一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法与流程

本发明涉及药物质量控制领域，特别涉及一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法。


背景技术：

假黄皮(学名：clausena excavata burm.f.)别名过山香，山黄皮，鸡母黄，本品为海南省常用的中草药，收载于《中国植物志》，全株可入药，多用其叶。用作草药，多用其叶。行气、止痛，驱风，去湿，见于平地至海拔1000米山坡灌丛或疏林中。资源分布主要分布于产台湾省、福建省、广东省、海南省、广西省、云南省南部。越南、老挝、柬埔寨、泰国、缅甸、印度等地也有；参考《中国植物志》
1.及采集的海南卷柏植物形态制订：高1～2m的灌木，小枝及叶轴均密被向上弯的短柔毛且散生微凸起的油点。叶有小叶21～27片，幼龄植株的多达41片，花序邻近的有时仅15片，小叶甚不对称，斜卵形、斜披针形或斜四边形，长2
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9cm，宽1～3cm，很少较大或较小，边缘波浪状，两面被毛或仅叶脉有毛，老叶几无毛：小叶柄长2～5mm。花序顶生：花蕾圆球形；苞片对生，细小：花瓣白色或淡黄白色，卵形或倒卵形，长2～3mm，宽1
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2mm；雄蕊8枚，长短相间，花蕾时贴附于花瓣内侧，盛花时伸出于花瓣外，花丝中部以上线形，中部曲膝状，下部宽，花药在药隔上方有1油点：子房上角四周各有1油点，密被灰白色长柔毛，花柱短而粗。果椭圆形，长12～18mm，宽8～15mm，初时被毛，成熟时由暗黄色转为淡红色至朱红色，毛尽脱落，有种子1～2颗。花期4～5月及7～8月，稀至10月仍开花(海南)：盛果期8～10月。已报道的假黄皮化学成分主要含有有香豆素类、咔唑生物碱以及三萜类化合物，对假黄皮的含量测定鲜有研究；在防病治病方面，将假黄皮提取粉碎后组织已不复存在，显微鉴别较难，则质量控制方法以有效成分为指标，进行薄层鉴别，但目前对假黄皮的鉴别方法专属性不强，存在斑点较多难以一一对应，结果判断困难的问题。


技术实现要素：

鉴以此，本发明提出一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，来解决上述问题。本发明的技术方案是这样实现的：一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，包括以下步骤：s1、制备供试品溶液：称取假黄皮粉末，加入体积分数10～50％的乙醇溶液，超声处理10～50min，超声功率400～800w，频率20～60khz，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；s2、制备对照品溶液：取芦丁对照品，加体积分数40～80％的乙醇溶液制成浓度为0.4～0.6mg/ml的溶液，即得对照品溶液；s3、检测样品：采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各3～9μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为22～30℃和相对湿度为32～80％环境下展开，展开后干燥10～20min，喷体积分数为10～20％的硫酸乙醇，加热至100～120℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。进一步的，一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，包括以下步骤：
s1、制备供试品溶液：称取假黄皮粉末，加入体积分数30％的乙醇溶液，超声处理30min，超声功率600w，频率40khz，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；s2、制备对照品溶液：取芦丁对照品，加体积分数60％的乙醇溶液制成浓度为0.5310mg/ml的溶液，即得对照品溶液；s3、检测样品：采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各7μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为4℃和相对湿度为68％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。进一步的，所述s1中黄皮粉末和乙醇的质量体积比g/ml为1:25～35。进一步的，所述s1中黄皮粉末和乙醇的质量体积比g/ml为1:30。进一步的，所述s3甲苯和乙酸乙酯体积比为9:1。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，提高药材的质量控制水平，确保人们用药的有效性和安全性，本发明操作步骤简单，调整供试品溶液制备方法，筛选展开剂系统和比例对相应的被检测成分分离效果好，调节检测环境，在相对湿度适应的条件下，更能有效排除其他物质干扰，选择合适的点样量使得薄层色谱鉴别方法分离度佳、重现性好、专属性强，判断直观明确，有利于更好的控制药材质量。
附图说明
图1为实施例1、2、3的显色结果，图中a:实施例1，b:实施例2，c:实施例3；图2为实施例3、4、5、6的显色结果，图中a:3μl；b:5μl；c:7μl；d:9μl； 1
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空白溶剂，2
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对照药材溶液，3
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供试品溶液，4
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供试品溶液；图3为实施例3、7、8的显色结果，图中a.32％；b.68％；c.80％；1
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空白溶剂，2
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对照药材溶液，3
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供试品溶液，4
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供试品溶液；图4为实施例3和对比例1、2的显色结果，图中a.乙酸乙酯
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甲醇
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乙酸(4： 0.5：0.2)；b.二氯甲烷
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甲醇
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乙酸(4：0.5：0.2)、c.甲苯
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乙酸乙酯(9：1)， 1
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空白溶剂，2
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对照药材溶液，3
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供试品溶液，4
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供试品溶液；图5为十批不同产地假黄皮药材的薄层鉴别，图中1
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空白溶剂，2
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对照药材溶液，3、4、5、6、7
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供试品溶液。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本品为芸香科黄皮属植物假黄皮clausena excavata burm.f.的干燥枝叶。全年可采收，除去杂质，干燥。实施例1一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，包括以下步骤：s1、制备供试品溶液：称取假黄皮粉末1g，加入体积分数10％的乙醇溶液 25ml，超
声处理10min，超声功率400w，频率20khz，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；s2、制备对照品溶液：取芦丁对照品，加体积分数40～80％的乙醇溶液制成浓度为0.4mg/ml的溶液，即得对照品溶液；s3、检测样品：采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各3μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为22℃和相对湿度为32％环境下展开，展开后干燥10min，喷体积分数为10％的硫酸乙醇，加热至100℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例2一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，包括以下步骤：s1、制备供试品溶液：称取假黄皮粉末1g，加入体积分数50％的乙醇溶液 35ml，超声处理50min，超声功率800w，频率60khz，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；s2、制备对照品溶液：取芦丁对照品，加体积分数80％的乙醇溶液制成浓度为0.6mg/ml的溶液，即得对照品溶液；s3、检测样品：采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各9μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为30℃和相对湿度为80％环境下展开，展开后干燥20min，喷体积分数为20％的硫酸乙醇，加热至120℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例3一种假黄皮药材薄层色谱鉴别的方法，包括以下步骤：s1、制备供试品溶液：称取假黄皮粉末1g，加入体积分数30％的乙醇溶液 30ml，超声处理30min，超声功率600w，频率40khz，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；s2、制备对照品溶液：取芦丁对照品，加体积分数60％的乙醇溶液制成浓度为0.5310mg/ml的溶液，即得对照品溶液；s3、检测样品：采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各7μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为25℃和相对湿度为68％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例4本实施例与实施例3的区别在于，点样量为3μl，具体为s3检测样品中，采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各3μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为4℃和相对湿度为68％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例5本实施例与实施例3的区别在于，点样量为5μl，具体为s3检测样品中，采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各5μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为25℃和相对湿度为68％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例6本实施例与实施例3的区别在于，点样量为9μl，具体为s3检测样品中，采用薄层色
谱法试验，吸取上述供试品溶液各9μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为25℃和相对湿度为68％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例7本实施例与实施例3的区别在于，在湿度为32％环境下展开，具体为s3检测样品中，采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各7μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为25℃和相对湿度为32％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。实施例8本实施例与实施例3的区别在于，在湿度为80％环境下展开，具体为s3检测样品中，采用薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液各7μl，分别点于同一硅胶gf
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薄层板上，以体积比为9:1的甲苯
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乙酸乙酯为展开剂，置于温度为25℃和相对湿度为80％环境下展开，展开后干燥15min，喷体积分数为15％的硫酸乙醇，加热至105℃，置紫外光灯下检视，确定斑点。对比例1本对比例与实施例3的区别在于，展开剂为体积比4：0.5：0.2的乙酸乙酯
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甲醇
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乙酸。对比例2本对比例与实施例3的区别在于，展开剂为体积比4：0.5：0.2的二氯甲烷
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甲醇
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乙酸。一、薄层鉴别对上述实施例1～3的检测方法在薄层板上出现的杂质斑点进行观察，显示的结果如图1：实施例1(图中a)与供试品与对照品相应位置上基本呈现一致的荧光斑点，斑点清晰，规则条带稍浅，无拖尾现象；实施例2(图中b)与供试品与对照品相应位置上基本呈现一致的荧光斑点，斑点稍清晰，形成规则条带，拖尾现象不明显；实施例3(图中c)与供试品与对照品相应位置上基本呈现一致的荧光斑点，斑点清晰，形成规则条带，无拖尾现象。(2)不同点样量薄层鉴别将实施例3和实施例4、5、6比较，分别对3、5、7、9μl假黄皮供试品溶液的点样量进行了考察，结果显示7μl的点样量，斑点清晰度最佳，因此选择7μl 作为假黄皮药材薄层色谱鉴别的点样量，见图2。(3)不同湿度薄层鉴别将实施例3和实施例7、8比较，分别对32％，68％，80％不同湿度进行了考察，结果显示湿度为68％，斑点清晰度最佳，因此选择68％作为假黄皮药材薄层色谱鉴别的湿度，见图3。(4)不同薄层色谱展开剂鉴别实验中采用硅胶gf
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薄层板，对实施例3和对比例1～2的显色结果进行比较，共计3种展开剂进行了考察，见图4，结果显示体积比为9：1的甲苯
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乙酸乙酯对假黄皮药材分离效果较好。
二、十批不同产地假黄皮药材的薄层鉴别药材来源:十批药材采集于海南，经海南医学院药学院生药学鉴定确定为芸香科植物黄皮属假黄皮clausena excavata burm.f.。表1不同批次的假黄皮药材样品通过对不同展开剂、点样量和湿度的考察，最终选择了实施例3的鉴别方法：硅胶gf
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薄层板，以甲苯
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乙酸乙酯(9：1)为展开剂，15％硫酸乙醇溶液在105℃加热至斑点显色清晰的显色方法，点样量7μl，对10批假黄皮药材进行了薄层鉴别，结果如图5，与假黄皮对照品相应位置上，呈现基本一致的荧光斑点，清晰明显，斑点圆整，无拖尾现象，易于观察，则专属性强，明确鉴别出假黄皮药材。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。