鸡密度应激模型的构建方法、鸡密度应激模型及其应用与流程

1.本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种鸡密度应激模型的构建方法、鸡密度应激模型及其应用。


背景技术：

2.近年来中国的养鸡产业发展迅速，禽类产品的消费量不断增加。养殖者为了追求经济效益和生产效率，采用集约化养殖，饲养密度和生产规模越来越大。在高密度养殖环境中，生产鸡容易产生应激，从而导致生长缓慢，行为异常，免疫力下降，进而引发生产鸡疾病甚至死亡，影响生产者经济效益。
3.因此探究密度应激对仔鸡的影响，寻找缓解密度应激对仔鸡的不利影响的方法，是今后禽类养殖研究人员研究的重点。探究密度应激对仔鸡的影响，制备鸡密度应激模型是必须的首要手段，同时鸡密度应激模型应具备标准化、规范化和可重复性等特点。因此，建立鸡密度应激模型对密度应激对鸡的影响及治疗策略的研究具有极其重要的意义。
4.迄今为止，国内外尚无规范化的制备建立鸡密度应激模型方法。
5.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

6.本发明的第一目的在于提供一种鸡密度应激模型的构建方法，该方法能够简单方便，构建得到的鸡密度应激模型能够有效模拟鸡生产过程中过高饲养密度所产生的应激效应，可用来研究高饲养密度引起的肉鸡应激相关机制。
7.本发明的第二目的在于提供一种鸡密度应激模型。
8.本发明的第三目的在于提供一种鸡密度应激模型在鸡饲养中的应用。
9.第一方面，本发明提供了一种鸡密度应激模型的构建方法，包括以下步骤：将仔鸡在饲养密度为18～23只/m2的条件下饲养25～30天，构建得到鸡密度应激模型。
10.作为进一步技术方案，所述饲养密度为22只/m2。
11.作为进一步技术方案，所述饲养的时间为28天。
12.作为进一步技术方案，所述仔鸡为肉仔鸡。
13.作为进一步技术方案，所述仔鸡的日龄为1～5日龄。
14.作为进一步技术方案，所述仔鸡的日龄为1日龄。
15.作为进一步技术方案，所述仔鸡在笼内进行饲养。
16.作为进一步技术方案，所述饲养期间仔鸡自由饮食。
17.第二方面，本发明提供了一种鸡密度应激模型。
18.第三方面，本发明提供了一种鸡密度应激模型在鸡饲养中的应用。
19.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
20.本发明提供的鸡密度应激模型的构建方法，将仔鸡在饲养密度为18～23只/m2的条件下饲养25～30天，在高饲养密度下诱导构建得到鸡密度应激模型，本发明提供的构建
方法简单实用，构建得到的鸡密度应激模型能够模拟肉鸡生产过程中过高饲养密度所产生的应激效应，可用来研究高饲养密度引起的肉鸡应激相关机制，为实际生产中减缓应激，降低高饲养密度对鸡生长性能的影响提供理论指导。
附图说明
21.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
22.图1为高密度处理对肉鸡日采食量的影响；
23.图2为高密度处理对肉鸡体重的影响；
24.图3为高密度处理对肉鸡体增重的影响；
25.图4为高密度处理对肉鸡料肉比的影响；
26.图5为高密度处理对肉鸡血清皮质酮的影响；
27.图6为高密度处理对肉鸡血清白细胞介素1β的影响；
28.图7为高密度处理对肉鸡血清肿瘤坏死因子的影响。
具体实施方式
29.下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
30.第一方面，本发明提供了一种鸡密度应激模型的构建方法，包括以下步骤：将仔鸡在饲养密度为18～23只/m2的条件下饲养25～30天，构建得到鸡密度应激模型。
31.本发明中，仔鸡的饲养密度典型但非限制性的为18只/m2、19只/m2、20只/m2、21只/m2、22只/m2、23只/m2。本发明采用的饲养密度远高于正常饲养密度(12.9只/
㎡
)，在保证仔鸡存活率的前提下，采用高饲养密度诱导构建鸡密度应激模型。
32.本发明中，饲养的时间典型但非限制性的为28天。
33.本发明提供的鸡密度应激模型的构建方法，将仔鸡在饲养密度为18～23只/m2的条件下饲养25～30天，在高饲养密度下诱导构建得到鸡密度应激模型，本发明提供的构建方法简单实用，构建得到的鸡密度应激模型能够模拟肉鸡生产过程中过高饲养密度所产生的应激效应，可用来研究高饲养密度引起的肉鸡应激相关机制，为实际生产中减缓应激，降低高饲养密度对鸡生长性能的影响提供理论指导。
34.在一些优选的实施方式中，所述饲养密度为22只/m2。
35.在一些优选的实施方式中，所述饲养的时间为28天。
36.在本发明中，通过对仔鸡饲养密度和饲养时间的进一步优化和调整，在保证仔鸡成活率的前提下，更好的实现对鸡密度应激模型的构建。
37.在一些优选的实施方式中，所述仔鸡包括但不限于肉仔鸡或蛋仔鸡，优选为肉仔鸡。
38.肉仔鸡较蛋仔鸡在生长指标的变化上更显著，在本发明中，优选以肉仔鸡构建模型。
39.在一些优选的实施方式中，所述仔鸡的日龄为1～5日龄，例如可以为，但不限于1日龄、2日龄、3日龄、4日龄或5日龄。
40.在一些优选的实施方式中，所述仔鸡的日龄为1日龄。
41.饲养环境的改变会影响高饲养密度诱导的肉鸡密度应激模型的构建，在本发明中，优选以1日龄的仔鸡构建密度应激模型。
42.在一些优选的实施方式中，所述仔鸡在笼内进行饲养。
43.在本发明中，将仔鸡在笼内进行饲养，更有利于对仔鸡的管理和饲养环境的清理，且符合实际。
44.在一些优选的实施方式中，所述饲养期间仔鸡自由饮食，对于仔鸡的饮食不做特殊处理。
45.第二方面，本发明提供了一种鸡密度应激模型。
46.该鸡密度应激模型采用本发明提供的构建方法构建得到，能够模拟肉鸡生产过程中过高饲养密度所产生的应激效应，可用来研究高饲养密度引起的肉鸡应激相关机制，为实际生产中减缓应激，降低高饲养密度对鸡生长性能的影响提供理论指导。
47.第三方面，本发明提供了一种鸡密度应激模型在鸡饲养中的应用。
48.本发明提供的鸡密度应激模型例如能够用于研究饲养密度对肉仔鸡生长性能的影响中，以避免高饲养密度对仔鸡的影响，为鸡的饲养提供指导。
49.下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
50.实施例1
51.一种鸡密度应激模型，其构建方法如下：
52.将1日龄的肉仔鸡在饲养密度为22只/m2的笼内饲养28天，饲养期间仔鸡自由饮食，构建得到鸡密度应激模型。
53.对比例1
54.一种鸡密度应激模型，其构建方法如下：
55.将1日龄的肉仔鸡在饲养密度为14只/m2的笼内饲养28天，饲养期间仔鸡自由饮食，构建得到鸡密度应激模型。
56.试验例1
57.1实验动物与饲养管理
58.108只健康状况良好、体重相似的1日龄aa雄性肉鸡随机分为2组，每组6个重复(小组)，高饲养密度组每小组11只(22只/
㎡
)，正常饲养密度组每小组7只(14只/
㎡
)，饲养在尺寸大小为0.49
㎡
(0.7*0.7
㎡
)的鸡笼内。全部鸡只饲喂基础日粮，自由饮水。
59.分别于7、14、21、28日龄(提前8小时断料)称取各组的鸡体重及料重，并统计采食量。于14、21、28日龄从每个重复中选取1只，翅静脉采血3ml，制备血清。
60.数据表示为平均数
±
标准误(mean
±
sem)，采用spss13.0软件进行单因素独立t检
验分析，p<0.05为差异显著。
61.2试验日粮组成和营养水平
62.基础日粮为玉米
‑
豆粕型日粮，基础日粮组成成分及营养水平见表1。
63.表1基础日粮组成成分及营养水平
[0064][0065]
1)微量元素预混料为每千克配合饲料提供：铜8mg(cuso4·
5h2o)；铁80mg(feso4)；锰100mg(mnso4·
h2o)；硒0.15mg(na2seo3)；碘0.35mg(ki)。
[0066]
2)维生素预混料为每千克配合饲料提供：va 9500iu，vd3 62.5ug，ve 30iu，vk3 2.65mg，vb1 2mg，vb6 6mg，vb12 0.025mg，生物素0.0325mg，叶酸1.25mg，泛酸12mg，烟酸50mg。
[0067]
3.高饲养密度对肉仔鸡生产性能影响
[0068]
试验于7、14、21、28日龄时，肉仔鸡空腹8h后，以重复为单位称重，记录7、14、21、28日龄的体重，并计算0
‑
7、8
‑
14、15
‑
21、22
‑
28日龄的平均采食量、平均体增重和平均料重比。结果如图1
‑
图4所示。
[0069]
图1
‑
图4结果表明：1
‑
7日龄，高饲养密度显著减少肉鸡体增重(p＜0.05)。8
‑
14日龄，高饲养密度减少肉鸡耗料量(p＜0.05)。15
‑
21日龄，高饲养密度减少肉鸡耗料量，显著降低肉鸡体增重(p＜0.05)。22
‑
28日龄，高饲养密度减少肉鸡耗料量，显著降低肉鸡体重、体增重(p＜0.05)。
[0070]
4.高饲养密度对肉仔鸡血清皮质酮和炎症因子的影响
[0071]
于14、21、28日龄从每个重复中选取1只，翅静脉采血3ml，制备血清。
[0072]
4.1血清皮质酮浓度的测定
[0073]
1)试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)组成成分：如表2。
[0074]
表2试剂盒组成成分
[0075][0076]
2)所需器材：如表3。
[0077]
表3所需器材
[0078][0079]
3)试剂配制：浓洗涤液和去离子水按1:9进行混合稀释用于酶标板的洗涤操作，稀释后的洗涤液可以在4℃的环境下保存一个月时间。
[0080]
4)试验前准备：所有试剂置于室温平衡至少30min，所用血清从冰箱拿出后自然解冻。
[0081]
5)操作：a、每孔依次加入50μl校准品或待测标本、抗体，在平板震荡器上震荡1min
后用封板膜封起来。在25℃的温箱中温育30min。b、温育30min后取出甩板拍干，洗板4次，每孔每次加入250μl洗液，浸泡30s后甩板拍干。c、每孔加入酶结合物100μl，用封板膜贴封。在25℃温箱中温育30min。d、温育30min后取出甩板拍干，洗板4次，每孔每次加入250μl洗液，浸泡30s后甩板拍干。e、先后加入100μl底物到每孔，在平板震荡器上震荡30s，用封板膜贴封，在25℃温箱中温育15min。f、经过显色温育之后，向每孔加入50μl终止液。在450nm酶标仪上读值。
[0082]
6)数据分析：用标准品和样本值减去s0孔的数值之后绘制一条曲线，如果设置有复孔的话，计算时使用其平均值。横坐标为od值，纵坐标为标准品浓度，制作标准曲线。把样本的od值代入标准曲线得出其相应浓度。或者用od值和标准品的浓度算出标准曲线的回归方程，将样本od值代入方程计算样本浓度。
[0083]
7)结果如图5所示。
[0084]
图5结果表明：14日龄，高饲养密度显著升高肉鸡血清皮质酮浓度(p＜0.05)。21日龄，高饲养密度显著升高肉鸡血清皮质酮浓度(p＜0.05)。
[0085]
4.2血清白细胞介素1β(il
‑
1β)浓度的测定。
[0086]
1)试剂盒组成：如表4。
[0087]
表4试剂盒组成成分
[0088][0089][0090]
2)所需仪器：表3。
[0091]
3)试剂准备：a、所有试剂在使用前都需要在室温条件下平衡30min。b、本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释，最后计算结果时需要乘以前面所稀释的倍数。c、使用前配制工作液，即洗涤液和双蒸水在500ml烧杯中混合定容至500ml。d、标准品原液(24小时内用完)的配制是把150μl的标准品稀释液加到标准品干粉管中进行标准品的稀释，稀释浓度依次是240ng/l、120ng/l、60ng/l、30ng/l、15ng/l、7.5ng/l，混匀，充分溶解，避免产生气泡。直接把加标准品或者样品稀释液加入零孔。e、低速离心后吸取1ml生物素抗原稀释液加入到浓缩型生物素抗原中，混匀，等到冻干粉全部溶解之后将所有液体倒进稀释液瓶中，混匀之后就是稀释后的生物素抗原工作液(一周内用完)。f、低速离心，把浓缩之后的亲和素
‑
hrp都转移到稀释液瓶里，混匀后制成亲和素
‑
hrp工作液(一周内用完)。
[0092]
4)样本前处理：a、血清：室温血液自然凝固15min，3500r/min，离心15min左右。收集上清液，期间如出现沉淀现象，需要再次离心。
[0093]
5)操作：a、事先将试剂盒在室温条件下平衡30min。b、空白孔只需要加显色剂a、b和终止液调零，不需要加样品。c、标准品孔先后加入50μl稀释后的标准品和生物素抗原工作液。d、零孔先后加50μl样品稀释液和生物素抗原工作液。e、样品孔先后加入50μl样品和生物素抗原工作液。f、轻晃，使用封板膜贴封后放进37℃温育箱中温育30min。g、将浓缩洗涤液用蒸馏水稀释25倍。h、第一次洗涤：开封，弃液，甩干，加入洗涤液，静置30s，弃液，重复5次，拍干。i、加入50μl亲和素
‑
hrp到零孔、标准品孔和样品孔中，轻晃，轻晃，使用封板膜贴封后放进37℃温育箱中温育30min。j、第二次洗涤操作同第一次洗涤。k、显色：每孔先加入显色剂a50μl、再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37c避光显色10分钟。l、终止反应：加入50μl终止液后蓝色立转黄色。m、加入终止液10min内，按照空白孔进行调零，经450nm波长依次测量各孔的od值。n、根据浓度和od值算出标准曲线的回归方程。
[0094]
6)结果如图6所示。
[0095]
图6结果表明：28日龄，高饲养密度显著升高肉鸡血清白细胞介素1β浓度(p＜0.05)。
[0096]
4.3血清肿瘤坏死因子(tnf
‑
α)浓度的测定。
[0097]
1)试剂盒组成：如表4。
[0098]
2)所需仪器：如表3。
[0099]
3)操作同4.2。
[0100]
4)结果如图7所示。
[0101]
图7结果表明：高饲养密度对不同日龄肉鸡血清肿瘤坏死因子无显著影响。
[0102]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。