一种花叶芋的组培快速繁殖方法与流程

1.本发明涉及样植物组织培养繁殖技术领域，特别是涉及一种花叶芋的组培快速繁殖方法。


背景技术：

2.花叶芋又名彩叶芋(学名：caladium bicolor(ait.)vent.)，天南星科，属多年生常绿草本植物。基生叶盾状箭形或心形，色泽美丽，变种极多；佛焰苞绿色，上部绿白色，呈壳状；肉穗花序。地下具膨大块茎，扁球形，有毒，误食后喉舌麻痹。原产于南美亚马逊河流域，喜高温、高湿和半阴环境，不耐低温和霜雪，要求土壤疏松、肥沃和排水良好。
3.叶片色泽美丽，变种极多，适于温室栽培观赏，夏季是主要观赏期，叶子的斑斓色彩充满着凉意。入秋叶渐零乱，冬季叶枯黄，进入休眠期，到春末夏初又开始萌芽生长。5
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9月是它的旺盛生长期。
4.彩叶芋可用分株或分球法进行繁殖。全年均能分株，但以冬季休眠后，春季叶片未萌发前分球为佳。将母球四周着生的小球，用刀片切离，阴干1天后栽植；亦可将母球切块，每块均带有芽眼，阴干1天后栽植，切面要光滑，有利于伤口愈合发根成苗，由于分球法很慢，不利于大量繁殖，植物价格昂贵，因此我们采用组培方法快速繁殖。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一种花叶芋的组培快速繁殖方法，各阶段采取不同的培养基，使得植株的优良性状能够保存，同时缩短了离体培养的时间和成本，提高幼苗成活率。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种花叶芋的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：
7.(一)培养基的配制
8.1)初代培养基：以改良的1/2ms培养基为基础培养基附加6
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糠基酰嘌呤0.1mg/l～1.5mg/l，椰子汁5g/l，香蕉汁10g/l，蔗糖50g/l，琼脂7g/l，ph为5.8
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6.0；
9.2)组织诱导培养基：以改良的ms培养基为基础培养基附加6
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苄氨基嘌呤1mg/l～2mg/l，萘乙酸0.1mg/l～1mg/l，蔗糖50g/l，琼脂7g/l，ph为5.8
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6.0；
10.3)分化培养基：以改良的ms培养基为基础培养基，附加6
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苄氨基嘌1mg/l～2mg/l，玉米素0.5mg/l～1.5mg/l，噻苯隆0.1mg/l～2mg/l，萘乙酸0.1mg/l～1mg/l，蔗糖80g/l，琼脂7g/l，ph为5.8
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6.2；
11.4)生根培养基：以改良的ms培养基为基础培养基，附加萘乙酸0.1mg/l～1mg/l，iba 0.1mg/l～1mg/l，活性炭0.5％，蔗糖80g/l，琼脂7g/l，ph为5.8
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6.2；
12.5)继代培养基：以改良的wpm培养基为基础培养基，附加萘乙酸0.5mg/l～1mg/l，活性炭1％，蔗糖80g/l，琼脂7g/l，ph为5.8
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6.2；
13.(二)花叶芋组培苗的培育
14.1)外植体的选取：选取无病虫害长势良好的花叶芋植株上绿嫩完整的叶片作为外植体；
15.2)外植体灭菌：将步骤1)中准备的外植体先用清水冲洗2～5分钟，洗洁精搓洗浸泡1～3分钟，清水冲洗3～4次，然后转移到超净工作台上，用75％的酒精灭菌10～15秒，50％的次氯酸钠处理5～7分钟，用无菌水清洗4～6次，再用消毒滤纸吸干表面水分放置于培养皿中备用；
16.3)初代培养：将步骤2)中消毒后的外植体剪成方块，分别接种平铺在初代培养基上，培养条件：培养温度为25～28℃，培养湿度50％，光照强度1500
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2500lx，光照时间12
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15h/d；
17.4)组织诱导：将步骤3)初代培养四五天后得到的初代花叶芋组培苗转移到组织诱导培养基中继续培养，培养条件：培养温度为25～27℃，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx，光照时间14h/d；
18.5)分化培养：经步骤4)组织诱导培养一周后叶片周围长出愈伤组织，然后将长出愈伤组织的叶片转移到分化培养基中继续培养，20～25天后叶片周围会有不定芽长出，培养条件：培养温度25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx；
19.6)生根培养：经步骤5)分化培养之后，选择1cm以上的不定芽转入生根培养基中进行生根壮苗培养，培养条件：培养温度25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx
20.7)继代培养：经步骤6)生根培养25～30d后得到的生根花叶芋组培苗，当生根花叶芋组培苗生长至4cm～10cm高，在超净工作台里将生根花叶芋组培苗分为1～2个侧芽一个茎段，转移至继代培养基中快速扩繁，培养条件：培养温度为25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx；
21.8)移栽炼苗：经步骤6)继代培养30～40d后得到继代花叶芋组培苗，继代花叶芋组培苗生长至4～5cm高、根3～5条、叶2～3片时，打开瓶盖炼苗1～2天得到花叶芋组培苗；然后取出花叶芋组培苗，用清水洗净根部的培养基，移栽到装有培养基质的穴盘中，并盖上炼苗盖；培养基质先经过高温高压灭菌，再混合20％珍珠岩，30％蛭石，保持湿度和光照，早晚各喷水一次。培养温度25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度70％，光照强度1500～2000lx。
22.优选的，所述改良的1/2ms培养基的配方为：硝酸钾1020mg，氯化钙123mg，硫酸镁224mg，磷酸二氢钠122mg，硫酸铵137mg，碘化钾0.68mg，硼酸3.55mg，肌醇100mg，硫酸锰7mg，硫酸锌2.45mg，硫酸铜0.011mg，氯化钴0.013mg，乙二胺四乙酸二钠23.4mg，硫酸亚铁24.4mg，钼酸钠0.4mg，烟酸3mg，盐酸吡哆醇6mg，盐酸硫胺素6mg。
23.优选的，所述改良的ms培养基的配方为：硝酸钾1020mg，氯化钙123mg，硫酸镁224mg，磷酸二氢钠122mg，硫酸铵137mg，碘化钾0.68mg，硼酸3.55mg，肌醇100mg，硫酸锰7mg，硫酸锌2.45mg，硫酸铜0.011mg，氯化钴0.013mg，乙二胺四乙酸二钠23.4mg，硫酸亚铁24.4mg，钼酸钠0.4mg，烟酸3mg，盐酸吡哆醇6mg，盐酸硫胺素6m。
24.优选的，所述改良的wpm培养基的配方为：氯化钙120mg，硝酸钾1500mg，硫酸镁100mg，硫酸铵120mg，硫酸亚铁23.4mg，磷酸二氢钠135mg，硫酸锰10mg，硼酸10mg，碘化钾0.57mg，钼酸钠2mg，硫酸铜0.025mg，氯化钴0.12mg，硫酸锌1.5mg，乙二胺四乙酸二钠27.5mg，盐酸硫胺素5.68mg，肌醇100mg，烟酸3mg，盐酸吡哆醇3.45mg。
25.本发明的有益效果：
26.(1)提供一种花叶芋的组培快速繁殖方法，利用花叶芋无菌诱导叶片再生的组培
方法，相对于传统繁殖方法，更加快速高效。
27.(2)本发明在叶片消毒过程中用75％的酒精灭菌和50％的次氯酸钠处理，杀菌效率高，而且相较于0.1％的氯化汞消毒更绿色环保，对植株损害小，易于清洗。
28.(3)通过初代培养基、组织诱导培养基、分化培养基可促进花叶芋的不定芽萌发，生根培养基可以提高花叶芋幼芽的存活率。本发明叶片再生不定芽率达到98％，并且可以促进不定根的生长，幼芽存活率达到98％，染菌率达到0.1％，由此可知，本发明对于传统的花叶芋繁殖方式，更高效，低成本。
29.下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
30.图1是本发明一种花叶芋的组培快速繁殖方法不定芽培养的示意图；
31.图2是本发明一种花叶芋的组培快速繁殖方法生根培养的示意图；
32.图3是本发明一种花叶芋的组培快速繁殖方法幼苗成形培育的示意图。
具体实施方式
33.下面结合实施例，对本发明进一步描述，实施例中所用各种化学品和试剂如无特别说明均为市售购买。
34.实施例
35.本发明提供一种花叶芋组培快繁的方法，包括以下步骤：
36.步骤1)外植体的选取：选取无病虫害长势良好的花叶芋植株上绿嫩完整的叶片作为外植体；
37.步骤2)外植体灭菌：将步骤1)中准备的外植体先用清水冲洗2～5分钟，洗洁精搓洗浸泡1～3分钟，清水冲洗3～4次，然后转移到超净工作台上，用75％的酒精灭菌10～15秒，50％的次氯酸钠处理5～7分钟，用无菌水清洗4～6次，再用消毒滤纸吸干表面水分放置于培养皿中备用；
38.步骤3)初代培养：将步骤2)中消毒后的外植体剪成切割成小方块，分别将消毒组织剪成小方块接种在平铺在初代培养基上，培养温度25～28℃，湿度50％，光照强度1500
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2500lx，光照时间12
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15h/d；
39.初代培养基由以下配方配制而成：改良1/2ms 6
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糠基酰嘌呤0.5mg/l 蔗糖50g/l 琼脂7g/l ph5.8
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6.0；
40.步骤4)组织诱导：将步骤3)中培养四五天的初代花叶芋组培苗分别接种至新的组织诱导培养基中，诱导组织愈伤；
41.组织诱导培养基由以下配方配制而成：改良ms 6
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苄氨基嘌呤1mg/l 萘乙酸0.2mg/l 蔗糖50g/l，琼脂7g/l，ph5.8
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6.0。
42.步骤5)分化培养：经步骤4)组织诱导培养一周后叶片周围长出愈伤组织，将愈伤组织接种至分化培养基，诱导愈伤组织进行分化，分化出丛芽。分化培养时间为20d，培养温度25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx；
43.分化培养基由以下配方配制而成：以改良ms 6
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苄氨基嘌1.5mg/l 玉米素0.5mg/l 噻苯隆0.5mg/l 萘乙酸0.1mg/l 蔗糖80g/l 琼脂7g/l ph5.8
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6.2。
44.步骤6)生根培养：经步骤5)分化培养之后，将分化出的1cm以上的不定芽分别接种到生根培养基中，进行生根壮苗培养，生根培养时间为25～30d，培养温度25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx；
45.生根培养基由以下配方配制而成：改良ms 萘乙酸0.1mg/l iba 0.5mg/l 活性炭0.5％ 蔗糖80g/l 琼脂7g/l ph5.8
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6.2。
46.步骤7)继代培养：经步骤6)生根培养25～30d后得到的生根花叶芋组培苗，当生根花叶芋组培苗生长至4cm～10cm高，在超净工作台里将生根花叶芋组培苗分为1～2个侧芽一个茎段，分别接种至继代培养基中快速扩繁。培养条件：培养温度为25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度45％，光照强度1500～2000lx；
47.继代培养基由以下配方配制而成：改良wpm 萘乙酸0.5mg/l 活性炭1％ 蔗糖80g/l 琼脂7g/l ph5.8
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6.2。
48.步骤8)移栽炼苗：经步骤6)继代培养30～40d后得到继代花叶芋组培苗，继代花叶芋组培苗生长至4～5cm高、根3～5条、叶2～3片时，打开瓶盖炼苗1～2天得到花叶芋组培苗；然后取出花叶芋组培苗，用清水洗净根部的培养基，移栽到装有培养基质的穴盘中，并盖上炼苗盖。培养基质先经过高温高压灭菌，再混合20％珍珠岩，30％蛭石，保持湿度和光照，早晚各喷水一次。培养温度25～27℃，光照时间16h/d，培养湿度70％，光照强度1500～2000lx；
49.最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。