用于预防、管理或治疗偏头痛相关症状的人乳寡糖及其组合物的制作方法

1.本发明涉及一种用于预防、管理和/或治疗人的选定形式的偏头痛和偏头痛相关症状的方法、化合物和组合物。


背景技术：

2.偏头痛是常见的神经系统病状，其特征为与恶心、呕吐以及对视觉、听觉和嗅觉刺激的超敏反应(hypersensitivity)相关联的疼痛性头痛。偏头痛发作可以导致数小时至数天的剧烈疼痛，并且可以严重到疼痛致残。在头痛之前或伴有头痛可以发生被称为先兆的症状。这些可一包括闪光、盲点或者面部一侧或手臂或腿部有刺痛感。
3.偏头痛在全世界的患病率为约10％，然而，在美国略高一些(约12％)。全球疾病负担研究将偏头痛列为289种疾病当中第七大最常见的致残病理。与男性相比，女性经历偏头痛的比率更高(1-17％)。偏头痛患者常常经历工作效率和功能的大幅降低。这导致患者的生活质量降低，并且包括给个人和雇主带来沉重的经济负担。保守估计美国每年与偏头痛相关的费用估计为780亿美元(thompson等人,《临床药学和治疗学杂志(j.clin.pharm.ther.)》42,394(2017))。
4.偏头痛是神经血管病症，其涉及皮质扩散抑制、神经源性炎症和颅内血管收缩功能障碍。某些诱因可以激发偏头痛发作。这些包括荷尔蒙改变、情绪诱因、身体原因(如剧烈的体力消耗)、饮食因素(例如酒精、咖啡因、亚硝酸盐)、药物和环境诱因，例如强光、强烈气味或响亮声音。
5.偏头痛的另一种形式是腹型偏头痛(abdominal migraine)。这是一种主要发生在儿童身上、但还可以发生在成人身上的偏头痛的形式。症状主要为腹痛，伴有食欲不振、恶心、呕吐和脸色苍白中的一种或多种。与腹型偏头痛相关联的疼痛一般位于腹部中部。发作通常持续1至72小时。腹型偏头痛是可以与偏头痛相关联的发作性综合征。患有腹型偏头痛的儿童通常在其十几岁时就不再有这种症状。然而，他们然后经常发生偏头痛。
6.各种形式偏头痛的确切机制仍未完全了解，完整的预防性和攻击性疗法仍不可用。据信偏头痛发作的基本机制涉及三叉神经血管系统的激活。通过触发机制，发生硬脑膜和软脑膜血管的血管舒张，这可以刺激血管周围的三叉神经初级神经末梢。激活的伤害感受器在周围释放神经肽，包括降钙素生成的肽、p物质和神经激肽a。这些物质引起三叉神经的炎症。当炎症和血管相互作用时，血管扩张，导致疼痛。大脑本身不含对疼痛敏感的神经元。当压力激活覆盖大脑的组织中或者面部、颈部和头皮周围的肌肉和血管中的对疼痛敏感的神经时，就产生疼痛。
7.与腹型偏头痛相关联的机制尚未知晓。然而，据信肠粘膜内免疫和神经元结构的遗传影响和差异可能是潜在的基础生理机制。另外，已经观察到患有腹型偏头痛的患者和对照组之间肠道粘膜通透性的显著差异。另外，据信可能涉及响应于肠道、脊髓或高级皮质系统水平上的神经生理学异常的内脏对膨胀的超敏反应。这可能是由于应激刺激中枢神经
系统，并通过神经肽和神经递质释放的失调对胃肠道系统产生异常影响。
8.谷氨酸是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，在初级传入神经传递和伤害感受中起到重要作用。大量的人和动物研究表明，谷氨酸和谷氨酸能系统在偏头痛中过度活跃。谷氨酸盐是非必需氨基酸谷氨酸的离子形式，它几乎使每个神经元兴奋，从而促进初级神经传递和痛觉。作为神经递质，谷氨酸通过线粒体酶谷氨酰胺酶由谷氨酰胺合成，并储存在突触囊泡中。在神经传递期间，它从储存库中释放至突触间隙，并由突触前谷氨酸转运体和位于邻近神经胶质细胞上的转运体清除。
9.谷氨酸受体还发现于三叉神经系统中。主要的谷氨酸促离子型受体中的一种是n-甲基-d-天冬氨酸(nmda)。nmda被谷氨酸激活引起细胞结构和dna的损伤，导致神经元细胞死亡，并且谷氨酸兴奋性毒性与nmda受体的超兴奋性相关，该超兴奋性在偏头痛的病理生理中起到关键作用。nmda受犬尿氨酸(kynurenine)途径代谢物的激活或抑制。
10.色氨酸沿犬尿氨酸和血清素途径代谢，从而导致犬尿氨酸代谢物，以及神经活性血清素和褪黑素的形成。两种途径降解色氨酸的能力不相等，其中95％的色氨酸被犬尿氨酸途径分解代谢，5％被血清素途径分解代谢。在犬尿氨酸途径中，色氨酸通过作为犬尿氨酸途径限速酶并且通过细胞因子tnf-α和ifn-γ调节的色氨酸2,3-双加氧酶和吲哚胺2,3-双加氧酶(ido)转化为n-甲酰基-l-犬尿氨酸。n-甲酰基-l-犬尿氨酸可以进一步代谢为l-犬尿氨酸(l-kyn)，其为犬尿酸(kyna)的前体。l-kyn还可以降解为邻氨基苯甲酸或3-羟基-l-犬尿氨酸。邻氨基苯甲酸和3-羟基-l-犬尿氨酸则进一步转化为3-羟基邻氨基苯甲酸，其代谢为喹啉酸。在犬尿氨酸途径代谢物当中，许多化合物具有生物活性。3-羟基-l-犬尿氨酸和3-羟基邻氨基苯甲酸能够增加自由基的形成，从而产生氧化应激。相反，kyna具有神经保护功能，因为它充当nmda的拮抗剂。
11.在血清素途径中，色氨酸通过色氨酸羟化酶转化为5-羟基色氨酸。5-羟基色氨酸则可以代谢为血清素，其可以通过血清素n-乙酰基转移酶进一步代谢为褪黑素。褪黑素在色氨酸代谢中具有非常重要的作用，因为它影响两条途径的两种关键酶；ido和血清素n-乙酰基转移酶。褪黑素经显示诱导ido的表达，而降低血清素n-乙酰基转移酶的表达。
12.据报道，偏头痛患者体内存在犬尿氨酸和血清素途径的异常。与对照组相比，已在患有偏头痛的患者体内测量到血清素和褪黑素水平较低，并且研究示出，慢性偏头痛患者的邻氨基苯甲酸惊人地升高，所有其它犬尿氨酸尤其是kyna下降。kyna水平的降低可以导致nmda的过度激活，血清素水平低可以导致褪黑素水平较低，这再次可以导致犬尿氨酸代谢物的失衡。这些事件导致偏头痛。此外，色氨酸的消耗已示出增加偏头痛患者的恶心、头痛和畏光(drummond,《头痛杂志(cephalalgia)》26,1225(2006)；curto等人,《头痛与疼痛杂志(j.headache pain)》17:47(2016))。这表明患有偏头痛的患者中色氨酸的水平和分解代谢失调。
13.由于色氨酸是必需氨基酸，估计膳食需要量为5mg/kg/天，它是几乎所有蛋白质来源中的限制性氨基酸，因此膳食来源的色氨酸可能不足以获得调节的犬尿氨酸和血清素途径。
14.必需维生素例如核黄素、叶酸和磷酸吡哆醛的水平对于针对神经毒性的保护也非常重要。这三种b-维生素可以通过缓解氧化应激、线粒体功能障碍、神经源性炎症和谷氨酸兴奋性毒性发挥作用，并且它们在色氨酸-犬尿氨酸途径中发挥关键作用。因此，维生素b不
足可以导致严重的神经后果。考虑到10-15％的全球人口的维生素吸收和利用受到限制，长期维生素不足可以导致多种神经病症例如偏头痛的发展。尽管b-维生素作为补充剂存在，并且存在于多种食品中，但仍然出现缺乏，主要是由于生物利用度低，以及食品摄入不足和饮食不均衡而导致的营养不良。维生素b补充剂已用于偏头痛疗法的治疗，然而，由于维生素恒定的生物利用度，通过肠道细菌进行原位强化似乎是更好的选择。
15.越来越多的证据表明，肠道微生物群在神经炎性病症的产生中起关键作用。肠道微生物群由庞大的细菌群落组成，主要居住于结肠中并且与宿主以共生关系生活。人胃肠道微生物群包括至少1000种不同物种的细菌，它们共同构成10
14
个细菌细胞，是人细胞数量的十倍，并且它们编码比人基因组多100倍的独特基因(qin等人,《自然(nature)》464,59(2010))。肠道细菌可以通过迷走感觉神经与中枢神经系统直接通信。迷走感觉神经是通过大脑和胃肠(gi)道之间的双向通信进行的神经-免疫和脑-肠轴的关键组成部分。
16.已经报道在偏头痛与一系列炎性病症例如哮喘、肥胖、代谢综合征、过敏和gi病症例如肠易激综合征和乳糜泻之间存在显著关联。已经在两个方向上发现这些关联：与健康对照组相比，偏头痛患者更常患有gi病症，并且与对照组相比，患有gi病症的患者更常患有偏头痛。这指示肠道和偏头痛之间存在显著关联。这些关联可通过肠道微生物群的改变、炎性免疫反应和肠道通透性增加来解释，所有这些都已在gi病症中发现。在偏头痛患者和患有gi病症的人中观察到肠道微生物群的改变。这可以导致肠道通透性增加。通透性受损使不易消化的食品颗粒和细菌成分如脂多糖(lps)泄漏到血流中。血流中lps和有害代谢物的存在可以影响血-脑屏障。血-脑屏障的破坏可以导致神经炎症并且引发激发偏头痛的反应(lankarani等人,《中东消化病杂志(middle east j.dig.dis.)》9,139(2017))。此外，γ-氨基丁酸(gaba)是可以由肠道细菌产生和破坏的有效的抑制性神经递质。因此，gaba代谢的失衡可以与偏头痛发作的发生和频率相关。
17.目前，偏头痛还没有治愈的方法。典型地，使用缓解疼痛的药物例如阿司匹林、布洛芬和曲普坦来治疗疼痛。通常，这些药物仅对轻度偏头痛有用，或者具有显著的副作用，例如恶心、眩晕、嗜睡、肌无力、中风和心脏病发作。用于偏头痛的预防性药物是可用的，但目前可用的预防性药物均不能完全停止头痛，并且具有严重的副作用。通常，这些药物被开发用于其它目的，例如抗抑郁药、抗癫痫药等。腹型偏头痛没有预防性药物。
18.此外，在偏头痛的发作中疼痛消退后，许多患者出现后发作期(postdrome)症状，例如疲劳、身体疼痛、注意力不集中、眩晕和对光敏感。这些后发作期症状可以持续数小时至数天。后发作期症状尚未知原因。然而，据信在偏头痛发作的疼痛阶段期间发生的活动和血流的深刻改变可以在发作后持续存在，并导致后发作期症状。后发作期症状的建议治疗包括喝大量的水，并且休息或进行平复性(calming)活动。
19.wo 2017/198276描述使用人乳寡糖预防或治疗人的血清素和/或色氨酸失调，特别是用于改善肠道运动性的合成组合物和方法。提到的病状为抑郁、焦虑、愤怒、对疼痛异常敏感、嗜糖癖和暴饮暴食、便秘、消化系统病症、因缺乏阳光而感到忧郁、感觉过度依赖他人、感觉不知所措(feeling overwhelmed)、过度警觉、失眠、不快乐、自卑、偏头痛、认知功能差和耳鸣。
20.目前尚没有有效的、副作用有限的用于预防、管理或治疗偏头痛和/或腹型偏头痛的后发作期症状的有效干预措施；尤其是对儿童来说。因此，非常需要有效、安全并且耐受
性良好的用于预防、管理或治疗人的偏头痛和/或腹型偏头痛的后发作期症状的方法和化合物。


技术实现要素：

21.本发明的第一方面涉及一种人乳寡糖(hmo)，其用于以下用途：
22.预防、管理或治疗人的偏头痛的后发作期症状，
23.预防、管理或治疗人的腹型偏头痛，和/或
24.高风险人患者的应激和/或焦虑诱发的偏头痛的二级预防。
25.本发明的第二方面涉及一种合成组合物，其用于以下用途：
26.预防、管理或治疗人的偏头痛的后发作期症状，
27.预防、管理或治疗人的腹型偏头痛，和/或
28.高风险人患者的应激和/或焦虑诱发的偏头痛的二级预防，
29.组合物包括至少一种人乳寡糖(hmo)。
30.优选地，合成组合物含有1g至15g、更优选2g至10g的量的hmo。例如，合成组合物可以含有3g至7g的hmo。
31.合成组合物可以含有双歧杆菌；例如长双歧杆菌(bifidobacterium longum)和/或两歧双歧杆菌(bifidobacterium bifidum)。合成组合物还可以包括镁源、维生素b源、褪黑素、辅酶q10和/或ω-3长链脂肪酸。例如，合成组合物可以包括维生素b源和/或ω-3长链脂肪酸。
32.本发明的第三方面涉及一种用于预防、管理或治疗人的偏头痛的后发作期症状的方法，该方法包括向人施用有效量的至少一种人乳寡糖(hmo)。
33.优选地，后发作期症状为疲劳、身体疼痛、注意力不集中、眩晕和对光敏感中的一种或多种。更优选地，疲劳得以减轻。
34.本发明的第四方面涉及一种用于预防、管理或治疗人的腹型偏头痛的方法，该方法包括向人施用有效量的至少一种人乳寡糖(hmo)。
35.患有腹型偏头痛风险的人优选地为儿童。上述人可以患有胃肠道屏障受损，并且施用的hmo的量有效增加胃肠道屏障功能。
36.上述人可以患有慢性偏头痛或患有另一种病症，例如炎性病症(例如哮喘)、肥胖、代谢综合征、过敏和/或涉及胃肠道症状的疾病或病状。例如，涉及胃肠道症状的疾病或病状可以是自身免疫性疾病，例如乳糜泻、肠易激综合征、过敏和/或食品不耐受，例如非乳糜泻(non-coeliac)麸质/小麦不耐受。上述人还可以患有血清素或色氨酸代谢异常。
37.本发明的第五方面涉及一种用于高风险人患者的应激和/或焦虑诱发的偏头痛的二级预防的方法，该方法包括向人预防性地施用有效量的至少一种人乳寡糖(hmo)。
38.优选地，向人施用hmo至少1周、更优选至少2周的时间段。
39.优选地，向人施用每天1g至15g量的hmo；更优选每天2g至10g。例如，可每天向人施用3g至7g。可以在初始阶段期间向人施用较高剂量，在第二维持阶段期间施用较低剂量。
40.本发明的第六方面为一种包装物，其用于以下用途：
41.预防、管理或治疗人的偏头痛的后发作期症状，
42.预防、管理或治疗人的腹型偏头痛，和/或
43.高风险患者的应激和/或焦虑诱发的偏头痛的二级预防，
44.包装物包括至少14个单独的日剂量的有效量的至少一种人乳寡糖(hmo)。
45.优选地，包装物中的每个剂量含有约1g至15g的人乳寡糖，优选2g至10g，更优选3g至7g。此外，包装物优选地包括至少约21个日剂量；例如，约28个日剂量。
46.hmo可以是中性hmo或酸性hmo。中性hmo可以是一种或多种岩藻糖基化hmo或一种或多种非岩藻糖基化hmo。优选地，hmo选自2
’‑
fl、3-fl、dfl、lnt、lnnt、3
’‑
sl、6
’‑
sl、lnfp-i或其混合物。优选地，hmo包括2
’‑
fl以及在lnnt和lnt中的至少一种；2
’‑
fl和dfl中的至少一种以及lnnt和lnt中的至少一种(例如2
’‑
fl、dfl以及在lnnt和lnt中的至少一种)；2
’‑
fl和6
’‑
sl；dfl和6
’‑
sl；2
’‑
fl、dfl和6
’‑
sl；2
’‑
fl、6
’‑
sl以及在lnnt和lnt中的至少一种；2
’‑
fl、dfl、6
’‑
sl以及在lnnt和/或lnt中的至少一种。
47.可以进一步向人施用镁源、维生素b源、褪黑素、辅酶q10和/或ω-3长链脂肪酸和/或益生菌，例如一种或多种双歧杆菌物种。优选地，进一步向人施用维生素b源和/或ω-3长链脂肪酸。
具体实施方式
48.现已令人惊讶地发现，向患有偏头痛后发作期症状和/或腹型偏头痛或处于应激/焦虑诱发的偏头痛的高风险中的人经口或肠内施用一种或多种hmo，减少或预防发生和/或症状严重性。hmo具有极好的安全性和耐受性分布，因此它们理想地适合用于偏头痛后发作期症状和/或腹型偏头痛的预防、管理和治疗。此外，通过增加青春双歧杆菌(b.adolescentis)系统发育组的双歧杆菌，长双歧杆菌和/或两歧双歧杆菌的丰度，向人施用hmo优先产生有益的肠道微生物群。这些细菌产生乳酸(lactate)和乙酸(acetate)，而乳酸和乙酸又可以被产丁酸细菌转化成丁酸(butyrate)。结果，胃肠道通透性和炎症减轻。此外，双歧杆菌能够从头合成b-维生素，例如核黄素和叶酸，从而确保其恒定的生物利用度，并且可以分泌神经调节剂，例如gaba。此外，双歧杆菌物种能够合成色氨酸，并且可以影响免疫调节以及不同免疫标志物例如ifn-γ和tnf-α的表达。犬尿氨酸途径通过ifn-γ和tnf-α调节，因此选择性刺激双歧杆菌可以影响色氨酸代谢，并且有助于调节血清素和犬尿氨酸途径。此外，岩藻糖基化hmo可以通过传入迷走神经刺激中枢神经系统(vazquez等人,《公共科学图书馆
·
综合(plos one)》11:e0166070(2016))。
49.人乳寡糖是人乳中发现的可溶性聚糖的异质混合物。它们是人乳中仅次于乳糖和脂质的第三种最丰富的固体成分，其以5-25g/l的浓度存在((bode：《人乳寡糖以及其有益作用(human milk oligosaccharides and their beneficial effects)》，见：《人母乳的膳食和营养方面手册(handbook of dietary and nutritional aspects of human breast milk)》(zibadi等人编辑)，第515-31页，瓦赫宁根学术出版社(wageningen academic publishers)(2013))。hmo对小肠中的酶水解具有抵抗力，因此在很大程度上未被消化和吸收，并完好无损地到达结肠。到达结肠的大多数hmo充当底物，通过选择性刺激特定细菌的生长来塑造肠道生态系统。据信，hmo实质上调节婴儿肠道菌群，并在配方粉喂养(formula-fed)和母乳喂养(breast-fed)的婴儿的微生物群差异中起决定性作用。hmo还能够对较大儿童和成人的肠道细菌进行实质性调节，并且对肠道健康产生积极影响。
50.在本说明书中，除非另有说明，否则以下术语具有适用于本文描述的所有实施方
式的以下含义：
[0051]“腹型偏头痛”是指以反复发作的中度至重度腹痛为标志的病状。疼痛通常持续1小时至三天。发病之间典型地完全正常。腹型偏头痛可以具有早期症状(前驱症状(prodrome))，指示疾病或病情例如便秘、情绪变化对食物的渴望等的发作。疼痛典型地始于腹部(肚子)中部，并且通常伴有例如食欲不振、恶心和呕吐的症状。其它症状可以包括对光敏感、对声音敏感和眩晕。腹型偏头痛可以经常随后有一种或多种症状，这些症状在发作后发生(后发作期症状(postdrome))并且持续几个小时至约2-3天，例如疲劳、精神混乱、皮肤和头皮敏感、情绪变化等。腹型偏头痛主要在儿童中发生。具体而言，本发明涉及根据《国际头痛病症分类法(the international classification of headache disorders)》第3版中定义的标准被归类为腹型偏头痛的偏头痛患者(https://ichd-3.org/1-migraine/1-6-episodic-syndromes-that-may-be-associated-with-migraine/1-6-1-recurrent-gastrointestinal-disturbance/1-6-1-2-abdominal-migraine/)。
[0052]“青春双歧杆菌系统发育组的双歧杆菌”是指选自以下的细菌：青春双歧杆菌(bifidobacterium adolescentis)、角形双歧杆菌(bifidobacterium angulatum)、链状双歧杆菌(bifidobacterium catenulatum)、假链状双歧杆菌(bifidobacterium pseudocatenulatum)、bifidobacterium kashiwanohense、齿双歧杆菌(bifidobacterium dentum)和bifidobacterium stercoris(duranti等人,《应用和环境微生物学(appl.environ.microbiol.)》79,336(2013)，bottacini等人,《微生物细胞工厂(microbial cell fact.)》13:s4(2014))。优选地，青春双歧杆菌系统发育组的双歧杆菌是青春双歧杆菌和/或假链状双歧杆菌。
[0053]“慢性偏头痛”是指患者每月至少有15天头痛持续至少3个月的偏头痛病状。慢性偏头痛是复发性偏头痛的更极端形式。
[0054]“有效量”是指足以在人体内产生期望结果的hmo的量。有效量可以以一个或多个剂量施用，以达到期望的结果。
[0055]“肠内施用”是指用于将组合物递送至人的任何常规形式，其导致组合物在胃肠道(包括胃)中的沉积。肠内施用的方法包括通过鼻胃管或空肠管、经口、舌下和直肠饲喂。
[0056]“高风险个体”是指不知道患有病状例如偏头痛、但具有遗传倾向或具有可以引起病状发作例如偏头痛发作的其他生理病状的个体，上述其他生理病状例如疾病或代谢病症，诸如炎性病症，例如哮喘、肥胖、代谢综合征；过敏；gi病症，诸如肠易激综合征或乳糜泻；血清素或色氨酸代谢异常。
[0057]“人乳寡糖”或“hmo”是指在人母乳中发现的复杂碳水化合物(urashima等人：《乳寡糖(milk oligosaccharides)》,nova科学出版社(nova science publisher)(2011)；chen,《碳水化合物化学和生物化学进展(adv.carbohydr.chem.biochem.)》72,113(2015))。hmo具有在还原末端包括乳糖单元的核心结构，其可以通过一个或多个β-n-乙酰基-氨基乳糖苷(β-n-acetyl-lactosaminyl)和/或一个或多个β-乳-n-二糖基(β-lacto-n-biosyl)单元延长，并且该核心结构可以被αl-吡喃岩藻糖基(fucopyranosyl)和/或α-n-乙酰基-神经氨酰基(唾液酸基)部分所取代。在这方面，非酸性(或中性)hmo不含唾液酸残基，酸性hmo在其结构中具有至少一个唾液酸残基。非酸性(或中性)hmo可以是岩藻糖基化或非岩藻糖基化的。这类中性非岩藻糖基化hmo的实例包括乳-n-四糖(lnt)、乳-n-新四糖
(lnnt)、乳-n-新六糖(lnnh)、对-乳-n-新六糖(plnnh)、对-乳-n-六糖(plnh)和乳-n-六糖(lnh)。中性岩藻糖基化hmo的实例包括2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)、乳-n-岩藻五糖i(lnfp-i)、乳-n-二岩藻六糖i(lndfh-i)、3-岩藻糖基乳糖(3-fl)、二岩藻糖基乳糖(dfl)、乳-n-岩藻五糖ii(lnfp-ii)、乳-n-岩藻五糖iii(lnfp-iii)、乳-n-二岩藻六糖iii(lndfh-iii)、岩藻糖基-乳-n-六糖ii(flnh-ii)、乳-n-岩藻五糖v(lnfp-v)、乳-n-二岩藻六糖ii(lndfh-ii)、岩藻糖基-乳-n-六糖i(flnh-i)、岩藻糖基-对-乳-n-六糖i(fplnh-i)、岩藻糖基-对-乳-n-新六糖ii(fplnnh ii)和岩藻糖基-乳-n-新六糖(flnnh)。酸性hmo的实例包括3
’‑
唾液酸乳糖(3
’‑
sl)、6
’‑
唾液酸乳糖(6
’‑
sl)、3-岩藻糖基-3
’‑
唾液酸乳糖(fsl)、lst a、岩藻糖基-lst a(flst a)、lst b、岩藻糖基-lst b(flst b)、lst c、岩藻糖基-lst c(flst c)、唾液酸基-lnh(slnh)、唾液酸基-乳-n-六糖(slnh)、唾液酸基-乳-n-新六糖i(slnh-1)、唾液酸基-乳-n-新六糖ii(slnh-ii)和二唾液酸基-乳-n-四糖(dslnt)。
[0058]“管理”人的医疗病状是指使用饮食或营养干预来解决人的特定营养需求。“管理(manage)”和“管理(management)”具有语法上对应的含义。
[0059]“微生物群(microbiota)”、“微生物丛(microflora)”和“微生物组(microbiome)”是指通常栖息于身体器官或部分、特别是人的胃肠道器官的活微生物群落。胃肠道微生物群的最占优势的成员包括厚壁菌门(firmicutes)、拟杆菌门(bacteroidetes)、放线菌门(actinobacteria)、变形菌门(proteobacteria)、互养菌门(synergistetes)、疣微菌门(verrucomicrobia)、梭杆菌门(fusobacteria)和广古菌门(euryarchaeota)这些门的微生物；在属水平上的拟杆菌属(bacteroides)、栖粪杆菌属(faecalibacterium)、双歧杆菌属(bifidobacterium)、罗斯氏菌属(roseburia)、另枝菌属(alistipes)、柯林斯氏菌(collinsella)、布劳特氏菌属(blautia)、粪球菌属(coprococcus)、瘤胃球菌属(ruminococcus)、真杆菌属(eubacterium)和多尔氏菌属(dorea)；在物种水平上的单形拟杆菌(bacteroides uniformis)、腐烂别样杆菌(alistipes putredinis)、粪副拟杆菌(parabacteroides merdae)、布氏瘤胃球菌(ruminococcus bromii)、长链多尔氏菌(dorea longicatena)、粪拟杆菌(bacteroides caccae)、多形拟杆菌(bacteroides thetaiotaomicron)、霍氏真杆菌(eubacterium hallii)、扭链瘤胃球菌(ruminococcus torques)、粪普拉梭杆菌(faecalibacterium prausnitzii)、酸奶瘤胃球菌(ruminococcus lactaris)、产气柯林斯菌(collinsella aerofaciens)、产甲酸多尔氏菌(dorea formicigenerans)、普通拟杆菌(bacteroides vulgatus)和罗斯拜瑞氏菌(roseburia intestinalis)。胃肠微生物群包括位于或附着于覆盖胃肠道上皮的粘液层的粘膜关联的微生物群，以及胃肠道腔中发现的腔关联的微生物群。
[0060]“偏头痛”是指一种常见的致残性原发性头痛病症。偏头痛具有两大类型：1.无先兆偏头痛是以头痛为特征的临床综合征，具有特定的特征和相关联的症状；2.有先兆偏头痛以通常在头痛之前或有时伴随头痛的短暂局灶性神经症状为主要特征。一些患者还经历头痛前数小时或数天发生的前驱期(prodromal phase)和/或头痛缓解后的后发作期(postdromal phase)。前驱症状和后发作期症状包括活动过度、活动不足、抑郁、对特定食物的渴望、反复打哈欠、疲劳和颈部僵硬和/或疼痛。通常，本发明涉及根据《国际头痛病症分类法》第3版(https://ichd-3.org/1-migraine/)的分类诊断为偏头痛的受试者。
[0061]
特别是，在本技术的上下文中，“偏头痛”是指以反复发作的中度至重度头痛伴悸
动性疼痛为标志的病状。疼痛通常持续两小时至三天。它可以具有早期症状(前驱症状)，指示疾病或病情的发作，例如便秘、情绪变化、对食物的渴望等。偏头痛发作典型地始于头部的一侧，但可向两侧扩散，并且经常伴有恶心、呕吐和对光或声音敏感，并且有时具有先发先兆。偏头痛经常伴有一种或多种症状，这些症状在发作后发生(后发作期症状)并且持续几个小时至约2-3天，例如疲劳、精神混乱、皮肤和头皮敏感、情绪变化等。
[0062]“偏头痛患者”是指患有腹型偏头痛或偏头痛的个体，无论是否伴有前驱症状和/或后发作期症状。
[0063]“偏头痛后发作期”是偏头痛发作的一个阶段，其典型地发生在头痛或腹痛阶段结束后。并非每个患有偏头痛的人都遭受后发作期，但它确实发生在大多数人身上(大约80％)。后发作期症状包括疲劳、身体疼痛、注意力不集中、抑郁、眩晕和对光敏感。
[0064]“微生物群的调节”是指对微生物群施加调节或控制的影响，例如导致双歧杆菌、巴氏杆菌(barnesiella)、粪杆菌属(faecalibacterium)和/或其它产丁酸细菌的固有(indigenous)肠道丰度增加的影响。在另一实例中，影响可以引起活泼瘤胃球菌(ruminococcus gnavus)和/或变形菌门(proteobacteria)的肠道丰度的减少。“变形菌门”是革兰氏阴性菌门，包括许多种病原菌，例如埃希氏菌属(escherichia)、沙门氏菌属(salmonella)、弧菌属(vibrio)、螺杆菌属(helicobacter)、耶尔森氏菌属(yersinia)和许多其它著名的属。
[0065]“经口施用”是指用于通过口将组合物递送至人的任何常规形式。因此，经口施用是肠内施用的一种形式。
[0066]“患者”通常是患有疾病或病理病状的个人，目前或过去已经由合格的医疗专业人员对其进行观察或控制。
[0067]“预防偏头痛”是指降低个体中与偏头痛相关联的一种或多种症状、优选两种或更多种症状、更优选所有偏头痛症状的发生或复发的风险。在一实施方式中，本发明涉及预防患有腹型偏头痛的儿童发展为以复发性头痛为特征的慢性偏头痛。
[0068]“预防性治疗”或“预防”是指为减少疾病发作或复发的风或者症状的严重程度而给予的治疗或采取的措施。
[0069]“预防性地降低症状严重性和/或发生率”是指在暴露于小麦和/或麸质后的稍后时间点降低症状的严重性和/或发生率。
[0070]“一级预防”是指在未知患有病状的个人中预防病状的发作。
[0071]“复发性偏头痛”是指个体周期性地经历偏头痛的症状，如每周一次、每两周一次、每月一次或更少次，其中偏头痛病状持续约1小时至约72小时。
[0072]“减轻偏头痛”是指消除或减少个体的与偏头痛相关联的至少一种症状，优选地个体的两种或更多种偏头痛症状，优选地所有偏头痛症状。
[0073]“二级预防”是指预防高风险个体的病状的发作，或者预防已经患有病状的患者的症状复发。
[0074]“偏头痛症状”是指以如下症状中的至少一种为特征的头痛：
[0075]-头部的一侧或两侧的疼痛；
[0076]-感觉悸动或搏动的疼痛；
[0077]-对光、声音以及有时对气味和触摸敏感；
[0078]-恶心和呕吐；
[0079]-视力模糊；
[0080]-头昏(light-headedness)，有时之后会昏厥。
[0081]“合成组合物”是指人工制备的组合物，并且优选地是指含有至少一种以化学和/或生物学方式离体产生(例如通过化学反应、酶促反应或重组)的化合物的组合物。合成组合物典型地包括一种或多种能够预防、管理或治疗人的偏头痛后发作期症状和/或腹型偏头痛的化合物，包括一种或多种hmo。此外，在一些实施方式中，合成组合物可以包括一种或多种不会对上述化合物的功效产生不利影响的营养学或药学活性成分。下文还描述了本发明的合成组合物的一些非限制性实施方式。
[0082]“疗法(therapy)”是指为减轻或消除疾病或病理病状的症状而给予的治疗或采取的措施。
[0083]“治疗(treat)”是指以改善或稳定被治疗的人的结果或解决潜在的营养需求为目标来解决医疗病状或疾病。因此，治疗包括通过解决人营养需求而进行的医疗病状或疾病的饮食或营养管理。“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”具有语法上对应的含义。
[0084]
根据本发明，通过向人施用一种或多种hmo，可以降低或预防人的偏头痛后发作期症状的发生率和强度，和/或腹型偏头痛的发生率和强度。此外，可通过向高风险的人施用一种或多种hmo，可以降低高风险患者的应激和/或焦虑诱发的偏头痛的发生率和/或强度。hmo可以作为单独的化合物或以合成组合物的形式施用。
[0085]
可以通过公知的方法从哺乳动物(包括但不限于人、牛、绵羊、猪或山羊物种)分泌的一种或多种乳中分离或富集hmo。还可以通过使用微生物发酵、酶促方法、化学合成或这些技术的组合的公知方法来生产hmo。作为实例，使用化学法，可以如wo 2011/100980和wo 2013/044928中所述制造lnnt，可以如wo 2012/155916和wo 2013/044928中所述合成lnt，可以如wo 2013/091660所述制造lnt和lnnt的混合物，可以如wo 2010/115934和wo 2010/115935中所述制造2
’‑
fl，可以如wo 2013/139344中所述制造3-fl，可以如wo 2010/100979中所述制造6
’‑
sl及其盐，可以如wo 2012/113404中所述制备唾液酸化寡糖，可以如wo 2012/113405中所述制备人乳寡糖的混合物。作为酶促制造的实例，可以如wo 2012/007588中所述制造唾液酸化寡糖，可以如wo 2012/127410中所述制造岩藻糖基化寡糖，可以如wo 2012/156897和wo 2012/156898中所述有利地制备人乳寡糖的多样化混合物。可以在wo 01/04341和wo 2007/101862中找到描述如何使用基因修饰的大肠杆菌制造核心人乳寡糖(任选地被岩藻糖或唾液酸取代)的生物技术方法。
[0086]
在上述方面中的任一项中，hmo可以是单一hmo或任何适合于本发明目的的hmo的混合物。
[0087]
在一个实施方式中，混合物包括以下组分、由以下组分组成或基本上由以下组分组成：中性hmo，优选至少第一中性hmo和至少第二中性hmo，其中第一中性hmo是岩藻糖基化中性hmo，第二中性hmo是核心hmo(也称为非岩藻糖基化中性hmo)。特别地，hmo的混合物可以含有岩藻糖基化hmo和核心hmo，所述岩藻糖基化hmo选自2
’‑
fl、3-fl、dfl、lnfp-i、lnfp-ii、lnfp-iii、lnfp-v、lndfh-i、lndfh-ii、lndfh-iii、flnh-i、flnh-ii、flnnh、fplnh-i和f-plnnh ii，所述核心hmo选自lnt、lnnt、lnh、lnnh、plnh和plnnh。更优选地，中性hmo的混合物含有以下组分、由以下组分组成或基本上由以下组分组成：选自2
’‑
fl、3-fl和dfl的岩
藻糖基化hmo，以及选自lnt和lnnt的核心hmo；有利地，混合物包括以下组分、由以下组分组成或基本上由以下组分组成：2
’‑
fl以及在lnnt和lnt中的至少一种；或者2
’‑
fl和dfl中的至少一种以及在lnnt和lnt中的至少一种；或者2
’‑
fl、dfl以及在lnnt和lnt中的至少一种。
[0088]
在其它实施方式中，混合物包括以下组分、由以下组分组成或基本上由以下组分组成：至少第一(酸性)hmo和至少第二(中性)hmo，其中第一(酸性)hmo选自3
’‑
sl、6
’‑
sl和fsl，第二(中性)hmo选自2
’‑
fl、3-fl、dfl、lnt和lnnt；有利地，混合物包括以下组分、由以下组分组成或基本上由以下组分组成：2
’‑
fl和6
’‑
sl；或者6
’‑
sl以及在2
’‑
fl和dfl中的至少一种；或者2
’‑
fl、6
’‑
sl以及在lnnt和lnt中的至少一种；或者2
’‑
fl、dfl、6
’‑
sl以及在lnnt和/或lnt中的至少一种。
[0089]
在一个实施方式中，合成组合物可以是营养组合物的形式。例如，营养组合物可以是食物组合物、补液溶液(rehydration solution)、医疗食品或用于特殊医疗目的的食品、营养补品等。营养组合物可以含有蛋白质、脂质和/或可消化的碳水化合物的来源，并且可以是粉末或液体的形式。可以将组合物设计成作为唯一的营养来源或者作为营养补充剂。
[0090]
合适的蛋白质来源包括乳蛋白、大豆蛋白、大米蛋白、豌豆蛋白和燕麦蛋白或其混合物。乳蛋白可以是乳蛋白浓缩物、乳蛋白分离物，乳清蛋白或酪蛋白或两者的混合物的形式。蛋白质可以是完整蛋白质或者部分水解或广泛水解的水解蛋白质。水解蛋白提供易于消化的优势，这对于患有发炎或受损胃肠道(gi tract)的人来说至关重要。蛋白质也可以游离氨基酸的形式提供。蛋白质可以占营养组合物能量的约5％至约30％，通常约10％至20％。
[0091]
蛋白质来源可以是以下的来源：谷氨酰胺、苏氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、脯氨酸或这些氨基酸的组合。谷氨酰胺来源可以是谷氨酰胺二肽和/或富含谷氨酰胺的蛋白质。由于谷氨酰胺被肠细胞用作能量源，因此可以包括谷氨酰胺。苏氨酸、丝氨酸和脯氨酸是产生粘蛋白的重要氨基酸。粘蛋白覆盖胃肠道，并且可以改善肠屏障功能和粘膜愈合。半胱氨酸是谷胱甘肽的主要前体，谷胱甘肽是机体抗氧化防御的关键。
[0092]
合适的可消化碳水化合物包括麦芽糊精、水解或改性的淀粉或玉米淀粉、葡萄糖聚合物、玉米糖浆、玉米糖浆固体、高果糖玉米糖浆、来源于大米的碳水化合物、来源于豌豆的碳水化合物、来源于马铃薯的碳水化合物、木薯淀粉、蔗糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、蜂蜜、糖醇(例如麦芽糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇)或其混合物。优选地，组合物不含添加的乳糖。通常，可消化碳水化合物提供营养组合物能量的约35％至约55％。特别合适的可消化碳水化合物是低葡萄糖当量(de)麦芽糊精。
[0093]
合适的脂质包括中链甘油三酸酯(mct)和长链甘油三酸酯(lct)。优选地，脂质是mct和lct的混合物。例如，mct可以占脂质的约30重量％至约重量70％，更具体地占约50重量％至约60重量％。mct具有更易于消化的优势，这对胃肠道发炎或受损的人来说至关重要。通常，脂质提供营养组合物能量的约35％至约50％。脂质可以含有必需脂肪酸(ω-3和ω-6脂肪酸)。优选地，这些多不饱和脂肪酸提供脂质来源总能量的低于约30％。
[0094]
长链甘油三酸酯的合适来源是菜籽油、葵花籽油、棕榈油、大豆油、乳脂、玉米油、高油酸(high oleic)油和大豆卵磷脂。分馏椰子油是中链甘油三酸酯的合适来源。营养组合物的脂质分布优选设计为具有约4:1至约10:1的多不饱和脂肪酸ω-3(n-3)与ω-3(n-6)之比。例如，n-3与n-6的脂肪酸比例可以为约6:1至约9:1。多不饱和脂肪酸可以由ω-3脂肪
酸组成。
[0095]
营养组合物还可以包括维生素和矿物质。如果营养组合物旨在作为唯一的营养来源，则其优选包括完整的维生素和矿物质谱。维生素的实例包括维生素a、b-复合物(例如b1、b2、b6和b12)、c、d、e和k、烟酸和酸性维生素，如泛酸、叶酸和生物素。矿物质的实例包括钙、铁、锌、镁、碘、铜、磷、锰、钾、铬、钼、硒、镍、锡、硅、钒和硼。镁源，例如柠檬酸镁(600mg)，可以减少偏头痛的发生和强度。营养组合物还可以包括辅酶q10。
[0096]
营养组合物还可以包括类胡萝卜素，如叶黄素、番茄红素、玉米黄质和β-胡萝卜素。所包括的类胡萝卜素的总量可以在约0.001μg/ml至约10μg/ml范围内变化。可以以约0.001μg/ml至约10μg/ml的量包括叶黄素，优选地约0.044μg/ml至约5μg/ml的叶黄素。可以以约0.001μg/ml至约10μg/ml的量包括番茄红素，优选约0.0185μg/ml至约5μg/ml的番茄红素。β-胡萝卜素可以占约0.001μg/ml至约10mg/ml，例如约0.034μg/ml至约5μg/ml的β-胡萝卜素。
[0097]
营养组合物优选还含有浓度降低的钠；例如，约300mg/l至约400mg/l。剩余电解质存在的浓度可以设定成在不给肾脏功能带来过多肾溶质负担的情况下满足需要。例如，钾优选在约1180至约1300mg/l的范围内存在；氯化物优选在约680至约800mg/l的范围内存在。
[0098]
营养组合物还可以含有各种其它常规成分，如防腐剂，乳化剂，增稠剂，缓冲剂，纤维素(fibres)和益生元(例如低聚果糖、低聚半乳糖)、益生菌(例如动物双歧杆菌(b.animalis)乳酸亚种(subsp.lactis)bb-12、乳酸双歧杆菌(b.lactis)hn019、乳酸双歧杆菌bi07、乳酸双歧杆菌w52、婴儿双歧杆菌(b.infantis)atcc 15697、两歧双歧杆菌(b.bifidum)、鼠李糖乳杆菌(l.rhamnosus)gg、鼠李糖乳杆菌hnooi、嗜酸乳杆菌(l.acidophilus)la-5、嗜酸乳杆菌ncfm、短乳杆菌(l.brevis)w63、干酪乳杆菌(l.casei)w56、唾液乳杆菌(l.salivarius)w24、发酵乳杆菌(l.fermentum)cect5716、长双歧杆菌(b.longum)bb536、长双歧杆菌ah1205、长双歧杆菌ah1206、短双歧杆菌(b.breve)m-16v、罗伊氏乳杆菌(l.reuteri)atcc 55730、罗伊氏乳杆菌atcc pta-6485、罗伊氏乳杆菌dsm 17938)，抗氧化剂/抗炎化合物，其包括生育酚、类胡萝卜素、抗坏血酸/维生素c、抗坏血酸棕榈酸酯、多酚、谷胱甘肽和超氧化物歧化酶(甜瓜)，其他生物活性因子(例如生长激素、细胞因子、tfg-β)，着色剂，调味剂和稳定剂，润滑剂等。
[0099]
营养组合物可以配制成可溶粉末、液体浓缩物或即用型制剂。组合物可以通过鼻胃管或经口饲喂给有需要的人。也可以存在各种调味剂、纤维素和其它添加剂。
[0100]
营养组合物可以通过用于制备固体或液体形式的营养组合物的任何常用制造技术来制备。例如，可以通过合并各种进料溶液来制备组合物。可以通过加热和混合脂质源，然后在加热和搅拌的同时添加乳化剂(例如卵磷脂)、脂溶性维生素和至少一部分蛋白质源来制备脂肪包蛋白质(protein-in-fat)进料溶液。然后通过在加热和搅拌的同时向水中添加矿物质、痕量和超痕量矿物质、增稠剂或悬浮剂来制备碳水化合物进料溶液。在添加碳水化合物(例如，hmo和可消化碳水化合物源)之前，将所得溶液在持续加热和搅拌下保持10分钟。然后将所得进料溶液在加热和搅拌下共混在一起，并将ph调节至6.6-7.0，然后对组合物进行高温短时加工，在此期间将组合物进行热处理、乳化和均质化，然后使其冷却。添加水溶性维生素和抗坏血酸，如果需要，将ph调节至所需范围，添加调味剂，添加水，以达到所
需的总固体含量。
[0101]
对于液体产品，则可以将所得溶液无菌包装以形成无菌包装的营养组合物。以这种形式，营养组合物可以是即食或浓缩液体形式。另外可选地，可以将组合物喷雾干燥并加工和包装成可重构粉末。
[0102]
当营养产品是即食营养液体时，以液体的重量计，液体中hmo的总浓度可以优选为约0.1％至约1.5％，包括约0.2％至约1.0％，例如约0.3％至约0.7％。当营养产品是浓缩营养液时，以液体的重量计，液体中hmo的总浓度可以优选为约0.2％至约3.0％，包括约0.4％至约2.0％，例如约0.6％至约1.5％。
[0103]
在另一实施方式中，营养组合物为单位剂型。单位剂型可以含有可接受的食品级载体，例如磷酸盐缓冲盐溶液，乙醇在水中的混合物，水，和乳液如油/水或水/油乳液，以及各种润湿剂或赋形剂。单位剂型也可以含有当施用于人时不会产生有害、过敏或其它不良反应的其它物质。载体和其它物质可以包括溶剂、分散剂、包衣剂、吸收促进剂、控释剂和一种或多种惰性赋形剂，如淀粉、多元醇、制粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
[0104]
本发明的单位剂型可以经口施用，例如作为含有预定量混合物的片剂、胶囊或丸剂，或者作为含有预定浓度混合物的粉剂或颗粒剂，或者含有预定浓度混合物的在水性或非水性液体中的凝胶剂、糊剂、溶液剂、混悬剂、乳液剂、糖浆、大丸剂、药糖剂(electuary)或浆剂。口服施用的组合物可以包括一种或多种粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、调味剂和湿润剂。经口施用的组合物例如片剂可以任选地被包衣，并且可以配制为提供hmo的持续、延迟或受控释放。
[0105]
本发明的单位剂型也可以通过鼻胃管施用或直接输注到胃肠道或胃中。
[0106]
本发明的单位剂型还可以包括治疗剂，如抗生素、益生菌、镁源、b族维生素源、褪黑素、辅酶q10、ω-3多不饱和脂肪酸、止痛药和抗炎剂。用于人的这类组合物的合适剂量可以基于例如人的病况、免疫状态、体重和年龄的因素以常规方式确定。在某些情况下，剂量的浓度将与在人母乳中的组成的hmo所发现的浓度相似。所需量通常为每天约1g至约15g，在某些实施方式中为每天约2g至约10g，例如每天约3g至约7g的范围内。适当的剂量方案可以通过本领域技术人员已知的方法来确定。
[0107]
在另一实施方式中，hmo可以包括在药物组合物中。药物组合物可以含有药学上可接受的载体，例如，磷酸盐缓冲盐溶液，乙醇在水的混合物，水和乳液例如油/水或水/油乳液，以及各种润湿剂或赋形剂。药物组合物还可以含有当施用于非婴儿时不会产生有害、过敏或其它有害的反应的其它物质。载体和其它物质可以包括溶剂、分散剂、包衣剂、吸收促进剂、控释剂和一种或多种惰性赋形剂，如淀粉、多元醇、制粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。
[0108]
药物组合物可以经口施用，例如作为含有预定量的片剂、胶囊或丸剂，或作为含有预定浓度的粉剂或颗粒剂，或含有预定浓度的在水性或非水性液体中的凝胶剂、糊剂、溶液剂、混悬剂、乳液剂、糖浆、大丸剂、药糖剂或浆剂。经口施用的组合物可以包括粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、调味剂和湿润剂。经口施用的组合物例如片剂可以任选地被包衣，并且可以被配制为提供持续、延迟或受控的其中混合物的释放。
[0109]
药物组合物也可以通过直肠栓剂、气雾剂管、鼻胃管或直接输注到胃肠道或胃中
施用。
[0110]
药物组合物还可以包括治疗剂，如抗生素、益生菌、止痛剂、镁源、b族维生素源、褪黑素、辅酶q10、ω-3多不饱和脂肪酸和抗炎剂。用于人的这些组合物的合适剂量可以基于例如病状、免疫状态、体重和年龄的因素以常规方式确定。在某些情况下，剂量将会是与人母乳中发现的hmo的浓度相似的浓度。所需的量通常范围为每天约1g至约15g，在某些实施方式中为每天约2g至约10g，例如每天约3g至约7g的范围内。适当的剂量方案可以通过常规方法确定。
[0111]
对于预防、管理或治疗人的偏头痛后发作期症状，和/或腹型偏头痛，和/或对于高风险患者的应激和/或焦虑诱发的偏头痛的二级治疗，需要施用的hmo的量将取决于以下因素而变化：例如复发性偏头痛的风险和严重性，任何潜在的医学状况或疾病，年龄，组合物的形式，和被施用的其它药物。然而，所需的量可以由医生来容易地设定，通常在每天约1g至约15g的范围内，在某些实施方式中，每天约2g至约10g，例如每天约3g至约7g。可以基于若干因素来确定合适的剂量，所述因素包括，例如，体重和/或病况，正在治疗、管理或预防的偏头痛和/或腹型偏头痛的严重性，其它病情和/或疾病，副作用的发生率和/或严重性，和施用方式。适当的剂量范围可以通过本领域技术人员已知的方法来确定。在初始阶段期间，剂量可以较高(例如每天3g至15g，优选每天3mg至10g)。在后期维持阶段期间，剂量可以减少(例如每天1g至10g，优选每天2g至7.5g)。
[0112]
实施例
[0113]
实施例1
[0114]
招募具有至少12个月的复发性偏头痛病史(根据《国际头痛病症分类法》第3版[试行版]的标准)且年龄在18-70岁之间的患者。患者在28天的筛查期间符合慢性偏头痛的标准(任何持续时间或严重程度的头痛≥15天，满足偏头痛ichd-3试行标准的头痛≥8天)。关键的排除标准是在筛查之前的4个月内使用预防性药物；在筛查之前的2个月内使用预防性装置(devices)，诸如经颅磁刺激；以及在筛查期间使用阿片类(opioid)药物或巴比妥类(barbiturate)药物超过4天。如果是妊娠期或哺乳期妇女，则患者也被排除在外。
[0115]
在初次就诊(筛查)时，向每名患者给予关于研究的书面和口头信息，并要求患者签署知情同意书。每名患者都通过全面回顾包括头痛/偏头痛病史的临床病史进行评估，并进行体检和12导联心电图。收集血液和尿液样本。将用于粪便取样的设备分发给每名患者。指导患者将其样本保存在冰箱中，直至下一次就诊。为患者提供电子日记的入口以记录头痛/偏头痛的发生和强度。疼痛强度使用4点李克特(likert)量表，其中得分“0”表示“无疼痛”，得分“3”表示“严重疼痛”。患者还记录相关联的偏头痛症状(例如恶心、畏光和声音恐惧症)、使用的任何药物。
[0116]
在第一次就诊的28天内进行第二次就诊(开始干预)时，将检查适格(eligibility)标准，并将适格的受试者随机分配到两个组中的一个。总共包括60名患者。每组有60名患者，其中一组服用治疗产品，一组服用安慰剂产品。治疗产品含有5克的2
’‑
fl和lnnt的组合，而安慰剂产品含有5克葡萄糖。两种产品均以粉末形式存在于单位剂量容器中。回顾日记，并且评估身心健康症状、胃肠道症状、躯体症状、生活质量、焦虑和抑郁以及粪便稠度(如通过sf36、gsrs、phq12、bsfs、hads和qol问卷进行测量)。试验补充材料与使用急救药物的说明一起分发。收集粪便样本，并分发用于收集新样本的设备。指导患者维持当
前饮食。
[0117]
收集血液样本和尿液用于生物标志物和生物储备(biobanking)。将血液样本中的血清转移至冷冻管中，并储存在-80℃下。测量以下生物标志物：ifn-γ、tnf-α、il-1β、il-8、il-6、il-12、il-10、mip-1β、hs-crp、脂多糖结合蛋白、脂肪酸结合蛋白2、类胰蛋白酶、抗鞭毛蛋白(antiflagellin)、连蛋白(zonulin)、组胺、前列腺素2和皮质醇。为了分析犬尿氨酸和血清素途径代谢物的水平，在血清中测量以下化合物；色氨酸、l-犬尿氨酸(l-kynurenine)、犬尿氨酸(kynureninic acid)和血清素。对血液进行流式细胞术以确定免疫细胞的水平。
[0118]
尿液样本储存在-80℃下。使用nmr分析尿液样本中的细菌代谢物，例如scfa。
[0119]
粪便样本储存在-80℃下直到分析。使用16s rrna基因序列对粪便样本进行微生物分析。
[0120]
在4周后的第三次就诊时，收集粪便样本，收集血液和尿液样本，并评估头痛/偏头痛的发生和强度，和身心健康症状、胃肠道症状、躯体症状、生活质量、焦虑和抑郁以及粪便稠度(如通过sf36、gsrs、phq12、bsfs、hads和qol问卷进行测量)。分发用于收集新样本的试验补充产品和设备。
[0121]
在干预结束时(第8周)，每位患者访问医疗团队。进行体检并重新评估症状(如通过日记、gsrs、phq12、ibs-sss、bsfs、hads和qol量表等进行测量)。收集试验补充产品以检查依从性。如前所述收集粪便样本和血液样本并进行分析。
[0122]
初级终点为与基线28天筛查期相比，每月平均头痛天数的平均变化(头痛持续≥4小时并且峰值严重程度至少为中等水平的天数或使用急性偏头痛特异性药物[曲普坦或麦角碱]治疗任何严重程度或持续时间的头痛的天数)。与安慰剂组相比，接受治疗产品的患者报告平均头痛天数减少。此外，在发生头痛/偏头痛时，治疗组的强度较小。二级终点为与基线28天筛查期相比，后发作期症状平均天数和后发作期症状平均症状严重程度的平均变化。与安慰剂组相比，接受治疗产品的患者报告后发作期平均天数和后发作期症状严重程度减少。与安慰剂组相比，治疗组还指示通过gsrs评分确定的胃肠道症状改善和粪便稠度改善。在基线时通过hads测量的焦虑评分升高的患者报告了焦虑症状减少。对血液的分析指示，治疗患者的炎症标志物水平降低，肠道通透性降低，表明粘膜屏障改善，调节性免疫细胞增加，并且来自犬尿氨酸和血清素途径的代谢物分布更加平衡。粪便分析表明，治疗患者的细菌过度生长/生态失调的水平降低，双歧杆菌水平更高；尤其是青春双歧杆菌系统发育组的成员，长双歧杆菌和两歧双歧杆菌。短链脂肪酸的浓度增加，有害代谢物减少。
[0123]
实施例2
[0124]
从普通人群中招募总计272名患有复发性偏头痛的男性和女性参与者参与研究。参与者完成基线筛查调查，他们在其中指示任何医疗病状(包括偏头痛)以及各种胃肠道和生活质量症状。对于症状，使用5点李克特量表，其中得分1表示“无症状”，得分5表示“严重症状”。在272名参与者中，指示以下附加病状：
[0125]
病状参与者数量肠易激综合征86腹泻141便秘143
过敏137食物不耐受149抑郁182
[0126]
为每名参与者提供足够3周的日剂量为约4g hmo的hmo量。将hmo提供为单独的2
’‑
fl，或者2
’‑
fl和lnnt的4:1混合物(按重量计)。
[0127]
摄入3周后，每名参与者都完成第二次调查，他们在其中指示各种胃肠道和生活质量症状。使用相同的5点李克特量表来评估症状。
[0128]
在6周、9周和12周后重复该过程。
[0129]
在整个12周的过程中，头痛/偏头痛参与者指示头痛/偏头痛的发生和强度降低。此外，它们指示后发作期症状的发生和症状严重程度降低，并且胃肠道、生活质量和焦虑症状改善。
[0130]
实施例3
[0131]
招募年龄在5至15岁之间的男女儿科患者。所有患者都报告在过去一个月内至少有2次至少1小时的腹痛发作，严重到足以干扰日常活动。这些发作伴有以下症状中的至少两种：厌食、恶心、呕吐和脸色苍白。两次发作之间症状完全缓解。排除表现出食物不耐受、吸收不良或胃肠道和泌尿道疾病疾病症状的患者。
[0132]
在初次就诊(筛查)时，向每名患者以及父母/监护人给予关于研究的书面和口头信息，并要求父母/监护人签署知情同意书。每名患者都通过全面回顾包括偏头痛病史的临床病史进行评估，并进行体检。收集血液和尿液样本。将用于粪便取样的设备分发给每名患者。指导父母/监护人将样本保存在冰箱中，直到下一次就诊为止。为父母/监护人提供电子日记入口以记录偏头痛的发生和强度。使用nrs11数字疼痛量表来记录疼痛水平。患者还记录相关联的偏头痛症状(例如恶心、畏光和声音恐惧症)、使用的任何药物。
[0133]
在第一次就诊的28天内进行第二次就诊(开始干预)时，将检查适格标准，并且将适格的受试者随机分配到两个组中的一个。总共包括50名患者。每组有25名患者，其中一组服用治疗产品，一组服用安慰剂产品。治疗产品含有5克2
’‑
fl、dfl和lnnt的组合，安慰剂产品含有5克葡萄糖。两种产品均以粉末形式存在于单位剂量容器中。回顾日记，并评估身心健康症状、疼痛、胃肠道症状、躯体症状、生活质量以及粪便稠度(如通过sf36、nrs11、gsrs、phq12、bsfs和qol问卷进行测量)。分发试验补充品。收集粪便样本，并分发用于收集新样本的设备。指导患者维持当前饮食。
[0134]
收集血液样本和尿液用于生物标志物和生物储备。将血液样本中的血清转移至冷冻管中，并储存在-80℃下。测量以下生物标志物：ifn-γ、tnf-α、il-1β、il-8、il-6、il-12、il-10、mip-1β、hs-crp、脂多糖结合蛋白、脂肪酸结合蛋白2、类胰蛋白酶、抗鞭毛蛋白、连蛋白、组胺、前列腺素2和皮质醇。为了分析犬尿氨酸和血清素途径代谢物的水平，在血清中测量以下化合物；色氨酸、l-犬尿氨酸、犬尿氨酸和血清素。对血液进行流式细胞术以确定免疫细胞的水平。
[0135]
尿液样本储存在-80℃下。使用nmr分析尿液样本中的细菌代谢物，例如scfa。
[0136]
粪便样本储存在-80℃下直到分析。使用16s rrna基因序列对粪便样本进行微生物分析。
[0137]
在6周后的第三次就诊时，收集粪便样本，收集血液和尿液样本，并评估偏头痛的
发生和强度，和身心健康症状、疼痛、胃肠道症状、躯体症状、生活质量以及粪便稠度(如通过sf36、nrs11、gsrs、phq12、bsfs和qol问卷进行测量)。分发用于收集新样本的试验补充产品和设备。
[0138]
在干预结束时(第12周)，每位患者访问医疗团队。进行体检并重新评估症状(如通过日记、nrs11、gsrs、phq12、ibs-sss、bsfs和qol量表等进行测量)。收集试验补充产品以检查依从性。如前所述收集粪便样本和血液样本并进行分析。
[0139]
初级终点为与基线28天筛查期相比，每月平均头痛天数的平均变化(头痛持续≥1小时并且峰值严重程度至少为中等水平的天数)。与安慰剂组相比，接受治疗产品的患者报告平均头痛天数减少。此外，在发生疼痛时，治疗组的强度较小。二级终点为与基线28天筛查期相比，后发作期症状平均天数和后发作期症状平均症状严重程度的平均变化。与安慰剂组相比，接受治疗产品的患者报告后发作期平均天数和后发作期症状严重程度减少。与安慰剂组相比，治疗组还指示通过gsrs评分确定的胃肠道症状改善和粪便稠度改善。对血液的分析指示，治疗患者的炎症标志物水平降低，肠道通透性降低，表明粘膜屏障改善，调节性免疫细胞增加，并且来自犬尿氨酸和血清素途径的代谢物分布更加平衡。粪便分析表明，治疗患者的细菌过度生长/生态失调的水平降低，双歧杆菌水平更高；尤其是青春双歧杆菌系统发育组的成员，长双歧杆菌和两歧双歧杆菌。短链脂肪酸的浓度增加，有害代谢物减少。
[0140]
实施例4
[0141]
将hmo 2
’‑
fl和lnnt以4:1的质量比引入到旋转共混器中。将0.25质量％的量的硬脂酸镁引入到共混器中，将混合物共混10分钟。然后将混合物在流化床中附聚(agglomerated)，装入5克棒状包装物中，并将包装物密封。