ATR抑制剂和PARP1抑制剂联用在制备治疗乙肝相关性肝癌的药物中的用途的制作方法

atr抑制剂和parp1抑制剂联用在制备治疗乙肝相关性肝癌的药物中的用途
技术领域
1.本发明属于制药领域，具体涉及atr抑制剂和parp1抑制剂联用在制备治疗乙肝相关性肝癌的药物中的用途。


背景技术：

2.atr(ataxia-telangiectasia mutated and rad3-related)作为dna损伤感受器，是dna损伤通路的关键分子。在获得dna损伤信号后，atr发生过度活化，通过磷酸化下游关键分子chk1、smc1、chk2、h2ax、p53等激活多条信号通路，启动应激系统，调节细胞周期各个检验点，引起细胞周期阻滞，影响染色体稳定性，最终可能导致细胞恶性转化。因此dna损伤时，atr通路的过度活化可能在恶性肿瘤的发生发展中起重要作用。研究表明，抑制atr可以选择性的抑制肿瘤细胞，且对正常细胞干扰较少，因此atr有望成为高选择性抗肿瘤药物的靶标，目前atr抑制剂受到越来越多的关注，atr抑制剂可诱导atr通路依赖型恶性肿瘤细胞死亡，用于癌症治疗有很大潜力。
3.聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(parp)是一种与dna损伤修复密切相关的核酶，其中parp1亚型承担了90％以上的修复任务。在肿瘤细胞中dna损伤修复通路异常活跃。parp1是一个多受体的蛋白质，可启动细胞内对端粒结构变化作出反应的信号转导机制，维持癌变细胞端粒结构的稳定，在癌细胞端粒结构的调控机制中有重要作用。抑制parp1的活性可以抑制肿瘤的生长。近年来，已经有多个parp1抑制剂进入临床研究阶段，parp1抑制剂已经成为肿瘤药物研发热点之一。
4.atr抑制剂和parp1抑制剂均可用于部分癌症的治疗，还有研究利用parp1抑制剂与atr抑制剂药物联用治疗乳腺癌，提高治疗效果。但是癌症治疗机理是十分复杂的，尚未见利用parp1抑制剂与atr抑制剂药物联用治疗乙肝相关性肝癌。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供atr抑制剂和parp1抑制剂联用在制备治疗乙肝相关性肝癌的药物中的用途。
6.本发明提供了atr抑制剂和parp1抑制剂联用在制备治疗乙肝相关性肝癌的药物中的用途。
7.进一步地，所述atr抑制剂和parp1抑制剂的重量配比为(5～20):3；
8.优选地，所述atr抑制剂和parp1抑制剂的重量配比为10:3。
9.进一步地，所述atr抑制剂为azd6738；所述parp1抑制剂为ag14361。
10.azd6738：别名为ceralasertib，cas 1352226-88-0，分子式c
20
h
24
n6o2s，分子量为412.51，是一种atr抑制剂，其结构式如下：
[0011][0012]
ag14361：cas 328543-09-5，分子式c
19
h
20
n4o，分子量为320.39，是一种parp1抑制剂，其结构式如下：
[0013][0014]
本发明还提供了一种治疗乙肝相关性肝癌的药物组合物，它是由atr抑制剂和parp1抑制剂组成。
[0015]
进一步地，所述atr抑制剂和parp1抑制剂的重量配比为(5～20):3；
[0016]
优选地，所述atr抑制剂和parp1抑制剂的重量配比为10:3。
[0017]
进一步地，所述atr抑制剂为azd6738；所述parp1抑制剂为ag14361。
[0018]
本发明提供了一种前述的药物组合物的制备方法，所述方法是按照以下步骤制备：按照重量配比取atr抑制剂和parp1抑制剂，混合，即可。
[0019]
本发明提供了一种治疗乙肝相关性肝癌的药物制剂，它是由前述的药物组合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或者辅助性成分制备而成的制剂。
[0020]
本发明提供了一种治疗乙肝相关性肝癌的联合用药，它含有相同或者不同规格的同时或者分别给药的atr抑制剂和parp1抑制剂，以及药学上可接受的载体；所述atr抑制剂和parp1抑制剂的重量配比为(5～20):3；
[0021]
优选地，所述atr抑制剂和parp1抑制剂的重量配比为10:3。
[0022]
进一步地，所述atr抑制剂为azd6738；所述parp1抑制剂为ag14361。
[0023]
本发明实施例中atr抑制剂为azd6738，parp1抑制剂为ag14361。但atr抑制剂和parp1抑制剂不仅仅限制于这两种种类，其他atr抑制剂和parp1抑制剂按照本发明所述方法，都可以达到相应疗效。
[0024]
atr抑制剂和parp1抑制剂联合使用仅仅对hbv阳性肝癌，即对乙肝相关性肝癌具
有协同增效作用，对于非乙肝相关性肝癌具无协同增效的作用。
[0025]
atr抑制剂和parp1抑制剂联合使用能够有效抑制乙肝相关性肝癌的肿瘤组织生长，可有效治疗乙肝相关性肝癌；且联合使用atr抑制剂和parp1抑制剂对乙肝相关性肝癌具有协同增效的作用，可用于制备治疗乙肝相关性肝癌的药物，具有良好的前景。
[0026]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0027]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
[0028]
图1为利用hbv阳性肝癌pdx模型评估atr抑制剂联合parp1抑制剂疗效的结果：a为给药28天后，各组肿瘤实体图；b为各组随时间增加肿瘤的体积变化；c为各组随时间增加荷瘤鼠的重量变化；d为给药28天后，各组肿瘤的重量。
[0029]
图2为利用hbv阴性肝癌pdx模型评估atr抑制剂联合parp1抑制剂疗效的结果：a给药14天后，为各组肿瘤实体图；b为各组随时间增加肿瘤的体积变化；c为各组随时间增加荷瘤鼠的重量变化。
具体实施方式
[0030]
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0031]
实施例1、利用hbv阳性肝癌pdx模型评估atr抑制剂联合parp1抑制剂的疗效
[0032]
1、实验方法
[0033]
(1)hbv阳性肝癌pdx模型的构造方法：建立肝癌pdx模型通过华西医院伦理委员会批准，选择hbv阳性肝癌组织，剪碎成绿豆大小，1小时内接种于ncg小鼠皮下，当肿瘤体积达到500mm3时，再次扩增传代至开展药效实验。
[0034]
(2)药物评价方法：
[0035]
按药效实验需要，接种肿瘤组织至相应数量的ncg小鼠，当肿瘤体积平均值达到100mm3左右时，按照统计学方法进行随机分组，每组入组7只荷瘤鼠。具体分组及给药方法如下：
[0036]
组别g1(溶剂对照组)：荷瘤鼠只数为7只，同时给药溶媒1和溶媒2。溶媒1和溶媒2的给药体积分别100μl/只，给药方式为灌胃给药(i.g.)。
[0037]
组别g2：荷瘤鼠只数为7只，给药atr抑制剂azd6738。将azd6738溶于溶媒1中，azd6738的给药剂量为50mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为灌胃给药(i.g.)。
[0038]
组别g3：荷瘤鼠只数为7只，atr抑制剂azd6738和parp1抑制剂ag14361联合给药。将azd6738溶于溶媒1中，ag14361溶于溶媒2中：azd6738的给药剂量为50mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为灌胃给药(i.g.)；ag14361的给药剂量为15mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为腹腔注射(i.p.)。
[0039]
组别g4：荷瘤鼠只数为7只，给药parp1抑制剂ag14361。将ag14361溶于溶媒2中，ag14361的给药剂量为15mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为腹腔注射(i.p.)。
[0040]
溶媒1：含二甲亚砜(dmso)和丙二醇的ddh2o，其中二甲亚砜浓度为10％，丙二醇浓度为40％；溶媒2：含二甲亚砜(dmso)的ddh2o，其中二甲亚砜浓度为4％；溶媒1和溶媒2配制好后均置于-80℃保存。
[0041]
所有组给药频率为1次/天，给药5天停药2天，给药3周，延长观测1周。
[0042]
(3)实验观察和数据采集
[0043]
分组给药后，每周常规监测肿瘤对动物正常行为的影响。具体内容有实验动物的活动性，摄食和饮水情况，体重增加或降低情况，眼睛、被毛及其它异常情况。试验过程中观察到的临床症状均记录在原始数据中。
[0044]
每周2次记录小鼠体重、肿瘤体积；
[0045]
给药过程中小鼠若出现明显体重下降(低于分组时的90％)或其他异常情况，及时做好记录，必要时暂停给药并增加观察频率。
[0046]
(4)非实验终点动物安乐标准
[0047]
若药效实验结束前，肿瘤体积已大于2000mm3时，则提前对这些动物进行人道主义终点处理。
[0048]
当小鼠体重下降超过20％的情况持续超过72小时，将对其实施安乐死。
[0049]
其他动物安乐死标准：持续稀便、活动迟缓(不能进食或饮水)、弓背，侧卧；活动减少，出现肌肉萎缩症状；呼吸困难；进程性体温降低；瘫痪，痉挛；持续流血；由于严重的腹水或腹围增大导致动物不能够正常行动；
[0050]
(5)实验终点
[0051]
实验结束时，分析下列指标：a.肿瘤生长曲线；b.小鼠体重曲线；c.肿瘤重量；d.剥离的肿瘤按照组别进行排列后统一拍照。
[0052]
(6)肿瘤保存方式：a.中性甲醛固定；b.低温速冻保存(-80℃保存)。
[0053]
(7)统计分析
[0054]
采用独立样本t检验比较各组有无显著性差异。p<0.05为具有显著性差异。
[0055]
2、实验结果
[0056]
利用hbv阳性肝癌pdx模型评估atr抑制剂联合parp1抑制剂疗效的结果如图1、表1和表2所示。
[0057]
表1.各组hbv阳性肝癌pdx肿瘤体积随给药时间的变化
[0058][0059]
注：g1和g4肿瘤生长均较快，相比无显著性差异；而g2和g3均对肿瘤生长具有抑制作用，g3对肿瘤生长的抑制明显优于g2。其中，实验第28天，g1和g3、g2相比有显著性差异(p<0.05)，g1和g4相比无显著性差异(p＞0.05)；g2和g3相比有显著性差异(p＝0.0133)；g3和g4相比有显著性差异(p<0.05)。
[0060]
表2.各组给药28天后hbv阳性肝癌pdx肿瘤重量
[0061][0062][0063]
由图1、表1和表2可知：单独使用parp1抑制剂对hbv阳性肝癌没有抑制作用，即parp1抑制剂不能治疗乙肝相关性肝癌；而atr抑制剂和parp1抑制剂联合使用后对hbv阳性肝癌有良好的抑制作用，效果优于单独使用atr抑制剂。说明atr抑制剂和parp1抑制剂联合
治疗hbv阳性肝癌发挥了协同增效的作用。
[0064]
实施例2、利用hbv阴性肝癌pdx模型评估atr抑制剂联合parp1抑制剂的疗效
[0065]
1、实验方法
[0066]
(1)hbv阴性肝癌pdx模型的构造方法：建立肝癌pdx模型通过华西医院伦理委员会批准，选择hbv阴性肝癌组织，剪碎成绿豆大小，1小时内接种于ncg小鼠皮下，当肿瘤体积达到500mm3时，再次扩增传代至开展药效实验。
[0067]
(2)药物评价方法：
[0068]
按药效实验需要接种肿瘤组织至相应数量的ncg小鼠，当肿瘤体积平均值达到100mm3左右时，按照统计学方法进行随机分组，每组入组7只荷瘤鼠。具体分组及给药方法如下：
[0069]
组别g1(溶剂对照组)：荷瘤鼠只数为7只，同时给药溶媒1和溶媒2。溶媒1和溶媒2的给药体积分别100μl/只，给药方式为灌胃给药(i.g.)。
[0070]
组别g2：荷瘤鼠只数为7只，给药atr抑制剂azd6738。将azd6738溶于溶媒1中，azd6738的给药剂量为50mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为灌胃给药(i.g.)。
[0071]
组别g3：荷瘤鼠只数为7只，atr抑制剂azd6738和parp1抑制剂ag14361联合给药。将azd6738溶于溶媒1中，ag14361溶于溶媒2中：azd6738的给药剂量为50mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为灌胃给药(i.g.)；ag14361的给药剂量为15mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为腹腔注射(i.p.)。
[0072]
组别g4：荷瘤鼠只数为7只，给药parp1抑制剂ag14361。将ag14361溶于溶媒2中，ag14361的给药剂量为15mg/kg，给药体积为100μl/只，给药方式为腹腔注射(i.p.)。
[0073]
溶媒1：含二甲亚砜(dmso)和丙二醇的ddh2o，其中二甲亚砜浓度为10％，丙二醇浓度为40％；溶媒2：含二甲亚砜(dmso)的ddh2o，其中二甲亚砜浓度为4％；溶媒1和溶媒2配制好后均置于-80℃保存。
[0074]
所有组给药频率为1次/天，给药5天停药2天，给药3周，延长观测1周。
[0075]
(3)实验观察和数据采集
[0076]
分组给药后，每周常规监测肿瘤对动物正常行为的影响。具体内容有实验动物的活动性，摄食和饮水情况，体重增加或降低情况，眼睛、被毛及其它异常情况。试验过程中观察到的临床症状均记录在原始数据中。
[0077]
每周2次记录小鼠体重、肿瘤体积；
[0078]
给药过程中小鼠若出现明显体重下降(低于分组时的90％)或其他异常情况，及时做好记录，必要时暂停给药并增加观察频率。
[0079]
(4)非实验终点动物安乐标准
[0080]
若药效实验结束前，肿瘤体积已大于2000mm3时，则提前对这些动物进行人道主义终点处理。
[0081]
当小鼠体重下降超过20％的情况持续超过72小时，将对其实施安乐死。
[0082]
其他动物安乐死标准：持续稀便、活动迟缓(不能进食或饮水)、弓背，侧卧；活动减少，出现肌肉萎缩症状；呼吸困难；进程性体温降低；瘫痪，痉挛；持续流血；由于严重的腹水或腹围增大导致动物不能够正常行动。
[0083]
(5)实验终点
[0084]
实验结束时，分析下列指标：a.肿瘤生长曲线；b.小鼠体重曲线；c.肿瘤重量；d.剥离的肿瘤按照组别进行排列后统一拍照。
[0085]
(6)肿瘤保存方式：a.中性甲醛固定；b.低温速冻保存(-80℃保存)。
[0086]
(7)统计分析
[0087]
采用独立样本t检验比较各组有无显著性差异。p<0.05为具有显著性差异。
[0088]
2、实验结果
[0089]
利用hbv阴性肝癌pdx模型评估atr抑制剂联合parp1抑制剂疗效的结果如图2、表3和表4所示。
[0090]
表3.各组hbv阴性肝癌pdx肿瘤体积随给药时间的变化
[0091][0092]
注：各组肿瘤体积无统计学差异(p＝0.8230)。
[0093]
表4.各组给药14天后hbv阴性肝癌pdx肿瘤重量
[0094]
[0095][0096]
由图2、表3和表4可知：给药14天时对照组(g1)死亡7只，atr单药组死亡2只；prap1单药组死亡6只，atr抑制剂单用组及联合parp1抑制剂组死亡2只，组间肿瘤大小无差异。可知atr抑制剂、parp1抑制剂无论单用还是联用，对hbv阴性肝癌均无明显抑制作用。
[0097]
上述实验结果说明：atr抑制剂和parp1抑制剂联合使用仅仅对hbv阳性肝癌，即对乙肝相关性肝癌具有协同增效作用，对于非乙肝相关性肝癌具无协同增效的作用。
[0098]
综上，atr抑制剂和parp1抑制剂联合使用能够有效抑制乙肝相关性肝癌的肿瘤组织生长，可有效治疗乙肝相关性肝癌；且联合使用atr抑制剂和parp1抑制剂对乙肝相关性肝癌具有协同增效的作用，可用于制备治疗乙肝相关性肝癌的药物，具有良好的前景。