基于微藻的光活性提取物的美容护理方法与流程

基于微藻的光活性提取物的美容护理方法
1.本发明涉及一种皮肤美容护理方法，其包含以下步骤：向所述皮肤涂抹包含至少一种微藻的光活性提取物的组合物，以及光照涂抹了所述组合物的区域。本发明还包含一种用于根据所述方法进行美容护理的照明装置，以及一种套件，其包含根据本发明的美容组合物和照明装置，所述美容组合物包含至少一种微藻的光活性提取物。本发明最后包含根据本发明所述的装置用于抗衰老和/或抗皱治疗和/或促进所述皮肤区域愈合治疗的用途。
2.如今，保持年轻的外表是一个永恒的关注点。随着时间的推移，特别是在时光衰老和/或光致衰老的情况下，皮肤会发生众多变化及退化，这导致在组织层面上，表皮、真皮
‑
表皮交界处、真皮以及血液供应和神经支配系统的结构被破坏，以及各种细胞代谢(例如涉及屏障功能平衡或涉及黑色素生成的细胞代谢)的减慢或功能障碍。在细胞层面上，衰老导致主要细胞类型(例如真皮的成纤维细胞、表皮的角质形成细胞以及黑色素细胞)的生理或代谢改变。
3.皮肤衰老是由两个单独且独立的过程引起的，这些过程涉及内源性因素和外源性因素。内源性衰老或时间生物学衰老对应于与年龄相关的正常衰老或生理衰老。
4.内源性衰老尤其会使得表皮细胞再生减慢，并出现细纹或皱纹。在真皮层面，胶原蛋白等大分子的生物合成会随着年龄的增加而减少，改变了真皮的力学性能，使得皮肤松弛，这是衰老的临床症状之一。
5.外源性衰老对应于通常由外部环境引起的衰老，并且特别对应于由于阳光照射的光衰老。光诱导的皮肤衰老，即由阳光照射引起的衰老，也称为光衰老或日光性皮肤病。光衰老是真皮层胶原纤维退化的结果，特别是导致临床上皮肤改变，如粗皱纹与形成软化和风吹日晒的皮肤。因此，长期由紫外线照射会加速皮肤的衰老。外源性衰老也可能是由于吸烟、脂肪含量过高的饮食，或者实际上是饮酒造成的。这些要素特别会影响氧化还原环境向促氧化状态的渐变过程，从而导致造成内皮功能障碍的内皮因子的渐进变化。
6.于是就有了大量被称为“抗衰老”的美容护理方法，这些方法旨在预防和/或治疗衰老，特别是光衰老及其迹象，具体是防止出现皱纹，并显著减少已有皱纹，还可以减少或抑制老年斑。例如，这些美容护理方法包括定期涂抹被称为“抗衰老”或“抗皱”的乳液或乳霜，其包含各种美容活性成分。
7.与衰老的方式类似，特别是在受伤或手术后，皮肤变得脆弱，因此机体开始愈合的过程，从而能够使组织修复。这个过程需要多种细胞类型，因此可以防止出血、保护机体、清洁要修复的组织，并最终使伤口闭合。
8.当今有大量促进愈合的美容护理方法，主要以乳霜或乳液的形式出现，并包含各种美容活性成分。
9.在这些抗衰老、抗皱和/或愈合美容活性成分中，微藻似乎是富含脂质、蛋白质、多糖、维生素(b1、b6、b12、c、e、k等)、色素和抗氧化剂的来源，所述色素还具有抗氧化剂的作用。这些色素包括类胡萝卜素、藻胆蛋白(藻红蛋白和藻蓝蛋白)、藻蓝蛋白、藻红蛋白、虾青素或确实有β
‑
胡萝卜素。
10.因此，各种美容组合物使用微藻的提取物作为抗衰老和抗皱组分。具体可以引用专利申请cn104224608，其描述了一种包含螺旋藻(spirulina)提取物的抗衰老和抗皱乳化液，专利申请us2005/0220810，其描述了一种包含小球藻(chlorella)的提取物的抗衰老和抗皱组合物，或者实际上是申请jp2007176832，其描述了包含束丝藻(aphanizomenon)的提取物的抗衰老组合物。
11.以类似的方式，可以引用专利us7285266，其描述了一种包含河栖海链藻(thalassiosirafluviatilis)或威氏海链藻(thalassiosiraweissflogii)的提取物的美容组合物。
12.在它们所有的优点中，凭借其抗氧化特性，这些微藻的提取物尤其可以减弱表皮细胞的氧化应激。
13.与本领域技术人员在微藻中寻求的传统抗氧化作用相反，本技术人开发了作为主要美容活性组分的抗衰老和抗皱美容组合物，和/或促进皮肤愈合的美容组合物，其包含微藻。微藻的氧化活性由于结合光的应用而显著增强，从而激活活性氧衍生物(ros)的生产量。
14.事实上，本技术人没有利用微藻的天然抗氧化特性，而是开发了一种方法，可以使用光活化微藻，从而增加所述微藻中活性氧衍生物(ros)的生产量，并增强表皮细胞的氧化状态，以及增加一氧化氮的依赖剂量，从而强化胶原蛋白的合成并减少促炎细胞因子和金属蛋白酶的释放。本技术人惊奇地观察到，如此刺激的细胞活性将修复皮肤及其皱纹，并增加其弹性，同时，光活化了皮肤各种成分的自然产生过程，特别是刺激成纤维细胞的活性，增加胶原蛋白和纤维的生产量，从而还具有促进愈合、细胞再生和血管形成的抗衰老和抗皱作用。
15.本发明第一个目的是一种皮肤区域的美容护理方法，其包含以下连续步骤：
16.‑
向所述皮肤区域涂抹包含至少一种微藻的光活性提取物的美容组合物；
17.‑
用光发射波长为400至750nm的光源光照涂抹了所述组合物的所述皮肤区域。
18.根据本发明，微藻意指单细胞叶绿素光合自养生物。这些生物包括真核微藻，其特征在于细胞壁和细胞核，具体包含绿藻(chlorophytes)、金藻(chrysophytes)、甲藻(pyrrophytes)、颗石藻(coccolithophytes)、硅藻(diatoms)、裸藻(euglenophytes)、红藻(rhodophytes)和共球藻(trebouxiophytes)，以及还称为“蓝细菌”的原核生物，其没有细胞核或细胞壁；并且包含蓝藻。
19.根据本发明，所述至少一种微藻优选是光活性微藻。
20.根据本发明，提取物或光活性微藻意指在光照(优选红光)时，其引发氧化反应，其ros生产量比未光照所述提取物时的ros生产量高至少50％，优选高100％的ros生产量，并且增加一氧化氮的依赖剂量，从而强化胶原蛋白的合成并减少促炎细胞因子和金属蛋白酶的释放。根据本发明，术语“光反应性”可以用于替代术语“光活性”。
21.光源意指发光的装置。
22.根据本发明，所述微藻的提取物优选来源于瑞典四鞭藻(tetraselmissuecica)、杜氏盐藻(dunaliella salina)、盐水隐藻(rhodomonas salina)、蔷薇藻(rhodellamaculata)、雨生红球藻(haematochococcuspluvialis)、血藻(porphyridiumcruentum)、蓝载藻(cyanophoraparadoxa)、新月细柱藻
(cylindrothecaclosterium)、巴夫藻(diacronemalutheri)、羊角月牙藻(selenastrumcapricornutum)、聚球藻(synechococus sp.)、等鞭金藻(isochrysis sp.)、大溪地金藻(tisochrysis lutea)、三角褐指藻(phaeodactylumtricornutum)、钝顶节螺藻(arthrospira platensis)、杆状裂丝藻(stichococcusbacillaris)、异线藻(xanthonema sp.)、念珠藻(nostoc sp.)、洋假鱼腥藻(pseudanabaenagaleata)、钙质角刺藻(chaetoceroscalcitrans)、特氏杜氏藻(dunaliellatertiolecta)、莱茵衣藻(chlamydomonas reinhardtii)、四肩突四鞭藻(tetraselmistetrathele)和/或紫球藻(porphyridium purpureum)。
23.瑞典四鞭藻是一种绿色嗜盐微藻，属于四爿藻(chlorodendrophytes)纲。
24.杜氏盐藻是一种绿色嗜盐微藻，属于绿藻(chlorophytes)纲，可自发生长，优选是在盐度很高的泻湖环境中生长。
25.盐水隐藻，前身为盐藻(pyrenomonas salina)，是隐芽植物科的一种藻，存在于所有水生环境中，主要用作桡足类动物的食物。
26.蔷薇藻或红藻(rhodellaviolacea)是红藻科(rhodellaceae)的单细胞红藻。
27.雨生红球藻是红球藻科(haematococcaceae)的一种淡水单细胞绿藻。
28.血藻是单细胞藻科(porphyridiophyceae)红藻的一种。
29.蓝载藻是灰胞藻(glaucocystaceae)科的一种藻类。
30.新月细柱藻是一种生活在潮间带环境中的海洋硅藻。
31.巴夫藻是一种在水产养殖中用作海洋无脊椎动物，尤其是双壳类动物食物的定鞭藻(haptophyte)。
32.羊角月牙藻或近头状尖胞藻(raphidocelissubcapitata)是一种微藻，通常用作淡水中有毒物质营养水平的生物指标，因为它对金属等有毒物质的存在非常敏感。
33.聚球藻是主要生活在海洋环境中的单细胞蓝细菌的一种。
34.等鞭金藻是包含大量岩藻黄质的单细胞藻类。
35.大溪地金藻是一种在水产养殖中经常用作食物的定鞭藻。
36.三角褐指藻(phaedodactylumtricornutum)是海洋硅藻的一种，特别是培养以用作软体动物和鱼类的食物。
37.钝顶节螺藻是席藻(phormidiaceae)科的一种。
38.杆状裂丝藻是一种陆生藻类，特别是存在于地面、石墙、瓷砖、树干、玻璃、湿堤上。
39.异线藻是褐藻的一种。
40.念珠藻是念珠藻(nostocaceae)科的一种蓝细菌。
41.特氏杜氏藻是一种在某些情况下能够积累脂质的绿色微藻。
42.洋假鱼腥藻是蓝藻纲的光合细菌。
43.钙质角刺藻是角毛藻(chaetocerotaceae)科硅藻的一种。
44.莱茵衣藻通常被称为绿色酵母，是绿藻的一种。
45.四肩突四鞭藻是一种含有大量的抗氧化剂的绿藻。
46.紫球藻也称为血藻(porphyridiumcruentum)，是单细胞藻科红藻的一种。
47.特别优选地，根据本发明，所述微藻提取物是杜氏盐藻的提取物。
48.特别优选地，根据本发明，所述微藻提取物是瑞典四鞭藻的提取物。
49.特别优选地，根据本发明，所述微藻的提取物是杜氏盐藻的提取物和瑞典四鞭藻的提取物。
50.根据本发明，所述提取物优选是微藻液体提取物，优选在微藻培养、离心和研磨滤饼后获得。这些提取物可以是水溶性的和/或脂溶性的。
51.甚至更优选地，根据本发明，这些提取物是水溶性的。
52.根据本发明，所述包含杜氏盐藻提取物的美容组合物优选包含：
53.‑
杜氏盐藻的提取物，占所述组合物重量的0.0001％至80％，优选占所述组合物重量的0.0001％至50％；
54.‑
qsp 100水；
55.‑
甘油，占所述组合物重量的2.50％；
56.‑
三乙醇胺，占所述组合物重量的0.40％；
57.‑
乙醇，占所述组合物重量的15％；
58.‑
椰油醇辛酸酯癸酸酯，占所述组合物重量的1％；
59.‑
肉豆蔻酸异丙酯，占所述组合物重量的1％；
60.‑
香水，占所述组合物重量的0.1％。
61.根据本发明，包含瑞典四鞭藻的提取物的所述美容组合物优选包含：
62.‑
瑞典四鞭藻的提取物，占所述组合物重量的0.0001％至78％，优选占所述组合物重量的0.0001％至50％；
63.‑
qsp 100水；
64.‑
甜杏仁油，占所述组合物重量的7.00％；
65.‑
苯甲酸c12
‑
15烷基酯，占所述组合物重量的4.50％；
66.‑
硬脂醇聚醚，占所述组合物重量的5.65％；
67.‑
硬脂酸甘油酯，占所述组合物重量的1.90％；
68.‑
二甲基硅油，占所述组合物重量的1.40％；
69.‑
卡波姆，占所述组合物重量的0.25％；
70.‑
苯甲酸钠，占所述组合物重量的0.25％；
71.‑
香水，占所述组合物重量的0.20％；
72.‑
苯甲酸钠，占所述组合物重量的0.18％；
73.‑
edta，占所述组合物重量的0.10％。
74.根据本发明，包含杜氏盐藻的提取物和瑞典四鞭藻的提取物的所述美容组合物优选包含：
75.‑
瑞典四鞭藻的提取物，占所述组合物重量的0.0001％至76％，优选占所述组合物重量的0.0001％至50％；
76.‑
杜氏盐藻的提取物，占所述组合物重量的0.0001％至76％，优选占所述组合物重量的0.0001％至50％；
77.‑
qsp 100水；
78.‑
棉籽油，占所述组合物重量的4.00％；
79.‑
甘油，占所述组合物重量的3.2％；
80.‑
向日葵油，占所述组合物重量的4.00％；
81.‑
辛基十二醇，占所述组合物重量的3.00％；
82.‑
丙二醇，占所述组合物重量的3.70％；
83.‑
丙烯酸钠共聚物，占所述组合物重量的1.5％；
84.‑
辛酸/癸酸甘油三酯，占所述组合物重量的1.10％；
85.‑
戊二醇，占所述组合物重量的0.8％；
86.‑
淀粉辛烯基琥珀酸铝，占所述组合物重量的0.8％；
87.‑
苯甲醇，占所述组合物重量的0.70％；
88.‑
卵磷脂，占所述组合物重量的0.50％；
89.‑
椰油醇
‑
辛酸酯/癸酸酯，占所述组合物重量的0.20％；
90.‑
生育酚，占所述组合物重量的0.20％；
91.‑
edta，占所述组合物重量的0.08％；
92.‑
脱氢乙酸，占所述组合物重量的0.06％。
93.根据本发明，所述光优选为红光，所述红光的波长为625至670nm，优选为645nm，所述红光的强度为140至180μmol.s
‑1.m
‑2光子，优选为155至170μmol.s
‑1.m
‑2光子。
94.根据本发明，优选使用电致发光二极管、激光和/或强脉冲光实现所述光照。
95.根据本发明，强脉冲光或ipl，也称为闪光灯，被理解为包含具有高强度放电功能并填充有稀有气体(例如氙气)的多色灯的技术。所述多色灯的功能是将储存的电能转化为强烈的辐射能爆发。发射的光覆盖紫外线、可见光和红外线的光谱区域，即350nm至1200nm，包括波长为625至670nm、优选为645nm的红光。
96.根据本发明，电致发光二极管意指当电流通过时发出低频光的电子组件。它发出一种被认为是“冷色”的光，因为不产生热量。所述电致发光二极管的发射光谱范围是从可见光到红外线。
97.根据本发明，所述电致发光二极管优选发射波长为625至670nm、优选为645nm的红光。
98.根据前述权利要求，所述光照时间优选为1秒至60分钟，优选30秒至40分钟，甚至更优选10至20分钟。
99.根据本发明，光照时间意指光照个体皮肤的时间。
100.根据本发明，优选地将所述光源放置在距待治疗的皮肤区域2mm至10cm的距离处。
101.根据本发明，所述光源优选提供的光强度在3和150j/cm2之间。
102.根据第二方面，本发明涉及一种用于根据本发明所述的方法进行美容护理的照明装置，所述装置由包含光源的壳体组成，所述光源的光发射波长为400至750nm，优选为625至670nm，强度为140至180μmol.s
‑1.m
‑2光子，优选为155至170μmol.s
‑1.m
‑2光子。
103.根据本发明，所述光源的光发射波长优选地为645nm。
104.根据本发明，所述光源优选地包含至少一个led，其光发射波长谱为400至750nm，优选为625至670nm，并且强度为140至180μmol.s
‑1.m
‑2光子，优选为155至170μmol.s
‑1.m
‑2光子。
105.根据本发明，所述至少一个led的光发射波长优选地为645nm。
106.根据本发明，所述光源优选地表现出0.15cm2至2900cm2的表面积。
107.根据本发明的一个实施例，所述光源优选地表现出0.25至1450cm2的表面积。
108.根据本发明，所述装置优选地采用面罩、面板或手动设备的形式。
109.根据本发明，面罩意指能够使面部的全部或部分接受光照的装置。所述光源可以表现出大约为面部表面积的表面积，即大约500cm2。
110.根据本发明，手动使用的设备意指一种手持装置，其能够以局部方式使个体皮肤接受光照。例如，手动设备可以是一支笔，并且然后所述光源可以表现出大约0.15至2cm2的表面积；或者所述手动设备是电动剃须刀大小的装置，并且然后所述光源可以表现出大约2至7cm2表面积。
111.根据本发明，面板意指一种能够使个体身体的很大一部分接受光照的装置。这种类型的装置甚至可以使整个个体身体接受光照。然后，所述光源可以表现出550cm2至大于1500cm2的表面积。
112.根据第三个方面，本发明涉及一种套件，其包含：
113.‑
美容组合物，其包含至少一种微藻的光活性提取物；
114.‑
用于根据本发明进行美容护理的照明装置。
115.根据本发明，微藻的所述提取物优选选自以下提取物：瑞典四鞭藻、杜氏盐藻、盐水隐藻、蔷薇藻、雨生红球藻、血藻、蓝载藻、新月细柱藻、巴夫藻、羊角月牙藻、聚球藻、等鞭金藻、大溪地金藻、三角褐指藻、钝顶节螺藻、杆状裂丝藻、异线藻、念珠藻、洋假鱼腥藻、钙质角刺藻、特氏杜氏藻、莱茵衣藻、四肩突四鞭藻和/或紫球藻。
116.根据本发明，所述组合物优选包含瑞典四鞭藻的提取物。
117.根据本发明，所述组合物优选包含杜氏盐藻的提取物。
118.根据本发明，所述照明装置的光发射波长优选为400至750nm，强度为140至180μmol.s
‑1.m
‑2光子，优选为155至170μmol.s
‑1.m
‑2光子。
119.根据本发明，所述光优选是波长为625至670nm，优选为645nm的红光。
120.根据第四方面，本发明涉及根据本发明的装置用于抗衰老和/或抗皱治疗和/或促进皮肤区域愈合治疗的用途。
附图说明
121.图1：微藻的多种光活性提取物在光照(645nm)25分钟(灰色)后ros的生产量，稀释因子为500。所述提取物在避光条件下保存的结果以黑色显示。
122.图2：光照时长对氧化分子(ros)生产量的影响，取决于所述提取物。源于杜氏盐藻(ds)的提取物(图2a)、源于瑞典四鞭藻(ts)的提取物(图2b)和源于盐水隐藻(rs)的提取物(图2c)保存在避光条件下(i)，或在645nm下光照1分钟(ii)、10分钟(iii)或连续光照(iv)。
123.图3：在通过微流体rt
‑
qpcr研究皮肤细胞mrna表达的有效性期间评估的基因。
124.图4：红色led模块(波长＝645nm)，预设为160μmol/m2/s，用于光活化(实例5)。
125.实例
126.实例1：样品的制备
127.微藻的提取物中氧化分子生产量的表征：
128.选择以下藻类的提取物来表征当它们受到光刺激时氧化分子生产量的增加：杜氏盐藻(ds)、特氏杜氏藻(td)、瑞典四鞭藻(ts)、莱茵衣藻(cr)、雨生红球藻(haematococuspluvialis)(hp)、四肩突四鞭藻(tt)、盐水隐藻(rs)、紫球藻(pp)、蔷薇藻
(rm)。
129.为了实现这一点，将藻类置于200ml培养物中。在680nm波长下进行细胞计数后，将100至150ml含有藻类的溶液以12,000rpm的速率离心10分钟。
130.然后将滤饼研磨，并将研磨材料在150ml pbs中调节至5.0.105个细胞/ml。
131.在680nm波长下进行细胞计数后，然后将这种调整过的研磨材料以12,000rpm的速率离心10分钟。
132.最后，将上清液以0.2μm过滤，以获得可供分析的样品。
133.一旦做好分析的准备，就将这些藻类提取物组成的样品放置在以下条件下：
134.1.避光，将15μl反应介质加入以0.2μm过滤的30ml上清液中；
135.2.避光，将15μl反应介质加入以0.2μm过滤的30ml上清液中，然后在645nm下连续光照，强度为166μmol.s
‑1.m
‑2。
136.3.避光，取0.2μm过滤的30ml上清液，用双氮鼓泡30分钟，然后与15μl反应介质混合。然后在645nm下以166μmol.s
‑1.m
‑2的强度进行光照步骤。
137.实例2：菌株筛选
138.然后通过使用分光荧光计进行的荧光分析，研究各种提取物，将它们保存在避光条件下或将它们在645nm光照25分钟，稀释因子为500。参数如下：
139.激发光：500发射光：522
140.激发光：扫描范围495
–
505
141.发射光：扫描范围400
–
650
142.结果如图1所示。
143.这些结果表明，对于所有研究的提取物，光照后ros的生产量增加。
144.具体来说，ds提取物的ros生产量增加到5倍，td提取物的ros生产量增加到5.5倍，ts提取物的ros生产量增加到3.6倍，cr提取物的ros生产量增加到2.1倍，pp提取物的ros生产量增加到2倍，rs提取物的ros生产量增加到6.8倍，rm提取物的ros生产量增加到2.3倍，hp提取物的ros生产量增加到3.1倍，tt提取物的ros生产量增加到3.4倍。
145.实例3：光照时长的影响：
146.然后基于光照时长研究提取物。研究的4个阶段是：
147.‑
避光保存的提取物
148.‑
在645nm下光照1分钟的提取物
149.‑
在645nm下光照10分钟的提取物
150.‑
在645nm下持续光照的提取物。
151.ds(图2a)、ts(图2b)和rs(图2c)的结果如图2所示。
152.这些结果表明，无论微藻的提取物如何，避光条件下ros的生产量都是恒定的。
153.对于1分钟光照的情况，ds、ts和rs的提取物均显示ros生产量的增加，这在大约20/25分钟后消失。生产量增加，在大约20/25分钟时达到最大，然后下降。因此，观察到ds最多增加到约2.5倍，ts最多增加到5倍，rs最多增加到约3倍。
154.之后对于10分钟光照的情况，ds、ts和rs的提取物均表现出ros生产量的增加，这大于光照1分钟后的特征。生产量增加，在大约25/30分钟时达到最大，然后下降。因此，与缺少光照的情况相比，观察到ds最多增加到约4.5倍，ts最多增加到7倍，rs最多增加到5倍。
155.在持续光照的情况下，观察到曲线接近光照10分钟后的曲线。因此生产量增加，在大约25/30分钟时达到最大，然后下降。对于ds，在25分钟后观察到最大生产量，是在避光条件下生产量的3.5倍，因此略低于光照10分钟。在最初的25分钟内，ros生产量的逐渐增加类似于在光照10分钟时的特征。然而，在35分钟后，持续光照似乎比在10分钟光照后的ros生产量更多。对于ts，在30分钟后观察到最大生产量，是避光条件下生产量的6倍，因此略低于光照10分钟的情况。在前25分钟内，ros生产量的逐渐增加类似于在光照10分钟时的特征。然而，在35分钟后，持续光照似乎比光照在10分钟后的ros生产量更多。对于rs，在25分钟后观察到最大生产量，是避光条件下生产量的5倍，因此与光照10分钟相同。然而，在35分钟后，持续光照似乎表现出持久的ros生产量，这大于光照于10分钟后的生产量。
156.总之，响应没有持续增加，使得在每个菌株的ros最大生产量达到特定平台期，在大约25/30分钟达到，光照量率为10分钟。此外，可以清楚地看出，生产量的终止取决于光照时长，在1和10分钟光照的情况显示出在20到30分钟后ros生产量的减少。
157.实例4：使用光发射波长为645nm的装置对30名抗衰老美容护理受试者进行临床评估总体而言，临床研究涉及30名年龄在35至70岁之间的女性。
158.a)进行美容组合物的涂抹，并以645nm的光照射。
159.进行皮肤色调(通过触摸分析)和细纹或皱纹的临床皮肤病学检查(半定量评分)。拍摄微距照片(未化妆的受试者，标准姿势)。在d0和d28时使用测量仪(皮肤站(skin station))测量皱纹的表面积、深度和皮肤粗糙度。
160.将0.4g组合物涂抹于面部。
161.用光发射波长为625至670nm的照明装置光射包含鱼尾纹的皮肤区域。
162.应用645nm的光源(时长、距离、强度)。
163.c)结论
164.在使用组合物和装置护理后，30名受试者中的27名中观察到了皮肤临床改善情况。
165.产品具有极好的耐受性，总体而言，美容评估非常好。
166.因此，根据本发明的美容护理方法可以显著减少皮肤皱纹。
167.实例5：在使用光活化提取物后，通过微流体rt
‑
qpcr评估皮肤细胞mrna表达的有效性。
168.整个处理过程是在半黑暗中进行的。
169.材料：
170.‑
红色led模块(波长＝645nm)，预设为160μmol/m2/s，如图4所示。
171.‑
20ml玻璃试管
172.‑
夹具
173.‑
包含杆的支架
174.方案：
175.在半黑暗中，将5ml的提取物倒入试管中。
176.然后通过夹具将试管固定到支架的杆上，将试管放置在led的模块的中心。
177.然后点亮红色led的模块，让光持续照射10分钟。
178.10分钟后，切断光，样品保持在半暗状态。
179.使用移液管取出试管中的提取物，无须搅拌。
180.在方案的其余部分，使用在新鲜状态下的光活化提取物。
181.该实验在正常人表皮角质形成细胞(nhek)和正常人真皮成纤维细胞(nhdf)上进行三次(n＝3)，其中使用了如上所述活化的提取物。
182.分析方法：
183.提取mrna并反转录为cdna。使用qpcr进行基因表达的量化，并通过参考基因的表达进行标准化。为了确认活化剂或抑制剂的作用，在与提取物接触后，将这些值与参考条件进行比较。
184.评估的基因如图3所示。
185.观察到紧密连接蛋白1基因、胶原蛋白基因、原纤维蛋白1基因和原纤维蛋白2基因以及一般抗氧化基因表达的增加。同时，观察到金属肽酶1、3和9基因表达和炎症的减少。
186.总之，观察到促进皮肤衰老的基因表达的减少。