤代的c
1-6
烷基。
[0110]
如本文所用，术语“含有”、“包含”或“包括”表示各种成分可一起应用于本发明的混合物或组合物中。因此，术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。
[0111]
如本文所用，术语“选择指数”可以用于判断药物效果的安全范围，选择指数大于1.00以上为有效，指数越大安全范围越大。
[0112]
固有免疫
[0113]
宿主的固有免疫是免疫系统抵抗病原微生物的第一道防线。自然界中病毒是一种能够引起多种疾病的病原体，而抗病毒的固有免疫反应能够诱导宿主细胞产生干扰素来抑制病毒的繁殖和扩增。抗病毒固有免疫反应由信号转导通路来介导，前期有关研究揭示了固有免疫系统如何识别病毒入侵进而迅速地触发免疫防御功能，从而有效地清除病毒感染。这是生命科学与医学领域中的重要研究，在分子水平上研究这类课题会为相关药物的设计提供理论依据，为病毒感染的防治带来新的希望。宿主细胞识别病原微生物后通过固有免疫信号通路转导产生干扰素、促炎因子以及细胞趋化因子，这些效应因子一方面可以抑制病原体复制，从而起到快速控制病原体增殖的作用；另一方面这些细胞因子可以动员宿主的其他免疫细胞包括适应性免疫系统中的抗原呈递细胞及t、b淋巴细胞，激活适应性免疫。除此之外，固有免疫反应的诱导激活还具有抗肿瘤的作用，它能够强化放疗和化疗的效果。
[0114]
固有免疫信号通路起始于宿主细胞的模式识别受体对病原微生物的相关分子模式的识别。目前已经发现的与病毒感染相关的固有免疫信号通路主要包括细胞质中识别rna病毒的rlrs-mavs信号通路和识别dna病毒的cgas-sting信号通路，以及tlrs信号通路。rlrs和cgas这两条信号通路激活后都通过下游的转导蛋白招募并激活tbk1，激活的tbk1使转录因子irf3发生磷酸化入核诱导i型干扰素的产生，最终达到抑制病毒的效果。在长期进化过程中，有些病毒也获得了一些逃逸固有免疫反应的机制。
[0115]
由于固有免疫在机体生命活动的各个环节都扮演着重要的角色，固有免疫对于疫苗的研制和药物的开发都具有重要的指导意义。
[0116]
活性成分
[0117]
如本文所用，术语“本发明化合物”、“本发明的活性成分”、可以互换使用，均指式i所示的化合物。该术语还包括式i化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、异构体、水合物、溶剂合物或前药。
[0118]
其中，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐(例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐(例如镁盐或钙盐)、铵盐(如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。
[0119]
如本文所用，术语“溶剂合物”指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
[0120]
如本文所用，术语“前药”包括其本身可以是具有生物学活性的或非活性的前药，当用适当的方法服用后，其在人体内进行代谢或化学反应而转变成式i的一类化合物，或式i的一个化合物所组成的盐或溶液。所述的前药包括(但不局限于)所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、砜酯、亚砜酯、氨基化合物、氨基甲酸盐、偶氮化合物、磷酰胺、葡萄糖苷、醚、乙缩醛等形式。
[0121]
在一个具体实施例中，本发明的化合物为麦帕克林(mepacrine)。
[0122]
在本文中，麦帕克林(mepacrine)又称quinacrine或者阿的平，是一种广泛应用于疟疾防治，对条虫病、阿米巴痢疾、梨形(虫便)虫病、阴道滴虫病，以及红斑狼疮和类风湿性关节炎等方面有应用疗效的药物，其结构如式iv-a所示(盐酸盐形式)：
[0123][0124]
药物组合物和施用方法
[0125]
由于本发明化合物具有优异的诱导i型干扰素产生的能力，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解新型冠状病毒感染。
[0126]
如本文所用，术语“诱导产生干扰素”、“诱导产生i型干扰素”、“诱导i型干扰素的产生”或“诱导干扰素的产生”可以互换使用，意在包括：提升i型干扰素或与i型干扰素相关的蛋白、细胞因子等的表达、转录或蛋白含量水平等。
[0127]
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-500mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
[0128]“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0129]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
[0130]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0131]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0132]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0133]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
[0134]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0135]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0136]
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。
活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
[0137]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0138]
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0139]
本发明的主要优点包括：
[0140]
(a)麦帕克林(mepacrine)表现出优异的诱导干扰素(如ifnβ)表达的能力。
[0141]
(b)麦帕克林(mepacrine)具有优异的抑制新型冠状病毒感染能力以及抗病毒活性。
[0142]
(c)麦帕克林(mepacrine)具有极低的细胞毒性。
[0143]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如sambrook等人，分子克隆：实验室手册(new york:cold spring harbor laboratory press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0144]
1.材料和试剂
[0145]
dmem及rpmi 1640培养基购于hyclone公司，胎牛血清(fbs)购于excell公司，qpcr试剂盒购于tiangen公司，cell-titer-glo试剂盒购于promega公司。兔来源的抗rp3-cov n蛋白的多克隆抗体来自中国科学院武汉病毒所张磊柯博士。羊来源的抗兔免疫球蛋白荧光素488偶联抗体购于abcam公司。麦帕克林从中国科学院分子细胞科学卓越创新中心化学平台申领。
[0146]
2.细胞培养
[0147]
所用hek293购于atcc。所用hek293t细胞系，thp-1细胞系，a549细胞系购于上海生科院细胞库，vero细胞系。单细胞层在37℃和5％co2培养箱中培养，细胞生长在含10％fbs及100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的dmem培养基中。thp-1细胞生长在含10％fbs及100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的1640培养基中。
[0148]
实施例1
[0149]
1.1干扰素表达实验
[0150]
将处于对数生长期的hek293、hek293t、thp-1及a549等多种细胞分别传入12孔细胞培养板，每孔的细胞量为5
×
105，待细胞贴壁6小时后，将细胞培养上清分别换置成含有终浓度为1μm，3μm和10μm麦帕克林的培养基，并继续培养12小时，最终收集细胞，提取细胞总rna。
[0151]
接着利用qpcr检测hek293、hek293t、thp-1及a549等多种细胞在药物处理下诱导ifnβmrna的表达情况，结果如图1，图2，图3，和图4所示.
[0152]
可见麦帕克林可以诱导细胞的ifnβ转录水平升高。而在hek293和hek293t细胞中il-6和tnfα的转录水平没有十分明显的升高。
[0153]
1.2干扰素浓度实验
[0154]
我们将处于对数生长期的hek293、hek293t、thp-1及a549等多种细胞分别传入12孔细胞培养板，每孔的细胞量为5
×
105，待细胞贴壁6小时后，将细胞培养上清分别换置成含有终浓度为1μm，3μm和10μm麦帕克林的培养基，并继续培养12小时，最终收集细胞培养上清。
[0155]
利用elisa检测细胞培养上清中的ifnβ，tnfα以及il-6的含量，结果如图5所示，由图中可以看出麦帕克林可以诱导a549细胞分泌ifnβ。
[0156]
实施例2本发明化合物对抑制新型冠状病毒sars-cov-2感染的作用
[0157]
2.1sars-cov-2染色实验
[0158]
本实施例中选用sars-cov-2，并利用免疫荧光技术和qpcr技术分别指示病毒的增殖和载量。
[0159]
将处于对数生长期的vero细胞分别传入12孔细胞培养板，每孔的细胞量为2
×
105，待细胞贴壁6小时后，将细胞培养上清分别换置成含有不同终浓度的麦帕克林(或dmso)和滴度为0.01的sars-cov-2的培养基，并继续培养24小时。此时，弃去细胞培养上清，并将细胞固定后，利用hoechst(一种染细胞核的荧光染料)染细胞核，利用偶联绿色荧光素的抗sars-cov-2核衣壳蛋白(n)的抗体标记病毒颗粒，并置于荧光显微镜下观察绿色荧光情况和细胞核染色情况(细胞核也使用荧光显微镜成像)。结果如图6所示。
[0160]
由图6可以看出，发现药物处理组与对照组即dmso处理组相比，sars-cov-2病毒表达的np的信号明显减弱，表明sars-cov-2感染受到抑制。并且，这种抑制作用随着药物浓度升高而增强。
[0161]
2.2抑制sars-cov-2曲线
[0162]
在sars-cov-2感染vero细胞条件下，用不同浓度麦帕克林处理后，根据病毒受到抑制的程度计算出了麦帕克林对sars-cov-2感染抑制作用的ec
50
(半数有效浓度)为0.76μm，si(选择指数)为134.2(图7)。可见，麦帕克林在极小的浓度下就可以一直sars-cov-2的复制。而麦帕克林对细胞的毒性cc
50
值为102μm，这表明麦帕克林具有安全性。综上所述，麦帕克林具有很好的药用前景。
[0163]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。