一种药材胭脂花根的薄层鉴别方法及其应用与流程

1.本发明涉及中草药鉴别方法，尤其涉及一种药材胭脂花根的薄层鉴别方法、一种用于区分药材胭脂花根和药材喜马拉雅紫茉莉根的薄层鉴别方法和一种包含药材胭脂花根的疗痔胶囊的薄层鉴别方法以及上述薄层鉴别方法的应用。


背景技术：

2.胭脂花根为紫茉莉科植物紫茉莉mirabilisjalapa l.的干燥根。秋、冬二季采挖，除去须根，洗净，趁鲜切片或直接干燥。胭脂花根亦为贵州省少数民族用药。
3.紫茉莉始载于明初兰茂(1397
‑
1476)所著《滇南本草》“苦丁香”名下，谓其“花开五色，用根”。清代赵学敏《本草纲目拾遗》最早使用“紫茉莉”之名。紫茉莉根在民间使用较多，《陕甘宁青中草药选》、《贵州民间方药集》、《福建药物志》、《土家族药物志》、《全国中草药汇编》均有药用记载。现代研究发现，紫茉莉根具有抗病毒、抗癌、抗肿瘤、抗菌、降低血糖的作用。目前可知，贵州地区习惯称紫茉莉根为胭脂花根，且已被《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)收载。《云南省中药材标准》(2005年版)(第四册
·
彝族药)亦收载紫茉莉根药材。
4.现有的胭脂花根(紫茉莉根)的鉴别研究(雷钧涛等人，中药紫茉莉花根的鉴别研究，安徽农业科学，2012,40(9):5191
‑
5192,5195)包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、薄层鉴别和紫外光谱鉴别。其中，薄层鉴别仅显示薄层板上的正丁醇浸提物有黄褐色斑点析出，且氯仿浸提物和石油醚浸提物在对应的位置有相同颜色的斑点。但是上述薄层鉴别方法的缺点在于缺乏对照药材、缺乏对照品、缺乏具体的展开剂条件并且鉴别精度极低，既无法实现药材胭脂花根(紫茉莉根)本身的有效鉴别，又无法实现药材胭脂花根(紫茉莉根)与相近似药材喜马拉雅紫茉莉根的有效区分。
5.基于以上原因，需要对药材胭脂花根(紫茉莉根)的薄层鉴别方法进一步研究，以解决现有的薄层鉴别方法缺乏对照药材、缺乏对照品、缺乏具体的展开剂条件并且鉴别精度极低的问题。


技术实现要素：

6.基于此，本发明的主要目的在于提供了一种药材胭脂花根的薄层鉴别方法、一种用于区分药材胭脂花根和药材喜马拉雅紫茉莉根的薄层鉴别方法和一种包含药材胭脂花根的疗痔胶囊的薄层鉴别方法以及上述薄层鉴别方法的应用，以解决现有技术中现有的薄层鉴别方法缺乏对照药材、缺乏对照品、缺乏具体的展开剂条件并且鉴别精度极低的问题。
7.为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种药材胭脂花根的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
8.(1)采用相同的方式分别将待鉴别的药材胭脂花根样品进行前处理得到供试品溶液、将对照药材样品进行前处理得到对照药材溶液；以及
9.(2)对该对供试品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
10.其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为展开剂，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
11.根据本发明的另一方面，提供了一种用于区分药材胭脂花根和药材喜马拉雅紫茉莉根的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
12.(1)采用相同的方式分别将药材胭脂花根样品进行前处理得到胭脂花根样品溶液、将药材喜马拉雅紫茉莉根样品进行前处理得到喜马拉雅紫茉莉根样品溶液；以及
13.(2)对该胭脂花根样品溶液和该喜马拉雅紫茉莉根样品溶液进行薄层色谱鉴别分析；
14.其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为展开剂，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
15.根据本发明的另一方面，提供了一种包含药材胭脂花根的疗痔胶囊的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
16.(1)采用相同的方式分别将待鉴别的疗痔胶囊样品进行前处理得到供试品溶液、将对照药材或者对照品进行前处理得到对照药材溶液或者对照品溶液；以及
17.(2)对该供试品溶液和该对照药材溶液或者该对照品溶液进行薄层色谱鉴别分析；
18.其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为展开剂，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
19.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(1～4):(2～5)。
20.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～5)。
21.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～3)。
22.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(2～4):(2～4):(2～3)。
23.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:(2～4):2。
24.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:4:2。
25.进一步地，该展开剂进一步包含酸。
26.进一步地，该酸为有机酸。
27.进一步地，该有机酸为甲酸和/或乙酸。
28.进一步地，相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，该酸的体积占比为2.5％至3.5％。
29.进一步地，该薄层鉴别方法进一步包括薄层板活化步骤。
30.进一步地，该薄层板活化步骤包括将该薄层板在100℃至120℃下活化20分钟至60分钟。
31.进一步地，该薄层板选自硅胶g薄层板、硅胶gf
254
薄层板、硅胶h薄层板、硅胶hf
254
薄层板和聚酰胺薄层板中的至少一种。
32.进一步地，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的检视条件为：可见光下观测。
33.进一步地，检视时将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以5％～10％硫酸乙醇溶液或者5％～25％磷钼酸乙醇溶液进行显色。
34.进一步地，检视时将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以5％～10％硫酸乙醇溶液进行显色。
35.进一步地，该前处理包括取样品粉末或对照品粉末加有机溶剂处理5～50分钟，滤过，滤液蒸干，将残渣加有机溶剂溶解，作为相应的样品溶液或对照品溶液。
36.进一步地，该样品溶液的点样量为3μl至10μl。
37.进一步地，该对照品溶液的点样量为5μl至10μl。
38.进一步地，该对照品溶液的浓度为0.15mg/ml至0.30mg/ml。
39.进一步地，该有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任意一种或两种以上的混合物。
40.进一步地，该处理时间为10～45分钟。
41.进一步地，该处理时间为20～30分钟。
42.进一步地，该处理的方法为超声、回流、煎煮、浸渍中的任意一种或两种以上。
43.进一步地，该对照品为胡萝卜苷和/或β
‑
谷甾醇。
44.进一步地，该对照药材为胭脂花根对照药材。
45.根据本发明的另一方面，提供了一种上述薄层鉴别方法在鉴别药材胭脂花根或者鉴别包含药材胭脂花根的疗痔胶囊中的用途。
46.根据本发明的另一方面，提供了一种用于鉴别药材胭脂花根或者包含药材胭脂花根的疗痔胶囊的试剂盒，其包括薄层板和展开剂。
47.进一步地，采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为该展开剂。
48.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
49.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(1～4):(2～5)。
50.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～5)。
51.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～3)。
52.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(2～4):(2～4):(2～3)。
53.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:(2～4):2。
54.进一步地，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:4:2。
55.进一步地，该展开剂进一步包含酸。
56.进一步地，该酸为有机酸。
57.进一步地，该有机酸为甲酸和/或乙酸。
58.进一步地，相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，该酸的体积占比为2.5％至3.5％。
59.应用本发明的技术方案，本发明的上述薄层鉴别方法展开剂选择适当、鉴别效率高、鉴别精度高并且操作方便从而能够很好地解决现有的薄层鉴别方法缺乏对照药材、缺乏对照品、缺乏具体的展开剂条件并且鉴别精度极低的问题。
附图说明
60.为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。
61.图1是实施例一的薄层色谱展开图(一)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾
醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
62.图2是实施例一的薄层色谱展开图(二)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
63.图3是实施例一的薄层色谱展开图(三)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
64.图4是实施例二的薄层色谱展开图(一)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)；编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
65.图5是实施例二的薄层色谱展开图(二)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)；编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
66.图6是实施例二的薄层色谱展开图(三)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)；编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
67.图7是实施例三的薄层色谱展开图(一)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
68.图8是实施例三的薄层色谱展开图(二)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
69.图9是实施例四的薄层色谱展开图(一)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)；编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
70.图10是实施例四的薄层色谱展开图(二)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)；编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
71.图11是实施例四的薄层色谱展开图(三)，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)；编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)；编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)。
72.图12是实施例五的薄层色谱展开图，其中编号1
‑‑‑
胡萝卜苷；编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇；编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1；编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2；编号5
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)3；编号6
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)1；编号7
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)2；编号8
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)3；编号9
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)4；编号10
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)5；编号11
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)6；编号12
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)7；编号13
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)8。
具体实施方式
73.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
74.正如背景技术部分所描述的，现有的薄层鉴别方法缺乏对照药材、缺乏对照品、缺乏具体的展开剂条件并且鉴别精度极低的问题。为了解决上述问题，本发明提供了一种药材胭脂花根的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
75.(1)采用相同的方式分别将待鉴别的药材胭脂花根样品进行前处理得到供试品溶液、将对照药材样品进行前处理得到对照药材溶液；以及
76.(2)对该对供试品溶液和该对照药材溶液进行薄层色谱鉴别分析；
77.其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为展开剂，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
78.根据本发明的另一方面，提供了一种用于区分药材胭脂花根和药材喜马拉雅紫茉莉根的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
79.(1)采用相同的方式分别将药材胭脂花根样品进行前处理得到胭脂花根样品溶液、将药材喜马拉雅紫茉莉根样品进行前处理得到喜马拉雅紫茉莉根样品溶液；以及
80.(2)对该胭脂花根样品溶液和该喜马拉雅紫茉莉根样品溶液进行薄层色谱鉴别分析；
81.其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为展开剂，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
82.根据本发明的另一方面，提供了一种包含药材胭脂花根的疗痔胶囊的薄层鉴别方法，其包括以下步骤：
83.(1)采用相同的方式分别将待鉴别的疗痔胶囊样品进行前处理得到供试品溶液、将对照药材或者对照品进行前处理得到对照药材溶液或者对照品溶液；以及
84.(2)对该供试品溶液和该对照药材溶液或者该对照品溶液进行薄层色谱鉴别分析；
85.其中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为展开剂，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
86.本发明提供的上述同时鉴别药材胭脂花根、药材喜马拉雅紫茉莉根和疗痔胶囊样品的方法，对药材胭脂花根、药材喜马拉雅紫茉莉根和疗痔胶囊样品采用相同的前处理方法，并选择特定的展开剂体系，使药材胭脂花根、药材喜马拉雅紫茉莉根和疗痔胶囊样品中的各种成分均能很好地分离，实现了同时鉴别。各自供试品色谱中，在与对照品色谱或对照药材色谱对应的位置上，显示相同颜色的斑点，显示出很强的专属性。同时，本发明的方法简化了操作过程，减少了鉴别所需的时间，提高了工作效率，降低了检测成本。
87.为了实现薄层展开过程中斑点之间更好地分离，在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(1～4):(2～5)。
88.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～5)。
89.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～5)。
90.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～3)。
91.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(2～4):(2～4):(2～3)。
92.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:(2～4):2。
93.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:4:2。
94.为了防止薄层展开过程中斑点的拖尾现象出现，在一种优选的实施方式中，该展开剂进一步包含酸。
95.在一种优选的实施方式中，该酸为有机酸。
96.在一种优选的实施方式中，该有机酸为甲酸和/或乙酸。
97.在一种优选的实施方式中，相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，该酸的体积占比为2.5％至3.5％。
98.为了除去吸附在薄层板上的挥发性杂质和水分并提高分离效率，在一种优选的实施方式中，该薄层鉴别方法进一步包括薄层板活化步骤。
99.为了进一步增强薄层板上的斑点的分离效率，在一种优选的实施方式中，该薄层板活化步骤包括将该薄层板在100℃至120℃下活化20分钟至60分钟。
100.在一种优选的实施方式中，该薄层板选自硅胶g薄层板、硅胶gf
254
薄层板、硅胶h薄层板、硅胶hf
254
薄层板和聚酰胺薄层板中的至少一种。
101.在一种优选的实施方式中，该薄层色谱鉴别分析的步骤中的检视条件为：可见光下观测。
102.在一种优选的实施方式中，检视时将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以5％～10％硫酸乙醇溶液或者5％～25％磷钼酸乙醇溶液进行显色。
103.在一种优选的实施方式中，检视时将展开完毕的薄层板取出，晾干，喷以5％～10％硫酸乙醇溶液进行显色。
104.在一种优选的实施方式中，该前处理包括取样品粉末或对照品粉末加有机溶剂处
理5～50分钟，滤过，滤液蒸干，将残渣加有机溶剂溶解，作为相应的样品溶液或对照品溶液。
105.在一种优选的实施方式中，该样品溶液的点样量为3μl至10μl。
106.为了使样品溶液在薄层展开后能够显示出清晰且不拖尾的斑点，在一种优选的实施方式中，胭脂花根样品点样量为10μl时，斑点最清晰；疗痔胶囊(含胭脂花根的苗药)点样量为3μl时最适宜。
107.为了使对照品溶液在薄层展开后能够显示出清晰且不拖尾的斑点，在一种优选的实施方式中，该对照品溶液的点样量为5μl至10μl。
108.在一种优选的实施方式中，该对照品溶液的浓度为0.15mg/ml至0.30mg/ml。
109.在一种优选的实施方式中，该有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任意一种或两种以上的混合物。
110.在一种优选的实施方式中，该处理时间为10～45分钟。
111.为了使样品溶液或对照品溶液在薄层展开后能够显示出清晰且浓度适中的斑点，在一种优选的实施方式中，该处理时间为30～40分钟。
112.在一种优选的实施方式中，该处理的方法为超声、回流、煎煮、浸渍中的任意一种或两种以上。
113.在一种优选的实施方式中，该对照品为胡萝卜苷和/或β
‑
谷甾醇。
114.在一种优选的实施方式中，该对照药材为胭脂花根对照药材。
115.根据本发明的另一方面，提供了一种上述薄层鉴别方法在鉴别药材胭脂花根或者鉴别包含药材胭脂花根的疗痔胶囊中的用途。
116.根据本发明的另一方面，提供了一种用于鉴别药材胭脂花根或者包含药材胭脂花根的疗痔胶囊的试剂盒，其包括薄层板和展开剂。
117.在一种优选的实施方式中，采用甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮作为该展开剂。
118.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～5):(1～5):(1～5)。
119.为了实现薄层展开过程中斑点之间更好地分离，在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(1～4):(2～5)。
120.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～5)。
121.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(1～4):(2～4):(2～3)。
122.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为(2～4):(2～4):(2～3)。
123.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:(2～4):2。
124.在一种优选的实施方式中，甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积比为4:4:2。
125.为了防止薄层展开过程中斑点的拖尾现象出现，在一种优选的实施方式中，该展开剂进一步包含酸。
126.在一种优选的实施方式中，该酸为有机酸。
127.在一种优选的实施方式中，该有机酸为甲酸和/或乙酸。
128.在一种优选的实施方式中，相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，该酸的体积占比为2.5％至3.5％。
129.需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
130.以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本技术所要求保护的范围。
131.本发明的鉴别方法包括如下步骤：
132.将供试品、对照药材和对照品分别进行前处理，然后采用薄层色谱法进行鉴别。其中，前处理的步骤可选用现有技术中的前处理手段。
133.具体来说，本发明的鉴别方法具体包括如下步骤：
134.1、供试品溶液的制备：
135.取供试品(即药材胭脂花根样品或药材喜马拉雅紫茉莉根或疗痔胶囊样品)粉末加有机溶剂处理5～50分钟，滤过，滤液蒸干，将残渣加有机溶剂溶解，作为相应的供试品溶液。
136.2、对照药材溶液的制备：
137.取对照药材(即胭脂花根对照药材样品)粉末依照供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
138.3、待区别对照药材溶液的制备
139.取待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)粉末依照供试品溶液制备方法制成待区别品溶液。
140.4、对照品溶液的制备：
141.取对照品(即胡萝卜苷和β
‑
谷甾醇)粉末依照供试品溶液制备方法制成相应的对照品溶液。
142.5、采用薄层色谱鉴别法对供试品溶液、对照药材溶液、待区别品溶液和对照品溶液进行薄层色谱分析：
143.薄层条件如下：
144.薄层板：硅胶g薄层板；
145.点样：供试品溶液、对照品溶液与对照药材溶液分别点样1μl～10μl；
146.展开剂：体积比为(1～5):(1～5):(1～5)的甲苯：乙酸乙酯：丙酮；
147.展开方式：上行展开；
148.检视：可见光下观察；
149.色谱识别：供试品色谱中，如果在与对照药材或对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，则说明供试品为合格品。
150.其中，本发明所用试验材料可选择如下材料，但实际实施时并不限于如下材料：
151.仪器：旋转蒸发仪(eyela，osb
‑
2100)、显色剂电动喷雾器(camag，ch
‑
4132muttenz)、烘箱(中兴伟业，101
‑
1ab)和分析天平(佑科仪器，yp30002)。
152.试剂：硅胶g薄层板，青岛胜海精细硅胶化工有限公司生产，板规格100
×
100mm，厚度0.20
‑
0.25mm。甲醇、甲苯、乙酸乙酯、丙酮、甲酸、浓硫酸、无水乙醇，均为分析纯。
153.供试品(药材胭脂花根样品)1
‑
8：信息如下表1所示。
154.表1药材胭脂花根样品信息表
[0155][0156][0157]
供试品(药材喜马拉雅紫茉莉根样品)：2019年采于西藏林芝，批号为2019001。
[0158]
供试品(疗痔胶囊样品)：其含有胭脂花根的苗药，生产厂家为贵州富华药业有限责任公司，批号为20180504。
[0159]
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1
‑
3：信息如下表2所示，按照《中检院民族药对照药材首批研制指导原则(试行)》研制。
[0160]
表2药材胭脂花根样品信息表
[0161][0162]
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)：购买于中国食品药品检定研究院，批号：121395
‑
201303。
[0163]
对照品：胡萝卜苷对照品(hplc≥98％，购买于上海源叶生物科技有限公司，批号：p26f9f54684)、β
‑
谷甾醇对照品(含量以97％计，购买于中国食品药品检定研究院，批号：110851
‑
201608)。
[0164]
实施例一
[0165]
本实施例以不同展开剂对本技术方案结果的影响进行研究，以对本技术方案作进一步说明。
[0166]
(1)样品制备：
[0167]
编号1
‑‑‑
胡萝卜苷：取胡萝卜苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.252mg/ml。
[0168]
编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇：取β
‑
谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.1956mg/ml。
[0169]
编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0170]
编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0171]
编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0172]
编号6
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)：取疗痔胶囊1粒，打开胶囊称量粉末约0.5g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0173]
(2)展开系统：
[0174]
1、石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(5:2:3)，0.5ml甲酸；
[0175]
2、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(1:2:5)，0.5ml甲酸；
[0176]
3、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(5:2:3)，0.5ml甲酸。
[0177]
(3)显色方法：取出，晾干，喷5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0178]
(4)试验结果：
[0179]
在石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(5:2:3)，加0.5ml甲酸的展开系统中，对照品较清晰，疗痔胶囊样品分离较差，喜马拉雅紫茉莉根和胭脂花根也未见明显区别，结果如图1所示；在甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(1:2:5)，加0.5ml甲酸的展开系统中，对照品清晰，喜马拉雅紫茉莉根和胭脂花根分离一般，疗痔胶囊样品分离一般，结果如图2所示；在甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(5:2:3)，加0.5ml甲酸的展开系统中，对照品斑点清晰，喜马拉雅紫茉莉根和胭脂花根分离一般，疗痔胶囊样品分离较优，结果如图3所示。
[0180]
实施例二
[0181]
为了进一步优化甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮展开剂系统，本实施例以不同展开剂对本技术方案结果的影响进行进一步研究，以对本技术方案作进一步说明。
[0182]
(1)样品制备：
[0183]
编号1
‑‑‑
胡萝卜苷：取胡萝卜苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.252mg/ml。
[0184]
编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇：取β
‑
谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.1956mg/ml。
[0185]
编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0186]
编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0187]
编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0188]
编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0189]
编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)：取疗痔胶囊1粒，打开胶囊称量粉末约0.5g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0190]
(2)展开系统：
[0191]
1、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(5:2:3)，0.5ml甲酸；
[0192]
2、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:2:2)，0.5ml甲酸；
[0193]
3、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:4:2)，0.5ml甲酸。
[0194]
(3)显色方法：取出，晾干，喷5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0195]
(4)试验结果：
[0196]
在甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(5:2:3)中，加0.5ml甲酸的展开系统中，对照品斑点清晰，喜马拉雅紫茉莉根和胭脂花根分离一般，疗痔胶囊样品分离较优，结果如图4所示；在甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:2:2)中，加0.5ml甲酸的展开系统中，对照品斑点清晰，喜马拉雅紫茉莉根和胭脂花根分离较优，疗痔胶囊样品分离较优，结果如图5所示；在甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:4:2)中，加0.5ml甲酸的展开系统中，胭脂花根对照样品分离好，斑点清晰，和胡萝卜苷、β
‑
谷甾醇对照品有对应斑点；疗痔胶囊样品分离较好，与对照品、胭脂花根对照样品有对应的斑点；而且胭脂花根和喜马拉雅紫茉莉根有明显区别，结果如图6所示。
[0197]
实施例三
[0198]
本实施例以不同显色剂对本技术方案结果的影响进行研究，以对本技术方案作进一步说明。
[0199]
(1)样品制备：
[0200]
编号1
‑‑‑
胡萝卜苷：取胡萝卜苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.252mg/ml。
[0201]
编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇：取β
‑
谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.1956mg/ml。
[0202]
编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0203]
编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0204]
编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0205]
编号6
‑‑‑
供试品(疗痔胶囊样品)：取疗痔胶囊1粒，打开胶囊称量粉末约0.5g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0206]
(2)展开系统：石油醚
‑
乙酸乙酯
‑‑
丙酮(5:2:1)，0.5ml甲酸；
[0207]
(3)显色方法：取出，晾干，分别喷5％硫酸乙醇溶液和25％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0208]
(4)试验结果：在石油醚
‑
乙酸乙酯
‑‑
丙酮(5:2:1)中，加0.5ml甲酸的展开条件下，对比5％硫酸乙醇溶液(结果如图7所示)和25％磷钼酸乙醇溶液(结果如图8所示)2种显色剂，结果表明：5％硫酸乙醇溶液更便于鉴别。
[0209]
实施例四
[0210]
本实施例以不同甲酸添加量对本技术方案结果的影响进行研究，以对本技术方案作进一步说明。
[0211]
(1)样品制备：
[0212]
编号1
‑‑‑
胡萝卜苷：取胡萝卜苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.252mg/ml。
[0213]
编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇：取β
‑
谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.1956mg/ml。
[0214]
编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1：取粉末1g，加甲醇10ml，超声
30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0215]
编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0216]
编号5
‑‑‑
待区别对照药材(即喜马拉雅紫茉莉根对照药材样品)：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0217]
编号6
‑‑‑
供试品(即药材喜马拉雅紫茉莉根样品)：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0218]
编号7
‑‑‑
供试品(即疗痔胶囊样品)：取疗痔胶囊1粒，打开胶囊称量粉末约0.5g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0219]
(2)展开系统：
[0220]
1、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:4:2)，上述三种溶剂相加为60ml，再加1.5ml甲酸(相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，甲酸的体积占比为2.5％)；
[0221]
2、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:4:2)，上述三种溶剂相加为60ml，再加0.5ml甲酸(相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，甲酸的体积占比为约0.83％)；
[0222]
3、甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:4:2)，不加甲酸。
[0223]
(3)显色方法：取出，晾干，喷5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0224]
(4)试验结果：
[0225]
甲酸的含量对展开结果有影响，无甲酸的展开系统，分离结果一般，基本能够实现鉴别药材的要求，结果如图9所示；甲酸体积占比在约0.83％时，分离效果同样一般，基本能够实现鉴别药材的要求，结果如图10所示；甲酸体积占比在2.5％时，分离效果好，斑点清晰，能够很好地鉴别药材，结果如图11所示。
[0226]
在上述实施例一、实施例二和实施例三中，所配制的“甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮，加0.5ml甲酸”和“石油醚
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮，加0.5ml甲酸”展开剂，甲酸体积占上述三种溶剂的体积之和均在2.44％～3.45％之间。
[0227]
实施例五
[0228]
以实施例四中的展开系统1作为展开剂条件，对不同产地胭脂花根的薄层鉴别，以对本技术方案作进一步说明。
[0229]
(1)样品制备：
[0230]
编号1
‑‑‑
胡萝卜苷：取胡萝卜苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.252mg/ml。
[0231]
编号2
‑‑‑
β
‑
谷甾醇：取β
‑
谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。本次试验对照品浓度为0.1956mg/ml。
[0232]
编号3
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)1：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0233]
编号4
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)2：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0234]
编号5
‑‑‑
对照药材(即胭脂花根对照药材样品)3：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0235]
编号6
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)1：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，
滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0236]
编号7
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)2：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0237]
编号8
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)3：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0238]
编号9
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)4：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0239]
编号10
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)5：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0240]
编号11
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)6：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0241]
编号12
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)7：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0242]
编号13
‑‑‑
供试品(药材胭脂花根样品)8：取粉末1g，加甲醇10ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，取1ml甲醇溶解。
[0243]
(2)展开系统：
[0244]
甲苯
‑
乙酸乙酯
‑
丙酮(4:4:2)，上述三种溶剂相加为60ml，再加1.5ml甲酸(相对于甲苯、乙酸乙酯和丙酮的体积之和，甲酸的体积占比为2.5％)。
[0245]
(3)显色方法：取出，晾干，喷5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
[0246]
(4)试验结果：
[0247]
如图12所示，建立的该薄层鉴别方法有胡萝卜苷、β
‑
谷甾醇2个对照品，还有胭脂花根对照药材，样品分离较好，rf值合适，斑点清晰。
[0248]
所有批次的胭脂花根药材和胡萝卜苷、β
‑
谷甾醇对照品有对应斑点；所有批次的胭脂花根药材和对照药材有相同的斑点，薄层鉴别结果表明：编号6、7、8、9、10、11、12和13的胭脂花根药材均是正品。
[0249]
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的技术手段等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
[0250]
以上对本发明实施例和附图进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。