一种金龙胆草中的皂苷制备、检测方法及应用与流程

1.本发明涉及金龙胆草加工技术领域，尤其涉及一种金龙胆草中的皂苷制备、检测方法及应用。


背景技术：

2.金龙胆草是我国四川省的一种民间药材，《中国药典2020版》对其做出的定义为：菊科植物苦蒿的干燥地上部分；性状为：茎呈圆柱形，少分枝，长30~100cm，直径0.2~0.6cm;表面黄绿色或浅棕黄色，有纵棱和多数白色长绒毛；质硬而脆，易折断；单叶互生，叶片多卷缩、破碎，完整者展平后呈羽状深裂至全裂，裂片披针形，黄绿色，两面密被白色绒毛；下部叶具柄，上部叶几无柄；头状花序直径约1cm，花黄白色；瘦果浅黄色，扁平，冠毛长5~6mm；气微，味极苦。
3.现有技术中，金龙胆草的皂苷制备方法需要使用到除乙醇外其他种类的有机溶剂，造成的溶剂残留与能耗会影响生产的企业成本与质量;且使用了不同浓度的高浓度乙醇进行提取，产品的工艺流程设计较为繁琐，不利于工业化大生产与质量控制。另外金龙胆草的皂苷片生产工艺中使用浸渍法进行提取，酸碱沉淀法沉淀其他杂质得到金龙胆草总皂苷，可这种方法提取时提取率不高，纯化需要使用大量酸碱所产生的废液对于环境负担大，废水处理成本高，且得到的产物中总皂苷含量也不高。


技术实现要素：

4.为解决现有技术不足，本发明提供一种金龙胆草中的皂苷制备、检测方法及应用，不使用其他种类有机溶剂辅助，降低溶剂残留与生产能耗；统一提取使用的乙醇浓度，简化工艺步骤；安全系数更高，危害与毒性显著性降低；得到的金龙胆草皂苷纯度较高。
5.为了实现本发明的目的，拟采用以下方案：一种金龙胆草中的皂苷制备方法，包括以下步骤：s1：将金龙胆草全草粉碎后，使用60%~85%的乙醇进行水浴加热回流提取，得到金龙胆草料液，其中，水浴加热温度70℃~90℃，提取时的料液比为1：6~1：10，提取三次，每次2h；s2：趁热过滤金龙胆草料液，并合并滤液，55℃~80℃减压回收溶剂，至乙醇完全挥发，得到浓溶液；s3：使用蒸馏水、20%乙醇进行稀释，得到浓度为15 g /100ml ~30g/100ml的生药；s4：使用离心机进行离心沉淀，取上清液，其中，离心速度500 rpm ~800rpm，离心时间8min~15min；s5：将上清液过ab
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8大孔树脂柱，分别使用蒸馏水、70%乙醇进行梯度洗脱；s6：收集70%乙醇洗脱液，55℃~80℃减压回收溶剂，干燥、粉碎后得到金龙胆草皂苷。
6.进一步的，步骤s1中：使用80%的乙醇水浴加热回流提取，提取时的料液比为1：8，
水浴加热温度80℃。
7.进一步的，步骤s2和s6中：60℃减压回收溶剂。
8.进一步的，步骤s4中：离心速度600 rpm，离心时间12min。
9.一种金龙胆草中的皂苷检测方法，利用所述检测方法检测上述所述的金龙胆草中的皂苷制备方法制得的金龙胆草皂苷，检测方法包括利用齐墩果酸作为对照品，香草醛
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乙醇
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硫酸法显色检测所述金龙胆草皂苷中的皂苷含量、出膏率。
10.进一步的，皂苷含量在60%~80%，出膏率1.5%~3.0%。
11.一种采用上述所述的金龙胆草中的皂苷制备方法制得的金龙胆草皂苷，在治疗消化道溃疡、慢性支气管的药物中的应用。
12.本发明的有益效果在于：1、本发明只使用乙醇进行回流提取、稀释、梯度洗脱等，不使用其他种类有机溶剂辅助，降低溶剂残留与生产能耗；统一了提取使用的乙醇浓度，简化了工艺步骤，提高了产品的生产效率，降低生产成本；工业化产品生产过程安全系数更高，生产过程产生危害与毒性显著性降低；该制备方法得到的金龙胆草皂苷纯度较高可达到60%~80%。
附图说明
13.图1为实施例的标准曲线图。
具体实施方式
14.实施例1本实施例提供了一种金龙胆草中的皂苷制备方法，包括以下步骤：s1：将金龙胆草全草粉碎后，使用60%~85%的乙醇进行水浴加热回流提取，得到金龙胆草料液，其中，水浴加热温度70℃~90℃，提取时的料液比为1：6~1：10，提取三次，每次2h；s2：趁热过滤金龙胆草料液，并合并滤液，55℃~80℃减压回收溶剂，至乙醇完全挥发，得到浓溶液；s3：使用蒸馏水、20%乙醇进行稀释，得到浓度为15 g /100ml ~30g/100ml的生药；s4：使用离心机进行离心沉淀，取上清液，其中，离心速度500 rpm ~800rpm，离心时间8min~15min；s5：将上清液过ab
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8大孔树脂柱，分别使用蒸馏水、70%乙醇进行梯度洗脱；s6：收集70%乙醇洗脱液，55℃~80℃减压回收溶剂，干燥、粉碎后得到金龙胆草皂苷。
15.具体的，步骤s1中：使用80%的乙醇水浴加热回流提取，提取时的料液比为1：8，水浴加热温度80℃。
16.具体的，步骤s2和s6中：60℃减压回收溶剂。
17.具体的，步骤s4中：离心速度600 rpm，离心时间12min。
18.实施例2一种金龙胆草中的皂苷检测方法，利用所述检测方法检测实施例1中制得的金龙胆草皂苷，检测方法包括利用齐墩果酸作为对照品，香草醛
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乙醇
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硫酸法显色检测所述金
龙胆草皂苷中的皂苷含量、出膏率。
19.具体的，皂苷含量在60%~80%，出膏率1.5%~3.0%。
20.实施例3本实施例提供了一种采用实施例1制得的金龙胆草皂苷，在治疗消化道溃疡、慢性支气管的药物中的应用。
21.具体实施例方案：制备方法：取10.01g经粉碎至10目以下的金龙胆草全草，用80%乙醇80℃水浴加热回流三次，一次2h，料液比为1：8，实验结果如表1所示；趁热过滤并合并滤液，60℃减压回收溶剂至无醇味，得到浓溶液；使用蒸馏水、20%乙醇将上述浓溶液稀释至10g/50ml；使用离心机进行离心沉淀， 500rpm离心沉淀10min，取上清液；使用ab
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8大孔树脂吸附上清液，蒸馏水与70%乙醇梯度洗脱；收集70%乙醇洗脱液，60℃减压回收溶剂，干燥、粉碎，得金龙胆草皂苷0.2313g，实验结果如表2所示。
22.表1表2检测方法：1.标准曲线的制备：精确称取齐墩果酸10mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为1mg/ml齐墩果酸标准溶液；精密量取齐墩果酸标准品溶液100μl、200μl、400μl、600μl、800μl，分别置于具塞比色管中；挥去甲醇，冷却，加入新鲜配制的8%香草醛
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乙醇溶液0.5ml，72%硫酸溶液5.0ml，置冰水浴中混合，摇匀，盖塞；60℃水浴加热10min，立即冷却，摇匀，同时平行制作试剂空白；在530nm处测量吸光度做标准曲线，标准曲线如图1所示。
23.2.供试品溶液的制备：精密称取样品0.2 g，加入甲醇40 ml，超声30 min溶解；过滤，润洗滤纸，水浴蒸干甲醇后加水30 ml溶解；用30ml石油醚萃取两次，30ml水饱合正丁醇萃取3次；合并萃取液，用20 ml正丁醇饱合水洗涤，100℃水浴锅上挥去正丁醇后，用甲醇溶解并定容至50 ml容量瓶中，摇匀；吸取2ml此溶液，甲醇定容至10ml容量瓶中，得到供试品溶液；精密吸取同一供试溶液2份，每份0.5ml，按照标准曲线项下测量方法进行含量测定。
24.综上所述，本发明不使用其他种类有机溶剂辅助，降低了溶剂残留与生产能耗；统一提取使用的乙醇浓度，简化工艺步骤；得到的金龙胆草皂苷纯度较高。
25.以上实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，并不表示是唯一的或是限制本发明。本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的范围情况下，对本发明进行的各种改变或同等替换，均属于本发明保护的范围。