包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法与流程

1.本发明涉及包含地洛瑞林(deslorelin)的缓释型微粒及其制备方法，更具体地，涉及如下的包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法，即注入动物体内时，可长时间持续释放地洛瑞林，由此可保持化学去势效果。


背景技术：

2.出于多种原因有必要对雄性反刍动物进行睾丸切除术(去除睾)或去势，其中，主要是为了减少攻击性、降低对人及其他动物造成伤害的风险以及便于驯服。
3.并且，当用于增重的更专用的饲养时，为了避免低遗传潜力雄性的不必要的杂交风险，或者，为通过相比完整动物而增加最佳肉质的比率以及增加脂肪蓄积来提供相对更好的胴体也是必要的。
4.作为去势方法有挫切式、精索结扎式、捻转式、被睾结扎式、捊断式、部分去势、无血去势式等外科手术，此外，还有一种是对性腺照射一定量的敏感的辐射，使其丧失能力的方法。
5.但是，物理去势对动物造成非常严重的痛苦及压力，因此从动物福利角度来说是一个问题，瑞士、挪威、比利时、荷兰等欧洲国家在2009年左右决定禁止对动物进行物理去势，而韩国也在考虑采取类似措施(图恩r等人，公猪去势：技术和动物福利问题。生理药理学杂志，57，第189
‑
194页，2006年(thun r et al.,castration in male pigs:techniques and animal welfare issues.journ al of physiology and pharmacology，57，pp.189
‑
194，2006))。
6.适合于性绝育和性欲消除的另一种方法是化学方法。在1960年代，以促进睾丸或精索的功能(产生精子及雄激素)总损失为目的，开始研究直接注入到睾丸或精索的硬化物质。
7.以在睾丸内施用如下几种激动剂的方式，对于猴子、仓鼠、兔子、鼠及狗尝试进行化学性绝育：氯化亚铁(kar等人，1965)、达那唑(dixit等人，1975)、卡介苗(bcg)(das等人，1982)、单宁酸锌(fahim等人，1982)、甘油(weinbauer等人，1985，immegart 2000)、葡萄糖、nacl(heath等人，1987，russell等人，1987)、二溴氯丙烷(dbcp)(shemi等人，1988)、乳酸(fordyce等人，1989)、精氨酸锌(fahim等人，1993)、氟化钠(sprando等人，1996)、福尔马林(balar等人，2002)及氯化钙(samanta 1998，jana等人，2002)、高锰酸钾冰醋酸(giri等人，2002)。在反刍动物中，使用了将乳酸(hill等人，1985)、单宁酸、硫酸锌(feher等人，1985)、α
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羟基丙酸(co hen等人，1995)、福尔马林(ijaz等人，2000)、卡斯特奎因14(castratequin14)(soerensen等人，2001)注入雄性睾丸内的方法。
8.最近，利用作为促性腺激素释放激素(gnrh)的合成类似物的地洛瑞林(deslorelin)，将其应用到雄性动物的化学去势及狗的良性前列腺肥大症的治疗中。
9.但是，上述地洛瑞林以植入的形式被注入到动物体内，因此给药时给动物带来巨大的疼痛。
10.为此，需要开发将地洛瑞林用作化学去势剂时，不给动物带来巨大的疼痛并作为暂时性的性绝育剂可长时间保持效果的产品。
11.现有技术文献
12.专利文献
13.(专利文献1)kr10
‑
2012
‑
0052355a1


技术实现要素：

14.发明要解决的问题
15.本发明的目的在于，提供一种包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法。
16.本发明的另一目的在于，以皮下注射剂型提供包含地洛瑞林的缓释型微粒，从而可以提供能长时间保持雄性动物的化学去势剂效果的包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法。
17.本发明的又一目的在于，提供如下的包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法，即以皮下注射剂型施用包含地洛瑞林的缓释型微粒时，具有2至8个月的化学去势剂效果，从而公猪的膻味(雄臭)去除效果优异。
18.本发明的又一目的在于，提供一种如下的缓释型微粒的制备方法及通过该制备方法制备的缓释型微粒，即通过提供具有均匀的直径的缓释型微粒，当对动物进行给药时，可缓解疼痛，并可持续2个月至36个月的化学去势效果。
19.用于解决问题的手段
20.为了实现上述目的，根据本发明一实施例的包含地洛瑞林的缓释型微粒的制备方法包括：1)将地洛瑞林溶于第一溶剂的活性药物成分(active pharmace utical ingredient，api)混合物与生物降解性高分子溶于第二溶剂的生物降解性高分子混合物进行混合来制备第一混合物的步骤；2)将表面活性剂溶于水中以制备第二混合物的步骤；3)将上述1)步骤的第一混合物注入到直线方向的通道来使其流动的步骤；4)将上述2)步骤的第二混合物注入到以与上述3)步骤的沿直线方向流动的通道形成交叉点的方式形成在两侧面或一侧面的微通道来使其流动，上述直线方向的流动与侧面方向的流动交叉，以制备地洛瑞林匀分布的微粒的步骤；5)收集在上述4)步骤的交叉点生成的微粒的步骤；6)去除存在于上述5)步骤中收集的微粒表面的有机溶剂的步骤；以及7)洗涤并干燥上述6)步骤的微粒的步骤。上述所制备的微粒为o1(油)/o2(油)/w(水)乳液(第一油/第二油/水乳液)或w1(水)/o(油)/w2(水)乳液(第一水/油/第二水乳液)，上述微粒的平均直径为25至140μm。
21.上述微粒可以以1：4至1：30的重量比包含地洛瑞林及生物降解性高分子。
22.上述活性药物成分(api)混合物可以是以1：3至1：8的重量比混合地洛瑞林及第一溶剂而成的混合物。
23.上述生物降解性高分子混合物可以是以1：10至3：10的重量比混合生物降解性高分子及第二溶剂而成的混合物。
24.上述第一混合物可以是以1：4至1：20的重量比混合api混合物基生物降解性高分子混合物而成的混合物。
25.上述第二混合物还可包含渗透压调节剂。
26.上述溶剂可选自由甲醇、氯仿、氯甲烷、二氯甲烷、三氯乙烷、水、乙醇、二甲基亚砜
及它们的混合物组成的组中。
27.上述生物降解性高分子可选自由聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物、聚丙交酯
‑
乙交酯共聚物(plga)、聚磷腈、聚亚氨基碳酸酯、聚磷酸酯、聚酸酐、聚原酸酯、聚己内酯、聚羟基戊酸酯、聚羟基丁酸酯、聚氨基酸及它们的组合组成的组中。
28.上述通道截面的宽度w与微粒的平均直径d'之比在0.7至1.3的范围。
29.上述通道截面的高度d与微粒的平均直径d'之比在0.7至1.3的范围。
30.根据本发明再一实施例的包含地洛瑞林的缓释型微粒，其通过上述制备方法制备而得。
31.本发明另一实施例的包含地洛瑞林的缓释型微粒的皮下注射用组合物，其可包含上述缓释型微粒及悬浮溶剂。
32.根据本发明还有一实施例的包含地洛瑞林的公猪的膻味去除用注射剂型，其包含上述缓释型微粒及悬浮溶剂，并用于去除公猪的膻味，通过皮下或肌肉注射提供所述注射剂型，可持续释放2至8个月的地洛瑞林。
33.根据本发明又一实施例的包含地洛瑞林的雄性动物的化学去势剂用注射剂型包含上述缓释型微粒及悬浮溶剂，用于雄性动物的化学去势，通过皮下或肌肉注射提供，可持续释放2至36个月的地洛瑞林。
34.以下，进一步详细说明本发明。
35.根据本发明一实施例的包含地洛瑞林的缓释型微粒的制备方法包括：1)将地洛瑞林溶于第一溶剂的活性药物成分(active pharmaceutical ingredient，api)混合物、及生物降解性高分子溶于第二溶剂的生物降解性高分子混合物进行混合来制备第一混合物的步骤；2)将表面活性剂溶于水中以制备第二混合物的步骤；3)将上述1)步骤的第一混合物注入到直线方向的通道来使其流动的步骤；4)将上述2)步骤的第二混合物注入到以与上述3)步骤的沿直线方向流动的通道形成交叉点的方式形成在两侧面或一侧面的微通道来使其流动，上述直线方向的流动与侧面方向的流动交叉，从而制备地洛瑞林匀分布的微粒的步骤；5)收集在上述4)步骤的交叉点中生成的微粒的步骤；6)去除存在于上述5)步骤中收集的微粒表面的有机溶剂的步骤；以及7)洗涤并干燥上述6)步骤的微粒的步骤。上述所制备的微粒为o1(油)/o2(油)/w(水)乳液或w1(水)/o(油)/w2(水)乳液，上述微粒的平均直径为25至140μm。
36.使用醋酸地洛瑞林(deslorelin acetate)来制备地洛瑞林，是天然存在的促性腺激素释放激素(gnrh)的合成类似物。
37.与主要用于通过脑下垂体的显著下调来抑制促黄体生成素(lh)和促卵泡激素(fsh)的其他gnrh激动剂不同，主要用于脑下垂体的初始升高效果(initial flare effect)及与其相关的lh分泌的增加。
38.在兽医学上，用于作为人工授精过程的一部分的诱导母马排卵，或者用于稳定以家畜为主的高危妊娠。并且，用于狗和伶鼬的化学去势，还可用于治疗狗的良性前列腺肥大。
39.本发明涉及缓释型微粒的制备方法，通过调节上述微粒的大小，可在动物体内保持2至36个月的药物释放效果。
40.更具体地，上述微粒为球形，其为均匀混合有生物降解性高分子和地洛瑞林的形
式。
41.常规的缓释型微粒以包裹药物的形式形成，但本发明是球形的粒子上均匀混合有生物降解性高分子和地洛瑞林的形式，将微粒本身注入到动物体内时，随着生物降解性高分子的分解，释放地洛瑞林，从而呈现药效。
42.更具体地，根据本发明一实施例的缓释型微粒的制备方法如下。
43.上述1)步骤为制备第一混合物的步骤，将地洛瑞林溶于第一溶剂的活性药物成分(active pharmaceutical ingredient，api)混合物与生物降解性高分子溶于第二溶剂的生物降解性高分子混合物进行混合来制备第一混合物。
44.上述api混合物是指将地洛瑞林溶于第一溶剂来使地洛瑞林均匀混合在溶剂中。上述api混合物以1：3至1：8的重量比混合地洛瑞林及第一溶剂。在上述范围内制备api混合物的情况下，可制备出均匀混合有生物降解性高分子和地洛瑞林的微粒。
45.上述生物降解性高分子混合物是指将生物降解性高分子溶于第二溶剂来使生物降解性高分子均匀混合在溶剂中。上述第二溶剂可使用有机溶剂，以完全溶解生物降解性高分子。上述生物降解性高分子混合物以1：10至3：10的重量比混合生物降解性高分子及第二溶剂。在上述范围内制备生物降解性高分子混合物的情况下，可制备出均匀混合有生物降解性高分子和地洛瑞林的微粒。
46.并且，第一混合物以1：4至1：20的重量比混合上述api混合物与生物降解性高分子混合物。在上述范围内制备api混合物的情况下，可制备出均匀混合有生物降解性高分子和地洛瑞林的微粒。
47.上述生物降解性高分子选自由聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物、聚丙交酯
‑
乙交酯共聚物(plga)、聚磷腈、聚亚氨基碳酸酯、聚磷酸酯、聚酸酐、聚原酸酯、聚己内酯、聚羟基戊酸酯、聚羟基丁酸酯、聚氨基酸及它们的组合组成的组中，优选地为聚丙交酯
‑
乙交酯共聚物(plga)，但并不限于上述示例。
48.并且，上述溶剂为选自由甲醇、氯仿、氯甲烷、二氯甲烷、三氯乙烷、水、乙醇、二甲基亚砜及它们的混合物组成的组中的一种。优选地，上述第一溶剂为甲醇或水，第二溶剂为二氯甲烷，但并不限于上述示例。
49.根据上述第一溶剂的种类制备的微粒为o1(油)/o2(油)/w(水)乳液或w1(水)/o(油)/w2(水)乳液，具有差异，此时，将甲醇用作第一溶剂的情况下，制备成o1(油)/o2(油)/w(水)乳液的形式，将水用作第一溶剂的情况下，制备成w1(水)/o(油)/w2(水)乳液的形式。
50.上述o1(油)/o2(油)/w(水)乳液或w1(水)/o(油)/w2(水)乳液均随着进行之后的搅拌工序及冷冻干燥步骤而最终制备成球形的微粒，即制备成地洛瑞林均匀分布在上述微粒中的形式。
51.上述1)步骤为制备第一混合物的步骤，混合将醋酸地洛瑞林完全溶于甲醇或水的api混合物与将生物降解性高分子完全溶于二氯甲烷额生物降解性高分子混合物。上述第一混合物以1：4至1：30的重量比包含地洛瑞林及生物降解性高分子。在包含低于上述范围值的生物降解性高分子的情况下，相对于地洛瑞林的重量，生物降解性高分子的重量比低，因此难以制备地洛瑞林均匀分布在球形的生物降解性高分子粒子的形式的微粒，在包含大于上述重量比的生物降解性高分子的情况下，由于微粒中地洛瑞林的含量少，因此可存在药物效果持续时间短，或为了实现所需浓度的药物给药而需要施用大量的微粒的问题。
52.上述2)步骤为制备第二混合物的步骤，通过将表面活性剂溶于水来制备第二混合物。只要是有助于生物降解性高分子溶液形成稳定的乳液，就可以不受限制地使用上述表面活性剂。具体地，其可以是选自由非离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂及它们的混合物组成的组中的一种一上，更具体地，其为选自由甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、明胶、聚乙烯醇、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、月桂基硫酸钠、硬脂酸钠、酯胺、直链二胺、脂肪胺及它们的混合物组成的组中的一种以上，优选地为聚乙烯醇，但不限于示例。
53.考虑到醋酸地洛瑞林的物性，上述第二混合物还可包含渗透压调节剂。
54.更具体地，通过第一混合物与第二混合物交叉形成微粒，此时，地洛瑞林可流至第二混合物。为了防止出现这种问题，第二混合物进一步包含渗透压调节剂。
55.上述渗透压调节剂选自由甘露醇、氯化钠(nacl)及它们的混合物组成的组中，优选地，单独使用甘露醇，或者可一起包含甘露醇及氯化钠。
56.以第二混合物的中重量为基准，上述渗透压调节剂包含1至10重量％的甘露醇，或者可包含1至10重量％的甘露醇和0.2至2.0重量％的氯化钠。在上述范围内混合使用渗透压调节剂，防止地洛瑞林混入第二混合物，并可制备地洛瑞林均匀分布在球形的微粒内的形式。
57.上述3)步骤s300及4)步骤s400是将第一混合物及第二混合物注入到形成在晶片上的微通道来使其流动的步骤。
58.更具体地，在硅晶片利用电子束蒸镀机(e
‑
beam evaporator)蒸镀铝，并利用光刻技术(photolithography)用光刻胶(photoresist)在铝上进行构图(patterning)。之后，将光刻胶用作掩膜(mask)并蚀刻(etching)铝，去除光刻胶后，将铝用作掩膜并以深反应离子蚀刻(deep ion reactive etching，drie)来蚀刻硅，去除铝后，在晶片上阳极接合玻璃并密封，以制备上述微通道。
59.并且，上述微通道的平均直径为40至100μm，优选为40至60μm，更优选为50μm，但不限于示例。当微通道的平均直径小于40μm时，存在所制备的微粒被制备成直径在20μm以下的小微粒的可能性，当注入到人体内后，其被巨噬细胞吞噬的可能性增大，由此会影响有效的药物释放及生物体内吸收。并且，当通道的平均直径大于100μm时，存在所制备的微粒被制备成大小在150μm以上的微粒的可能性，在以注射剂的方式给药时，异物感及疼痛增加，所制备的粒子的粒度分布增大，因此难以制备粒度均匀的微粒。
60.并且，上所述微通道的截面宽度w及截面的高度d与所制备的微粒的平均直径d'有着密切的关联。如图8所示，所述微通道截面的宽度w相对于微粒的平均直径d'为0.7至1.3的比率范围，微通道截面的高度d相对于微粒的平均直径d'为0.7至1.3的比率范围。
61.即确定了所要制备的微粒的平均直径d'时，由此，只有将微通道截面的宽度w及高度d的长度设为d'的0.7至1.3的比率范围，才能够制备所需大小的微粒。
62.上述3)步骤是将第一混合物注入到直线方向的通道来使其流动的步骤，上述4)步骤是将第二混合物注入到以与直线方向的微通道形成交叉点的方式形成在两侧面或一侧面的微通道来使其流动的步骤。
63.即第一混合物沿直线方向的通道流动，第二混合物沿以上述直线方向的通道为基准形成在两侧面或一侧面的通道流动，并与流动的第一混合物相交汇。
64.此时，将第一混合物注入到直线方向的通道时，以一定的压力条件注入而使其以一定的流速流动，此时的压力条件为200至2000mbar，优选为1100mba r，但不限于示例。
65.并且，将第二混合物注入到两侧面或一侧面的微通道时，以一定的压力条件注入而使其能够以一定的流速流动，此时的压力条件为500至2400mbar，优选为2200mbar，但不限于示例。
66.即为了使与流动的第一混合物形成交叉点的第二混合物相比于注入到直线方向的通道的第一混合物的流动更快的流速流动，因此，在更高的压力条件下，使第二混合物流动。
67.如上所述，使第一混合物及第二混合物的流速不同，并使第二混合物的流速快于第一混合物的流速，在第一混合物流和第二混合物流交汇的地点，具有相对更快的流速的第二混合物会压缩第一混合物，此时，由于第一混合物及第二混合物的排斥力，第一混合物内的生物降解性高分子及地洛瑞林生成球状的微粒，更具体地，形成地洛瑞林均匀分布在球形的生物降解性高分子中的形式的微粒。
68.上述5)步骤是收集微粒的步骤，在装有第二混合物(混合表面活性剂及水的混合溶液)水槽内收集微粒，以防止初期生成的微粒间的聚集现象(aggregation)。
69.上述5)步骤可利用在上述2)步骤中制备的第二混合物，即表面活性剂及水的混合溶液，还可使用与上述第二混合物的成分含量不同的混合溶液。
70.也可以将在上述2)步骤中制备的第二混合物(包含1至2重量％的表面活性剂及余量水)直接用在上述5)步骤，在上述5)步骤中，为了更有效地防止水槽内微粒间的聚集现象，还可使用两种表面活性剂以及水的混合溶液。
71.如上所述，当使用两种表面活性剂时，以混合溶液总重量为基准，可包含0.1至2重量％的聚乙烯醇、1至10重量％的甘露醇及余量水。
72.如上所述，当包含两种表面活性剂来制备混合溶液并将其用于5)步骤时，可有效防止微粒间的聚集现象。
73.在直接使用2)步骤中的第二混合物的情况下，在通过上述2)步骤制备以后，一部分注入到通道，另一部分移至5)步骤的的水槽中，用于防止所收集的微粒间的聚集现象。
74.在收集微粒的步骤以后，通过在水槽内搅拌所收集的微粒的步骤，将微粒以一定的温度条件及搅拌速度进行搅拌，蒸发并去除存在于微粒的表面的有机溶剂。此时，按照如下搅拌条件以如下顺序进行：在15至25℃温度以200至600rpm的速度搅拌0.5至2小时的一次搅拌步骤；在上述一次搅拌步骤以后，在30至50℃的温度以200至800rpm的速度搅拌2至6小时的二次搅拌步骤；以及在上述二次搅拌步骤以后，在15至25℃的温度以200至800rpm的速度搅拌0.5至1.5小时的三次搅拌步骤。
75.通过改变搅拌微粒的搅拌速度和温度条件来进行搅拌工序，从而可调节存在于微粒表面的有机溶剂的蒸发速度。即通过搅拌工序使存在于微粒表面的有机溶剂蒸发，从而去除有害溶剂，并可制备具有光滑的表面的微粒。
76.第一混合物及第二混合物经由微通道时的温度同样为15至20℃，优选为17℃。即在流经微通道并形成交叉点，生成微粒后，直至对所收集的微粒进行一次搅拌，将温度恒定地保持在15至20℃的低温。只有在微粒的制备过程中保持低温，才能够制备及保持球形的粒子。即在非低温条件的情况下，会发生难以制备一定的球状的粒子的问题。
77.最后是洗涤并干燥微粒的步骤，用水对通过搅拌完全去除表面的有机溶剂的微粒进行多次洗涤，从而去除残留在微粒的表面活性剂，之后冷冻干燥
78.上述微粒的制备可以是通过将混合物注入到形成于晶片上的通道来使其流动的方式来制备。更具体地，上述通道为微通道。
79.更具体地，在硅晶片利用电子束蒸镀机(e
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beam evaporator)蒸镀铝，并利用光刻技术(photolithography)用光刻胶(photoresist)在铝上进行构图。之后，将光刻胶用作掩膜并蚀刻(etching)铝，去除光刻胶后，将铝用作掩膜并以深反应离子蚀刻(deep ion reactive etching，drie)蚀刻硅，去除铝后，在晶片上阳极接合玻璃并密封，以制备所述微通道。
80.最终生成的微粒粒子为o(油)/o(油)/w(水)乳液，其为地洛瑞林药物均匀分布在球形的生物降解性高分子微粒的形式。
81.上述微粒的粒子直径为25至140μm，以1：4至1：30的重量比包含地洛瑞林及生物降解性高分子。当上述微粒的平均直径小于25μm时，注入到动物中后，被巨噬细胞吞噬的可能性增大，由此会影响有效的药物释放及生物体内吸收，当粒子的平均直径大于140μm时，当施用包括在注射剂中的药物时，需要对被给药的动物使用大规格注射器针头，因此可增加疼痛。
82.包含在微粒内的生物降解性高分子及地洛瑞林的重量比与第一混合物中的重量比相同，这是由于制备微粒后通过蒸发完全去除溶剂，从而能够制备出以与第一混合物中的重量比相同的比例包含生物降解性高分子及地洛瑞林的微粒。
83.作为本发明一实施例，提供用于去除公猪的膻味的包含地洛瑞林的缓释型微粒的皮下注射用组合物。
84.就公猪而言，会出现特殊气味(公猪的膻味)，只有在屠宰几个月前进行去势，才不会在肉中出现异味，也才能够食用，但在动物伦理方面以及实际去势过程存在困难等。
85.即就物理去势而言，由于在动物伦理方面以及实际去势过程存在困难，事实上难以在屠宰几个月前进行去势。
86.本发明的缓释型微粒通过调节粒子大小，可以在动物体内具有2至36个月的药物释放效果。
87.为此，当用作上述公猪的膻味去除用皮下注射组合物时，地洛瑞林在公猪的体内保持2至8个月的释放效果，从而提高作为化学去势剂的效果。
88.发明的效果
89.根据本发明的包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法，通过皮下注射剂型提供包含地洛瑞林的缓释型微粒，当对动物进行给药时，可缓解疼痛，并可持续2个月至36个月的化学去势效果。
90.并且，作为化学去势剂具有2至8个月的效果，因此公猪的膻味(雄臭)去除效果优异。
附图说明
91.图1为根据本发明一实施例的不同搅拌条件的粒子扫描电子显微镜(sem)照片。
92.图2为根据本发明一实施例的不同搅拌条件的粒子扫描电子显微镜照片。
具体实施方式
93.本发明涉及包含地洛瑞林的缓释型微粒的制备方法，包括：1)将地洛瑞林溶于第一溶剂的活性药物成分(active pharmaceutical ingredient，api)混合物与生物降解性高分子溶于第二溶剂的生物降解性高分子混合物进行混合来制备第一混合物的步骤；2)将表面活性剂溶于水中以制备第二混合物的步骤；3)将上述1)步骤的第一混合物注入到直线方向的通道来使其流动的步骤；4)将上述2)步骤的第二混合物注入到以与上述3)步骤的沿直线方向流动的通道形成交叉点的方式形成在两侧面或一侧面的微通道来使其流动，上述直线方向的流动与侧面方向的流动交叉，从而制备地洛瑞林匀分布的微粒的步骤；5)收集在上述4)步骤的交叉点中生成的微粒的步骤；6)去除存在于上述5)步骤中收集的微粒表面的有机溶剂的步骤；以及7)洗涤并干燥上述6)步骤的微粒的步骤。上述所制备的微粒为o1(油)/o2(油)/w(水)乳液或w1(水)/o(油)/w2(水)乳液，上述微粒的平均直径为25至140μm。
94.具体实施例
95.以下，将详细说明本发明实施例，以便本发明所属技术领域的普通技术人员能够容易地实施本发明。但是，本发明可以以各种形式实现，并不限于在这里说明的实施例。
96.1.缓释型微粒的制备
97.实施例1
98.将醋酸地洛瑞林(deslorelin acetate)溶于甲醇制备了api混合物。将聚丙交酯
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乙交酯共聚物(plga)溶于二氯甲烷(dichloromethane)制备了生物降解性高分子混合物。
99.混合上述api混合物与生物降解性高分子混合物制备了第一混合物。此时，第一混合物内的聚丙交酯
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乙交酯共聚物及醋酸地洛瑞林的重量比为4：1。
100.上述聚丙交酯
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乙交酯共聚物(plga 7502)使用了丙交酯及乙交酯摩尔比为75/25的生物降解性高分子。
101.将作为表面活性剂的聚乙烯醇混入水中，制备了包含0.25重量％的聚乙烯醇的第二混合物。
102.将上述第一混合物及第二混合物注入到形成于硅晶片上的微通道来使其流动。此时，为了使第一混合物及第二混合物以一定的流速流动，使第一混合物在800mbar的压力条件下流动，且使第二混合物在1400mbar的压力条件下流动。温度条件保持在15℃。
103.在装有第二混合物的水槽内收集在上述第一混合物的流动及第二混合物的流动交汇的交叉点生成的微粒。将在所述水槽内收集的微粒在17℃的温度以400rpm的速度搅拌1小时以进行一次搅拌，并将温度上升至40℃，以600rpm的速度搅拌3小时以进行二次搅拌，之后将温度降低至25℃，以600rpm的速度搅拌1小时以进行三次搅拌。
104.用经过除菌过滤的纯净水多次洗涤完成搅拌的微粒，并冷冻干燥，从而制备了微粒。
105.实施例2
106.以上述第二混合物的总重量％为基准，除了额外混合5重量％的甘露醇以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
107.实施例3
108.除了聚丙交酯
‑
乙交酯共聚物及醋酸地洛瑞林的重量比为30：1以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
109.实施例4
110.除了聚丙交酯
‑
乙交酯共聚物及醋酸地洛瑞林的重量比为1：1以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
111.实施例5
112.除了聚丙交酯
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乙交酯共聚物及醋酸地洛瑞林的重量比为15：1以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
113.实施例6
114.除了聚丙交酯
‑
乙交酯共聚物及醋酸地洛瑞林的重量比为40：1以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
115.实施例7
116.除了将搅拌时温度条件改为，一次搅拌时温度为17℃；二次搅拌时温度为25℃；以及三次搅拌时温度为40℃来进行搅拌以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
117.实施例8
118.除了通过混合0.5重量％的聚乙烯醇、5重量％的甘露醇及余量水来制备混合溶液，并将其用在上述第一混合物的流动及第二混合物的流动交汇的交叉点来收集所形成的微粒的水槽中以外，以与实施例1相同的方法进行制备。
119.2.皮下注射用组合物的制备
120.以3个月量为基准(26μg/天api的相应量)，将通过上述实施例1至8制备的微粒加入到2.0ml的悬浮溶剂后，均匀混悬，制备成皮下注射用组合物。
121.上述悬浮溶剂由下述表1所示的组份组成。
122.[表1]
[0123][0124]
[实验例1：缓释型微粒的药物释放实验]
[0125]
将约100mg的实施例1至6的微粒放入内容量为120ml的玻璃试验容器中，并填充100ml的释放试验液。通过如下药物释放加速实验条件进行药物释放实验，即放入45℃的水浴中并以4cm的振幅和120次/分钟的振荡次数进行往返的条件进行。采集样品时，摇匀瓶子，并取1ml。以13000rpm离心3分钟后，取上清液并通过高效液相色谱进行分析。
[0126]
药物释放实验结果如下述表2所示。
[0127]
[表2]
[0128][0129][0130]
(单位：ng/ml)
[0131]
根据表2，就实施例4而言，初期药物释放量太多，14天后几乎完全释放，因此存在难以长时间显示药物释放效果的问题。不仅如此，就实施例6而言，初期药物释放量太少，因此存在药物治疗效果微乎其微的问题。
[0132]
与此相反，就实施例1而言，确认到持续释放1个月的地洛瑞林，就实施例2而言，以与实施例1相同的地洛瑞林及生物降解性高分子比例制备而成，但保持长时间药物释放效果。
[0133]
就实施例3及5而言，确认到持续释放长达3个月的地洛瑞林。
[0134]
实验例2.微粒的性状变化
[0135]
为了确认根据不同搅拌条件的微粒的性状变化，确认了以与实施例1、实施例7及实施例8相同的方式制备的微粒的扫描电子显微镜照片。
[0136]
实验结果如图1至2所示。
[0137]
图1为以实施例7的条件进行搅拌的情况，如实施例7所示，确认了若不在25℃温度条件进行搅拌的情况下，发生粒子间的聚集现象。
[0138]
与此相反，就实施例1而言，如图2所示，不仅可以制备具有均匀粒径的微粒，而且还可以制备表面均匀且不发生粒子间聚集现象的微粒。
[0139]
并且，就实施例8而言，如图2所示，确认了可以制备粒子间不发生聚集现象的微粒。
[0140]
以上，详细说明了本发明的优选实施例，但本发明的权利范围不限于此，本领域所属普通技术人员利用以上发明要求保护范围中定义的本发明的基本概念做出的各种修改及改进也属于本发明的权利要求的范围。
[0141]
产业可利用性
[0142]
本发明涉及包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法，更具体地，涉及注入动物体内时，长时间持续释放地洛瑞林，从而可保持化学去势效果的包含地洛瑞林的缓释型微粒及其制备方法。