一种马铃薯种质资源的保存方法与流程

1.本发明属于马铃薯技术领域，具体是一种马铃薯种质资源的保存方法。


背景技术：

2.马铃薯属于茄类，块茎可食用，仅次于小麦、稻谷和玉米被称为全球第四大中啊哟的粮食作物，又名洋芋、洋山芋、洋芋头、地蛋和土豆等，马铃薯的生长周期大致可分为四个阶段，一、成熟的块茎经过一段时间的休眠才能作为种薯播种；二、播种后，依靠自身的营养生根发芽长出幼苗；三、出苗后，通过光合作用制造有机物，利用根系吸收水分和无机元素，形成完整的植株生长体系；四、开花后，地上部停止生长，块茎迅速膨大，积累养分到成熟，这对种质资源较好的种薯进行保存极其重要，可加大来年的生产量。
3.传统的马铃薯种质资源的保存方法基本上分为两种，一种是田间种植保存，另一种是试管苗保存，由于田间种植保存容易受到温度的影响从而损坏马铃薯种，所以采用试管苗保存的马铃薯种的存活率更高，现有的试管苗由于阳光不充足导致叶绿体的光合作用较差；叶片气孔数目少，导致活性差，不能被普遍推广使用；另外，在低温条件下进行长期保存，会影响试管苗的生长，比较细弱，茎叶表层角质层不发达，严重会导致其死亡。


技术实现要素：

4.本发明的目的是针对以上问题，本发明提供了一种马铃薯种质资源的保存方法，具有存活率高和对逆境的适应性、抵抗能力较高的优点。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种马铃薯种质资源的保存方法，包括以下步骤：s1、先进行种薯的挑选，选择新鲜、光泽好且腐烂率低的，接着用刀将马铃薯切块，并观察有无环腐病，选择无环腐病的健康植株并截取3～4cm有腋芽的茎段若干个；s2、接着将切成段的茎段用清水冲洗后再用无菌镊子夹出并放置于灭菌水中清洗若干次，为茎段日后成长为无菌苗做准备；s3、将灭菌后的茎段放置于ms培养基中进行培养，用防护膜将存放培养基的瓶子口处进行封口，然后再移至组培苗生长间，将组培苗生长间的光照强度调整为2600
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3000lx，并控制温度保持在20～24℃；s4、无菌苗在成长过程中要定期检测并进行生长间消毒，在无菌苗已经培育至1～2个月时，可调整组培生长间的光照强度为3200～3600lx，并控制温度保持在23～25℃继续培养；s5、当无菌苗形成后，可在无菌的条件下截取其4～5个茎段并放于ms培养基中继续培养保存，并用防护膜将瓶口处进行封口，再移至种质资源保存间进行保存，并控制温度保持在15～20℃，光照强度在2800～3200lx，并定期对种质资源保存间进行消毒工作，这样可保证不断有新的试管苗形成并长期保存。
6.挑选种薯可选择基因较好且无环腐病的种薯茎段，再进行蒸馏水和灭菌水配合清
洗，从而将细菌和病菌清除，利用无菌镊子夹取可避免有害物质沾染，从而导致其携带病菌，ms培养基可为成长的茎段提供所需的营养物质，并配合组培苗生长间内舒适的温度和所需的光照强度，从而使得幼苗稳定成长，并通过调控温度的变化，使得试管苗能够适应不同的生长环境并加强自身的抵抗力，使得幼苗健康并茁壮成长，通过选择根茎较为粗壮且活性较好的试管苗并通过不断的转接，可保证培育出来的试管苗质量较好，且存活率更高，可保证品种较为优秀的马铃薯种质资源能一直长期保存。
7.作为本发明的一种优选技术方案，所述s3和s5中的防护膜采用的是保鲜膜，保鲜膜既便宜又好用，可以隔绝细菌和病菌的侵入，定期更换保鲜膜，以保证试管内部氧气充足，随着试管苗的不断成长可选择放弃使用保鲜膜，可锻炼并增强幼苗本身的抵抗力。
8.作为本发明的一种优选技术方案，所述s5中出现的ms培养基中含有3%的甘露醇、盐酸吡哆酸和盐酸硫胺素，甘露醇相当于渗透压的调节剂，可起到缓冲渗透压的作用，可防止细胞涨破，保护基因细胞不被损坏，并保证带有良好基因试管苗可以一直保存下去。
9.作为本发明的一种优选技术方案，s2中出现的清水采用的是蒸馏水且需间接性清洗0.5～1.5h，蒸馏水不含杂质，不会污染刚切段的根茎，无菌水则是经过高温杀菌制作的，对根茎清洗使其适用于长时间的密封无菌保存，从而缩小其携带的病菌率，使其成长为健康的幼苗。
10.作为本发明的一种优选技术方案，所述s2中灭菌水需要对茎段清洗3～4次，蒸馏水不含杂质，不会污染刚切段的根茎，使其保持其原有的细胞结构，非常适合伤口处理。
11.作为本发明的一种优选技术方案，所述s1中在用刀对种薯进行切块观察时，如若发现带有环腐病，需对刀具进行消毒清洗后才能对其他种薯进行切块，其中环腐病指的是马铃薯呈环状腐烂，当切有环腐病的马铃薯时，该马铃薯种要扔掉，且刀具要用酒精进行消毒，不然会传染其他质量较好的马铃薯种，从而造成浪费，这种携带病菌的马铃薯种生长成幼苗时会出现死苗的现象，并会污染组培苗生长间。
12.作为本发明的一种优选技术方案，所述s1中出现的茎段若干个指的是茎段6～10段，截取这个数量的茎段可保证该马铃薯种成活率升高，因为要考虑培育期间，有的幼苗可能会出现死苗的现象，从而影响该马铃薯种质资源的长期保存。
13.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：1、本发明通过设置有种薯挑选环节，可保证挑选的种薯新鲜且健康，并保证截取的茎段无环腐病基因，利用蒸馏水和灭菌水对截取的茎段进行清洗，可去除茎段携带的细菌和病菌，为培育成无菌苗打下基础，ms培养基可为需要培养的茎段提供充足的营养元素，保鲜膜可隔绝外部的病菌和细菌进入，组培生长间可为茎段成长成幼苗提供充足的阳光和舒适的温度，通过调控温度和光照强度可增强幼苗对不同生长环境的适应性并加强抵抗力，可挑选根茎较为粗壮且活性较好的试管苗并通过不断的转接，可保证培育出来的试管苗质量较好，且存活率更高，可保证品种较为优秀的马铃薯种质资源能一直长期保存。
具体实施方式
14.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都
属于本发明保护的范围。
15.本发明提供一种马铃薯种质资源的保存方法，包括以下步骤：s1、先进行种薯的挑选，选择新鲜、光泽好且腐烂率低的，接着用刀将马铃薯切块，并观察有无环腐病，选择无环腐病的健康植株并截取3～4cm有腋芽的茎段若干个；s2、接着将切成段的茎段用清水冲洗后再用无菌镊子夹出并放置于灭菌水中清洗若干次，为茎段日后成长为无菌苗做准备；s3、将灭菌后的茎段放置于ms培养基中进行培养，用防护膜将存放培养基的瓶子口处进行封口，然后再移至组培苗生长间，将组培苗生长间的光照强度调整为2600
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3000lx，并控制温度保持在20～24℃；s4、无菌苗在成长过程中要定期检测并进行生长间消毒，在无菌苗已经培育至1～2个月时，可调整组培生长间的光照强度为3200～3600lx，并控制温度保持在23～25℃继续培养；s5、当无菌苗形成后，可在无菌的条件下截取其4～5个茎段并放于ms培养基中继续培养保存，并用防护膜将瓶口处进行封口，再移至种质资源保存间进行保存，并控制温度保持在15～20℃，光照强度在2800～3200lx，并定期对种质资源保存间进行消毒工作，这样可保证不断有新的试管苗形成并长期保存。
16.挑选种薯可选择基因较好且无环腐病的种薯茎段，再进行蒸馏水和灭菌水配合清洗，从而将细菌和病菌清除，利用无菌镊子夹取可避免有害物质沾染，从而导致其携带病菌，ms培养基可为成长的茎段提供所需的营养物质，并配合组培苗生长间内舒适的温度和所需的光照强度，从而使得幼苗稳定成长，并通过调控温度的变化，使得试管苗能够适应不同的生长环境并加强自身的抵抗力，使得幼苗健康并茁壮成长，通过选择根茎较为粗壮且活性较好的试管苗并通过不断的转接，可保证培育出来的试管苗质量较好，且存活率更高，可保证品种较为优秀的马铃薯种质资源能一直长期保存。
17.其中，s3和s5中的防护膜采用的是保鲜膜，保鲜膜既便宜又好用，可以隔绝细菌和病菌的侵入，定期更换保鲜膜，以保证试管内部氧气充足，随着试管苗的不断成长可选择放弃使用保鲜膜，可锻炼并增强幼苗本身的抵抗力。
18.其中，s5中出现的ms培养基中含有3%的甘露醇、盐酸吡哆酸和盐酸硫胺素，甘露醇相当于渗透压的调节剂，可起到缓冲渗透压的作用，可防止细胞涨破，保护基因细胞不被损坏，并保证带有良好基因试管苗可以一直保存下去。
19.其中，s2中出现的清水采用的是蒸馏水且需间接性清洗0.5～1.5h，蒸馏水不含杂质，不会污染刚切段的根茎，使其保持其原有的细胞结构，非常适合伤口处理。
20.其中，s2中灭菌水需要对茎段清洗3～4次，无菌水则是经过高温杀菌制作的，对根茎清洗使其适用于长时间的密封无菌保存，从而缩小其携带的病菌率，使其成长为健康的幼苗。
21.其中，s1中在用刀对种薯进行切块观察时，如若发现带有环腐病，需对刀具进行消毒清洗后才能对其他种薯进行切块，其中环腐病指的是马铃薯呈环状腐烂，当切有环腐病的马铃薯时，该马铃薯种要扔掉，且刀具要用酒精进行消毒，不然会传染其他质量较好的马铃薯种，从而造成浪费，这种携带病菌的马铃薯种生长成幼苗时会出现死苗的现象，并会污染组培苗生长间。
22.其中，s1中出现的茎段若干个指的是茎段6～10段，截取这个数量的茎段可保证该马铃薯种成活率升高，因为要考虑培育期间，有的幼苗可能会出现死苗的现象，从而影响该马铃薯种质资源的长期保存。
23.实施例一：s1、先进行种薯的挑选，选择新鲜、光泽好且腐烂率低的，接着用刀将马铃薯切块，并观察有无环腐病，选择无环腐病的健康植株并截取3cm有腋芽的茎段若干个；s2、接着将切成段的茎段用清水冲洗后再用无菌镊子夹出并放置于灭菌水中清洗若干次，为茎段日后成长为无菌苗做准备；s3、将灭菌后的茎段放置于ms培养基中进行培养，用防护膜将存放培养基的瓶子口处进行封口，然后再移至组培苗生长间，将组培苗生长间的光照强度调整为2600lx，并控制温度保持在21℃；s4、无菌苗在成长过程中要定期检测并进行生长间消毒，在无菌苗已经培育至1～2个月时，可调整组培生长间的光照强度为3200x，并控制温度保持在23℃继续培养；s5、当无菌苗形成后，可在无菌的条件下截取其4个茎段并放于ms培养基中继续培养保存，并用防护膜将瓶口处进行封口，再移至种质资源保存间进行保存，并控制温度保持在15℃，光照强度在2800lx，并定期对种质资源保存间进行消毒工作，这样可保证不断有新的试管苗形成并长期保存。
24.实施列二：s1、先进行种薯的挑选，选择新鲜、光泽好且腐烂率低的，接着用刀将马铃薯切块，并观察有无环腐病，选择无环腐病的健康植株并截取3.5cm有腋芽的茎段若干个；s2、接着将切成段的茎段用清水冲洗后再用无菌镊子夹出并放置于灭菌水中清洗若干次，为茎段日后成长为无菌苗做准备；s3、将灭菌后的茎段放置于ms培养基中进行培养，用防护膜将存放培养基的瓶子口处进行封口，然后再移至组培苗生长间，将组培苗生长间的光照强度调整为2700lx，并控制温度保持在22℃；s4、无菌苗在成长过程中要定期检测并进行生长间消毒，在无菌苗已经培育至1～2个月时，可调整组培生长间的光照强度为3300lx，并控制温度保持在24℃继续培养；s5、当无菌苗形成后，可在无菌的条件下截取其4.5个茎段并放于ms培养基中继续培养保存，并用防护膜将瓶口处进行封口，再移至种质资源保存间进行保存，并控制温度保持在16℃，光照强度在2900lx，并定期对种质资源保存间进行消毒工作，这样可保证不断有新的试管苗形成并长期保存实施列三：s1、先进行种薯的挑选，选择新鲜、光泽好且腐烂率低的，接着用刀将马铃薯切块，并观察有无环腐病，选择无环腐病的健康植株并截取4cm有腋芽的茎段若干个；s2、接着将切成段的茎段用清水冲洗后再用无菌镊子夹出并放置于灭菌水中清洗若干次，为茎段日后成长为无菌苗做准备；s3、将灭菌后的茎段放置于ms培养基中进行培养，用防护膜将存放培养基的瓶子口处进行封口，然后再移至组培苗生长间，将组培苗生长间的光照强度调整为2800lx，并控制温度保持在23℃；s4、无菌苗在成长过程中要定期检测并进行生长间消毒，在无菌苗已经培育至1～
1.5个月时，可调整组培生长间的光照强度为3400lx，并控制温度保持在25℃继续培养；s5、当无菌苗形成后，可在无菌的条件下截取其5个茎段并放于ms培养基中继续培养保存，并用防护膜将瓶口处进行封口，再移至种质资源保存间进行保存，并控制温度保持在19℃，光照强度在3100lx，并定期对种质资源保存间进行消毒工作，这样可保证不断有新的试管苗形成并长期保存。
25.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
26.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。