一种海蛇毒的鉴定方法及其应用与流程

技术特征：
1.一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）选择产地为中国的海蛇毒素冻干粉，溶解后配制成蛋白质溶液；所述产地为中国的海蛇毒素包括平颏海蛇毒和青环海蛇毒；（2）采用紫外光谱扫描进行海蛇毒的分析及初步鉴定；（3）采用sds-page电泳分析及液质联用lc-esi-ms/ms质谱法进行明确鉴定。2.根据权利要求1所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（1）中，所述溶解后配制成蛋白质溶液具体为：用溶液a溶解后配制成蛋白浓度20-65mg/ml的蛋白质溶液；其中，溶液a的配方为：2.8-3.6g 氯化钠，4.2-4.5g硼酸，0.40-0.46g四硼酸钠，加注射用水定容至1l，ph值为 6.0-8.0。3.根据权利要求2所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，所述溶液a的配方为：3.5g 氯化钠，4.2g硼酸，0.45g四硼酸钠，加注射用水定容至1l，ph值为 7.2。4.根据权利要求2所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，所述用溶液a溶解后配制成蛋白浓度为30mg/ml的蛋白质溶液。5.根据权利要求1所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述紫外光谱扫描的波长扫描范围为200nm-400nm，所述紫外光谱扫描对海蛇毒进行质量控制和对比分析。6.根据权利要求1所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中，所述进行sds-page电泳分析，蛋白胶浓度为10-17.5%。7.根据权利要求6所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，所述蛋白胶浓度为17.5%。8.根据权利要求6或7所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中，所述蛋白胶为分离胶，由如下组分组成：水、溶液b、溶液c、溶液d、溶液e、溶液f；所述溶液b的配方为：290g acrylamide，10g bis-acrylamide，加注射用水定容至1l；所述溶液c的配方为：181.7g tris，hcl调ph值至7.5-9.5，加注射用水定容至1l；所述溶液d的配方为：100g sds，加注射用水定容至1l；所述溶液e的配方为：100g aps，加注射用水定容至1l；所述溶液f的配方为：temed溶液。9.根据权利要求1所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中，所述进行sds-page电泳分析，蛋白胶浓度为4.5%，所述蛋白胶为浓缩胶，浓度为由如下组分组成：水、溶液b、溶液g、溶液d、溶液e、溶液f；所述溶液b的配方为：290g acrylamide，10g bis-acrylamide，加注射用水定容至1l；所述溶液g的配方为：121g tris，hcl调ph值至6.0-8.0，加注射用水定容至1l；所述溶液d的配方为：100g sds，加注射用水定容至1l；所述溶液e的配方为：100g aps，加注射用水定容至1l；所述溶液f的配方为：temed溶液。10.根据权利要求1所述的一种海蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中，所述进行液质联用lc-esi-ms/ms质谱鉴定，检测到的海蛇蛇毒蛋白主要有磷脂酶a2、三指毒素、金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、血管内皮生长因子、蛇毒因子、蛋白酶抑制剂、磷脂酶b、离子通道抑制剂、富含半胱氨酸的蛇毒蛋白、翻译控制肿瘤蛋白。11.如权利要求1-10任一项所述的一种海蛇毒的鉴定方法在制备治疗海蛇毒中毒的抗海蛇毒血清中的应用。

技术总结
本发明公开了一种海蛇蛇毒的鉴定方法，包括如下步骤：（1）选择产地为中国的海蛇毒素（含平颏海蛇毒和青环海蛇毒）冻干粉，溶解后配制成蛋白质溶液；（2）采用紫外光谱扫描进行海蛇毒的分析及初步鉴定；（3）采用SDS-PAGE电泳分析及液质联用LC-ESI-MS/MS质谱法进行明确鉴定。此外，本发明还公开了该海蛇毒的鉴定方法在制备治疗海蛇毒中毒的抗海蛇毒血清中的应用。本发明可对海蛇毒进行实验室鉴定，更准确地对海蛇毒进行质控，进而生产出治疗海蛇毒中毒的特效药抗海蛇毒血清。本发明方法检测灵敏度高、正确检出率较高、不存在交叉反应，能有效缩短测试时间，并大大降低人工操作成本。并大大降低人工操作成本。并大大降低人工操作成本。


技术研发人员：张黎明 杨智 柳国艳 范铁炯 王博 史小月 王倩倩 陈则
受保护的技术使用者：上海赛伦生物技术股份有限公司
技术研发日：2020.06.16
技术公布日：2021/12/16