一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法与流程

技术特征：
1.一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其具体步骤如下：s1，将柑橘干燥后粉碎，筛网过滤，称取100kg粉末加入溶剂提取，调整ph为碱性，将其置于自制的超声逆流提取装置中进行提取120min，过滤，收集提取液，提取两次后，合并提取液，将合并后的提取液进行浓缩，浓缩至原提取液体积的1/(2～4)，过滤，调节ph至3
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4，静置沉淀8h，过滤收集沉淀，用纯水清洗沉淀至中性并干燥成粉，称重，得柑橘粗提物；s2，利用生物酶对所得柑橘粗提物进行酶促水解反应，首先，使用淀粉酶，果胶酶，蛋白酶对柑橘粗提物中的淀粉，果胶，蛋白进行水解后，其次，使用鼠李糖苷酶对其进行水解，生成单葡萄糖橙皮素，并使用β
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葡萄糖苷酶对生成的单葡萄糖橙皮素进行进一步水解，反应完成后静置沉淀并过滤，得橙皮素粗品，最后使用乙醇对所得橙皮素粗品进行重结晶，制得精制橙皮素，乙醇浓度(v/v)为50％
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95％；s3，对精制橙皮素的含量测定包括：1)试剂和仪器仪器：高效液相色谱仪，电子分析天平，超声清洗器；试剂：乙腈(色谱纯)、甲酸(色谱纯)、橙皮素对照品(≥98％)，一级水，其中高效液相色谱仪的色谱条件为色谱柱：c
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液相色谱柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5μm；流动相：乙腈：甲酸水溶液(体积分数为0.5％)＝40:60；柱温：30℃；泵：等度泵；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；检测波长：285nm和运行时间：15min；2)分析步骤a)对照品溶液的制备：准确称取0.01g橙皮素对照品，精确至0.0001g，用流动相溶解，移入100ml容量瓶中，加流动相定容至100ml,所得溶液用0.45μm滤膜过滤，滤液备用。b)试样溶液的制备：准确称取0.01g试样，精确至0.0001g，用流动相溶解，移入100ml容量瓶中，加流动相定容至100ml,所得溶液用0.45μm滤膜过滤，滤液备用。c)测定：在上述色谱条件下，分别对对照品溶液和试样溶液进行测定，记录其主峰面积。d)结果计算：橙皮素含量的质量分数w1按以下公式计算式中：a1—试样溶液色谱图中主峰的峰面积值；m2—对照品的质量，单位为克(g)；w2—对照品中橙皮素含量的质量分数(％)；a2—对照品溶液色谱图中的主峰的峰面积值；m1—试样的质量，单位为克(g)。2.根据权利要求1所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在于，所述s1中溶剂为乙醇、水或两者混合物，所述s2中生物酶为自行发酵获得，其中淀粉酶，果胶酶及蛋白酶均通过土壤中筛选的枯草芽孢杆菌菌株发酵所得，所述鼠李糖苷酶，β
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葡萄糖苷均通过土壤中筛选的黑曲霉发酵所得。3.根据权利要求2所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在
于，所述生物酶酶活性为：淀粉酶酶活性为70000u、果胶酶酶活性为50000u、蛋白酶酶活性为50000u、鼠李糖苷酶酶活性为100000u、β
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葡萄糖苷酶酶活为100000u。4.根据权利要求3所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在于，所述生物酶与底物的质量比分别为淀粉酶：底物为1：10～1：50、果胶酶：底物为1:10～1:50、蛋白酶：底物为1:10～1:30、鼠李糖苷酶：底物为1:10～1:70、β
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葡萄糖苷酶：底物为1:10～1:60。5.根据权利要求4所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在于，所述生物酶与底物的质量比分别为淀粉酶：底物为1:15～1:40、果胶酶：底物为1:15～1:40、蛋白酶：底物为1:15～1:30、鼠李糖苷酶：底物为1:15～1:60、β
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葡萄糖苷酶：底物为1:15～1:50。6.根据权利要求5所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在于，所述生物酶与底物的质量比分别为淀粉酶：底物为1:20～1:40、果胶酶：底物为1:20～1:40、蛋白酶：底物为1:20～1:30、鼠李糖苷酶：底物为1:20～1:60、β
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葡萄糖苷酶：底物为1:20～1:50。7.根据权利要求6所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在于，所述生物酶与底物的质量比分别为淀粉酶：底物为1:20、果胶酶：底物为1:20、蛋白酶：底物为1:20、鼠李糖苷酶：底物为1:30、β
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葡萄糖苷酶：底物为1:30。8.根据权利要求7所述的一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其特征在于，所述s2中水解反应的反应条件为：温度50℃、ph为5.5和时间为5h。

技术总结
本发明涉及植物有效成分的提取技术领域，尤其为一种从柑橘中提取橙皮苷物制备成橙皮素的方法，其具体步骤如下：S1，将柑橘干燥后粉碎，筛网过滤，称取100kg粉末加入溶剂提取，调整PH为碱性，将其置于自制的超声逆流提取装置中进行提取120min，过滤，收集提取液，提取两次后，合并提取液，将合并后的提取液进行浓缩，浓缩至原提取液体积的1/(2～4)，过滤，调节PH至3


技术研发人员：张达成 钟国坚 刘园 吴茂忠
受保护的技术使用者：广州健顺生物医药研究院有限公司
技术研发日：2021.08.26
技术公布日：2021/11/23