一种抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法与流程

1.本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法。


背景技术：

2.早泄(premature ejaculation，pe)是一种常见的性功能障碍，具体表现为男女之间进行性行为时男性射精过早，不能引起女性的高度快感。据学者调查发现早泄的发病率为20％～30％左右，占射精功能障碍患者的90％。以前大多数人们认为pe对身体并不会造成太大危害，所以并没有引起重视。可是近十年来的研究调查表明pe已经严重影响了患者们的性生活质量和自尊心，甚至严重影响夫妇关系，应该引起医生和患者的高度重视。目前fda尚无批准专门治疗pe药物，但已有一些5
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羟色胺再吸收抑制剂(serotonin reuptake inhibitors， sris)类药物如帕罗西汀、达泊西汀等被试用于临床。然而这些药物副作用较大，服用过多会抑制性兴奋、性行为。在中医疗法中治疗早泄常采用针刺挑法，这样的方法给患者带来的疼痛大多难以被患者接受，因此，寻找一种安全、有效的治疗pe药物具有极其重要的意义。
3.pe的发病机制极其复杂，涉及到病理性、心理以及生理等各方面因素的影响。近年来研究发现pe患者不仅心理上出现了问题，还存在神经器质性病变，如阴茎感觉过敏或阴茎感觉神经兴奋性增高。许多研究表明男性射精的控制在于被比喻为“司令部”的大脑是由多种神经递质调节的。此前科学家通过实验发现脑内儿茶酚胺 (catecholamine)系统和5
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羟色胺(5
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hydroxytryptamine，5
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ht)系统与射精密切相关。其中多巴胺(dopamine，da)与5
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羟色胺都参与调节两性动物的性行为，多巴胺系统促进射精；5
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羟色胺系统抑制射精。此外，其他的神经递质如催产素(oxytocin，ot)、β
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内啡肽(β
‑
endorphin，β
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end)、乙酰胆碱(acetylcholine，ach)、氨基酸(amino acid)和一氧化氮(nitric oxide，no)等以及非递质激素类也都参与了射精的调控。最新研究表明基因对于控制早泄射精具有重要作用，多巴胺转运体蛋白基因slc6a3的遗传多态性与早泄相关。有人在构建大鼠射精过程脑部基因表达谱时发现drd4、slc6a4、 chrna3、chrnb4、oxt、avp、gabrr1和gabra6显著差异表达，并认为这些基因共同控制射精，首次阐述基因与射精的关系，还发现5
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羟色胺重摄取抑制剂达泊西汀通过诱导drd4显著上升表达来延长大鼠的射精过程，从而达到治疗早泄的目的。
4.氟西汀和帕罗西汀是最常用的两种选择性sris,其中帕罗西汀能通过择性阻断5
‑
羟色胺再摄取来明显抑制射精。达泊西汀作为一种新型、短效的sris药物能通过抑制神经元的5
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羟色胺再摄取抑制以及增强5
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羟色胺的活性延长射精而治疗pe。研究表明急性注射给予大鼠达泊西汀60mg/kg能够使骑跨潜伏期、插入潜伏期、射精潜伏期和射精后间隔期显著延长，而射精次数减少。然而当pe患者服用此类药物时，由于其副作用较大，常常会出现出各种不良反应。
5.中草药在药物副作用方面较西药具有明显的优势。牛大力，为豆科蝶形花亚科崖豆藤属植物美丽崖豆藤(millettia speciosa champ.) 的干燥根，又称山莲藕、血藤、九龙
串珠、大力薯等，其气味甘香，性温和，具有壮阳，养肾补虚的功效，常用于治疗肾虚，血气不旺，为岭南地区著名的药食两用植物，也是广西少数民族间处方常用的道地药材。《中药大辞典》《现代本草纲目》等书中均记载牛大力含有如刺桐碱等生物碱类物质。近年实验研究表明，牛大力中含有苯丙素类、三萜化合物、植物甾醇、香豆素、黄酮类、糖类、酚苷、及紫檀烷类化合物等多种成分。在药理作用方面牛大力有提高免疫功能、抗疲劳、保肝、去咳、平喘、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等，研究者在对牛大力的安全性进行了评估后，发现牛大力在合理给药范围内无论是水提物还是醇提物并无明显的毒害作用，说明牛大力的毒副作用较小，相对于一些副作用较大的西药如达泊西汀等具有更高的安全性，有望能够运用于临床进行治疗早泄。
6.因此，有必要提供一种新的抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法解决上述技术问题。


技术实现要素：

7.本发明解决的技术问题是提供一种工艺简单、效果明显的抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法。
8.为解决上述技术问题，本发明提供的抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法包括以下步骤：
9.s1：取牛大力洗净、切片后烘干为干燥药材；
10.s2：加入蒸馏水浸泡后煮沸；
11.s3：趁热过滤，得到滤液a和滤渣；
12.s4：取所述滤渣加入蒸馏水加热煮沸；
13.s5：趁热过滤，得到滤液b；
14.s6：合并滤液a和滤液b得到混合液c，对所述混合液c进行浓缩处理，得到提取液。
15.优选的，所述步骤s2中所述干燥药片和蒸馏水的体积比为1:10。
16.优选的，所述步骤s2中所述干燥药片浸泡的时间为1
‑
2h，所述加热煮沸的时间维2
‑
3h。
17.优选的，所述步骤s3中使用目数为400目的滤布进行过滤。
18.优选的，所述步骤s4中所述滤渣与蒸馏水的体积比为1:6。
19.优选的，所述步骤s4中加热煮沸的时间为1
‑
2h。
20.优选的，所述步骤s6中将混合液c浓缩至1g/ml：
21.与相关技术相比较，本发明提供的抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法具有如下有益效果：
22.本发明提供一种抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法，工艺简单，制造成本低，浓缩的牛大力水提物相较于传统的氟西汀和帕罗西汀等西药其副作用较小，不会出现出各种不良反应，而且在抑制早发性射精方面效果明显。
附图说明
23.图1为实验技术路线图；
24.图2为不同剂量牛大力水提物对正常雄鼠性行为的影响的柱状图；
25.图3为不同剂量牛大力水提物对pe模型大鼠性行为的影响的柱状图；
26.其中，ck：空白对照组；nd：5g/kg牛大力水提物；nz：10g/kg 牛大力水提物；nh：20g/kg牛大力水提物；mounting latency：骑跨潜伏期：intromission latency；ejaculation latency：射精潜伏期；插入潜伏期；post ejaculatory interval latency：射精后间隔期；intromissionfrequency：插入次数；ejaculation frequency：射精次数；s：秒； t：次数；*：与对照组相比，p<0.05；**：p<0.01。
具体实施方式
27.下面结合附图和实施方式对本发明作进一步说明。
28.一种抑制早发性射精的牛大力水提物的提取方法包括以下步骤：
29.s1：取牛大力洗净、切片后烘干为干燥药材；
30.s2：加入蒸馏水浸泡后煮沸；
31.s3：趁热过滤，得到滤液a和滤渣；
32.s4：取所述滤渣加入蒸馏水加热煮沸；
33.s5：趁热过滤，得到滤液b；
34.s6：合并滤液a和滤液b得到混合液c，对所述混合液c进行浓缩处理，得到提取液。
35.所述步骤s2中所述干燥药片和蒸馏水的体积比为1:10。
36.所述步骤s2中所述干燥药片浸泡的时间为1
‑
2h，所述加热煮沸的时间维2
‑
3h。
37.所述步骤s3中使用目数为400目的滤布进行过滤。
38.所述步骤s4中所述滤渣与蒸馏水的体积比为1:6。
39.所述步骤s4中加热煮沸的时间为1
‑
2h。
40.所述步骤s6中将混合液c浓缩至1g/ml。
41.以下通过大鼠的性行为实验探讨牛大力水提物对抑制早发性射精的影响：
42.1.实验材料
43.1.1实验动物
44.9周龄已具备射精能力雄鼠90只，平均体重(300
±
20)g，雌鼠90只，平均体质量(220
±
20)g(北京维通利华实验动物技术有限公司提供)。所有动物均分笼饲养于标准动物房，以国家标准啮齿类动物饲料饲养，自由饮食，给予规律光照(12h:12h)，室内相对湿度45％～50％，室温(22
±
2)℃。
45.1.2实验药品与仪器
46.1.2.1实验药品
47.2mg/ml苯甲酸雌二醇注射液(杭州药品厂生产，兽药批准文号：兽药字110202511)、10mg/ml黄体酮注射液(杭州药品厂生产，兽药批准文号：兽药字110201438)、8
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oh
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dpat (8
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hydroxy
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di
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propylaminotetralin，上海源叶生物科技有限公司,批号：c24j11l116648)、达泊西汀盐酸盐(上海源叶生物科技有限公司，批号：a23j11f116675)、0.9％氯化钠注射液(回音必集团江西东亚制药有限公司，药品准字号：h36020301)、牛大力(南宁市景昌中药饮片有限公司提供，生产批号：20200901)
48.1.2.2主要实验仪器
[0049][0050]
2.实验方法
[0051]
2.1实验技术路线
[0052]
如图1所示；
[0053]
2.2药物制备
[0054][0055]
2.3分组与给药
[0056]
将雄鼠随机分为9组：空白对照组、阳性组、pe模型组、构造 pe模型的牛大力水提
物低(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/kg)给药组和未构造pe模型牛大力低水提物(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/kg) 给药组。每天皮下注射0.4mg/kg 8
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oh
‑
dpat构造pe大鼠模型，同时每天以灌胃方式分别给予5g/kg、10g/kg、20g/kg牛大力水提物，阳性组60mg/kg达泊西汀，空白对照组则每天给与同体积生理盐水。另外，对未给予8
‑
oh
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dpat的正常大鼠每天灌胃5g/kg、10g/kg、 20g/kg牛大力水提物。各组连续给药7d。
[0057]
2.4雌鼠去势手术
[0058]
手术器械高温消毒，雌鼠以戊巴比妥钠腹腔麻醉(40mg/kg)。剪除背部手术区毛发，手术区皮肤常规消毒，以最后一肋和两大腿根部连线中点为中心切约1cm的纵行切口，分离皮下组织，用手轻轻挤压，看到包裹卵巢的乳白色脂肪团，用弯镊把脂肪团轻轻地夹起拖出，然后用镊子夹起卵巢，结扎并切除。切除后把切口用医用针线缝合，术后用红霉素软膏涂抹皮肤切口处，并肌注青霉素8万单位，以防感染。
[0059]
2.5激素诱导雌鼠发情
[0060]
分别在交配实验前48h和4h皮下注射苯甲酸雌二醇(estradiolbenzoate)20μg和黄体酮(progesterone)500μg(分别以0.1ml的香麻油溶解，并且混合后在60℃水浴加热1h)来诱导雌鼠发情。
[0061]
2.6大鼠交配行为观察
[0062]
交配行为观察实验于晚上19：00～22：00，行为观察室用红色的灯光照明，
[0063]
调好灯光和录像。将已具备发情良好条件的雌鼠(1:1)与雄鼠合笼进行交配。观察雄鼠在30min内的交配行为，并分别记录下各组雄鼠的骑跨潜伏期(mounting latency,ml)、插入潜伏期(intromissionlatency,il)、射精潜伏期(ejaculation latency,el)、射精后间隔期(post ejaculatory interval latency,pei)、插入次数(intromissionfrequency,if)和射精次数(ejaculation frequency，ef)，各组实验重复3次。
[0064]
雄鼠性行为特征描述：(1)骑跨(mount):雄鼠将其前爪趴在雌鼠侧腹使雌鼠的脊柱前凸，进行快速的骨盆挤压，此时雄鼠的阴茎不一定插入雌鼠的阴道，然后雄鼠的前爪慢慢放下后，开始舔自己的阴茎；(2)插入(intromission):发生在骑跨之后，雄鼠突然向前一次深的冲刺，把阴茎迅速插入雌鼠阴道，并停止骨盆挤压，然后迅速将阴茎抽离雌鼠阴道，并舔自己的阴茎；(3)射精(ejaculation)；几次插入后雄鼠阴茎在雌鼠阴道内停留一段时间，并不断地弯曲后腿，可看到雄鼠后腹部有节律地收缩，然后雄鼠慢慢抬高前爪，雄鼠离开雌鼠；(4) 骑跨潜伏期:从雌鼠放入笼中后到雄鼠第一次骑跨所需的时间；(5)插入潜伏期:从雌鼠放入笼中后到雄鼠第一次插入所需的时间；(6)射精潜伏期:第1次插入至射精所需要的时间；(7)射精后间隔期:雄鼠射精后到下一次插入所需要的时间。
[0065]
2.7统计学分析
[0066]
本实验计量资料均采用均数
±
标准差()表示，统计分析采用的软件为spss17.5软件，组间比较采用t检验，p＜0.05，p＜0.01表示显著差异性，具有统计学意义。
[0067]
3.结果与讨论
[0068]
3.1结果
[0069]
3.1.1不同剂量牛大力水提物对正常雄鼠性行为的影响
[0070]
由图2表明，与对照组相比，5g/kg、10g/kg、20g/kg牛大力水提物均对雄鼠性行为具有显著影响(p<0.05，p<0.01)，具有统计学意义，表现为延长射精潜伏期和射精后间隔
期，插入次数增加(见图 2c，2d，2e)，20g/kg牛大力水提物则缩短骑跨和插入潜伏期(见图 2a，2b)。而三个剂量的牛大力水提物均对射精次数无显著影响。
[0071]
3.1.2不同剂量牛大力对pe模型雄鼠性行为的影响
[0072]
如图3所示，与对照组相比，给予8
‑
oh
‑
dpat造模后，雄鼠骑跨、插入和射精潜伏期，射精后间隔期显著缩短，射精次数显著增加 (p<0.05，p<0.01)，具有统计学意义。在造模基础上给与达泊西汀和不同剂量牛大力水提物结果显示，与模型组相比，阳性达泊西汀使雄鼠骑跨、射精潜伏期和射精后间隔期显著延长，插入次数增加(见图3a、3b、3c、3e，p<0.05，p<0.01)，具有统计学意义；5g/kg、10g/kg、 20g/kg三个剂量的牛大力水提物均显著缩短雄鼠骑跨、插入潜伏期，延长射精和射精后间隔期(见图3a、3b、3c、3e)，增加插入次数(见图3e，p<0.05，p<0.01)，具有统计学意义。
[0073]
3.2讨论
[0074]
3.2.1 8
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oh
‑
dpat和达泊西汀对雄鼠性行为的影响
[0075]
射精行为主要是受到5
‑
ht以及多巴胺等神经递质的调节，而5
‑
ht系统能够延迟射精，8
‑
oh
‑
dpat作为5
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羟色胺1a受体激动剂中的一种，能够缩短骑跨、射精潜伏期和射精后间隔期。研究表明皮下注射0.4mgkg 8
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oh
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dpat可增加男性的射精频率，为了观察贯叶金丝桃素浓缩提取物对射精功能的影响，通过构造8
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oh
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dpat (0.4mg/kg)皮下注射的早泄模型，发现贯叶金丝桃素浓缩提取物有明显的延迟射精的作用。本实验结果表明，8
‑
oh
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dpat(0.4mg/kg，皮下注射)对雄鼠的性行为存在显著性影响，雄鼠骑跨、插入和射精潜伏期，射精后间隔期显著缩短，射精次数显著增加，说明pe模型构造成功，8
‑
oh
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dpat具有促进射精的作用。
[0076]
有研究表明抑制5
‑
羟色胺的重摄取是治疗早泄的机制之一，因此 5
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羟色胺水平抑制剂类药物常用于早泄的临床治疗。作为5
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羟色胺水平抑制剂类药物中的一种，达泊西汀作为5
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羟色胺水平抑制剂类药物中的一种，研究表明急性注射给予大鼠达泊西汀60mg/kg对其性行为的影响最为显著，具体表现为延长骑跨、插入、射精潜伏期和射精后间隔期，减少射精次数剂量为60mg/kg的达泊西汀能够使雄性大鼠骑跨、插入、射精潜伏期延长和射精后间隔期延长，射精次数减少。本实验结果表明，在造模的基础上通过灌胃的方法给予雄鼠60mg/kg 达泊西汀能够使雄鼠的骑跨、射精潜伏期和射精后间隔期显著延长，插入次数显著增加，与研究结果相对一致，表明达泊西汀作为阳性药物能够抑制射精，延长射精过程来治疗早泄，其机制可能与抑制5
‑ꢀ
羟色胺的重摄取，提高突触间隙5
‑
ht浓度来抑制射精相关。在本次实验过程中，阳性组的雄性大鼠随着给药天数的增加慢慢出现了腿软无力，食欲下降，体重减轻等不良反应，此现象可能与达泊西汀的副作用相关。
[0077]
3.2.2牛大力水提物对雄鼠性行为的影响
[0078]
中医认为人体的射精功能与肾的固摄与与肝的疏泄作用相关，肾失固摄，肝失疏泻也有可能会引发早泄，补肾壮阳是我国中医学中的一种帮助人们改善肾功能的一种治疗手段，壮阳类中药则可用于治疗男子阳痿、早泄。目前对于壮阳类药物已经有一定进展，对研究对象使用巴戟天进行补肾壮阳作用方面的研究发现，巴戟天能够提升研究对象的性能力，延长研究对象的射精过程从而治疗早泄。通过网络药理学角度初步阐释了氨基酸、脂肪酸、甾体和磷脂等成分均为中药海马“壮阳、益精”的功效物质。
[0079]
牛大力作为广西少数民族地区常用的道地药材，具有补肝肾，强筋骨以及壮阳的
功效，我们猜测可能对射精等性行为造成一定影响，然而关于牛大力对大鼠射精行为的研究尚无研究报道。本实验分别对 pe模型雄性大鼠与正常雄性大鼠灌胃低(5g/kg)、中(10g/kg)、高(20g/kg)三个不同剂量的牛大力水提物后与pe模型组、正常对照组、阳性组(60mg/kg达泊西汀)雄性大鼠交配行为观察，将雄性大鼠的性行为做分析对比来研究牛大力水提物对于早泄大鼠性行为的影响。
[0080]
实验结果表明5g/kg、10g/kg、20g/kg牛大力水提物均对雄鼠性行为具有显著影响，具体表现为表现为插入次数增加，延长射精潜伏期和射精后间隔期，20g/kg牛大力水提物则缩短骑跨和插入潜伏期 (p<0.05，p<0.01)。而三个剂量的牛大力水提物均对射精次数无显著影响；与pe模型组相比，在造模的基础上给予5g/kg、10g/kg、20g/kg 三个剂量的牛大力水提物均显著缩短雄鼠骑跨、插入潜伏期，延长射精和射精后间隔期，增加插入次数。根据实验结果显示，牛大力水提物延长射精潜伏期方面优于阳性达泊西汀药物。
[0081]
综上所述，本次实验探究了牛大力水提物对于正常大鼠以及pe 大鼠性行为的影响，发现牛大力水提物能够显著延长射精潜伏期与射精后间隔期，增加插入次数，缩短骑跨、插入潜伏期。牛大力水提物有类似于达泊西汀延长射精的作用，能起到一定的治疗pe的作用，能为后续牛大力能否作为临床治疗pe的药物提供了一定实验基础。牛大力水提物延长射精的机制可能与达泊西汀治疗早泄的机制密切相关，但由于未对大鼠脑部神经与代谢网络进行分析，具体机制尚未清楚，有待进一步研究。
[0082]
4.结论
[0083]
牛大力水提物三个剂量均显著显著缩短雄鼠骑跨、插入潜伏期，延长射精和射精后间隔期，增加插入次数，表明牛大力水提具有延迟射精的作用。
[0084]
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。