一种诊断标志物及其在COVID-19诊断及冠状病毒既往感染检测中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种covid
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19的诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物包括肽段covid19
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v004，所述肽段covid19
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v004的氨基酸序列为：包含nraltgiaveqdkntqev中5个及5个以上连续氨基酸的序列；或所述肽段covid19
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v004的氨基酸序列为：包含nraltgiaveqdkntqev中1个到几个氨基酸的取代或/和缺失或/和添加所形成的序列。2.根据权利要求1所述的covid
‑
19的诊断标志物，其特征在于，所述肽段的氨基酸序列为nraltgiaveqdkntqev，或包含氨基酸序列nraltgiaveqdkntqev中1个或几个氨基酸的缺失或突变所形成的序列。3.一种用于covid
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19的诊断试剂盒，其特征在于，包括权利要求1
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2任一项所述的诊断标志物。4.一种检测sars
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cov
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2病毒既往感染的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1
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2任一项所述的诊断标志物。5.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断标志物通过smcc与bsa偶联，形成smcc
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bsa
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肽偶联产物。6.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准品、包被缓冲液、封闭液、样品稀释液、终止液、酶标试剂、酶底物溶液和洗涤液。7.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述标准品包括抗诊断标志物(肽段covid19
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v004)的igg抗体的浓度为0u/ml的标准血清1和抗诊断标志物(肽段covid19
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v004)的igg抗体的浓度为100u/ml的标准血清2；所述标准血清1为正常人血清，标准血清2为covid19
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v004抗体为阳性的血清；所述肽段covid19
‑
v004抗原采用包被缓冲液稀释，所述包被缓冲液为0.05
±
0.005m、ph 9.6
±
0.05的碳酸盐缓冲液，即每1l溶液中含1.59g na2co3，2.93g nahco3；所述封闭液为含3％牛血清白蛋白的0.01
±
0.005m、ph 7.4
±
0.05的磷酸盐
‑
nacl缓冲液(pbs)溶液，即每1l中含有5g牛血清白蛋白(bsa)，8g nacl，0.2g kh2po4，2.9g na2hpo4·
12h2o，0.2g kcl。8.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述酶底物溶液包括：显色剂a：500ml溶液中含醋酸钠13.6g，柠檬酸1.6g，30％双氧水0.3ml；显色剂b：500ml溶液中含tmb 350mg，dmso 20ml，柠檬酸
·
h2o 5.1g。9.根据权利要求3或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述标准品与待测血清样品采用样品稀释液进行稀释，所述样品稀释液为0.01m ph 7.4磷酸盐
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nacl缓冲液(pbs)；所述洗涤采用的洗涤液为含0.05％tween
‑
20的、0.01
±
0.005m、ph 7.4
±
0.05磷酸盐
‑
nacl缓冲液(pbst)，即每1升溶液中含8g nacl，0.2g kh2po4，2.9g na2hpo4·
12h2o，0.2g kcl，0.5ml tween
‑
20；所述终止液为2
±
0.1m h2so4溶液；所述酶标试剂为含有辣根过氧化物酶标记的anti
‑
human igg抗体的酶标试剂。10.一种定性检测人血清中抗肽段covid19
‑
v004的igg抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、将权利要求1所述的诊断标志物肽段covid19
‑
v004通过smcc与bsa偶联；b、将偶联后的肽段covid19
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v004通过稀释后包被在酶标板上的微孔内制成固相抗原，
加入封闭液；c、将标准品与待测血清样品稀释后加入各自的抗原测定孔中，温育后，每孔加入含有辣根过氧化物酶标记的anti
‑
human igg抗体的酶标试剂，形成covid19
‑
v004
‑
抗体
‑
酶标二抗复合物；d、经步骤c处理后，彻底洗涤，加酶底物溶液显色，然后加入终止液终止反应，通过od
450
值即得样品中抗肽covid19
‑
v004的igg抗体的水平。

技术总结
本发明公开一种诊断标志物及在COVID


技术研发人员：陶生策 李阳 赖丹昀 江何伟 张海南 祁环
受保护的技术使用者：上海交通大学
技术研发日：2020.05.15
技术公布日：2021/11/19