一种疏风止痛胶囊中白芷的质量控制方法与流程

1.本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种疏风止痛胶囊中白芷的质量控制方法。


背景技术：

2.疏风止痛胶囊是在《辨证录》“救破汤”的基础上，结合临床经验拟定而成的方剂，白芷为其中的臣药组分。
3.白芷为多年生高大草本，高1
‑
2.5米，根圆柱形，茎基部径2
‑
5厘米，基生叶一回羽状分裂，复伞形花序顶生或侧生，果实长圆形至卵圆形。主要变种有杭白芷、祁白芷、白芷(原变种)等。以根入药，有祛病除湿、排脓生肌、活血止痛等功能。主治风寒感冒、头痛、鼻炎、牙痛。赤白带下、痛疖肿毒等症，亦可作香料。北方的一些省区有栽培，多自产自销，少数调省外。一般生于林下、林缘、溪旁、灌丛和山谷草地。
4.疏风止痛胶囊的内容物味微苦、辛，可活血祛风、温经止痛，常用于偏头痛之寒凝血瘀证，即症状为偏正头痛或巅顶作痛，伴绌急引痛，得热则减，口不渴，喜热饮，小便清长，大便溏薄，舌质淡黯或紫，苔白润，脉迟或紧涩。但目前对于该疏风止痛胶囊缺乏全面规范的方法学研究资料，并未有对白芷制定有规范的质量标准。
5.故而，亟需一种疏风止痛胶囊中白芷的质量控制方法。


技术实现要素：

6.本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种疏风止痛胶囊中白芷的质量控制方法。
7.为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
8.提供一种疏风止痛胶囊中白芷的质量控制方法，步骤包括：
9.s1、取样品研细后，加入第一溶剂，加热回流处理，放冷、滤过、挥干滤液，于残渣中加入第二溶剂溶解，即得第一供试品溶液；取白芷对照药材，加入第一溶剂，加热回流处理，放冷、滤过、挥干滤液，于残渣中加入第二溶剂溶解，即得第一对照品溶液；依照薄层色谱法鉴别：所述第一供试品溶液的薄层色谱中，在与第一对照品溶液的薄层色谱以及第二对照品溶液的薄层色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点；
10.s2、将样品混匀研细后，精密称定，并精密加入第三溶剂，称定重量，进行超声处理，取出、放冷，再次称定重量，并用第三溶剂补足所减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液，即得第二供试品溶液；依照高效液相色谱法测定：以欧前胡素以及异欧前胡素的总量计，每0.29g样品中白芷的含量是否少于0.30mg。
11.优选地，所述第一溶剂为乙醚；所述第二溶剂为乙酸乙酯；所述第三溶剂为甲醇。
12.优选地，所述薄层色谱法包括：吸取所述第一供试品溶液、所述第一对照品溶液以及所述第二对照品溶液，分别点于同一薄层板上，展开、取出、晾干，并置于紫外光灯下检视。
13.优选地，所述第二对照品溶液由每1ml所述第二溶剂中加入0.5mg欧前胡素对照品以及0.5mg异欧前胡素对照品制得。
14.优选地，所述薄层色谱法的条件包括：点样量为5μl；所述薄层板为硅胶g板；展开剂为甲苯
‑
乙酸乙酯；所述紫外光灯的波长为365nm。
15.优选地，所述展开剂中，甲苯与乙酸乙酯间的体积比为10:1。
16.优选地，所述高效液相色谱法包括：精密吸取所述第二供试品溶液以及第三对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪。
17.优选地，所述第三对照品溶液由每1ml所述第三溶剂中加入100μg精密称定的欧前胡素对照品以及30μg精密称定的异欧前胡素对照品制得。
18.优选地，所述高效液相色谱法的条件包括：进样量为10μl；填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈
‑
水；检测波长为250nm；理论板数按欧前胡素峰计算不低于6000。
19.优选地，所述流动相中，乙腈与水间的体积比为60:40。
20.本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
21.本发明的质量控制方法对疏风止痛胶囊中白芷建立了相应的方法进行定性以及定量检测，具有较好的线性关系、平行性、重复性、准确度、稳定性、中间精密度、专属性以及耐用性，从而制订了疏风止痛胶囊中白芷的质量标准规范。
附图说明
22.图1为鉴别白芷时的薄层色谱图(室温、中湿)；
23.其中，lane1为欧前胡素对照品溶液；lane2为异欧前胡素对照品溶液；lane3为空白样品(缺白芷)的供试品溶液；lane4为白芷对照药材溶液；lane5为第二供试品溶液(批号为s141201)；lane6为第二供试品溶液(批号为s141202)；lane7为第二供试品溶液(批号为s141203)；
24.图2为疏风止痛胶囊中白芷含量测定时的液相色谱图；
25.其中，图a为第二供试品溶液的液相色谱图；图b为欧前胡素对照品以及异欧前胡素对照品的混合溶液的液相色谱图(色谱峰从左至右依次为欧前胡素和异欧前胡素)；图c为空白样品(缺白芷)溶液的液相色谱图。
具体实施方式
26.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
27.需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
28.下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。
29.实施例1
30.本实施例提供一种疏风止痛胶囊中白芷的质量控制方法，步骤包括：
31.s1、取4g样品研细后，加入80ml乙醚，加热回流处理40min，放冷、滤过、挥干滤液，
于残渣中加入1ml乙酸乙酯溶解，即得第一供试品溶液；取1g 白芷对照药材，加入40ml乙醚，加热回流处理，放冷、滤过、挥干滤液，于残渣中加入1ml乙酸乙酯溶解，即得第一对照品溶液；取欧前胡素对照品以及异欧前胡素对照品，加入乙酸乙酯制得浓度均为0.5mg/ml的第二对照品溶液；依照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录vi b)试验，吸取所述第一供试品溶液、所述第一对照品溶液以及所述第二对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶 g薄层板上，以甲苯
‑
乙酸乙酯(10:1)为展开剂，展开、取出、晾干，并置于紫外光灯(365nm)下检视：所述第一供试品溶液的薄层色谱中，在与第一对照品溶液的薄层色谱以及第二对照品溶液的薄层色谱相应的位置上，是否显有相同颜色的荧光斑点；
32.s2、将样品混匀研细后，精密称定1.0g，置于具塞锥形瓶中，并精密加入甲醇25ml，称定重量，进行超声处理(功率为300w，频率为45khz)30min，取出、放冷，再次称定重量，并用甲醇补足所减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液，即得第二供试品溶液；精密称定欧前胡素对照品以及异欧前胡素对照品，加入甲醇制得欧前胡素浓度为100μg/ml且异欧前胡素浓度为30μg/ml的第三对照品溶液；依照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录vi d)试验，精密吸取所述第二供试品溶液以及第三对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪(填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈
‑
水(60:40)；检测波长为250nm；理论板数按欧前胡素峰计算不低于6000)，测定：以欧前胡素(c
16
h
14
o4)以及异欧前胡素(c
16
h
14
o4)的总量计，每粒(即0.29g)样品中白芷的含量是否少于0.30mg。
33.实施例2：关于薄层色谱法的考察
34.(1)提取方法的考察
35.经考察，当采用“取4g样品研细后，加入80ml乙醚，进行加热回流40min，放冷、滤过、挥干滤液，于残渣中加入1ml乙酸乙酯溶解，即得第一供试品溶液”时，所述第一供试品溶液的薄层色谱中白芷的特征斑点清晰。
36.(2)点样量的考察
37.经考察，当白芷对照药材的取样量为1g，欧前胡素对照品和异欧前胡素对照品溶液的浓度均为0.5mg/ml，且第一供试品溶液、白芷对照药材溶液、欧前胡素对照品溶液以及异欧前胡素对照品溶液的点样量均为5μl时，薄层色谱上斑点的大小适中。
38.(3)展开剂的考察
39.考察石油醚(30～60℃)
‑
乙醚(3:2)、石油醚(30～60℃)
‑
乙醚(2:1)、石油醚(30～60℃)
‑
乙醚(1:1)、石油醚(30～60℃)
‑
乙酸乙酯(1:1)、甲苯
‑
乙酸乙酯(8:2)、石油醚(30～60℃)
‑
乙酸乙酯(85:15)、石油醚(30～60℃)
‑
乙酸乙酯(9:1)、甲苯
‑
乙酸乙酯(15:1)、环己烷
‑
乙酸乙酯(17:3)、甲苯
‑
乙酸乙酯 (10:1)、甲苯
‑
乙酸乙酯(7:1)等十余种展开剂，结果当采用甲苯
‑
乙酸乙酯(10:1) 为展开剂、硅胶g薄层板、紫外光灯(365nm)下检视等条件，第一供试品溶液的薄层色谱分离度较好，在与白芷对照药材溶液的薄层色谱、欧前胡素对照品溶液的薄层色谱以及异欧前胡素对照品溶液的薄层色谱相应的位置上，显有相同颜色的荧光斑点，空白样品(缺白芷)的供试品溶液的薄层色谱并无干扰。
40.(4)专属性的考察
41.空白样品(缺白芷)的供试品溶液同法制备后，空白样品(缺白芷)的供试品溶液的薄层色谱在与白芷对照药材溶液的薄层色谱相应的位置上，不显相同颜色的荧光主斑点，在与欧前胡素对照品溶液的薄层色谱以及异欧前胡素对照品溶液的薄层色谱相应的位置
上，不显相同颜色的荧光斑点，对鉴别白芷无干扰，专属性较好(见图1)。
42.(5)方法耐用性的考察
43.采用本发明的鉴别方法，考察了薄层板不同的来源(进口和国产预制硅胶g 薄层板)、不同的温度(室温，即20℃以及低温，即4℃)、不同的湿度(低湿，即rh＝32％以及高湿，即rh＝88％)等条件，结果均获得满意的展开和分离，表明不同的条件下本发明的耐用性均较好。
44.实施例3：关于高效液相色谱法的考察
45.(1)色谱柱的考察
46.考察了不同厂家、不同品牌、不同长度的3种色谱柱，包括：
①
agilentzorbax eclipe xdb
‑
c18(安捷伦公司，5μm，4.6
×
150mm)、
②
phenomenex luna (菲罗门公司，5μm c18(2)100a，5μm，4.6
×
250mm)、
③
agilent zorbax sb
‑
c18 (安捷伦公司，5μm，4.6
×
250mm)。结果表明，不同规格色谱柱对本发明中欧前胡素、异欧前胡素的响应和分离均较好，方法耐用性较好。
47.(2)流动相的选择
48.考察甲醇
‑
水(55:45)作为流动相，发现欧前胡素分离较差；
49.考察其他流动相条件，当采用乙腈
‑
水(60:40)为流动相时，待测成分与相邻色谱峰的分离度均较好，故被选用。
50.(3)检测波长的选择
51.通过对欧前胡素和异欧前胡素色谱峰进行二极管阵列扫描，发现当吸收波长为250nm时，两种待测成分的响应值均较高，因此最终选择检测波长为250nm。
52.(4)线性关系的考察
53.分别精密吸取混合对照品溶液(欧前胡素浓度为0.10325mg/ml，欧前胡素浓度为0.0305274mg/ml)1μl、2μl和混合对照品溶液(欧前胡素浓度为 0.413mg/ml，欧前胡素浓度为0.1221096mg/ml)1μl、2μl、5μl、10μl、20μl，注入液相色谱仪，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。浓度和进样量之间的关系见表1、表2。
54.表1欧前胡素浓度和进样量之间的关系(n＝7)
55.浓度(mg/ml)进样体积(μl)进样量(μg)峰面积0.1032510.10325487.752410.1032520.2065949.674130.41310.4131909.809940.41320.8263822.253910.41352.0659477.42090.413104.13182000.413208.2633871.5
56.线性方程为：y＝4113.89682x 411.51929，回归系数为：r＝0.9992。上述测定结果表明，欧前胡素进样量在0.10325μg～8.26μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。
57.表2异欧前胡素浓度和进样量之间的关系(n＝7)
[0058][0059][0060]
线性方程为：y＝3755.99028x 0.21730，回归系数为：r＝1.0000。上述测定结果表明，异欧前胡素进样量在0.0305274μg～2.442192μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。
[0061]
(5)对照品溶液平行性试验
[0062]
精密吸取混合对照品溶液(欧前胡素浓度为0.10325mg/ml，欧前胡素浓度为0.0305274mg/ml)10μl，分别连续进样6次，测得欧前胡素、异欧前胡素的峰面积，结果见表3。
[0063]
表3对照品溶液平行性试验结果(n＝6)
[0064]
编号峰面积(欧前胡素)峰面积(异欧前胡素)14759.500981144.9648424760.891601146.0040334761.637701145.8265444764.937501145.8781754766.134281147.0778864768.802251146.69043平均4763.650721146.07365rsd(％)0.070.06
[0065]
由上表可知，连续分析6次所得欧前胡素和异欧前胡素峰面积的rsd均较小，对照品溶液的平行性良好。
[0066]
(6)超声时间的考察
[0067]
考察了超声时间15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟，欧前胡素测定结果分别为2.37mg/g、2.40mg/g、2.39mg/g、2.40mg/g、2.39mg/g，异欧前胡素测定结果分别为0.72mg/g、0.72mg/g、0.72mg/g、0.73mg/g、0.73mg/g。当超声时间为30分钟，提取已较完全，因此选择30分钟的超声时间。
[0068]
(7)重复性考察
[0069]
取样品粉末1.0g，一式6份，按照上述供试品溶液制备方法处理，结果见表 4、表5。
[0070]
表4欧前胡素重现性试验(n＝6)
[0071][0072]
表5异欧前胡素重现性试验(n＝6)
[0073][0074]
由上表可知，6份样品的欧前胡素和异欧前胡素重复性测定结果的相对标准偏差均小于1％，方法重复性较好。
[0075]
(8)准确度考察
[0076]
取样品粉末0.5g，一式9份，精密称定，精密加入混合对照品溶液(欧前胡素浓度为0.413mg/ml、异欧前胡素浓度为0.1221096mg/ml)2.5ml、3.0ml， 3.5ml(各3份)，分别作为低浓度、中浓度和高浓度加样，按照上述供试品溶液制备方法处理，计算加样回收率，结果见表6、表7。
[0077]
表6欧前胡素准确度试验测定结果(n＝9)
[0078][0079]
表7异欧前胡素准确度试验测定结果(n＝9)
[0080][0081]
由上述结果可知，拟订方法的准确度较好。
[0082]
(9)供试品溶液的稳定性考察
[0083]
取供试品溶液，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时、9小时、 12小时、15小时、18小时、21小时、24小时进样分析，记录峰面积，结果见表8。
[0084]
表8供试品溶液的稳定性结果
[0085]
[0086][0087]
上述试验结果表明，供试品溶液中欧前胡素和异欧前胡素在24小时内均基本稳定。
[0088]
(10)中间精密度考察
[0089]
为考察随机变动因素对精密度的影响，按照拟订的方法，由不同的分析人员在不同的日期、不同仪器设备对3批样品进行了含量测定，结果见表9。
[0090]
表9中间精密度测定结果(单位：mg/粒)
[0091][0092]
上述结果表明，由不同的分析人员在不同日期、不同仪器和不同色谱柱的测定结果基本一致，方法的中间精密度良好。
[0093]
(11)专属性考察
[0094]
取空白样品(缺白芷)，按照拟订的方法进行测定，结果空白样品溶液在欧前胡素、异欧前胡素色谱峰处无干扰，专属性较好(见图2)。
[0095]
综上所述，本发明的质量控制方法对疏风止痛胶囊中白芷建立了相应的方法进行定性以及定量检测，具有较好的线性关系、平行性、重复性、准确度、稳定性、中间精密度、专属性以及耐用性，从而制订了疏风止痛胶囊中白芷的质量标准规范。
[0096]
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。