技术特征：
1.一种包含锌指蛋白(zfp)域及转录抑制物域的融合蛋白，其中该zfp域结合至人类c9orf72基因的突变型等位基因上外显子1a与外显子1b之间内含子区段中的目标区，其中该目标区包含超过30个g4c2(seq id no:1)的串联重复序列。2.如权利要求1的融合蛋白，其中所述融合蛋白抑制来自所述突变型等位基因的含重复序列的mrna的转录，且不抑制来自所述基因的野生型mrna的转录。3.如权利要求1或2的融合蛋白，其中所述zfp域结合至所述目标区中的正义序列，其中所述正义序列包含一至三个以下六核苷酸的串联重复序列：ggggcc(seq id no:1)、gggccg(seq id no:2)、ggccgg(seq id no:3)、gccggg(seq id no:4)、ccgggg(seq id no:5)或cggggc(seq id no:6)。4.如权利要求1至3中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白抑制人类细胞中来自所述突变型c9orf72等位基因的正义转录。5.如权利要求4的融合蛋白，其中所述融合蛋白抑制来自c9orf721a启动子的正义转录，且不抑制来自c9orf721b启动子的正义转录。6.如权利要求1或2的融合蛋白，其中所述zfp域结合至所述目标区中的反义序列，其中所述反义序列包含一至三个以下六核苷酸的串联重复序列：ggcccc(seq id no:7)、gccccg(seq id no:8)、ccccgg(seq id no:9)、cccggc(seq id no:10)、ccggcc(seq id no:11)或cggccc(seq id no:12)。7.如前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白抑制人类细胞中来自所述突变型c9orf72等位基因的反义转录。8.如前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白抑制人类细胞中来自所述突变型c9orf72等位基因的正义转录及反义转录两者。9.如前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述融合蛋白抑制来自所述突变型c9orf72等位基因的正义和/或反义转录至少约30％、40％、75％、90％或95％，任选地其中所述融合蛋白不抑制来自c9orf721b启动子的正义转录。10.如前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述zfp域包含六个锌指；结合至表1中所示的目标序列；和/或包含表1中所示的zfp转录因子的六个锌指序列，任选地包含对如表1中所指示的识别螺旋区外残基的一或多个突变。11.如前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述转录抑制物域包含来自人类kox1的krab域氨基酸序列。12.如前述权利要求中任一项的融合蛋白，其中所述zfp域经由肽接头连接至所述转录抑制物域。13.一种核酸构建体，其包含如权利要求1至12中任一项的融合蛋白的编码序列，其中所述编码序列可操作地连接至转录调控元件。14.如权利要求13的核酸构建体，其中所述转录调控元件是哺乳动物启动子，该启动子在脑细胞中是组成型活性的或诱导型的，任选地其中所述启动子是人类突触蛋白i启动子。15.如权利要求13或14的核酸构建体，其中所述构建体是病毒构建体，任选地其中所述病毒构建体是重组腺相关病毒构建体。
16.一种宿主细胞，其包含如权利要求13至15中任一项的核酸构建体。17.如权利要求16的宿主细胞，其中所述宿主细胞是人类细胞。18.如权利要求17的宿主细胞，其中所述人类细胞是神经元或多能干细胞，其中所述干细胞任选地是胚胎干细胞或诱导性多能干细胞(ipsc)。19.一种重组病毒，其包含如权利要求15的核酸构建体，任选地其中所述重组病毒是重组腺相关病毒(raav)。20.一种药物组合物，其包含如权利要求13至15中任一项的核酸构建体，或如权利要求19的重组病毒，及药学上可接受的载剂。21.一种抑制人类细胞中c9orf72基因的突变型等位基因的转录的方法，其中所述突变型等位基因在外显子1a与外显子1b之间的内含子区段中包含经扩增g4c2(seq id no:1)重复序列区，所述方法包括向所述细胞中引入如权利要求1至12中任一项的融合蛋白、如权利要求13至15中任一项的核酸构建体、如权利要求19的重组病毒或如权利要求20的药物组合物。22.如权利要求21的方法，其中所述人类细胞是神经元、神经胶细胞、室管膜细胞或神经上皮细胞。23.如权利要求21或22的方法，其中所述细胞在患有c9orf72相关病症的患者的脑或脊髓中，该病症任选地选自肌萎缩侧索硬化(als)及c9家族性额颞叶痴呆(c9 familial frontotemporal dementia；c9ftd)。24.一种治疗患有c9orf72相关病症的患者的方法，该病症任选地选自肌萎缩侧索硬化(als)及c9家族性额颞叶痴呆(c9ftd)，该方法包括向所述患者引入如权利要求1至12中任一项的融合蛋白、如权利要求13至15中任一项的核酸构建体、如权利要求19的重组病毒或如权利要求20的药物组合物。25.如权利要求21至24中任一项的方法，其中所述融合蛋白是经由表达所述融合蛋白的重组病毒引入。26.如权利要求25的方法，其中所述重组病毒是腺相关病毒(aav)，所述腺相关病毒任选地具有血清型9或假型aav2/9或aav2/6/9。27.如权利要求25或26的方法，其中经由脑室内、鞘内、颅内、眶后(ro)、静脉内、鼻内和/或脑池内途径向该患者施用所述重组病毒。28.如权利要求21至27中任一项的方法，其中引入两种或更多种如权利要求1至12中任一项的融合蛋白，任选地其中所述两种或更多种融合蛋白的编码序列在同一重组病毒载体上。29.如权利要求1至12中任一项的融合蛋白、如权利要求13至15中任一项的核酸构建体、如权利要求19的重组病毒或如权利要求20的药物组合物，其用于如权利要求21至28中任一项的方法。30.一种如权利要求13至15中任一项的核酸构建体或如权利要求19的重组病毒用于制备药物的用途，所述药物用于在如权利要求21至28中任一项的方法中治疗有需要的患者。
技术总结
本公开提供用于调节有需要的患者中C9orf72基因转录的组合物及方法，所述患者包括患有C9orf72相关疾病诸如肌萎缩侧索硬化(ALS)和额颞叶痴呆(FTD)的患者。(ALS)和额颞叶痴呆(FTD)的患者。
技术研发人员：J.F.纳汉 A.帕塔马塔 M.萨米
受保护的技术使用者：桑格摩生物治疗股份有限公司
技术研发日：2020.04.23
技术公布日：2021/12/7
再多了解一些
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