L-瓜氨酸和L-谷氨酰胺联用在制备冠状病毒药物中的应用的制作方法

l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用在制备冠状病毒药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医药技术领域，更具体的，涉及l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用在制备冠状病毒药物中的应用。


背景技术：

2.l
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瓜氨酸是一氧化氮(no)合成的前体物质，在炎症、肿瘤、自身免疫性疾病等疾病中发挥重要调控功能。病原微生物可激活免疫细胞产生no，no通过与微生物的结构元件、代谢酶或毒力因子作用，削弱病原体的增殖、代谢和存活能力，增强宿主免疫应答，从而直接发挥抗病毒或抗细菌作用。no在脓毒症和ards等呼吸系统疾病的发病中发挥重要调控作用。l
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谷氨酰胺是人类和其他动物血浆中含量最丰富的氨基酸，是三羧酸(tca)循环的替代燃料，参与调节细胞的多种功能，包括核苷酸，氨基酸和脂肪酸合成。此外，l
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谷氨酰胺还参与调节哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mtor)等重要细胞内信号通路的激活。葡萄糖和谷氨酰胺都是免疫细胞快速分裂并发挥免疫调节功能的能量来源。然而，在病毒和细菌感染等情况下，患者和宿主免疫细胞对谷氨酰胺利用的需求显著增加。l
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谷氨酰胺代谢受损会增加机体对感染性疾病的易感性。谷氨酰胺转运体的缺乏会损害th1和th17细胞介导的免疫反应，进而抑制机体对细菌的清除。
3.在脓毒症、脓毒症休克、急性呼吸窘迫综合征(ards)及病毒感染的患者中，l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺的水平均下降，且降低的l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺与临床预后差及者死亡率增加有关。研究发现，补充l
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瓜氨酸可延缓促炎细胞因子释放，增加抗炎细胞因子产生，抑制脓毒症大鼠的炎症反应；改善糖尿病大鼠氧化应激反应导致的肾损伤，抑制肾小球高滤过并减轻蛋白尿等症状；l
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瓜氨酸还可抑制炎症及氧化应激所致的细胞凋亡，并减轻高氧诱导的肺损伤。同时研究也表明，补充l
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谷氨酰胺能够减轻脂多糖诱导的脓毒症小鼠肺损伤；此外， l
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谷氨酰胺还可抑制病毒活化。但是，l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用在冠状病毒感染中的治疗作用尚不明确。
4.目前临床治疗冠状病毒感染性疾病以抗生素及抗病毒治疗为主，然而患者由于过度炎症反应和器官损伤所导致的死亡暂无特效治疗药物，亟需进一步开发一种新的有效缓解炎症和器官损伤的新冠状病毒药物。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术所提出的上述缺陷，本发明的首要目的是l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用作为有效成分在制备治疗/缓解冠状病毒的药物中的应用。
6.本发明的目的通过以下技术方案实现：
7.l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用作为有效成分在制备治疗/缓解冠状病毒的药物中的应用。
8.优选的，所述药物包括：
9.(1)含有l
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瓜氨酸和l谷氨酰胺的物质；和/或，
10.(2)能够产生或者释放l
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瓜氨酸和l谷氨酰胺的物质；
11.所述物质选自纯净物、组合物、复合物。
12.优选的，所述药物还包括药学上可接受的l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺的辅剂，所述药物的给药方式可以是口服、静脉注射、肌肉注射或者皮下注射；所述药物可以涵盖片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释制剂和纳米制剂。
13.所述冠状病毒包括新型冠状病毒、重症急性呼吸综合征冠状病毒、中东呼吸综合征冠状病毒及小鼠冠状病毒。
14.本发明一方面研究发现：1、联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可以缓解冠状病毒感染导致的炎性因子风暴和肺损伤，肺部ct显示肺部毛玻璃样阴影及炎性渗出减少，he染色显示肺部损伤及炎性浸润减轻，肺泡壁增厚减少，肺泡结构完整性增加。
15.因此在实际应用中，可以通过补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺，达到缓解冠状病毒感染导致的过度炎症反应和器官损伤的目的。
16.本发明另一方面研究发现：1、l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺与新型冠状病毒肺炎患者病情密切相关；2、在冠状病毒感染的小鼠模型中，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可显著提高小鼠的生存率。因此，通过l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用，可改善患者的预后，达到治疗冠状病毒感染所致疾病的目的。
17.因此，优选的，上述应用中，所述治疗/缓解包括以下至少一种情况：
18.(1)提高新型冠状病毒患者的生存率；
19.(2)延缓新型冠状病毒疾病进展；
20.(3)减少新冠病毒引起的炎性因子产生；
21.(4)减少新冠病毒引起的脏器损伤。
22.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
23.本发明揭示了l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺联用在冠状病毒感染性疾病中的保护及治疗作用。依据包括两方面，一方面l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺与冠状病毒感染患者病情密切相关，另一方面可减轻冠状病毒感染引起的炎症及器官损伤。该发明为临床冠状病毒感染性疾病的干预和治疗提供了良好的策略，具有十分广阔的应用前景。
附图说明
24.图1相关性分析显示，新型冠状病毒感染患者血浆中l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺含量与患者的疾病进展呈现显著负相关性；
25.图2显示，在冠状病毒感染的小鼠模型中，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可有效提高小鼠生存率；
26.图3结果表明，在冠状病毒感染的小鼠模型中联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺，可减轻肺部损伤和炎性渗出；
27.图4显示，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可显著减轻冠状病毒感染的小鼠肺部炎性浸润，减少肺泡结构的破坏；
28.图5显示，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可减少冠状病毒感染的小鼠体内炎性因子产生。
具体实施方式
29.下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
30.下述实验例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
31.实施例1新型冠状病毒感染患者血浆中l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺含量与患者的病情相关性分析
32.收集88个新型冠状病毒感染患者外周肝素抗凝血，1800rpm离心10min，收取血浆。检测患者血浆中l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺的含量，并分析l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺与患者临床指标之间的相关性。根据中国新型冠状病毒诊疗指南，型冠状病毒感染患者淋巴细胞计数进行性下降，白蛋白水平降低，急性c反应蛋白(crp)升高，d二聚体升高。
33.图1a结果表明，新型冠状病毒感染患者血浆中l
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瓜氨酸含量与患者的淋巴细胞计数及白蛋白水平呈现正相关，与患者crp及d二聚体水平呈现负相关，说明新型冠状病毒感染患者血浆中l
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瓜氨酸含量与患者疾病进展及体内炎症水平密切相关。
34.图1b结果表明，型冠状病毒感染患者血浆中l
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谷氨酰胺含量与患者的淋巴细胞计数及白蛋白水平呈现正相关，与患者crp及d二聚体水平呈现负相关，说明新型冠状病毒感染患者血浆中l
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谷氨酰胺含量与患者的疾病严重程度呈现负相关性，l
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谷氨酰胺含量越低患者病情越严重，含量越高则患者病情越轻。
35.上述结果说明，l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺含量与新型冠状病毒感染患者疾病进展密切相关，提示l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可以作为新型冠状病毒感染的预后评估指标，并有可能通过补充 l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺缓解患者的症状。
36.实施例2联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺对冠状病毒感染小鼠生存率的影响
37.使用4
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6周spf级雌性c57bl/6小鼠，经滴鼻感染鼠冠状病毒(mhv
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a59)构建小鼠冠状病毒感染模型，感染后第2天开始，每天分别灌胃给予等量的无菌水(对照)，l
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瓜氨酸 (250mg/kg)，l
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谷氨酰胺(250mg/kg)及l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺各半混合物，观察并记录小鼠生存率，结果如图2所示。
38.图2a结果表明，单独补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可显著提高冠状病毒感染小鼠的生存率。
39.图2b结果表明，相比于单独补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可更显著地提高小鼠的生存率。
40.综上可见：在冠状病毒感染的小鼠模型中联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺，可有效提高小鼠生存率。
41.实施例3联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺对冠状病毒感染小鼠肺部损伤和炎性渗出的影响
42.使用4
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6周spf级雌性c57bl/6小鼠，经滴鼻感染鼠冠状病毒(mhv
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a59)构建小鼠冠状病毒感染模型，感染5天后，使用异氟烷吸入法麻醉小鼠，待充分麻醉后，使用小鼠ct 扫描设备获取肺部ct扫描图，观察小鼠肺部的影像学改变及炎性渗出情况，结果如图3所示。
43.图3结果表明，感染了冠状病毒的小鼠肺部呈现毛玻璃样阴影及大量炎性渗出，而
补充 l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺后，肺部的毛玻璃样阴影及炎性渗出均得到了明显改善，提示补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可有效减轻由于小鼠冠状病毒感染导致的肺部炎性渗出和损伤。
44.实施例4联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺对冠状病毒感染小鼠肺部炎性浸润和肺泡结构完整性的影响
45.使用4
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6周spf级雌性c57bl/6小鼠，经滴鼻感染鼠冠状病毒(mhv
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a59)构建小鼠冠状病毒感染模型，感染5天后处死小鼠，并取小鼠肺组织用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋切片后进行h&e染色，显微镜下观察小鼠肺部炎性浸润及损伤，结果如图4所示。
46.图4结果表明，补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺后，小鼠肺部损伤及炎性浸润减轻，肺泡壁增厚减少，肺泡结构完整性增加。
47.由此可得出结论：在冠状病毒感染的小鼠中联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺，可有效减轻冠状病毒感染所导致的肺部炎性浸润和炎性渗出，同时减少小鼠的脏器损伤。
48.实施例5联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺对冠状病毒感染小鼠体内炎性因子水平的影响
49.用4
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6周spf级雌性c57bl/6小鼠，经滴鼻感染鼠冠状病毒(mhv
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a59)构建小鼠冠状病毒感染模型，感染5天后，使用眼球采血法取小鼠外周血，1800rpm离心10min收取血浆，通过酶联免疫吸附试验(elisa)，分别检测血浆中的tnf、il
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1β、il
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6水平，结果如图5 所示。
50.图5a结果表明，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺的小鼠血浆中炎性因子il
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6水平显著降低。
51.图5b结果表明，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可显著降低小鼠血浆中炎性因子tnf 的水平。
52.图5e结果表明，联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可显著降低小鼠血浆中炎性因子il
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1β的水平。
53.由此得出结论：联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺，对冠状病毒感染的小鼠血清中炎性因子水平具有抑制作用，提示联合补充l
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瓜氨酸和l
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谷氨酰胺可达到抑制冠状病毒感染引起的炎性因子风暴的效果。
54.上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护范围之内。