一种提高小鼠体外受精效率的操作液及其使用方法与流程

技术特征：
1.一种提高小鼠体外受精效率的操作液，其特征在于，其配方包括htf混合液和胎牛血清；所述htf混合液的配方包括nacl 0.6mg/ml、kcl 0.35mg/ml、kh2po
4 0.05mg/ml、mgso4.7h2o 0.05mg/ml、葡萄糖0.5mg/ml、nahco
3 2.1mg/ml、cacl2.2h2o 0.6mg/ml、丙酮酸钠0.037mg/ml、60％乳酸钠水乳液3.42μl/ml、牛血清蛋白5
‑
8mg/ml。2.根据权利要求1所述的提高小鼠体外受精效率的操作液，其特征在于，所述胎牛血清以htf混合液的体积计的用量为60
‑
80μl/ml。3.根据权利要求2所述的提高小鼠体外受精效率的操作液，其特征在于，所述胎牛血清以htf混合液的体积计的用量为75μl/ml。4.权利要求1所述的提高小鼠体外受精效率的操作液的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、在被处死之前第三天对雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素，注射量为5
‑
10iu/只；44
‑
48h后对对雌鼠腹腔注射人绒毛膜促性腺激素，注射量为5
‑
10iu/只；在雄鼠被处死精液的前一天取所述htf混合液在5％co2培养体系下过夜平衡，同时另取htf混合液和胎牛血清混合均匀后在5％co2培养体系下过夜平衡，制得htf混合液和操作液；s2、处死步骤s1的雄鼠并获得附睾尾，将附睾尾精液移入500μl步骤s1的所述htf混合液中，盖上石蜡油，在5％co2培养体系下获能40
‑
60min；s3、取步骤s1的所述操作液100
‑
200μl作为受精滴，取2
‑
5个受精滴作为受精盘，盖上石蜡油；处死检出阴道栓的步骤s1的雌鼠并取出卵团，将卵团转入所述受精盘的受精滴中；每个所述受精滴含有3
‑
5个卵团；s4、在步骤s3所得的每个所述受精滴中分别加入步骤s2的产物5
‑
10μl，在5％co2培养体系下培养4
‑
6h；s5、将步骤s4培养后的受精盘中的胚胎挑出，挑选出受精胚胎，用培养液清洗数次后，转到培养孔中培养洗胚。5.根据权利要求4所述的提高小鼠体外受精的操作液的使用方法，其特征在于，步骤s2的获能时间为55min。6.根据权利要求4所述的提高小鼠体外受精的操作液的使用方法，其特征在于，步骤s3中作为受精滴的所述操作液的用量为150ul。7.根据权利要求4所述的提高小鼠体外受精的操作液的使用方法，其特征在于，步骤s4中，步骤s2的产物的加入量为8μl，在5％co2培养体系下培养5.5h。

技术总结
本发明公开一种提高小鼠体外受精效率的操作液及其使用方法，属于小鼠体外受精技术领域；操作液配方包括HTF混合液和胎牛血清；HTF混合液的配方包括NaCl 0.6mg/ml、KCl 0.35mg/ml、KH2PO40.05mg/ml、MgSO4.7H2O 0.05mg/ml、葡萄糖0.5mg/ml、NaHCO32.1mg/ml、CaCl2.2H2O 0.6mg/ml、丙酮酸钠0.037mg/ml、60％乳酸钠水乳液3.42μl/ml、牛血清蛋白5


技术研发人员：熊文静 骆峻玮
受保护的技术使用者：武汉纤然生物科技有限公司
技术研发日：2021.08.26
技术公布日：2021/12/16