一种固定化尿酸酶活性的方法与流程

技术特征：
1.一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，其操作方法如下：步骤1、a试管中加入尿酸溶液，并于40℃的水浴中保温5min；步骤2、向a试管中加入适当稀释的尿酸酶液，搅拌均匀，使其反应完全；步骤3、向a试管中加入20％的koh用于停止尿酸酶的反应，并通过紫外分光光度计于290nm处测定吸光度；步骤4、b试管中加入水溶液，并于40℃的水浴中保温5min；步骤5、向b试管中加入适当稀释的尿酸酶液，搅拌均匀，使其反应完全；步骤6、向b试管中加入20％的koh用于停止尿酸酶的反应，并通过紫外分光光度计于290nm处测定吸光度；步骤7、c试管中加入尿酸溶液，并于40℃的水浴中保温5min后，加入固定化尿酸酶并搅拌均匀，使其反应完全；步骤8、将固定化尿酸酶通过滤膜过滤后，通过紫外分光光度计于290nm处测定吸光度；步骤9、d试管中加入水溶液，并于40℃的水浴中保温5min后，加入固定化尿酸酶并搅拌均匀；步骤10、将固定化尿酸酶通过滤膜过滤后，通过紫外分光光度计于290nm处测定吸光度；步骤11、将所得的吸光度代入至标准曲线中计算尿酸含量。2.根据权利要求1所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步骤2和步骤5中尿酸酶液的浓度为1mg/ml3.根据权利要求1所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步骤1中加入的尿酸溶液的体积为10ml，浓度为100mg/l；步骤7中加入的尿酸溶液的体积为10ml。4.根据权利要求1所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步骤4中加入的水溶液的体积为10ml，酸碱度为ph8.5，步骤9中加入的水溶液的体积为10ml，酸碱度为ph8.5。5.根据权利要求1所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步骤7中加入的固定化尿酸酶体积为1g，步骤9中加入的固定化尿酸酶体积为1g。6.根据权利要求1所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步骤11中的标准曲线为y＝12.976x
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0.1957。7.根据权利要求1所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述步骤11中标准曲线的制作方法包括如下步骤：步骤110、抽取母液25ml放于烧杯中，另外加入等体积的基底液进行稀释，得到混合物a；步骤111、抽取混合物a25ml放于烧杯中，另外加入等体积的基底液进行稀释，得到混合物b，并同理继续进行稀释，直至稀释9次，得到混合物c；步骤112、将紫外分光光度计打开预热20分钟，并机器进行自检；步骤113、机器开盖后按调零键，合上盖子将波长调至293nm，加空白溶液，调满度，透射比为100，测其9次稀释溶液的吸光度，每次测3个重复；步骤114、根据9次稀释溶液的吸光度，制作标注曲线。8.根据权利要求7所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述母液为
100mg/l的尿酸溶液，基底液为ph＝8.5的碱液，其中碱液为300mg naoh和5l纯水的混合物。9.根据权利要求8所述的一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其特征在于，所述母液的配置方法为：将100mg的尿酸加入ph＝8.5的基底液中，并放于37.5℃中，溶解3h，直至溶液变为清澈，并且无白色颗粒，放置一天后，用于标准溶液的配制。

技术总结
本发明提出了一种测定固定化尿酸酶活性的方法，其操作方法如下：步骤1、A试管中加入尿酸溶液并水浴中保温；步骤2、向A试管中加入尿酸酶液搅拌均匀；步骤3、向A试管中加入KOH并测定吸光度；步骤4、B试管中加入水溶液并水浴中保温；步骤5、向B试管中加入尿酸酶液并搅拌均匀；步骤6、向B试管中加入KOH并测定吸光度；步骤7、C试管中加入尿酸溶液并水浴中保温后，加入固定化尿酸酶搅拌均匀；步骤8、将固定化尿酸酶过滤后，测定吸光度；步骤9、D试管中加入水溶液并水浴中保温后，加入固定化尿酸酶搅拌均匀；步骤10、将固定化尿酸酶过滤后，测定吸光度，借此，本发明具有能够测定固定化尿酸酶对尿酸分解效果的优点。尿酸分解效果的优点。尿酸分解效果的优点。


技术研发人员：顾凌巍 张令慧 张丁一
受保护的技术使用者：江苏恰瑞生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.17
技术公布日：2021/12/16