一种用于灵长类动物神经元分离的试剂盒及方法与流程

技术特征：
1.一种人工脑脊液，其特征在于，所述人工脑脊液包含：60～65mm/l nacl，10～15mm/l nahco3，0.4～0.6mm/l nah2po4，0.9～1.1mm/l kcl，11～14mm/l d
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葡萄糖，0.9～1.1mm/l cacl2，0.4～0.6mm/l mgcl2，2～3mm/l l
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抗坏血酸钠，1.25～1.75mm/l丙酮酸钠，0.0075～0.0125mm/l牛磺酸，1.75～2.25mm/l硫脲，6.5～8.5mm/l海藻糖，0.4～0.6mm/l犬尿酸，5～15μm/l 6
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氰基
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硝基喹喔啉
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2,3
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二酮，45～55μm/l dl
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ap5，0.4～0.6μm/l河豚毒素和3.5
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5.5μg/ml放线菌素d；所述人工脑脊液的ph值为7.2～7.6。2.一种用于灵长类动物神经元分离的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的人工脑脊液和脑组织修复液。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述脑组织修复液包含：45～50mm/l n
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甲基
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d
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葡萄糖胺，14～16mm/l nahco3，0.5～0.7mm/l nah2po4，1～1.5mm/l kcl，9～11mm/l 4
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羟乙基哌嗪乙磺酸，11～14mm/l d
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葡萄糖，2.25～2.75mm/l l
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抗坏血酸钠，0.9～1.1mm/l硫脲，1.4～1.6mm/l丙酮酸钠，4.25～5.75mm/l mgso4和0.2～0.3mm/l cacl2；所述脑组织修复液的ph值为7.2～7.6。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括灌流液、消化液、消化终止液和细胞清洗液。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述灌流液包括权利要求1所述人工脑脊液和动物体重0.002～0.003％的肝素钠。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述消化液包含：权利要求1所述人工脑脊液，35～45u/ml木瓜蛋白酶，15～25mg/ml胶原酶ⅱ型，消化液总体积0.4～0.6％的胰蛋白酶
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edta和4～6mg/ml脱氧核糖核酸酶i。7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述消化终止液包含：权利要求1所述人工脑脊液和消化终止液总体积5～10％的fbs。8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞清洗液包含：pbs，细胞清洗液总体积0.01～0.04％的牛血清白蛋白和细胞清洗液总体积0.01～0.04％的d
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葡萄糖。9.一种灵长类动物神经元的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)脑组织材料的获取；(2)将脑组织材料转移到预热的消化液进行消化；(3)在步骤(2)的消化液中加入消化终止液并吹打；(4)将步骤(3)的溶液进行过滤，取滤液；(5)将步骤(4)的滤液进行离心，取沉淀；(6)去除步骤(5)的沉淀中的髓鞘、杂质和死细胞，得细胞沉淀；(7)用细胞清洗液清洗步骤(6)的细胞沉淀，得所述灵长类动物神经元细胞。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，通过以下方法获取脑组织材料：采用灌流液对动物进行心脏灌注，获取脑组织浸泡于冰冷的氧饱和脑组织修复液，然后对脑组织进行修整；脑组织修块后，切成300～500μm的脑片，并将脑片置于冰冷的氧饱和的人工脑脊液；所述步骤(2)中的消化温度为34℃，消化时间为40～60min；所述步骤(3)中采用口径为800μm、400μm和200μm的玻璃吸管进行吹打；所述步骤(5)中的离心温度为4℃，离心转速为1000rpm，离心时间为5min。

技术总结
本发明公开了一种用于灵长类动物神经元分离的试剂盒及方法，涉及生物细胞技术领域。本发明的试剂盒通过对人工脑脊液和脑组织修复液的配方进行优化，在人工脑脊液中添加了抑制剂混合物，提高神经元的存活率，降低神经毒性，更适合灵长类动物脑细胞的分离。本发明的试剂盒首次成功分离出灵长类动物单个神经元且能保证90％以上的神经元的存活，并能够保留神经元的胞体、树突、轴突和其他突起等，实现灵长类动物单个神经元几乎所有信息的检测，更深入地了解不同神经元的异质性，探究神经元更全面更完整的信息。面更完整的信息。面更完整的信息。


技术研发人员：刘胜 韦佳如
受保护的技术使用者：中山大学中山眼科中心
技术研发日：2021.09.23
技术公布日：2021/12/2