一种含大麻提取物的药物组合物、制剂及其应用的制作方法

1.本发明涉及医药领域，具体是涉及一种含大麻提取物的药物组合物、制剂及其应用，更具体地，涉及一种含大麻总萜烯酚和大麻总萜烯的药物组合物、制剂及其应用。


背景技术：

2.大麻萜烯酚是大麻中含量最高且研究最为深入的活性成分，现已有开发上市的用于抗癫痫的药品——epidiolex(cannabidiol)。大麻萜烯酚中主要包括大麻二酚(cbd)、次大麻二酚(cbdv)、大麻酚(cbn)、大麻萜酚(cbmg)、大麻环萜酚(cbc)、四氢大麻酚(thc)、δ9-四氢化次大麻酚(thcv)等大麻素类成分。其中，除了毒性成分四氢大麻酚(thc)可使人致幻成瘾外，其他类成分的毒性较低或无毒性。现有研究表明，上述大麻素类成分具有多种药理活性，包括抗癌、止吐、抗菌、治疗神经疾病、治疗心血管疾病、抗炎症、抗水肿、治疗大脑疾病、治疗青光眼等。
3.大麻总萜烯是大麻中发现的一组具有独特香气和风味的化合物，其含量较萜酚类成分低很多，无相关药品开发上市。目前，研究人员从大麻中分离鉴别了100多种萜烯类成分，其中包括
ɑ-蒎烯、月桂烯、柠檬烯、β-石竹烯、芳樟醇、蛇麻烯、罗勒烯、异松油烯等。近年来的研究发现，大麻萜烯具有多种药理活性——缓解疼痛、消炎、防止溃疡、增强免疫力、抗氧化、镇静、减少癌细胞增殖、抑菌、局部麻醉等。此外，研究也发现，大麻萜酚、大麻萜烯和其他大麻素类成分具有一定的协同作用——也称为“随行效应”。然而，并没有确切的报道将大麻萜酚、大麻萜烯用于神经系统疾病的临床治疗中。


技术实现要素：

4.本发明的目的是推动大麻更深层面的研发，充分发挥大麻各成分的协同作用在神经系统疾病治疗中的作用，提供了一种含大麻提取物的药物组合物、制剂及其作为抗癫痫药物的应用。
5.为达到本发明的目的，本发明的含大麻提取物的药物组合物包含大麻总萜烯酚提取物和大麻总萜烯包合物，所述组合物是将大麻总萜烯酚提取物和大麻总萜烯包合物分别过筛(例如过50～150目筛，优选过80目筛)，再按大麻总萜烯酚和大麻总萜烯(300～1)：(1～300)的质量比混匀，即得；其中，所述大麻总萜烯酚提取物中大麻总萜烯酚含量为80～90％，所述大麻总萜烯包合物中大麻总萜烯含量为6～10％。
6.进一步地，所述大麻总萜烯酚提取物和大麻总萜烯包合物通过如下方法制备而来：
7.(1)将大麻花叶药材进行粉碎，过筛，烘烤，取一定量烘烤后的大麻花叶药材，按料液比1:6～1:10(w/v)加入70～95％乙醇，室温搅拌提取两次，过滤，合并提取液，离心过滤，离心过滤液减压浓缩至浸膏，加入药材当量2～5倍的纯化水，在70～80℃下保温搅拌，置于分液罐中冷却至室温，离心，分离上层，即得大麻粗提物；将所得大麻粗提物用药材当量2-4倍量的93～98％乙醇搅拌溶解，加入药材当量0.02～0.06倍的活性炭，室温搅拌，然后过
滤，滤液混匀后浓缩至浸膏；将浸膏于70～90℃保温，并在真空、70～90℃条件下进行分子蒸馏，收集轻组分，即得大麻总萜烯粗提物；取大麻总萜烯粗提物，加入6～10倍的纯化水，进行水蒸气蒸馏，用轻组分收集器收集，室温静置，收集上层，即得大麻总萜烯提取物；取大麻总萜烯提取物，用适量80～98％乙醇溶解，于50～70℃滴加至β环糊精的饱和水溶液中，50～70℃保温搅拌包合1～3h，放置室温后冷藏12～36h，过滤，滤饼低温(30～50℃)真空干燥8～16h，即得大麻总萜烯包合物；
8.(2)取(1)中分子蒸馏所得重组分，于80～95℃保温，并在真空、180～200℃条件下进行分子蒸馏，收集轻组分，将轻组分用3～5倍的70～90％乙醇进行溶解，将溶解液进行柱层析，用60～80％乙醇为流动相进行等度洗脱，收集流份，减压浓缩至稠膏，即得大麻总萜烯酚提取物。
9.优选地，所述大麻总萜烯酚和大麻总萜烯按100：1的质量比混匀。
10.本发明所述含大麻提取物的药物组合物可以与药学中可接受的辅料制成颗粒剂、胶囊剂、片剂等剂型。
11.进一步地，本发明提供了一种含前述大麻提取物药物组合物的颗粒剂，所述颗粒剂中包含大麻总萜烯包合物、大麻总萜烯酚提取物、稀释剂、粘合剂、崩解剂。
12.优选地，所述稀释剂选自淀粉、乳糖、糊精、糖粉、硫酸钙、蔗糖、甘露醇、微晶纤维素、葡萄糖中的一种或两种以上；所述粘合剂选自打浆淀粉、预胶化淀粉、糊精、聚维酮、乙基纤维素、羟丙基纤维素中的一种或两种以上；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联纤维素、玉米淀粉、聚维酮、预胶化淀粉、海藻酸中的一种或两种以上。
13.进一步优选地，所述稀释剂为蔗糖和糊精，所述粘合剂为打浆淀粉，所述崩解剂为聚维酮。
14.更优选地，所述含前述大麻提取物药物组合物的颗粒剂中包含：
[0015][0016]
进一步地，所述含前述大麻提取物药物组合物的颗粒剂的制备方法为：称取处方量的大麻总萜烯包合物、聚维酮、蔗糖、糊精，粉碎，过筛，并充分混合，备用；将打浆淀粉制成质量分数为8％～12％的淀粉浆，并将大麻总萜烯酚提取物缓慢滴加至淀粉浆液中，混匀，搅拌下将淀粉浆加入到已混合的备用物料中，制成软材，过筛，得湿粒，干燥。
[0017]
进一步地，本发明还提供了一种含前述大麻提取物药物组合物的胶囊剂，所述胶囊剂中包含大麻萜烯包合物、大麻总萜烯酚提取物、稀释剂、粘合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂。
[0018]
优选地，所述稀释剂选自甘露醇、微晶纤维素、乳糖、玉米淀粉、预胶化淀粉中的一种或两种以上；所述粘合剂选自打浆淀粉、预胶化淀粉、糊精、聚维酮、乙基纤维素、羟丙基
纤维素中的一种或两种以上；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联纤维素、玉米淀粉、聚维酮、预胶化淀粉、海藻酸中的一种或两种以上；所述助流剂选自微粉硅胶、滑石粉；所述润滑剂可选自硬脂酸镁、单硬脂酸镁甘油酯、硬脂酸、滑石粉中的一种或两种以上。
[0019]
进一步优选地，所述稀释剂为微晶纤维素；所述粘合剂为聚维酮；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠；所述助流剂为滑石粉；所述润滑剂为硬脂酸镁。
[0020]
更优选地，所述含前述大麻提取物药物组合物的胶囊剂中包含：
[0021][0022]
进一步地，所述含前述大麻提取物药物组合物的胶囊剂的制备方法为：称取处方量的大麻总萜烯包合物，加入羧甲基淀粉钠和微晶纤维素，混合均匀，备用；将聚维酮制成质量分数为0.8％～1.2％的聚维酮溶液，并将大麻总萜烯酚提取物缓慢滴加至聚维酮溶液中，混匀后搅拌下将聚维酮溶液加入上述混合均匀的备用混合物中制成软材，过筛，得湿粒，干燥后，过筛整粒，加入硬脂酸镁和滑石粉，混合均匀，用胶囊灌装。
[0023]
进一步地，本发明还提供了一种含前述大麻提取物药物组合物的片剂，所述片剂中包含大麻总萜烯包合物、大麻总萜烯酚提取物、稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂。
[0024]
优选地，所述稀释剂选自甘露醇、微晶纤维素、乳糖、玉米淀粉、预胶化淀粉中的一种或两种以上；所述粘合剂选自打浆淀粉、预胶化淀粉、糊精、聚维酮、乙基纤维素、羟丙基纤维素中的一种或两种以上；所述崩解剂选自羧甲基淀粉钠、交联纤维素、玉米淀粉、聚维酮、预胶化淀粉、海藻酸中的一种或两种以上；所述润滑剂选自硬脂酸镁、单硬脂酸镁甘油酯、硬脂酸、滑石粉中的一种或两种以上。
[0025]
进一步优选地，所述稀释剂为预胶化淀粉、微晶纤维素；所述粘合剂为聚维酮k30；所述崩解剂为羧甲基淀粉钠；所述润滑剂为硬脂酸镁。
[0026]
更优选地，所述含前述大麻提取物药物组合物的片剂中包含：
[0027]
[0028]
进一步地，所述含前述大麻提取物药物组合物的片剂的制备方法为：预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁分别过筛；取聚维酮k30用无水乙醇制成3％的溶液，并将大麻总萜烯酚提取物缓慢滴加至聚维酮溶液中，混均备用；按处方量称取大麻总萜烯包合物、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，混合均匀，加入前述备用的聚维酮k30溶液制成软材，过筛，得湿粒，干燥后过筛，加入硬脂酸镁，混均冲压成片。
[0029]
再一方面，本发明提供了一种含前述大麻提取物的药物组合物的应用，即在制备治疗癫痫的药物中使用含前述大麻提取物的药物组合物。
[0030]
本发明的发明人发现大麻总萜烯和大麻总萜烯酚单独应用的活性较低，通过试验研究了大麻总萜烯酚和大麻总萜烯不同比例对其药效的影响，并确定了大麻总萜烯酚和大麻总萜烯的最佳配比范围，辅以合适的药用辅料将其制备成颗粒剂、胶囊剂和片剂，充分发挥了两者之间的协同作用，增强了大麻制剂的临床应用。
具体实施方式
[0031]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0032]
本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0033]
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。
[0034]
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
[0035]
若无特别说明，本发明实施例中大麻总萜烯酚提取物中大麻总萜酚含量为85％，大麻总萜烯包合物中大麻总萜烯含量为8％。
[0036]
实施例1
[0037]
①
取大麻花叶药材100.0kg，粉碎，过1号筛，100℃烘烤200min，取烘烤后的大麻花叶药材，按料液比1:8(w/v)加入95％乙醇，室温搅拌提取两次，每次1小时，过滤，合并提取液，离心过滤，离心过滤液减压浓缩(65℃，-0.08～-0.09mpa)至浸膏，加入药材当量3倍的纯化水，在75℃下保温搅拌30分钟，置分液罐中冷却至室温，蝶式离心，分离上层，即得大麻粗提物。将所得大麻粗提物用药材当量3倍量的95％乙醇搅拌溶解，加入药材当量的0.05倍活性炭，室温搅拌40分钟，然后过滤，滤液混匀后浓缩至浸膏。将浸膏于80℃保温，并在真空度-0.1pa(绝对真空)、85℃条件下进行分子蒸馏，收集轻组分，即得大麻总萜烯粗提物。取大麻总萜烯粗提物，加入8倍的纯化水，于100℃进行水蒸气蒸馏，用轻组分收集器收集，室温静置，收集上层，即得大麻总萜烯提取物100.8g。将大麻总萜烯提取物100.0g，用适量
95％乙醇溶解，于60℃滴加至β环糊精的饱和水溶液中，60℃保温搅拌包合2h，放置室温后冷藏24h，过滤，滤饼低温(40℃)真空干燥12h，即得大麻总萜烯包合物270.5g，其中大麻总萜烯的含量为8.0％。
[0038]
②
取
“①”
中分子蒸馏所得重组分，于90℃保温，并在真空度-0.1～-10pa(绝对真空)、190℃条件下进行分子蒸馏，收集轻组分，将轻组分用4倍的80％乙醇进行溶解，将溶解液进行柱层析，层析填料为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径为40μm，用75％乙醇为流动相，流速为3bv/h进行等度洗脱，收集第1到第2.5倍柱体积流份，减压浓缩至稠膏，即得大麻萜烯酚类成分，即得大麻总萜烯酚提取物，其中大麻总萜烯酚的含量为85.0％。
[0039]
实施例2
[0040]
将从大麻中提取得到的大麻总萜烯酚提取物(大麻总萜酚含量为85％)和大麻总萜烯包合物(大麻总萜烯含量为8％)分别过80目筛，再将大总萜烯酚和大麻总萜烯按300～1:1～300(g/g)的比例混均(最佳配比为100:1)，即得大麻提取物的组合物。
[0041]
实施例3
[0042]
一种含大麻提取物药物组合物的颗粒剂，成分如下：
[0043][0044]
制备方法为：称取处方量的大麻总萜烯包合物、聚维酮、蔗糖、糊精，粉碎，过100目筛，并充分混合30min，备用；将打浆淀粉制成10％的淀粉浆，并将大麻总萜烯酚提取物缓慢滴加至淀粉浆液中，混均，搅拌下将淀粉浆加入到前述已混合的备用物料中，制成软材，过14目筛，得湿粒，在40℃干燥6h，整理后，分包成1000包。
[0045]
实施例4
[0046]
一种含大麻提取物药物组合物的胶囊剂，成分如下：
[0047][0048][0049]
制备方法为：按处方称取大麻总萜烯包合物，加入羧甲基淀粉钠和微晶纤维素，混合均匀备用；将聚维酮制成1％聚维酮溶液，并将大麻总萜烯酚提取物缓慢滴加至聚维酮溶
液中，混均，搅拌下将聚维酮溶液加入上述备用混合物中制成软材，过20目筛，得湿粒，于40℃干燥4h后，用18目筛整粒，加入滑石粉和硬脂酸镁，混合均匀，用胶囊灌装得1000粒。
[0050]
实施例5
[0051]
一种含大麻提取物药物组合物的片剂，成分如下：
[0052][0053]
制备方法为：预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁分别过80目筛；取聚维酮k30用无水乙醇制成3％的溶液，并将大麻总萜烯酚提取物缓慢滴加至聚维酮溶液中，混均备用；按处方量称取大麻总萜烯包合物、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，混合均匀，加入聚维酮k30溶液制成软材，过20目筛，得湿粒；于40℃干燥4h后，过18目筛，加入硬脂酸镁，混均后，用直径8mm浅弧冲压成1000片。
[0054]
药效学初筛试验效果
[0055]
一、实验目的
[0056]
研究大麻总萜烯酚提取物和大麻总萜烯包合物不同剂量配比的初步药效学作用，为受试药的继续开发提供试验依据。
[0057]
二、实验材料
[0058]
1、药品和试剂
[0059]
1.1药品
[0060]
药物组：大麻总萜烯酚提取物(总含量85.0％，实施例1制备)，大麻总萜烯包合物(总含量8.0％，实施例1制备)；
[0061]
药物配制：
[0062]
—1mg/ml总萜烯酚溶液的配制：取大麻总萜烯酚提取物适量，加大豆油，超声辅助溶解，制成总萜烯酚浓度为1mg/ml的溶液；
[0063]
—0.01mg/ml总萜烯溶液的配制：取大麻萜烯包合物适量，加大豆油，超声辅助溶解，制成总萜烯浓度为0.01mg/ml的溶液；
[0064]
—第一组：总萜烯酚：总萜烯(1.5mg/kg：0)；
[0065]
—第二组：总萜烯酚：总萜烯(1mg/kg：0.005mg/kg)；
[0066]
—第三组：总萜烯酚：总萜烯(0.5mg/kg：0.005mg/kg)；
[0067]
—第四组：总萜烯酚：总萜烯(0.005mg/kg：1mg/kg)；
[0068]
—第五组：总萜烯酚：总萜烯(0：1.5mg/kg)；
[0069]
对照药物：卡马西平；
[0070]
1.2试剂
[0071]
大豆油(辽宁新兴药业股份有限公司，药用纯)：受试物溶媒；戊四唑(北京市通广精细化工有限公司)，用于诱发癫痫模型的化学物质。
[0072]
2、实验仪器
[0073]
jtc-1型电惊厥仪(成都仪器厂)，yls-4c型疲劳转棒仪(上海寰熙医疗器械有限公司)，千分之一天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司，超声机(上海宁商超声仪器有限公司)。
[0074]
3、实验动物
[0075]
实验小鼠由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，共35只，体重190-200g(雌雄各半)。
[0076]
小鼠饲养条件为自然光12h光照/12h黑夜下饲养，自由饮水、进食。
[0077]
三、实验方法和结果
[0078]
实验方法
[0079]
1、最大电休克实验(mes)
[0080]
实验动物：小鼠
[0081]
给药方式：腹腔注射(i.p.)；
[0082]
实验方法：先在小鼠的双耳尖部两侧涂上0.9％的生理盐水，用耳电极夹住双耳尖部；再采用110v，60hz的交流电，电刺激时间为0.2s，电刺激后小鼠的后肢出现强直现象的则可用于该药理实验模型。小鼠给药后0.5h后，用以上实验方法进行测定，如果电刺激后小鼠的后肢出现强直现象，则认为该药物不具有抗癫痫活性；反之，则具有抗癫痫活性。对于具有潜在活性的化合物，通过该药理实验模型进一步定量评价其半数有效剂量ed50。
[0083]
2、神经毒性实验(tox)
[0084]
实验动物：小鼠
[0085]
给药方式：腹腔注射(i.p.)；
[0086]
实验方法：实验小鼠腹腔给药0.5h后，将其放置在半径15mm、长60mm、调转速至6rpm的疲劳转棒仪上。每只小鼠进行三次试验，每次测试时间为1min，如果小鼠在1min内没有从实验圆柱上掉下来，则认为该药物具有神经毒性，反之，则具有神经毒性。通过该药理实验模型进一步定量评价其半数毒性剂量td50。
[0087]
3、惊厥实验模型
[0088]
实验分组：三组——空白组(大豆油，0.5ml/20g)，药物组(第一组、第二组、第三组、第四组、第五组)，对照药物组；每组小鼠5只。
[0089]
戊四唑模型实验方法：药物组和对照药物组(50mg/kg，i.p.)0.5h后，皮下给药(s.c.)戊四唑(70mg/kg，i.p.)，然后观察1h。在1h内小鼠出现大于5s的痉挛发作，则称为阵挛性发作，如果小鼠的后肢出现强直现象，则称为强直性发作。统计小鼠的阵挛、强直和死亡的个数。
[0090]
实验过程和结果：将受试药物溶解在大豆油中，腹腔注射有两种剂量类型：20、100mg/kg。每组小鼠用5只，腹腔注射半小时后进行mes和tox，记录现象；空白组和对照组同法操作。
[0091]
计算pi(td50/ed50)，根据pi推断出安全剂量。然后按惊厥实验模型方法对受试物进行试验，结果见下表。
[0092][0093][0094]amaximal electroshock:doses of 30and 100mg/kg were administrated intraperitoneally in mice.
[0095]
the animals were examined 0.5h after administration.
[0096]bn1/n2:the animals protected/the animals tested
[0097]
从上表可以看出，在两种剂量下，各受试物整体上毒性均较小；除空白组和第五组外，大麻部分受试物在100mg/kg的剂量下表现出了抗惊厥活性，且第三组和对照组抗惊厥活性相当且优于其他组。在20mg/kg的剂量下，对照药物、第二组、第三组、第一组均表现不同程度的抗癫痫活性，且第三组明显优于其他组。
[0098]
四、试验结论
[0099]
上述结果表明，第三组疗效与对照组相当，且优于第一组、第二组、第四组、第五组。本发明组合物的抗癫痫药理活性均高于大麻总萜烯酚提取物和大麻总萜烯包合物单独应用，尤其是配比为100:1，且低剂量使用时。
[0100]
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。