一种高效液相检测苯酞的含量分析方法与流程

1.本发明属于化学检测领域，涉及一种高效液相检测苯酞的含量分析方法。


背景技术：

2.苯酞，英文名phthalide，化学式c8h6o2，分子量134，用于有机合成、精细化学品的中间体，用于生产染料中间体1，4
‑
二氯蒽醌、1
‑
氯蒽醌，抗凝血药苯基茚满二酮，杀菌剂四氯苯酞，抗焦虑药多虑平等。
3.中国发明专利cn110221009a公开了hplc测定丁苯酞有关物质的方法，其中提到过苯酞的检测，但是该专利主要的工作是分离丁苯酞中的各种杂质，分析时间过长，所使用的色谱柱不常用，同时并未对苯酞进行定量方法验证；而且发明人查询其他文献，有些企业在生产中采用气相色谱的方法来检测苯酞的含量，但是该方法不能排除无机盐及不出峰物质的干扰，导致其测得结果较之真实值虚高，进而导致在生产过程中无法准确的指导生产，其他并未见到有关高效液相检测苯酞含量的方法报道，因此本领域亟需一种简单方便的液相检测方法来检测苯酞的含量。


技术实现要素：

4.本发明针对上述技术存在的不足，提供了一种高效液相检测苯酞的含量分析方法，具体采用的是高效液相色谱分析方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃，检测波长280nm；以乙腈和0.8％的乙酸水溶液的混合体系做流动相，在280nm下得到理想的色谱峰形，使用外标法计算被测样品中的苯酞的含量。该方法专属性强，精密度好，回收率高。
5.发明人提供的具体技术方案如下：
6.一种高效液相检测苯酞的含量分析方法，采用反相高效液相色谱分析方法，具体方法如下：
7.用乙腈作溶剂分别溶解标准物质和待测样品，得到标样和试样；
8.将高效液相色谱的检测波长设定为280nm，仪器基线稳定后按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，分别对标样和试样的苯酞峰面积进行平均，得其峰面积平均值；
9.按照下式对苯酞的质量分数进行计算：
[0010][0011]
式中：
[0012]
a1——标样中，苯酞峰面积的平均值；
[0013]
a2——试样中，苯酞峰面积的平均值；
[0014]
m1——标样的质量；
[0015]
m2——试样的质量；
[0016]
p1——标样中苯酞的质量分数；
[0017]
x1——试样中苯酞的质量分数；
[0018]
其中所述的流动相为乙腈和0.8％乙酸水溶液的混合体系，色谱柱为5μm的十八烷基硅烷键合硅胶的填充剂不锈钢柱；更具体的：所用色谱柱采用粒径为5微米，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，理论塔板数不低于5000；
[0019]
优选的，所采用的流动相为乙腈和0.8％乙酸水溶液的体积比25：75；流动相的流速为1ml/min；
[0020]
每次进样的样品体积为5微升。
[0021]
本发明所针对的待测物苯酞是醚菌酯中间体中的一个重要原料，本领域中苯酞的定量一直以来都是使用气相归一的方法进行检测，但是气相检测不能排除无机盐及不出峰物质的干扰，导致其测得结果不准确，重复性差，测得结果虚高，不利于车间生产指导，本发明发明人提供的上述液相检测方法，能很好的规避气相方法的弊端，能准确的测定苯酞的真实含量，很好的实时指导车间生产；
[0022]
同时发明人针对上述方法进行了稳定性、中间精密度、线性关系和回收率的验证试验，结果发现，该方法稳定性、中间精密度良好，线性关系和回收率针对苯酞而言也是最佳的，准确性高，可操作性好，可以广泛的应用到苯酞含量的分析检测中。
附图说明
[0023]
图1为实施例1中的标样色谱图；
[0024]
图2为实施例1中的样品色谱图；
[0025]
图3为实施例2中的标样色谱图；
[0026]
图4为实施例2中的样品色谱图；
[0027]
图5是试验例3中的线性关系图；
[0028]
图6是苯酞的紫外光谱图；
[0029]
图7是试验例4中的230nm波长下线性关系图；
[0030]
图8是试验例4中的250nm波长下线性关系图。
具体实施方式
[0031]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容做进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围，下述实施例中，除特殊说明外所述方法和采用试剂均为本领域常规技术，如所采用的高效液相色谱仪为岛津公司的lc
‑
20at输液泵和spd
‑
m20a紫外检测器。
[0032]
实施例1
[0033]
一种高效液相检测苯酞的含量分析方法，具体步骤如下：
[0034]
外购小试样品01批，固体20g，对该固体产品中苯酞含量进行分析：
[0035]
色谱柱条件：采用粒径为5微米，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，柱长150毫米，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃。
[0036]
以乙腈：0.8％乙酸水溶液＝25：75为流动相，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为5微升。
[0037]
标样配制
[0038]
准确称取苯酞标样0.0503g，置于100ml容量瓶中，加80ml乙腈，超声波振荡溶解，冷至室温后，用乙腈稀释至刻度，得到试样备用。
[0039]
试样配制
[0040]
准确称取上述含苯酞试样0.0544g，置于100ml容量瓶中，加80ml乙腈，超声波振荡溶解，冷至室温后，用乙腈稀释至刻度，得到试样备用。
[0041]
测试与数据处理
[0042]
开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于0.5％之后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，在280nm波长下检测，其色谱图如图1和2所示，获得数据如下：
[0043]
表1实施例1检测结果
[0044][0045]
带入公式
[0046][0047]
计算可得样品的质量分数为92.35％。
[0048]
实施例2
[0049]
一种高效液相检测苯酞的含量分析方法，具体步骤如下：
[0050]
外购小试样品02批，固体50g，对该固体产品中苯酞含量进行分析：
[0051]
色谱柱条件：采用粒径为5微米，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，柱长150毫米，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃。
[0052]
以乙腈：0.8％乙酸水溶液＝25：75:为流动相，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为5微升。
[0053]
标样配制
[0054]
准确称取含苯酞0.0529g试样，置于100ml容量瓶中，加80ml乙腈，超声波振荡溶解，冷至室温后，用乙腈稀释至刻度，得到试样备用。
[0055]
试样配制
[0056]
准确称取上述含苯酞试样0.0568g，置于100ml容量瓶中，加80ml乙腈，超声波振荡溶解，冷至室温后，用乙腈稀释至刻度，得到试样备用。
[0057]
测试与数据处理
[0058]
开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值,达到相邻两针相对响应值变化小于0.5％之后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，在280nm波长下检测，其色谱图如图3和4所示，得数据如下：
[0059]
表2实施例2检测结果
[0060][0061]
带入公式
[0062][0063]
计算可得样品的质量分数为94.22％。
[0064]
为验证上述本发明所述方法的可行性和准确性，发明人进行了如下验证试验：
[0065]
试验例1稳定性试验
[0066]
色谱柱条件：采用粒径为5微米，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，柱长150毫米，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃。
[0067]
以乙腈：0.8％乙酸水溶液＝25：75为流动相，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为5微升。
[0068]
取实施例1中标准溶液为考察对象，室温下每间隔一定的时间分析一次，共分析6次，并同时记录峰面积。
[0069]
结果如下表4所示，色谱峰的保留时间稳定，比较峰面积得到，rsd小于1％，表明本发明所述的分析方法稳定性良好。
[0070]
表3稳定性试验结果
[0071][0072]
试验例2精密度试验
[0073]
取实施例2小试样品02批的苯酞为考察对象，称取标准品0.0501g和五个平行待测样品，按照标准品溶液、待测样品溶液、待测样品、标准品溶液溶液的顺序分别进样，计算五个平行待测样品中苯酞的质量分数；
[0074]
色谱条件：采用粒径为5微米采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，柱长150毫米，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃。
[0075]
以乙腈：0.8％乙酸水溶液＝25：75为流动相，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为5微升。
[0076]
测试与数据处理
[0077]
依次在280nm进行扫描测定，杂质分离完全，峰形良好，按式(1)计算试样的有效成分含量，按上述过程对五份试样进行分别检测，结果列于表2。由表中数据可见，该方法实验结果中间精密度良好。
[0078]
表4精密度试验结果
[0079][0080]
试验例3线性试验
[0081]
色谱柱条件：采用粒径为5微米，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
‑
ods，柱长150毫米，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃。
[0082]
以乙腈：0.8％乙酸水溶液＝25：75为流动相，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为5微升。
[0083]
试样配制
[0084]
分别称取标准品苯酞，用乙腈溶解成含苯酞309ug/ml、440ug/ml、569ug/ml、640ug/ml、750ug/ml的一组苯酞样品备用。
[0085]
测试与数据处理
[0086]
依次在280nm进行测定，以峰面积(a)对样品浓度，作线性回归，得到的回归方程(如图5所示)为y＝3747.1x 2280.4r2＝1
[0087]
可见苯酞在300～800ug/ml范围内线性关系良好。
[0088]
表5线性试验结果
[0089][0090][0091]
试验例4不同检测波长下线性检测结果的对比
[0092]
为验证不同波长对线性结果的影响，通过液相色谱二极管阵列检测器扫描苯酞的紫外光谱图，见图6。
[0093]
在试验例3的基础上，调整检测波长，分别以230nm、250nm为检测波长进行线性验证，检测步骤及其他参数的选择同验证例3，结果如下表6、7及图7、8所示。
[0094]
表6 230nm波长线性试验结果
[0095][0096]
根据检测所得平均峰面积对试样浓度作线性回归，得到230nm波长下的回归方程：y＝16883x 894778，r2＝0.9988。
[0097]
表7 250nm波长线性试验结果
[0098][0099]
根据检测所得平均峰面积对试样浓度作线性回归，得到250nm波长下的回归方程：y＝1229.1x 4252.4，r2＝1。
[0100]
可以看出，在波长230nm条件下，由于该波长吸收较大，导致峰面积过大，虽然线性相关系数r2的值也大于0.99，但截距很大，如果采用本发明中的单标准比较法进行样品分析，误差较大；在波长250nm条件下，该波长下吸收最小，尽管相关系数r2的值等于1，但峰面积较小，不利于含量很小的样品检测，综合考虑选择选择波长280nm适宜。
[0101]
试验例5回收率试验
[0102]
取实施例2小试样品02批，称取标样0.0526g，分别称取五个不同质量的样品，并加入不同质量的标样，进样计算加入标样的回收率，回收率均在98％
‑
102％之间，平均回收率为99.6％，表明该实验回收率符合要求。
[0103]
色谱柱条件：采用粒径为5微米，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱vp
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ods，柱长150毫米，理论塔板数5000的色谱柱，柱温为40℃。
[0104]
以乙腈：0.8％乙酸水溶液＝25：75为流动相，流速为1ml/min，检测波长为280nm，进样体积为5微升。
[0105]
表6回收率试验结果
[0106][0107]
由上述试验例可知，本发明所提供的苯酞含量的分析方法准确性高，可操作性好，可以广泛的应用到苯酞含量的分析检测中。