一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用的制作方法

1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用。


背景技术：

2.人被动运动时，受到异常前庭刺激或/和异常视觉刺激，会发生运动病，主要表现为面色苍白、出冷汗、流涎、淡漠、腹部不适、眩晕、恶心、呕吐等。目前，运动病的详细发病机制仍不十分清楚，防治方面仍缺少高效而无副作用的药物。现有防治运动病最常用的药物是抗组胺药乘晕宁(茶苯海明)，而效果最好的单药是抗胆碱药东茛菪碱，但以上药物的有效作用部位还不十分清楚，副作用也较大，特别是中枢抑制、视力模糊、记忆力损害等副作用，影响人们在航海、航空航天等各种特殊环境条件下的作业。
3.梅尼埃病是以突然发作的旋转性眩晕，伴有耳鸣、耳聋、头或耳内胀满感等症状为特征的内耳疾病，眩晕剧烈者可伴有恶心、呕吐、出冷汗等症状。该病的基本病理改变为膜迷路积水。研究发现，梅尼埃病与免疫反应、植物神经功能紊乱或感染等因素有关，这些因素或干扰内耳微血管功能，致使毛细血管和静脉回流受阻，或使内淋巴管阻塞，内淋巴液吸收障碍，造成膜迷路积水，导致内耳平衡功能失调。梅尼埃病往往发病急，易反复，是耳鼻喉科的难治病。对于梅尼埃病的治疗，由于至今尚未完全阐明病因，因此目前临床上主要针对其病理生理过程以对症治疗为主，采用抗晕、镇静、扩张血管、脱水及支持疗法等治疗措施，或是一些破坏性的手术或非手术治疗，保守治疗无效时，考虑手术治疗，如内淋巴囊减压或分流术、前庭神经切断术、迷路损毁或切除术等。这些方法或是影响到治疗效果，或是带来一些不必要的甚至损害听力与平衡功能等严重的副作用。
4.许多研究发现，运动病和梅尼埃病引起内耳内淋巴液形成过多，内淋巴囊上皮对水的重吸收减少，导致膜迷路积水，最终诱发眩晕、恶心、呕吐等症状。因此，如果使用药物抑制内耳内淋巴过多形成，可应用于运动病和梅尼埃病的新药物的开发。
5.醛固酮是一种参与机体水盐平衡、维持机体内环境稳态的重要激素。研究表明，腹腔注射醛固酮会导致豚鼠的耳蜗出现膜迷路积水的现象，提示醛固酮或许会促进内耳内淋巴生成和/或减少内淋巴重吸收，从而有增加内淋巴容量的效果。此外，也有发现豚鼠耳蜗因腹腔注射醛固酮诱发出现膜迷路积水现象的同时，会引起耳蜗组织中的上皮钠通道(α
‑
enac)蛋白和钠钾泵(na

,k

‑
atpase)的表达增加。这些研究提示盐皮质激素醛固酮调控的上皮钠通道和钠钾泵可能通过内耳靶蛋白的作用影响内耳水盐平衡，从而参与运动病和梅尼埃病的发生过程。
6.钠钾泵为细胞膜中存在的一种特殊蛋白质可以分解atp获得能量，并利用此能量进行na

、k

的主动转运，即能逆浓度梯度把na

从细胞内转运到细胞外，把k

从细胞外转运入细胞内，atp酶的主要作用是控制细胞膜内外的k

，na

离子的浓度差，对维持细胞内外的离子浓度差和正常膜电位起着极其重要的作用。钠钾泵对内外淋巴液k

，na

离子的浓度差至关重要，将细胞内过多的na

逆化学梯度泵出到细胞外。当运动病和梅尼埃病时，钠钾泵
表达和激活增加，最终引起内淋巴增加，造成膜迷路积水。因此可以利用抑制钠钾泵的过渡激活和表达的药物，应用于运动病和梅尼埃病。
7.强心苷类药物在临床上主要用于治疗心力衰竭和某些心律失常，其中最具代表性的就是地高辛(digoxin,dig.)，治疗剂量下可轻微抑制钠钾泵，破坏钠在细胞膜上的主动转运，使细胞内na

浓度增加，k

浓度降低。有研究表明地高辛可以缓解小鼠的胰腺和肺的水肿，因此也可能使用钠钾泵的抑制剂地高辛抑制内耳内淋巴液的生成，缓解内淋巴水肿，减轻前庭刺激的作用入手，从而盐皮质激素信号途径下游的蛋白钠钾泵为靶点，从拮抗钠钾泵的地高辛着手研发新的抗运动病药物。


技术实现要素：

8.解决的技术问题：
9.针对现有技术的不足，本技术解决了目前存在的现有药物的有效作用部位还不十分清楚，副作用也较大，特别是中枢抑制、视力模糊、记忆力损害等副作用，缺少高效而无副作用的药物等难题；提供了一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用。
10.技术方案：
11.为实现上述目的，本技术通过以下技术方案予以实现：
12.一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用，所述采用的实验动物为sprague
‑
dawley(sd)大鼠，体重200
‑
220g，雌性，适应性饲养3天，然后进行旋转刺激诱导运动病和梅尼病两个晕模型的实验，以条件性味觉厌恶为模型；再进行地高辛的抗晕实验，以旋转刺激诱导的条件性味觉厌恶为模型，步骤为：
13.步骤1：0.15％糖精钠溶液让大鼠自由饮用，每24h测量一次饮用量，地高辛在旋转刺激前1h经腹腔注射给予，剂量为1
‑
20mg/kg；
14.步骤2，旋转刺激诱导大鼠条件性味觉厌恶：旋转刺激诱导sd大鼠产生条件性味觉厌恶(晕)，通过测量大鼠对0.15％糖精钠溶液(saccharin sodium solution,sss)摄取量的减少情况来进行判断；
15.步骤3，地高辛抑制旋转刺激诱导的大鼠条件性味觉厌恶行为：在sd大鼠进行2h的旋转刺激前1h，腹腔注射给予地高辛(10mg/kg)，与旋转刺激前比较，检测旋转刺激后两天大鼠对0.15％糖精钠溶液饮用量的变化。
16.作为本发明的一种优选技术方案：所述地高辛(amiloride,aml)购自美国西格码
‑
奥德里奇(sigma
‑
aldrich)公司，糖精钠(saccharin sodium)由天津北方食品有限公司生产，sd大鼠由南通大学实验动物中心提供。
17.作为本发明的一种优选技术方案：所述步骤2中将大鼠自由无约束地放入内嵌有上下两层分隔板的旋转刺激装置中，每块隔板平均分成6份，每份放置1只，该装置在绕竖直轴进行匀速缓慢顺时针旋转的同时，绕水平轴变速旋转，先以角加速度16
°
/s2加速，角速度达到最大值120
°
/s后，立即以
‑
48
°
/s2的角加速度减速，直至停止，10s为一个周期，随后，逆时针方向重复这个周期，如此反复刺激120min，连续监测旋转刺激前两天和旋转刺激后两天各sd大鼠对0.15％糖精钠溶液的饮用量，记录相应实验数据，计算出糖精钠溶液的摄入量变化，指标为：糖精钠溶液饮用量变化百分比＝(旋转后2天糖精钠溶液平均饮用量
‑
旋转前2天平均饮用量)/旋转前2天平均饮用量，然后进行统计学分析，两组间比较采用独立样
本t检验(student’s test)，多组间比较采用单因素方差分析(one way anova)，lsd法进行两两比较，当p<0.05时，认为差异具有显著性即具有统计学意义。
18.作为本发明的一种优选技术方案：所述旋转刺激装置按照crampton和lucot(1985)的报道方法，将大鼠自由无约束地放入内嵌有上下两层分隔板的旋转刺激装置中，每块隔板平均分成6份，每份放置1只。
19.有益效果：
20.本技术提供了一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用，与现有技术相比，具备以下有益效果：
21.1、作为醛固酮下游靶蛋白钠钾泵的拮抗剂，地高辛腹腔注射可以缓解旋转刺激引起的条件性味觉厌恶，即可拮抗运动病、梅尼埃病(晕)；
22.2、由于梅尼埃病的发病机制与内耳内淋巴积水及醛固酮在内耳的作用直接相关，因此本研究结果也支持使用地高辛可起到治疗梅尼埃病的作用。
23.3、应用地高辛来拮抗旋转刺激和升高的精氨酸加压素、盐皮质激素醛固酮对内耳的作用，拮抗内耳内淋巴液生成过量，降低前庭刺激敏感性，抑制运动病的发生和抑制梅尼埃病程进展。
24.4、本发明通过研究显示，地高辛腹腔注射可以缓解旋转刺激引起的条件性味觉厌恶，即可拮抗运动病、梅尼埃病(晕)。
附图说明：
25.图1是本技术中腹腔注射地高辛后大鼠糖精钠溶液饮用量的变化图。
具体实施方式
26.下面结合实例对本发明的具体实施方式及工作过程作进一步说明。
27.实施例1：
28.一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用，采用的实验动物为sprague
‑
dawley(sd)大鼠，体重200
‑
220g，雌性，适应性饲养3天，然后进行旋转刺激诱导运动病和梅尼病两个晕模型的实验，以条件性味觉厌恶为模型；再进行地高辛的抗晕实验，以旋转刺激诱导的条件性味觉厌恶为模型，所述地高辛(amiloride,aml)购自美国西格码
‑
奥德里奇(sigma
‑
aldrich)公司，糖精钠(saccharin sodium)由天津北方食品有限公司生产，sd大鼠由南通大学实验动物中心提供，步骤为：
29.步骤1：0.15％糖精钠溶液让大鼠自由饮用，每24h测量一次饮用量，地高辛在旋转刺激前1h经腹腔注射给予，剂量为10mg/kg；
30.步骤2，旋转刺激装置按照crampton和lucot(1985)的报道方法，将大鼠自由无约束地放入内嵌有上下两层分隔板的旋转刺激装置中，每块隔板平均分成6份，每份放置1只，该装置在绕竖直轴进行匀速缓慢顺时针旋转的同时，绕水平轴变速旋转，先以角加速度16
°
/s2加速，角速度达到最大值120
°
/s后，立即以
‑
48
°
/s2的角加速度减速，直至停止，10s为一个周期，随后，逆时针方向重复这个周期，如此反复刺激120min，连续监测旋转刺激前两天和旋转刺激后两天各sd大鼠对0.15％糖精钠溶液的饮用量，记录相应实验数据，计算出糖精钠溶液的摄入量变化，指标为：糖精钠溶液饮用量变化百分比＝(旋转后2天糖精钠溶
液平均饮用量
‑
旋转前2天平均饮用量)/旋转前2天平均饮用量，然后进行统计学分析，两组间比较采用独立样本t检验(student’s test)，多组间比较采用单因素方差分析(one way anova)，lsd法进行两两比较，当p<0.05时，认为差异具有显著性即具有统计学意义；
31.步骤3，地高辛抑制旋转刺激诱导的大鼠条件性味觉厌恶行为：在sd大鼠进行2h的旋转刺激前1h，腹腔注射给予地高辛(10mg/kg)，与旋转刺激前比较，检测旋转刺激后两天大鼠对0.15％糖精钠溶液饮用量的变化。
32.如图1所示，与对照组(control)相比，旋转刺激组(rotation)sd大鼠糖精钠溶液饮用量显著减少(p<0.05)，而地高辛组(digoxin rotation)相较于旋转刺激溶剂组(vehicle rotation)糖精钠溶液饮用量减少情况受到抑制(p<0.05)。以上结果表明，醛固酮下游靶蛋白钠钾泵拮抗剂地高辛可以抑制旋转刺激引起的条件性味觉厌恶行为这一运动病、梅尼埃病(晕)的表现，即可以抑制运动病、梅尼埃病(晕)的发生，提示可将地高辛作为药物用于防治运动病与梅尼埃病。地高辛浓度为10mg/kg。
33.实施例2：
34.一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用，采用的实验动物为sprague
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dawley(sd)大鼠，体重200
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220g，雌性，适应性饲养3天，然后进行旋转刺激诱导运动病和梅尼病两个晕模型的实验，以条件性味觉厌恶为模型；再进行地高辛的抗晕实验，以旋转刺激诱导的条件性味觉厌恶为模型，所述地高辛(amiloride,aml)购自美国西格码
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奥德里奇(sigma
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aldrich)公司，糖精钠(saccharin sodium)由天津北方食品有限公司生产，sd大鼠由南通大学实验动物中心提供，步骤为：
35.步骤1：0.15％糖精钠溶液让大鼠自由饮用，每24h测量一次饮用量，地高辛在旋转刺激前1h经腹腔注射给予，剂量为1mg/kg；
36.步骤2，旋转刺激装置按照crampton和lucot(1985)的报道方法，将大鼠自由无约束地放入内嵌有上下两层分隔板的旋转刺激装置中，每块隔板平均分成6份，每份放置1只，该装置在绕竖直轴进行匀速缓慢顺时针旋转的同时，绕水平轴变速旋转，先以角加速度16
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/s2加速，角速度达到最大值120
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/s后，立即以
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48
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/s2的角加速度减速，直至停止，10s为一个周期，随后，逆时针方向重复这个周期，如此反复刺激120min，连续监测旋转刺激前两天和旋转刺激后两天各sd大鼠对0.15％糖精钠溶液的饮用量，记录相应实验数据，计算出糖精钠溶液的摄入量变化，指标为：糖精钠溶液饮用量变化百分比＝(旋转后2天糖精钠溶液平均饮用量
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旋转前2天平均饮用量)/旋转前2天平均饮用量，然后进行统计学分析，两组间比较采用独立样本t检验(student’s test)，多组间比较采用单因素方差分析(one way anova)，lsd法进行两两比较，当p<0.05时，认为差异具有显著性即具有统计学意义；
37.步骤3，地高辛抑制旋转刺激诱导的大鼠条件性味觉厌恶行为：在sd大鼠进行2h的旋转刺激前1h，腹腔注射给予地高辛(10mg/kg)，与旋转刺激前比较，检测旋转刺激后两天大鼠对0.15％糖精钠溶液饮用量的变化。
38.实施例3：
39.一种地高辛在防治运动病、梅尼埃病药物中的应用，采用的实验动物为sprague
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dawley(sd)大鼠，体重200
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220g，雌性，适应性饲养3天，然后进行旋转刺激诱导运动病和梅尼病两个晕模型的实验，以条件性味觉厌恶为模型；再进行地高辛的抗晕实验，以旋转刺激诱导的条件性味觉厌恶为模型，所述地高辛(amiloride,aml)购自美国西格码
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奥德里奇
(sigma
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aldrich)公司，糖精钠(saccharin sodium)由天津北方食品有限公司生产，sd大鼠由南通大学实验动物中心提供，步骤为：
40.步骤1：0.15％糖精钠溶液让大鼠自由饮用，每24h测量一次饮用量，地高辛在旋转刺激前1h经腹腔注射给予，剂量为20mg/kg；
41.步骤2，旋转刺激装置按照crampton和lucot(1985)的报道方法，将大鼠自由无约束地放入内嵌有上下两层分隔板的旋转刺激装置中，每块隔板平均分成6份，每份放置1只，该装置在绕竖直轴进行匀速缓慢顺时针旋转的同时，绕水平轴变速旋转，先以角加速度16
°
/s2加速，角速度达到最大值120
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/s后，立即以
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/s2的角加速度减速，直至停止，10s为一个周期，随后，逆时针方向重复这个周期，如此反复刺激120min，连续监测旋转刺激前两天和旋转刺激后两天各sd大鼠对0.15％糖精钠溶液的饮用量，记录相应实验数据，计算出糖精钠溶液的摄入量变化，指标为：糖精钠溶液饮用量变化百分比＝(旋转后2天糖精钠溶液平均饮用量
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旋转前2天平均饮用量)/旋转前2天平均饮用量，然后进行统计学分析，两组间比较采用独立样本t检验(student’s test)，多组间比较采用单因素方差分析(one way anova)，lsd法进行两两比较，当p<0.05时，认为差异具有显著性即具有统计学意义；
42.步骤3，地高辛抑制旋转刺激诱导的大鼠条件性味觉厌恶行为：在sd大鼠进行2h的旋转刺激前1h，腹腔注射给予地高辛(10mg/kg)，与旋转刺激前比较，检测旋转刺激后两天大鼠对0.15％糖精钠溶液饮用量的变化。
43.最后说明的是，以上实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。